Если днк вируса гепатита в отрицателен
Определение ДНК вируса гепатита В необходимо преимущественно в диагностике хронической формы болезни. Проводится качественный и количественный анализ ДНК гепатита для установления активности репликации возбудителя (вирусная нагрузка) и принятия решения о необходимости начала специфической противовирусной терапии.
В процессе лечения хронического гепатита В и после завершения полного курса эти анализы проводятся повторно для оценки эффективности проведенной терапии.
Что такое ДНК вируса гепатита B
HBV DNA – это главная составляющая возбудителя гепатита В, в которой хранится генетическая информация о вирусе. В клинической практике определение ДНК HBV вместе с HBsAg и другими маркерами вирусного гепатита используется в диагностике хронической формы болезни, реже – острой.
Если в крови пациента не обнаружено следов ДНК HBV (качественный анализ отрицательный), то это позволяет полностью исключить диагноз острого и хронического гепатита В. Именно этот анализ помогает в сложных диагностических случаях, когда серологические маркеры вирусного гепатита В вызывают сомнения у лечащего врача.
Если позволяют технические возможности, то в крови пациента выявляют только ДНК HBV методом ПЦР без определения серологических маркеров вирусного гепатита В. Этот метод может быть использован в качестве скринингового как самый надежный, но не всегда доступный из-за своей высокой стоимости.
Показания к проведению исследования
В отечественной клинической практике традиционно принято не начинать обследование пациента с ДНК HBV, а стартовать с более доступных с финансовой и технической точек зрения серологических маркеров вирусного гепатита Б.
Необходимость выявить наличие ДНК HBV (или подтвердить ее отсутствие) целесообразно в таких ситуациях:
- длительное течение острой формы гепатита В (затяжной вариант с высокой вероятностью хронизации);
- при получении сомнительных результатов серологических маркеров (например, отрицательный HBsAg и положительный HBeAg);
- перед началом противовирусной терапии пациенту с хроническим гепатитом В для оценки концентрации вирусных частиц в крови (вирусная нагрузка);
- через месяц от момента старта противовирусной терапии для оценки эффективности назначенных противовирусных средств (вирусная нагрузка должна снижаться);
- после завершения курса специфического лечения для оценки его эффективности (качественный и количественный анализ ДНК HBV должны стать отрицательными).
Семейный доктор также может назначить анализ на ДНК HBV в процессе проведения дифференциальной диагностики, если у пациента заподозрено заболевание печени или диагностирован синдром желтухи неустановленной этиологии.
Кратность проведения анализов на ДНК HBV, какой именно вариант необходим (качественный или количественный) – решает лечащий доктор. Пациенту лучше не заниматься самодиагностикой, так как ПЦР-диагностика на ДНК HBV достаточно дорогая.
Правила подготовки к анализу
Полимеразная цепная реакция не требует специальной подготовки. Правила подготовки такие же, как и к другим традиционным лабораторным исследованиям. Если у пациента возникают вопросы, то их необходимо задать лечащему доктору или сотруднику лабораторного комплекса. Перед определением ДНК HBV пациенту необходимо:
- на протяжении 3 дней отказаться от приема лекарственных препаратов;
- исключить жирную пищу;
- выдержать период голодания в течение 8-10 часов до момента взятия крови;
- запланировать визит в лабораторный комплекс на первую половину дня;
- приходить натощак, но обязательно выпить 1-2 стакана обычной питьевой воды или некрепкого чая.
Допускается взятие крови пациента в одном подразделении и последующая доставка контейнера с биологическим материалом в лабораторный комплекс. Венозная кровь наливается в емкость с веществом, препятствующим свертыванию крови.
Биологический материал в обязательном порядке транспортируется в лабораторный комплекс в условиях переносного холодильника (температура от 2 до 8 градусов). Информативный результат может быть получен только при условии доставки крови в течение 24 часов.
Читайте также: Анализ на гепатит В – расшифровка результата и норма показателей
Определение ДНК HBV методом ПЦР
ДНК HBV обнаруживают методом полимеразной цепной реакции. Это значит, что с помощью амплификации в биологической жидкости обследуемого пациента участки ДНК вируса гепатита В синтезируются – их концентрация увеличивается в несколько раз. Каждый макро- и микроорганизм обладает уникальной неповторимой последовательностью нуклеотидов.
Разработаны праймеры – так называемые эталоны, в сравнении с которыми устанавливается порядок нуклеотидов и идентифицируется микробный агент. Это значит, что практически исключена диагностическая ошибка.
Ложноположительный и ложноотрицательный результаты встречаются крайне редко. Компания-производитель на упаковке с диагностической тест-системой всегда указывает значение (концентрацию вируса), которое расценивается как положительный результат.
