Цирроз печени крысы диссертация
Диссертация, — 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья
Автореферат — бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников
Воробьева Ольга Васильевна. Влияние экспериментального цирроза печени у самок крыс на патологию и регенерацию печени у потомства : диссертация … кандидата медицинских наук : 14.00.15 / Воробьева Ольга Васильевна; [Место защиты: ГОУВПО «Ульяновский государственный университет»].- Ульяновск, 2007.- 137 с.: ил.
Введение к работе
Актуальность работы
Исследования, проведенные за последние 30 лет, позволили ряду авторов сформулировать представление о том, что во время беременности между организмами матери и плода формируется функциональная система мать-плацента-плод, итоговым результатом которой является нормальное развитие плода (А.П. Милованов и соавт., 2006). Функциональная система мать–плацента-плод – это биологическое содружество двух организмов, в котором гомологичные исполнительные механизмы одноименных гомеостатических систем специфически интегрируются, обеспечивая оптимальное достижение нормального развития плода.
В настоящее время наблюдается неуклонное возрастание удельного веса экологических факторов, отрицательно влияющих на здоровье потомства (Н.П.Бочков 2001; Ю.Е. Вельтищев, Д.И. Зелинская, 2004). Внимание исследователей привлекает как огромное разнообразие экологически обусловленных форм, так и увеличение социальной и медицинской значимости широко распространенных заболеваний, в основе которых лежит антенатально обусловленная предрасположенность к их развитию (гипертоническая болезнь, язвенная болезнь желудка, сахарный диабет и другие).
Патология печени по клиническим проявлениям и своим последствиям занимает ведущее место в гастроэнтерологии. Одной из актуальных её проблем остаются циррозы печени, частота которых по данным вскрытий наблюдается более чем в 3% случаев. В настоящее время повсеместно прослеживается четкая тенденция к росту заболеваемости циррозом печени, склонность к затяжному и рецидивирующему его течению, переходу в злокачественные формы (А.И. Хазанов, 2006). При этом практически отсутствуют данные о том, каким образом антенатальные токсические поражения печени плода под воздействием неблагоприятных экологических факторов на функциональную систему мать-плацента-плод, вызывают предрасположенность к развитию цирроза в постнатальном периоде его развития.
Классической экспериментальной моделью цирроза печени является токсическое воздействие четырёххлористым углеродом (тетрахлорметаном) А.А. Косых (1991). К настоящему времени хорошо изучены патоморфогенез токсического поражения печени и регенеративные процессы при экспериментальном воздействии тетрахлорметаном у млекопитающих и человека. Однако до настоящего времени остается не изученным антенатальное влияние тетрахлорметана, как токсического агента, на предрасположенность к возникновению поражения печени и его динамики у потомства в процессе его последующего развития.
Цель исследования:
Изучить сравнительную динамику поражения и регенераторных процессов печени потомства крыс, подвергшегося экспериментальному воздействию четыреххлористого углерода в антенатальном и постнатальном периодах.
Задачи исследования:
1. Установить динамику патоморфологических изменений и восстановительных процессов гепатоцитов при токсическом поражении печени у новорожденных крысят, антенатально подвергшихся экспериментальному воздействию четыреххлористого углерода.
2. Установить динамику патоморфологических изменений и восстановительных процессов гепатоцитов при токсическом поражении печени у новорожденных крысят, подвергшихся экспериментальному воздействию четыреххлористого углерода в антенатальном и постнатальном периодах.
3. Изучить патоморфологическую динамику, гистохимическую активность гепатоцитов при токсическом поражении печени у новорожденных крысят, подвергшихся воздействию четыреххлористого углерода в постнатальном периоде.
4. Определить динамику содержания биогенных аминов в гепатоцитах новорожденных крысят при экспериментальном токсическом воздействии четыреххлористым углеродом.
