Днк вирус гепатита в аналитическая чувствительность

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

• отрицательный результат — вируса нет;
• положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

1. Перед назначением лечения.
2. Для оценки эффективности терапии.
3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

• < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
• 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
• 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

1. Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
2. Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
4. Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
5. Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

• ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
• ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Подводя итоги

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

Метод исследования: ПЦР

Вирусный гепатит В — инфекционное заболевание с парентеральным механизмом передачи возбудителя — ДНК-содержащего вируса гепатита В, относящегося к семейству Hepadnaviridae. Источник инфекции — больной вирусным гепатитом В или носитель. Инкубационный период — 30-90 дней. Острый гепатит В характеризуется развитием гепатита с желтухой или без нее, заканчивающегося в большинстве случаев выздоровлением или переходящего в хронический гепатит В. Хронический гепатит В — поражение печени вирусом гепатита В, продолжающееся более 6 месяцев.

ДНК гепатита В — маркер репликации вируса гепатита В. Появляется в крови первым из маркеров гепатита В, в среднем через 1 месяц после инфицирования.

Ультрачувствительные тесты для выявления ДНК/РНК возбудителей инфекций — тесты с высокой аналитической чувствительностью, что позволяет использовать их для раннего выявления ВГВ. Высокоинформативен при исследовании крови доноров. Может использоваться для подтверждения спонтанной или индуцированной лечением элиминации вируса.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

• Диагностика скрытых (латентных) форм вирусного гепатита В;
• Оценка эффективности проводимой противовирусной терапии;
• Для раннего выявления острого вирусного гепатита В у контактных лиц.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Аналитическая чувствительность исследования для определения ДНК вируса гепатита B -5 МЕ/мл.

Выявление ДНК ВГВ свидетельствует об инфицировании вирусом гепатита В.

* Клинические рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации и Российского общества по изучению печени по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом В, 2014.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

Метод исследования: Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Гепатит В — инфекционное заболевание с парентеральным механизмом передачи. Вызывается ДНК-содержащим вирусом, который относится к семейству Hepadnaviridae. Источник инфекции — больной гепатитом В или носитель. Инкубационный период составляет 30-90 дней. Острый гепатит В характеризуется развитием гепатита с желтухой или без нее, и заканчивается в большинстве случаев выздоровлением или может перейти в хроническую стадию. Хронический гепатит В — поражение печени вирусом гепатита В, продолжающееся более 6 месяцев.

ДНК вируса гепатита В — маркер репликации. Появляется в крови первым из маркеров гепатита В, в среднем через 1 месяц после инфицирования. В некоторых случаях является единственным маркером особой формы — скрытой HBV-инфекции.

Новая услуга 030109 – это уникальное исследование с высокой аналитической чувствительностью (5 МЕ/мл) для определения ДНК вируса гепатита В в количественном формате. Исследование используется для мониторинга эффективности терапии. Высокая чувствительность метода достигается за счет максимально автоматизированного проведения исследования.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

• Мониторинг эффективности противовирусной терапии.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

В результате проведенного исследования врач одновременно получает информацию о наличии или отсутствии ДНК HBV в качественном и количественном форматах. Результат исследования представлен в виде таблицы, состоящей из трех частей.

В первой части таблицы в графе «Результат» выдается результат «Готов». Во второй части таблицы в графе «Результат» содержится информация о наличии или отсутствии ДНК HBV в качественном формате и выдается результат «обнаружено» или «не обнаружено» (аналитическая чувствительность теста составляет 5 МЕ/мл). В третьей части таблицы в графе «Результат» содержится информация о наличии или отсутствии ДНК HBV в количественном формате (линейный диапазон измерения: 15-10^8 МЕ/мл). При концентрации вируса менее 15 МЕ/мл (от 5 до 15 МЕ/мл) количество вируса не указывается, в графе «Результат» отображается «Обнаружено, менее 15». При концентрации вируса 15 МЕ/мл и выше в графе «Результат» указывается точное количество вируса в МЕ/мл.

Пример результата исследования

Внимание! В соответствии с федеральным законом от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» ПЦР-исследование является одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению пациента.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.