ПЦР-диагностика – быстрый метод диагностики. Результат известен через 2-3 часа от момента начала работы с биологической жидкостью пациента. Лаборатория выдает ответ на бланке, где указан не только сам результат (положительный или отрицательный, или же концентрация вирусных частиц), но и название тест-системы, а также ее чувствительность.
Качественное исследование
Качественное исследование ДНК вируса гепатита В предполагает только выявление этого микробного агента. Этот анализ назначается чаще, чем количественный, так как его диагностическая ценность несколько выше.
Это исследование позволяет отличить норму от патологии, то есть получить однозначный ответ на вопрос, есть ли в крови обследуемого пациента возбудитель вирусного гепатита В или его нет. Чаще всего качественный анализ на ДНК вируса гепатита В необходим для диагностики хронической формы гепатита, когда клинические признаки этого варианта поражения печени минимальны.
В диагностике острого вирусного гепатита В качественный анализ на ДНК необходим только в сложных диагностических случаях. Например, если в крови пациента уже не обнаруживается ни поверхностный антиген HBsAg, ни антитела anti-HBs. В такой ситуации вероятно затяжное течение болезни или трансформация острой формы в хроническую.
Возникает необходимость назначения специфической мощной противовирусной терапии, поэтому необходимо оценить уровень репликации возбудителя гепатита В. Если это так называемое «серонегативное окно», то есть краткий период, когда отсутствует и антиген, и антитела, то противовирусная терапия не нужна. Если репликация вируса установлена, то это означает необходимость контроля за состоянием пациента и назначением противовирусной терапии.
Количественное исследование
Анализ концентрации ДНК вируса гепатита В необходим преимущественно в диагностике хронической формы болезни. В клинической практике количественный анализ называется чаще вирусной нагрузкой, так как исследуется количество вирионов вируса гепатита В в 1 мкл крови пациента.
Обнаруженный уровень вирусной нагрузки до начала лечения является своеобразным эталоном. С изначальной цифрой сравнивается последующий результат, который назначается через месяц от начала специфической терапии и после завершения полного курса противовирусного лечения.
Расшифровка результатов
Нужно не просто найти вирус гепатита В в биологическом материале пациента, но и знать, как трактовать полученные результаты. Пациенту следует понимать, что анализировать сделанные самостоятельно выводы – далеко не всегда правильно. Оценивать весь комплекс анализов на основании клинического осмотра больного может только лечащий доктор.
Предварительно расшифровать полученный ответ можно с помощью таблицы:
Анализ | Результат |
Качественный | отрицательный – пациент не инфицирован вирусом гепатита В, дальнейшая диагностика этого вирусного заболевания нецелесообразна |
положительный – пациент инфицирован вирусом гепатита В, необходим качественный анализ для оценки уровня репликации микробного агента и принятия решения о необходимости старта противовирусной терапии | |
Количественный | более 2000 ME/мл или 10 000 копий/мл – вирусная нагрузка высокая, репликация возбудителя интенсивная, необходима специфическая терапия при отсутствии противопоказаний к ней |
менее 2000 ME/мл или 10 000 копий/мл – вирусная нагрузка низкая, решение о старте противовирусного лечения принимается после комплексной оценки других результатов обследования (биохимические и серологические тесты) |
Заключение
Бланки ПЦР-анализа на ДНК вируса гепатита В не являются диагнозом и основанием для назначения терапии противовирусными лекарственными средствами. Все выводы и необходимые дальнейшие рекомендации делает лечащий доктор.
Источник
Комплексное исследование при подтвержденном вирусном гепатите В (HBV). Анализ маркеров инфекции позволяет установить клиническую стадию заболевания, иммунологический статус обследуемого, а также оценить эффективность лечения. Включает в себя определение белков вируса (антигенов), основных классов специфических антител, а также обнаружение ДНК вируса в крови.
Венозную кровь.
- Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
- Не курить за 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Вирусный гепатит B (HBV) – инфекционное заболевание, которое является причиной серьёзных поражений печени. Зачастую гепатит B переходит в хроническую форму, его течение становится затяжным и провоцирует возникновение цирроза и рака печени.
Вирус гепатита B (Hepadnaviridae) содержит двухцепочечную ДНК, окруженную нуклеокапсидом размером 27 нм, в состав которого входит антиген HBcAg, и внешней оболочкой, содержащей антиген HBsAg. Этот антиген обнаруживается в крови за 6 недель до появления симптомов заболевания и может выявляться длительное время как при их наличии, так и в при их отсутствии (при хроническом гепатите и носительстве). На ранних стадиях заболевания присутствует у 90-95 % больных.
Особенностью вируса гепатита B является то, что он поступает непосредственно в кровь и циркулирует в ней на протяжении всего периода заболевания. У некоторых пациентов вирус в крови сохраняется всю жизнь. По этой причине источником заражения могут стать не только те, кто болен гепатитом в его острой форме, но также те, кто уже перенес данное заболевание, а также люди, у которых заболевание не проявляется, однако они являются носителями вируса.
