Днк hbv вирус гепатита b кровь pcr real time отр

[09-008]
HBV, ДНК [реал-тайм ПЦР]

585 руб.

Исследование для выявления возбудителя гепатита B (HBV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (ДНК) вируса в образце крови.

Синонимы русские

Вирус гепатита В (ВГВ), качественное определение ДНК.

Синонимы английские

Hepatitis B Virus DNA, Qualitative, Real-Time PCR, Blood.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит В (ВГВ) – инфекционное заболевание печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В (HBV). Среди всех причин развития острого гепатита и хронической вирусной инфекции вирус гепатита В считается одной из самых распространенных в мире. Действительное количество инфицированных неизвестно, так как у многих людей инфекция протекает без специфических симптомов и за медицинской помощью они не обращаются. Нередко вирус обнаруживают при проведении профилактических лабораторных исследований. По приблизительным подсчетам, в мире около 350 миллионов человек поражено вирусом гепатита В и ежегодно от его последствий умирает 620 тысяч. В России количество носителей HBV превышает 5 миллионов человек.

Источник инфекции – больной ВГВ или бессимптомный вирусоноситель. HBV передается с кровью и другими биологическими жидкостями. Заражение происходит при незащищенном половом контакте, использовании нестерильных шприцев, переливании крови и пересадке донорских органов, ребенка может заразить мать во время или после родов (через трещины в сосках). В группу риска входят: медицинские работники, у которых возможен контакт с кровью пациента, пациенты, получающие гемодиализ, инъекционные наркоманы, люди, ведущие беспорядочную половую жизнь, дети, рождённые от матерей с ВГВ.

Инкубационный период заболевания – от 4 недель до 6 месяцев. Вирусный гепатит В может протекать как в виде легких форм, длящихся несколько недель, так и в виде многолетней хронической инфекции. Основные признаки гепатита: желтушность кожных покровов, лихорадка, тошнота, утомляемость, в лабораторных анализах – нарушения функции печени и специфические антигены вируса гепатита В. Острое заболевание может быстро приводить к летальному исходу, переходить в хроническую инфекцию или заканчиваться полным выздоровлением. Считается, что после  перенесенного ВГВ формируется стойкий иммунитет. Хронический вирусный гепатит В связан с развитием цирроза и рака печени.

Есть несколько специфических тестов для выявления существующего или перенесенного вирусного гепатита В. Для подтверждения наличия инфекции и уточнения периода заболевания используют определение антигенов вируса, антител к ним и ДНК вируса.

Полимеразная цепная реакция отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Это особенно важно в сложных диагностических случаях. При инфицировании мутантными штаммами вируса специфические антигены HBsAg и HBeAg могут быть отрицательными, что не уменьшает при этом риска распространения вируса и развития заболевания у зараженного человека.

Качественное определение ДНК вируса играет важную роль в раннем выявлении гепатита В у людей с высоким риском инфицирования. Генетический материал вируса обнаруживается в крови на несколько недель раньше, чем HBsAg. Положительный результат ПЦР за период более 6 месяцев указывает на хроническую инфекцию.

Повышенные уровни печеночных трансаминаз при положительном результате ПЦР являются показателями необходимости проведения терапии. Во время лечения вирусного гепатита В исчезновение ДНК вируса свидетельствует о его эффективности.

Для чего используется исследование?

• Для ранней диагностики вирусного гепатита В.
• Для подтверждения хронического вирусного гепатита В.
• Для выявления носителей вирусного гепатита В.
• Для выявления скрытых и мутантных штаммов вируса гепатита В.
• Для оценки эффективности противовирусной терапии гепатита В и принятия решения о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на инфицирование вирусом гепатита В и сомнительных результатах серологического обследования (у HBsAg-отрицательных пациентов и у людей, контактировавших с инфицированным).
• При микст-гепатитах.
• При хронических заболеваниях печени неясной этиологии.
• Во время контроля за терапией вирусного гепатита В.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата

• Вирусный гепатит В.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие вируса гепатита В в организме исследуемого.



Важные замечания

• Вирусный гепатит В нередко сочетается с вирусным гепатитом D.

Также рекомендуется

• HBsAg
• anti-HBc, IgM
• anti-HBc, антитела
• anti-HBe, антитела
• anti-HBs, антитела
• HBеAg
• HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]
• anti-HDV, антитела
• Anti-HCV, антитела, ИФА
• Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
• Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
• Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
• Фосфатаза щелочная общая
• Альбумин в сыворотке
• Билирубин общий
• Холестерол общий
• Тромбиновое время
• Фибриноген

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог, гастроэнтеролог, терапевт, врач общей практики.