Научная новизна
Впервые показано, что у потомства крыс, антенатально подвергшегося воздействию четыреххлористым углеродом на морфологическом уровне восстановление структуры печени происходит к 30 суткам постнатального периода. Установлено, что у потомства крыс, антенатально подвергшегося воздействию четыреххлористым углеродом, при длительном его введении после нормализации структуры печени, скорость развития цирроза печени и степень поражения гепатоцитов выше, чем у потомства, не подвергавшегося антенатальному воздействию. Впервые с помощью люминесцентно-гистохимического и цитоспектрофлуориметрического методов показано увеличение катехоламинов, серотонина и гистамина в гепатоцитах у новорожденных крыс при развитии токсического поражения печени под экспериментальным воздействием четыреххлористым углеродом.
Научно-практическая значимость работы
Результаты исследования свидетельствуют о том, что антенатальное токсическое воздействие гепатотропным ядом (тетрахлорметаном) вызывает статистически значимое увеличение чувствительности печёночных клеток к повторным воздействиям такого рода в постнатальном периоде, приводит к усилению повреждающего действия, снижению их регенераторного потенциала, увеличению скорости развития соединительной ткани и формирования цирроза. Развитие патоморфологических изменений в печени потомства крыс сопровождается специфической динамикой содержания в них биогенных аминов, увеличением их на начальных стадиях токсического воздействия и снижения к моменту развития цирроза. Полученные данные могут быть использованы для разработки морфологических критериев степени токсических поражений и динамики развития их проявлений в печени при оценке воздействия на потомство промышленных ядов, ксенобиотиков, лекарственных препаратов, обладающих гепатотоксичностью.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. У потомства крыс, антенатально подвергшегося воздействию четыреххлористым углеродом, имеется высокая предрасположенность к развитию токсического поражения печени при последующем хроническом постнатальном его введении. Она проявляется в меньшем регенерационном потенциале печеночных клеток, их низкой ферментативной активности, снижении содержания в них биогенных аминов и в раннем формировании цирроза.
2. Количественное содержание уровня биогенных аминов в гепатоцитах сопряжено с тяжестью токсического поражения печени при экспериментальном циррозе печени, вызванным четыреххлористым углеродом.
Апробация работы
Результаты исследований изложены в 4 научных работах, опубликованных в журнале «Аллергология и иммунология» (2006), в материалах научной конференции, посвященной 5-летию ГОУ «Институт усовершенствования врачей Минздрава Чувашии» (Чебоксары, 2005), в научном журнале «Вестнике Чувашского государственного университета» ГУ (2006), рукописи, депонированной ВИНИТИ (2006).
Внедрение результатов исследования
Полученные результаты о морфологических и регенераторных процессах в печени новорожденных крысят, антенатально подвергшихся воздействию четырёххлористым углеродом, о динамике изменений содержания ферментов и биогенных аминов в гепатоцитах при длительном его ведении, внедрены в учебный процесс на кафедре патологической анатомии и патологической физиологии ГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», а также на кафедре естественнонаучных дисциплин ГОУ ВПО «Московский государственный открытый педагогический университет им. М.А.Шолохова» Федерального агентства РФ по образованию.
Структура и объем диссертации
Диссертационное исследование изложено на 137 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов исследований, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа проиллюстрирована 26 таблицами, 38 рисунками. Список литературы содержит 301 источник, из которых 210 — отечественные и 115 — иностранные.
Похожие диссертации на Влияние экспериментального цирроза печени у самок крыс на патологию и регенерацию печени у потомства
Источник
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕЧЕНИ БЕЛЫХ КРЫС И ЧЕЛОВЕКА ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ЦИРРОЗЕ
Лебедева Елена Ивановна
аспирант кафедры гистологии,
УО «ВГМУ»,
Республика Беларусь, г. Витебск
E-mail: lebedeva.ya—elenale2013@yandex.ru.