Полное выздоровление регистрируется у 92-95 % больных острым гепатитом В, и лишь у 5-8 % из них отмечается переход заболевания в хроническую форму.
Гепатит B лечится исключительно в условиях стационара. Это заболевание в случае длительного течения является фактором риска развития первичной гепатоцеллюлярной карциномы (рак печени).
В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции. В фазе репликации происходит воспроизведение (размножение) вируса. ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита, где с помощью ДНК-полимеразы синтезируется нуклеокапсид, содержащий ДНК вируса, антигены HBcAg, HBeAg, которые являются основной мишенью иммунной системы. Затем нуклеокапсид мигрирует из ядра в цитоплазму, где реплицируются белки внешней оболочки (HBsAg), и, таким образом, происходит сборка полного вириона. При этом избыток HBsAg, не использованный для сборки вируса, через межклеточное пространство попадает в кровь. Полная сборка (репликация) вируса заканчивается презентацией его растворимого нуклеокапсидного антигена – HBeAg на мембране гепатоцита, где происходит его «узнавание» иммуноцитами. Антиген HBcAg серологическими методами не определяется, потому что отсутствует в крови в свободном виде. Определяется наличие в крови антител (anti-HBc) к этому антигену, вырабатывающихся вследствие его высокой иммуногенности.
Маркерами фазы репликации вируса гепатита В являются:
- выявление в крови антигенов HBeAg и anti-HBc (Ig M).
У 7-12 % больных хроническим вирусным гепатитом В возможен спонтанный переход фазы репликации в нерепликативную фазу (при этом из крови исчезает HBeAg и появляются anti-HBe). Именно фаза репликации обусловливает тяжесть поражения печени и контагиозность больного.
В фазе интеграции происходит интегрирование (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, несущего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита с последующим образованием преимущественно HBsAg. При этом репликация вируса прекращается, однако генетический аппарат гепатоцита продолжает синтезировать HBsAg в большом количестве.
Вирусная ДНК может быть интегрирована не только в гепатоциты, но и в клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды, клетки почек.
Фаза интеграции сопровождается становлением клинико-морфологической ремиссии. В этой фазе в большинстве случаев формируется состояние иммунологической толерантности к вирусу, что приводит к купированию активности процесса и носительству HBsAg. Интеграция делает вирус недосягаемым для иммунного контроля.
Серологические маркеры фазы интеграции:
- наличие в крови только HBsAg или в сочетании с anti-HBc (IgG);
- отсутствие в крови ДНК-вируса;
- сероконверсия HBeAg в anti-HBe (т.е. исчезновение из крови HBeAg и появление anti-HBe).
Пациенты, перенесшие инфекцию и имеющие антитела к вирусу, не могут повторно заразиться гепатитом B. В некоторых случаях полное выздоровление не наступает и человек становится хроническим вирусоносителем. Вирусоносительство может протекать бессимптомно, но в некоторых случаях развивается хронический активный гепатит B. Ключевым фактором риска активного вирусоносительства является возраст, когда человек был заражен: для грудных детей уровень риска превышает 50 %, в то время как для взрослых остается на уровне 5-10 %. Исследования показывают, что мужчины чаще становятся носителями, чем женщины.
HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В
Поверхностный антиген вируса гепатита В (HВsAg) является белком, который присутствует на поверхности вируса. Обнаруживается в крови при остром и хроническом гепатите В. Самый ранний маркер. Достигает максимума к 4-6-й неделе заболевания. Сохраняется до 6 месяцев при остром гепатите, свыше 6 месяцев – при переходе заболевания в хроническую форму.
HBeAg – ядерный ‘е’-антиген вируса гепатита В
Антиген, находящийся в ядре вируса. Появляется в крови одновременно с HBsAg и сохраняется в течение 3-6 недель. HBeAg появляется в крови больного острым гепатитом В одновременно с HBsAg или вслед за ним и сохраняется в крови 3-6 недель. Указывает на активное размножение и высокий риск передачи вируса при половом контакте, а также перинатально. Инфекционность HBeAg-положительной сыворотки в 3-5 раз выше, чем HBsAg-положительной. Выявление HBeAg в крови более 8-10 недель свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. При отсутствии репликативной активности вируса во время хронической инфекции HBeAg не выявляется. Его появление же свидетельствует о реактивации вируса, что чаще происходит на фоне иммуносупрессии.
При лечении вирусного гепатита В исчезновение HBeAg и появление антител к HBe-антигену свидетельствует об эффективности терапии.
anti-HBc (Ig M) – специфические антитела класса IgМ к ядерному ‘core‘ антигену вируса
Начинают вырабатываться еще до клинических проявлений, указывают на активную репликацию вируса.
