Генетический анализ при гепатите в

Гепатит Б – вирусное заболевание печени, опасное осложнениями. Возбудитель передается гематогенным и половым путем, заражение происходит в бытовых условиях, если частички инфицированной крови попадают на слизистые или в ранки. Вирус сохраняет жизнеспособность в течение недели в сухой среде, до полугода во влажной. Разрушается только при нагреве до температуры свыше 140 градусов или в дезинфицирующих растворах.

Выявить присутствие вируса визуально невозможно. Методы диагностики позволяют с высокой точностью установить инфекционную природу патологии печени. Это связано с природой ДНК-вируса. В нем содержатся особые белки, в ответ на них иммунитет вырабатывает антитела. По анализам на гепатит Б устанавливается факт заражения, стадия заболевания, динамика выздоровления, наличие иммунитета.

Что такое гепатит В?

Инфекция развивается по аутоиммунному принципу. Попадая в кровь, возбудитель достигает клеток печени, проникает в них, начинает размножаться. В период выхода из гепатоцита выделяет геном, который распознают иммунные клетки. Атакуя возбудитель, организм уничтожает собственную печень. Желтушность и другие симптомы появляются, когда секреторные функции паренхимы угасают, нарастает интоксикация организма.

Установить диагноз помогает исследование крови. Если результат на гепатит В положительный, делается оценка вирусной нагрузки. В зависимости от нее разрабатывается терапия, контролируется процесс формирования иммунитета. Повторное заражение исключено. Хроническая форма, требующая длительного лечения, возникает в 15% случаев.

Как в анализах обозначается гепатит B?

В международной классификации возбудители болезни обозначаются буквенными символами. Возбудитель гепатита вида В – HBV, на русском языке – ВГВ. Его присутствие в крови выявляют:

по промежуточному белку HBеAg, он содержится в оболочке вируса;
ядерному геному HBcAg, он появляется при активном делении HBV.

Эти символы встречаются в бланках.

Как пишут гепатит Б в анализах, когда в пробах находится вирус? В графе делается отметка «положительный», а рядом з буквенный символ HBеAg или HBcAg. В количественном анализе указывается числовой показатель в единицах измерения «копий/мл».

Какие анализы крови сдают при гепатите В и их расшифровка?

Заподозрить возбудитель можно по общему и биохимическому анализу крови. Печень выполняет очистительную функцию, при нарушении ее работы концентрация компонентов крови меняется. Факт присутствия гепатита Б в крови устанавливают маркерами, выявляющим гены ДНК-Серологическая проба выявляет вид возбудителя. Расшифровка анализа на гепатит В под силу медицинским работникам. Антигены и антитела встречаются в различных комбинациях в зависимости от фазы болезни, степени ее тяжести, состояния иммунитета.

Маркеры гепатита

На молекулярном уровне тестированием выявляются компоненты крови, появляющиеся в ее составе при заражении вирусом. Этот анализ крови на гепатит позволяет определить тип возбудителя. Для вида В характерны особые антигены и антитела. По ним специалистами определяется фаза течения болезни. Например, наличие антител IgM говорит об острой фазе заболевания, IgG появляются в процессе формирования иммунитета. Другие маркеры выявляют антигены и антитела разных типов, все они характерны для инфекции. На бытовом уровне достаточно знать, как в анализах обозначают гепатит В:

Anti-HBс-total или anti-НBcore-total – присутствие антител к HBV типа IgM и IgG;
HBs или Hepatitis B surface Antigen – австралийский антиген, характерный для HBV;
HBeAg и HBcAg – антигены HBV, свидетельствуют о делении вируса в клетках печени;
Anti-HBе и Anti-HBs – вид антител, вырабатываемых иммунитетом при инфицировании или после вакцинации.

ПЦР на гепатит В

Анализ методом ПЦР полимеразной цепной реакции позволяет выявить возбудитель. Он виден по качественному показателю: положительный говорит об инфицировании пациента. Количественная оценка указывается в числовом значении. HBV-DNA – показатель вирусной нагрузки. По нему определяют, борется ли организм с инфекцией, правильно ли выбран противовирусный препарат.

Биохимический анализ крови при гепатите В

Когда печень поражена вирусом, меняются показатели, возрастает:

концентрация ферментов аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), они появляются после разрушения гепатоцитов;
содержание ГГТ (гамма-глутамилтрансфераза), характерный признак интоксикации организма, вызывающей гибель гепатоцитов.
уровень билирубина.

Непрямой билирубин вызывает желтушность. Он связывается в паренхиме ферментами энзимами, трансформируется в водорастворимую форму (прямой билирубин). В таком виде выводится по желчным протокам.

Если присутствует гепатит А, анализы выявляют снижение уровня альбумина и общего белка, это говорит об угасании функции паренхимы. Гепатоциты выделяют ферменты, участвующие в белковом обмене, альбумин нужен для связывания билирубина, чтобы он из ядовитой непрямой формы в паренхиме перешел в прямую.