Гусев Андрей Владимирович
студент 2 курса лечебного факультета,
УО «ВГМУ»,
Республика Беларусь, г. Витебск
COMPARATIVE HISTOLOGIC AL CHARACTERISTIC OF A LIVER OF WHITE RATS AND HUMANS AT TOXIC CIRRHOSIS
Elena Lebedeva
postgraduate of the Department of Histology,
EE “VSMU”,
Republic of Belarus, Vitebsk
Gusev Andrei
2-nd year student of the medical faculty,
EE “VSMU”,
Republic of Belarus, Vitebsk
АННОТАЦИЯ
Целью исследования являлось сравнительная гистологическая характеристика печени белых крыс и человека при токсическом циррозе. Работа выполнена на материале печени от беспородных белых крыс и людей в условиях нормы и в динамике развития токсического цирроза. Использовали гистологические, гистохимические, морфометрические методы. Морфофункциональная характеристика токсического воздействия у крыс сопровождается видовыми, половыми и индивидуальными различиями.
ABSTRACT
The aim of the study was to compare the histological characteristics of liver of white rats and humans in toxic cirrhosis. The work performed on the material of the liver from outbred white rats and humans in normal conditions and in the dynamics of toxic cirrhosis. Histological, histochemical, morphometric methods were used. Morphofunctional characteristic of toxic effects in rats is accompanied by species, sex and individual differences.
Ключевые слова: печень; белые крысы; люди; токсический цирроз.
Keywords: liver; white rats; humans; toxic cirrhosis.
В настоящее время вопросы патогенеза, диагностики и лечения заболеваний печени остаются одними из актуальных в медицине как ввиду сложности диагностики и выбора оптимальных методов лечения, так и вследствие тенденции к росту количества больных этими заболеваниями [2, с. 5—8; 5, с. 2159].
Целью исследования являлось сравнительная гистологическая характеристика печени белых крыс и человека при токсическом циррозе.
Материалы и методы. Работа выполнена на материале печени от беспородных белых крыс в условиях нормы и в динамике развития токсического цирроза. Данное экспериментальное исследование описано в статье [3, с. 31].
Кроме того, был изучен секционный материал и материал прижизненных пункционных биопсий печени пациентов с клинико-лабораторными и морфологическими признаками хронической гепатопатии, полученном в УЗ «Витебская областная клиническая больница» и УЗ «Витебское областное клиническое патологоанатомическое бюро». Критериями отбора пациентов в группу злоупотребляющих алкоголем являлись указание в анамнезе на регулярное употребление ими спиртных напитков и данных клинических и биохимических исследований. В качестве контроля использовали материл печени относительно здоровых людей (биоптаты печени лиц, направленных военкоматами для исключения патологии и лиц, умерших от причин, непосредственно не связанных с патологией печени), в котором отсутствовали морфологические, клинические и биохимические признаки поражения печени. На выполнение данных исследований получено разрешение комитета по этике клинических испытаний УО «Витебский государственный медицинский университет» (протокол №4 от 09.01.2013). Пациенты были разделены на 4 группы: 1-я — относительная норма (n=10, 6 мужчин и 5 женщин); 2-я — пациенты с алкогольным стеатозом (n=12, 7 мужчин и 5 женщин); 3-я — пациенты с алкогольным гепатитом (n=12, 6 мужчин и 6 женщин); 4-я — пациенты с алкогольным циррозом (n=15, 5 мужчин и 10 женщин). Всего исследован материал от 24 мужчин и 26 женщин в возрасте от 22 до 65 лет.
Для морфологических исследований использовали следующие методы:
1. Общегистологические. Окраска гематоксилином и эозином [1, с. 191—192].
2. Гистохимические методы. В нефиксированных срезах печени толщиной около 10 мкм изучали активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ; КФ 1.3.99.1) по методу Нахласа с нитро-СТ [4, с. 349—355] и выявляли нейтральные липиды смесью суданов III и IV [1, с. 252].
3. Специальный метод окрашивания соединительной ткани по методу Маллори [1, с. 199—200].
Для гистологического анализа данных использовали компьютерные программы анализа изображений Image Scope Color и cellSens Standard (Россия). С этой целью производили микрофотосъемку случайных полей зрения гистологических препаратов цифровой камерой OLYMPUS XC30 на базе микроскопа OLYMPUS BX51 (Япония) при увеличении ×100, ×200, ×400, ×600, ×1000 (не менее 10 полей зрения в каждом гистологическом срезе).