Литература

1. Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000 — Т.1.: 601-654.
2. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

Диагностика инфекционных заболеваний (ПЦР) — ДНК HBV (вирус гепатита B), кровь (PCR real time)

Сроки исполнения: 3-5 рабочих дней*.
Биоматериал: кровь.

Описание:

Подготовка к исследованию: специальной подготовки не требуется
Справка: ДНК HBV (вирус гепатита B) – тест, позволяющий определить присутствие в организме человека ДНК вируса гепатита B с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции). Метод основан на определении фрагмента ДНК вируса, которому присуща уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для данного вируса, и больше ни для какого другого. Данный метод является крайне важным для диагностики HBV-инфекции, поскольку в популяции вируса гепатита B встречается достаточно мутантных штаммов (HbsAg и HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Этот тест является качественным, то есть позволяет определить присутствие ДНК вируса в организме, не определяя его количество.
Гепатит B (ВГВ, HВV) острое вирусное заболевание, характеризующееся поражением печени и различными внепеченочными проявлениями. Протекает остро или хронически, в желтушной (35%) или безжелтушной (65%) формах. Вирус гепатита В чрезвычайно устойчив во внешней среде (к УФ-лучам, температуре, детергентам), передается с кровью и биологическими жидкостями (парентеральным, трансплацентарным, половым и бытовым путями).
Инкубационный период инфекции составляет в среднем 50 дней, но может растягиваться до 6 месяцев. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз (АЛАТ и АСАТ), увеличиваются печень и селезенка, возможно повышение концентрации билирубина в 2-3 раза. Встречаются гриппоподобный, артралгический, диспептический или смешанный варианты клинического течения продромального периода.
Острый период (2 — 12 дней) протекает с интоксикационным синдромом: снижением аппетита, диспепсией, инверсией сна. В трети случаев возникает желтуха: резко повышается уровень билирубина, слизистые оболочки и кожа окрашиваются в различные оттенки желтого цвета, появляется кожный зуд. Наиболее опасным симптомом является снижение протромбинового индекса и альбумина крови, свидетельствующие о печеночно-клеточной недостаточности. Бурный гуморальный иммунный ответ зачастую приводит к появлению иммунных комплексов, оседающих на эндотелии сосудов почек, щитовидной железы и других органов, что сопровождается развитием васкулитов. В клинике системных проявлений HBV-инфекции могут возникать аутоиммунный тиреоидит, хронический гастрит, синдром Шегрена, идеопатическая тромбоцитопеническая пурпура, узелковый периартериит, гломерулонефрит, ревматоидный артрит и другие патологические состояния.
Фаза выздоровления характеризуется исчезновением признаков холестаза, нормализацией процессов обмена веществ, восстановлением функции печени, на первый план выходят системные проявления заболевания. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит В имеет более системный характер, менее благоприятно протекает у детей. Хроническое течение возникает в 5% случаев. «Здоровые» носители HbsAg, также как и больные хроническим гепатитом В, подвержены высокому риску развития цирроза печени и гепато-целлюлярной карциномы. Системные проявления заболевания не всегда исчезают вместе с излечением гепатита В.
Показания к назначению: выявление ранней HBV-инфекции, подозрение на вирусный гепатит B при отсутствии серологических маркеров.
Единицы измерения: при обнаружении ДНК вируса гепатита B выдается ответ «положительно», в случае их отсутствия — «отрицательно».
Нормальные показатели: вирус не обнаружен («отрицательно»)
Интерпретация результатов:
ДНК вируса определяется в крови больного в случае активного размножения вируса гепатита. Определение ДНК вируса позволяет исключить (или подтвердить) активную фазу гепатита. При инфицировании больного мутантным вирусом гепатита B выявление ДНК ВГВ может стать единственным свидетельством репликации вируса.
Качественное обнаружение в крови ДНК HBV является основным критерием, характеризующим активность вирусного процесса, который можно использовать при заражении мутантными формами вируса, при иммуносупрессии (больные онкологическими заболеваниями, наркоманы и т.д.) и для последующей количественной оценки присутствующего в организме возбудителя.
ДНК вируса определяется уже на первых неделях HBV-инфекции, когда серологические маркеры еще отсутствуют.
Положительный результат теста:
острый и хронический вирусный гепатит B (активная фаза репликации);
носительство вируса гепатита В (в некоторых случаях).
Отрицательный результат теста:
гепатит B не выявлен.

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

• отрицательный результат — вируса нет;
• положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

1. Перед назначением лечения.
2. Для оценки эффективности терапии.
3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

• < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
• 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
• 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

1. Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
2. Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
4. Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
5. Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

• ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
• ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Подводя итоги

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.