Появляются в крови через 3-5 недель, сохраняются в течение 2-5 месяцев и исчезают в период выздоровления.
anti-HBc – суммарные антитела (IgM+IgG) к ядерному ‘core’ антигену вируса гепатита В
Важный диагностический маркер, особенно при отрицательном значении HBsAg. Антитела класса IgM вырабатываются через 3-5 недель. Антитела класса IgG начинают вырабатываться с 4-6-го месяца и могут сохраняться пожизненно. Подтверждают контакт организма с вирусом.
anti-HBs – суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В
Появляются медленно, достигая максимума через 6-12 месяцев. Указывают на перенесенную инфекцию или наличие поствакцинальных антител. Выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении и развитии иммунитета. Обнаружение антител в высоком титре в первые недели заболевания может быть связано с развитием гипериммунного варианта фульминантного гепатита В.
anti-HBe – антитела к ‘е’-антигену вируса гепатита В
Появляются на 8-16-й неделе после инфицирования у 90 % больных. Свидетельствуют о завершении острого периода болезни и начале периода реконвалесценции. Могут сохраняться до 5 лет после перенесенного заболевания.
HBV (ДНК) – ДНК вируса гепатита В
Маркер наличия и репликации вируса. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Это особенно важно в сложных диагностических случаях. При инфицировании мутантными штаммами вируса результаты теста на специфические антигены HBsAg и HBeAg могут быть отрицательными, но при этом риск распространения вируса и развития заболевания у зараженного человека сохраняется.
Качественное определение ДНК вируса играет важную роль в раннем выявлении гепатита В у людей с высоким риском инфицирования. Генетический материал вируса обнаруживается в крови на несколько недель раньше, чем HBsAg. Положительный результат ПЦР за период более 6 месяцев указывает на хроническую инфекцию. Определение вирусной нагрузки (количество ДНК вируса в крови) позволяет оценить вероятность перехода заболевания в хроническую форму.
Повышенные уровни печеночных трансаминаз при положительном результате ПЦР являются показателями необходимости проведения терапии. Во время лечения вирусного гепатита В исчезновение ДНК вируса свидетельствует об эффективности лечения.
Для чего используется исследование?
- Для оценки серологического профиля;
- для выяснения стадии заболевания и степени контагиозности;
- для подтверждения заболевания и уточнения его формы (острая, хроническая, носительство);
- для наблюдения за течением хронического гепатита В;
- для оценки эффективности противовирусной терапии.
Когда назначается исследование?
- При выявлении у пациента поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg);
- при подозрении на инфицирование вирусом гепатита В и сомнительных результатах серологических тестов;
- при микст-гепатитах (сочетанные вирусные гепатиты В и С);
- при динамическом наблюдении за больным гепатитом В (определение стадии процесса при совместном исследовании на другие специфические маркеры инфекции).
Что означают результаты?
Референсные значения
Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:
Острый гепатит В. Выделяют «дикий» штамм (естественный) и «мутантный» штамм (вид) вируса. Определение штамма вируса имеет определенное значение при выборе противовирусного лечения. Мутантные штаммы вируса несколько хуже поддаются лечению в сравнении с «диким».
Хронический гепатит В (ХВГВ). Выделяют три серологических варианта:
- ХВГВ с минимальной активностью (ранее использовали термин «носительство HBsAg»);
- НВе-негативный ХВГВ;
- НВе-позитивный ХВГВ.
Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита В
Маркеры | ИНТЕРПРЕТАЦИЯ | ||||||
HBsAg | HBeAg | anti-HBc | anti-HBs | anti-HBe | HBV, ДНК | ||
IgM | IgM + IgG | ||||||
+ | + | + | -/+ | — | -/+ | + | Острый гепатит В (дикий штамм) |
+ | — | + | + | — | +/- | + | Острый гепатит В (мутантный штамм) |
— | — | — | + | + | +/- | — | Иммунитет после перенесенного гепатита |
+ | — | — | + | — | +/- | +/- | ХВГВ с минимальной активностью |
+ | — | — | + | — | + | + | HBe-негативный ХВГВ |
+ | + | — | + | — | — | ++ | HBe-позитивный ХВГВ |
Скачать пример результата
Кто назначает исследование?
Инфекционист, гастроэнтеролог, гепатолог, эпидемиолог.
[09-009] HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]
[06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
[06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
[06-013] Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
[40-120] Билирубин и его фракции (общий, прямой и непрямой)
[06-045] Фосфатаза щелочная общая
[06-004] Альбумин в сыворотке
[03-011] Фибриноген
[40-483] Лабораторное обследование функции печени
Литература
- А. М. Сокурова, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов, УДК: 616.36-002:578.891.
- Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
Source: helix.ru
Читайте также
Вид:
Источник