Результаты и обсуждения. При вскрытии печень была увеличена в размерах, поверхность была не ровной, грубозернистой, местами бугристо-узловатой желтовато-серого и буро-серого цвета. Иногда на разрезе в паренхиме печени у отдельных крыс наблюдались очаговые плотные, диаметром 2—3 мм узлы желтого цвета. У 5 крыс (2 самца и 3 самки) через 19 нед. эксперимента отмечалась резко выраженная деформация печени с множественными очаговыми узловыми образованиями на поверхности органа светло-розового, светло-желтого и красного цвета плотной консистенции (рисунок 1).
Рисунок 1. Фотография печени крысы с резко выраженной деформацией органа через 19 нед. эксперимента
Особенностью протекания патоморфологических процессов в печени белых крыс, при развитии токсического цирроза являлось: венозная гиперемия (через 3 нед. эксперимента имела выраженный характер, рис. 2), очаговый некробиоз и некроз гепатоцитов, нечеткие границы большинства клеток, разного размера гепатоциты и их ядра (уменьшенного, среднего, крупного и гигантского) , преобладание в ядрах эухроматина и увеличения количества ядрышек (до четырех), развитие жировой дистрофии без патогистологических признаков гепатита и морфологическое проявление интерстициального гепатита (очагового) на фоне сформированного цирроза в цирротических разрастаниях соединительной ткани (рис.3), нарушения балочного строения, скопления липофусцина в соединительной ткани и снижение активности фермента СДГ. Через 12 нед. эксперимента в печени животных (самцы и самки) развился цирроз, на срезах преобладали ложные дольки среднего диаметра, а к концу отмечались ложные дольки разного диаметра.
Рисунок 2. Срез печени животных через 3 нед. эксперимента: а — самцы, б — самки. Окраска гематоксилином и эозином. ×200
Рисунок 3. Срез печени животных через 19 нед. эксперимента: а — самцы, б — самки. Окраска гематоксилином и эозином. ×200
Следует отметить, что через 16 и 19 нед. эксперимента среди выше описанных патологических изменений признаком грубой деструкции долек в результате патологического разрастания соединительной ткани являлось сближение триад, которое выявлялось только на препаратах печени самок. Междольковые желчные протоки в большом количестве локализовались в расширенной междольковой соединительной ткани каждый из которых был окружен ее прослойками окрашенной по методу Маллори в голубой и синий цвет. Ядра и клетки протоков были сильно гипертрофированы и не прокрашены с одним или двумя ядрышками (рис. 4).
Рисунок 4. Срез печени самки через 19 нед. эксперимента. Окраска по методу Маллори. ×200
При гистохимическом исследовании активности СДГ на всех этапах эксперимента (у самцов и самок) на гистологических препаратах отмечалась высокая концентрация фермента в гепатоцитах внутренней терминальной пластинки, крупных сосудов и особенно в участках, прилегающих к собирательной вене и выявлялись четыре типа клеток (рис. 5):
1. Клетки в которых активность СДГ проявлялась в виде интенсивной диффузной сине-лиловой и сине-фиолетовой окраски, заполняющей всю цитоплазму вокруг ядра на этом фоне зерна и гранулы диформазана контрастировали в меньшей степени.
2. Клетки с менее интенсивной окраской цитоплазмы (бледно-фиолетовый цвет) параллельно с этим зерна и гранулы диформазана контрастировали резко.
3. Клетки в начальной стадии повреждения (в состоянии жировой дистрофии, некробиоза и некроза) их цитоплазма не прокрашивалась, она имела бледно-серый цвет. Однако в зоне клеток выявлялось большое количество гранул диформазана. Часто отмечалось их поверхностное расположение над клетками.
4. Клетки с поздним сроком повреждения, в которых отсутствовало окрашивание цитоплазмы, зерна и гранулы диформазана.
Рисунок 5. Срез печени самца через 19 нед. эксперимента. Окраска по методу Нахласа. ×200
Следует отметить, что исследование развития токсического цирроза печени у белых крыс выявило:
1. Два пути которые предшествовали его формированию: альтеративный путь (на гистологических препаратах отмечалось выраженное жировое перерождение паренхимы) и пролиферативный путь (на гистологических препаратах преобладал рост соединительной ткани).