Клинический анализ крови

При подозрении на инфекционную природу заболевания на исследование сдаются моча и кровь. По ОАК определяют содержание эритроцитов и скорость их осаждения, превышение нормы говорит о воспалительном процессе. Уровень тромбоцитов позволяет поставить ориентировочный диагноз, так как при поражении гепатоцитов снижается свертываемость. По результатам общего анализа назначаются дополнительные исследования пациента.

Результаты анализа: положительный, отрицательный и ложноположительный

После проведения тестирования возможны три версии результатов на присутствие антигенов и антител:

Если проба на гепатит В положительная, что это значит? В пробах присутствуют антигены HBV. Сначала возрастает концентрация HBеAg, затем появляются HBсAg. Когда начинается процесс выздоровления, появляются антитела, вырабатываемые организмом для борьбы с вирусом. При хронической форме болезни выявляется австралийский антиген. Если результат положительный, определится концентрация возбудителя. Значительное превышение нормы говорит об остром течении заболевания.
Если возбудитель попал в организм, но его концентрация ничтожна или антигенов вообще нет в пробах, результат отрицательный. Это говорит, что инфицирования не было. Отсутствие возбудителя при наличии антител говорит о выздоровлении (инфицирование было, но на момент взятия проб пациент здоров).
Ложноположительный анализ на гепатит показывает присутствие возбудителя у здорового человека. Такое возможно, если:

пациент поставил прививку;
женщина беременная, у нее изменен гормональный фон;
развивается онкология;
были погрешности при заборе проб;
в организме присутствует другая инфекция;
ослаблен иммунитет;
имеются заболевания аутоиммунной природы.

Может ли быть ошибка в анализе на гепатит В?

Когда биологический материал обследуется в лицензированных лабораториях, вероятность механической ошибки мала. Она возникает при:

несоблюдении правил забора проб, их транспортировке, хранении (биологический материал нельзя прогревать до температуры свыше 20 градусов);
сбое в работе оборудования (отключении электроэнергии, изменение частоты, напряжения и силы тока);
ошибке или низкой квалификации лаборанта (не исключена путаница проб).

Неправильный результат возможен, если пациент не подготовлен к анализу. Накануне сдачи нужно умерить физические нагрузки, они способны спровоцировать сбой иммунитета. Важно правильно питаться, исключить алкоголь, газировку, копчености, консервации. Нельзя сдавать анализы после лучевой диагностики (рентгена, КТ, МРТ, УЗИ). Пробы берутся на голодный желудок, через 12 часов после последнего приема пищи. Лекарственные препараты, особенно иммуностимулирующие, также способны изменить результаты.

Источник

Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

при возникновении признаков гепатита В у пациента;
во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
для уточнения эффективности терапии.

Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

Для ПЦР-анализа делается забор венозной крови

Метод ПЦР даёт возможность выявить ДНК возбудителя даже при минимальном его присутствии в отобранной пробе крови. Кроме того, анализ позволяет обнаружить антигены, которые уже выработались на вирус. Каждый из антигенов свидетельствует об определённой стадии болезни:

HBsAg — вирус присутствует в данный момент.
Анти-HBcor — возбудитель в настоящее время отсутствует, но имелся в прошлом.
Анти-HBs — в крови имеются антитела к гепатиту B (как вариант — герпесу, ВИЧ, хламидиозу, микоплазмозу, кандидозу, туберкулёзу, клещевому энцефалиту и многим другим болезням).

Патология и её признаки

Гепатит B или HBV — это вирусная инфекция, поражающая клетки печени. Она опасна не только непосредственным воздействием на паренхиму органа, ослабляющим барьерную функцию и общий иммунитет. Возможны и более тяжёлые последствия, такие как цирроз печени и возникновение злокачественных новообразований.

HBV передаётся через кровь человека, инфицированного гепатитом, его экскременты, через контакты со слизистыми оболочками, особенно при половом акте, повреждениями кожи, через нестерильные шприцы при переливании крови или при полостных операциях. Возможно заражение новорожденного его больной матерью при прикосновении к трещинам на её сосках.

Для гепатита B характерны следующие симптомы:

Непривычная утомляемость

нарастающая усталость при небольших нагрузках;
непривычная утомляемость;
тяжесть в области правого подреберья;
пониженный аппетит, тошнота;
желтушность кожных покровов, склер глаз;
светлый кал;
тёмная моча;
болезненные ощущения в суставах.

Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

Показаниями к ПЦР являются:

положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
острый и хронический гепатит;
микст-гепатиты;
количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
разработка тактики эффективной терапии.

Подготовка к анализу

Перед процедурой необходимо 15-20 минут полного покоя

Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

Как проходит исследование

В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

Амплификатор

Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

Расшифровка результатов

Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

Читайте также: Где рожают с гепатитом с

Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

Особенность полимеразной цепной реакции

В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

конкретную вирусную нагрузку на печень;
интенсивность прогрессирования заболевания;
устойчивость к препаратам противовирусной группы;
результативность лечения.

Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
маркеров вирусной инфекции;
результатов биопсии печени.

Общие цели ПЦР

Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

обнаружить носители вируса;
прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
мониторить активность вируса на всех фазах развития;
выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.

Преимущества метода

В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.

Источник