2. При окраске смесью суданов мелкие, средние и крупные капли, а также крупные образования липидов локализовались в тех участках где намечался и происходил разрост соединительной ткани (рис. 6).
3. В печени самок по сравнению с самцами патологические процессы запаздывали на один этап эксперимента, но к концу (19 нед.) имели более выраженный характер.
4. На всех этапах эксперимента устойчивость печени животных к повреждающим агентам (четыреххлористый углерод и этанол) была индивидуальной. У одних животных устойчивость печени была выше и развитие патологических процессов была выражено меньше. Параллельно с этим у других в один и тот же срок выраженность патологических процессов была выше и в ряде случаев заканчивалось гибелью животных.
5. Гипертрофия гепатоцитов и ядер, преобладание эухроматина, увеличение количества ядрышек свидетельствуют о компенсаторных процессах в печени на фоне непрерывного токсического воздействия.
Рисунок 5. Срез печени самца через 3 нед. эксперимента. Окраска смесью суданов III и IV. ×100
Гистологическое исследование паренхимы печени пациентов выявило следующие особенности развитии токсического цирроза: венозная гиперемия в биопсийном материале была выражена слабо, очаговый некробиоз и некроз гепатоцитов, межклеточные границы выражены плохо (в отдельных участках срезов контуры клеток были четкие), преобладали клетки и ядра среднего диаметра, в ядрах чаще выявлялся гетерохроматин (выявлялись и эухроматические ядра), наличие жировой дистрофии, разрастание соединительной ткани, нарушения балочного строения, снижение активности фермента СДГ и отложения липофусцина. На гистологических препаратах при циррозе преобладали ложные дольки среднего размера.
При окраске криостатных срезов суданами выявлялось четкое разделение гистологических препаратов на три группы (рис. 7):
1. В поле зрения наблюдалось большое количество крупных жировых образований размерами, превышающими примерно в полтора-два раза клетку с диффузным расположением в паренхиме (рис. 7.1).
2. В поле зрения наблюдались крупные капли жира, которые локализовались диффузно или очагова в дольках в большом количестве. Причем по большой концентрации жировых капель можно было четко определить границы долек (рис. 7.2).
3. В поле зрения наблюдалось максимальная степень развития жировой дистрофии, где жировые капли разных размеров (мелкие, средние, крупные и очень крупные) локализовались диффузно в большом количестве по всей паренхиме печени. Такое состояние печени было характерно для секционного материала (рис. 7.3).
Рисунок 7. Срез печени пациентов (секционный материал): 7.1 — диффузное расположение жировых вакуолей, 7.2 — очаговое, 7.3 — тотальная жировая дистрофия. Окраска гематоксилином и эозином. ×200
На отдельных гистологических препаратах, полученных из секционного материала на стадии цирроза, встречались широкие поля соединительной ткани. В отдельных участках шире чем сама ложная долька. Выявлялись участки с полной деструкцией долек, внутридольковым разрастанием соединительной ткани и тотальным некрозом гепатоцитов.
Полученные данные о характере патологических изменений при развитии токсического цирроза печени у беспородных белых крыс и человека могут быть использованы при поиске путей их коррекции.
Список литературы:
- Елисеев В.Г. Основы гистологии и гистологической техники. М.: Медицина, 1967. — 267 с.
- Камышников В.С. Клинико-лабораторная диагностика заболеваний печени. М.: МЕДпресс-информ, 2013. — 90 с.
- Лебедева Е.И. Качественные и количественные показатели содержания гликогена в печени крыс в динамике развития токсического цирроза/ Лебедева Е.И., Мяделец О.Д. // Журн. ГрГМУ. — 2015. — № 1. — С. 31—35.
- Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир, 1969. — 645 с.
- Abenavoli L. Pharmacotherapy of acute alcoholic hepatitis in clinical practice / L. Abenavoli [et al.] // World J. Gastroenterol. — 2014. — Vol. 20. — № 9. — Р. 2159—2167.
Источник