Гепатит а методом ифа и ихл

Гепатит В — это инфекционное заболевание печени. Для него характерно разнообразие клинических проявлений, начиная от неярко выраженных субклинических форм и заканчивая явлениями печеночной недостаточности, цирроза или рака печени. Антитела к гепатиту В — это белковые соединения, которые вырабатываются в ответ на проникновение вирусных антигенов — структурных элементов возбудителя. В клинической практике они также носят название маркеров. В данном случае возбудителем является HBV — вирус гепатита В.

При попадании вируса гепатита наш организм начинает вырабатывать антитела. Их можно определить с помощью серологических методов — реакций взаимодействия антигена и антитела. К таким принадлежит ИФА — реакция иммунофлюоресценции, а также ИХЛА — иммунохемолюминесцентный анализ. Материалом для определения маркеров вирусного гепатита В может быть или цельная кровь, или плазма.

Поверхностный антиген HBsAg. Этот чужеродный белок появляется через 8–12 недель после заражения, то есть фактически в инкубационный период. Его можно определить раньше, чем появятся биохимические маркеры — АЛТ (аланинаминотрансфераза) и АСТ (аспартатаминотрансфераза) — и какая-либо симптоматика. Такие антигены циркулируют в крови еще четыре–шесть месяцев, а их наличие после этого периода считается признаком хронической формы болезни.

Антитела класса анти-HBs. Являются ответом на проникновение в организм HBsAg. Появляются после исчезновения последних. Поэтому определение таких маркеров считается признаком реконвалесценции — выздоровления больного. Также следует заметить, что у значительного количества населения, перенесшего гепатит В, эти антитела циркулируют в крови на протяжении всей оставшейся жизни. Поэтому их также изучают с целью определения эффективности и целесообразности вакцинации.

В последние годы распространяется метод количественного определения анти-HBs антител, с помощью которого возможно различить острый период инфекции и обычное носительство. Также это позволяет оценить эффективность лечения интерфероном.

Антиген HВсore. Является компонентом сердцевины вируса. Это оболочка, которая сохраняет генетический его аппарат. В свободном состоянии отсутствует в организме. Его наличие можно определить только после воздействия на кровь реагентом.

Определяют через одну-две недели после заражения. Также этот антиген можно выявить при биопсии печени и исследовании биоптата.

Основная характеристика других антител

Антитела анти-HBc IgM и анти-HBc IgG. Существует два вида маркеров такого типа. Их расшифровка помогает врачам и лабораторным диагностам уточнить характер течения болезни. Преимуществом этих антител является то, что их можно найти в крови даже в период так называемого серологического окна. Это промежуток времени, что лежит между исчезновением HBsAg и появлением анти-HBs. Наличие этого окна может быть причиной ложных негативных результатов при исследовании.

Продолжительность такого периода составляет от четырех до семи месяцев. Неблагоприятным прогностическим признаком является почти мгновенное появление антител к HBsAg после исчезновения самого антигена.

IgM анти-HBc являются маркерами острой формы вирусного гепатита. В ряде случаев их наличие может быть единственным критерием. Также их определяют в случае обострения хронического гепатита В. Выявление антител данного класса может иметь некоторые трудности. Например, у людей с ревматизмом определяются ложноположительные результаты, что ведет к диагностическим ошибкам. Кроме того, при очень высокой концентрации IgG происходит недостаточное выявление IgM анти-HBcor.
IgG анти-HBc появляются только спустя некоторое время после исчезновения из крови IgM (несколько недель). Со временем они становятся преобладающим классом. Сохраняются пожизненно вместе с анти-HBs, но в отличие от последних, не обладают никакими защитными свойствами. Анти-HBcor в 10 % случаев могут быть единственными признаками гепатита. Это объясняется тем, что иногда возникают микст-гепатиты, когда антиген HBsAg производится в очень малых количествах.

Антиген HBe; антитела к нему — анти-HBe. Этот антиген является маркером вирусной репликации. Репликация — это активное деление вируса путем построения и удвоения ДНК. Его наличие говорит о тяжелом течении болезни, а также если он выявлен у беременной женщины, то о высоком риске осложнений со стороны плода.

Расшифровка и определение антител к HBeAg позволяют подтвердить начало выздоровления и выведение возбудителя из организма. Если у пациента хронический вирусный гепатит В, то наличие этих антител тоже считается положительным признаком: говорит о прекращении размножения вируса. Существует особый феномен, когда в крови повышается концентрация вирусной ДНК и анти-НВе, но без увеличения количества антигена HBe. Такая ситуация показывает врачу-диагносту, что вирус мутировал, следует изменить тактику лечения. После перенесенного заболевания анти-HBe находятся в крови человека от пяти месяцев до пяти лет.

Алгоритм диагностики гепатита В

Согласно международным рекомендациям Европейской ассоциации по изучению заболеваний печени, врачам следует придерживаться таких правил:

Для скрининга используются тесты на определение HBsAg и анти-HBs, а также антител к HBcor.
Тесты для дальнейшей и более глубокой диагностики гепатита. К ним принадлежат определения антигена HBe и, соответственно, антител к нему. К этим исследованиям может причисляться также определение количества вирусной ДНК в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Дополнительные методы исследования, что дают возможность понять целесообразность лечения и определить его тактику. К ним относят биохимическое исследование крови, биопсию печени.

Антитела и вакцинация

Известно, что вакцинирование людей, перенесших гепатит В, не только экономически нецелесообразно, но и опасно для пациента. Это объясняется тем, что дополнительная антигенная нагрузка может стать причиной возникновения гепатита, ассоциированного с вакциной. Именно поэтому перед тем как делать прививку, необходимо провести скрининг на определение HBsAg, анти-HBs и анти-HBcor. Если в крови выявляется присутствие хотя бы одного из вышеперечисленных маркеров, то необходимо отказаться от вакцинации. Но данная процедура, к сожалению, проводится крайне редко, что негативно сказывается на здоровье пациентов.

Также после вакцинации в 2–30 % случаев не наблюдается желаемого увеличения количества антител. Это связано с индивидуальными особенностями каждого человека. К ним принадлежат: возраст пациента, состояние других органов и систем, наличие первичного (врожденного) или вторичного (СПИД, тяжелые заболевания) иммунодефицита.

Source: apechen.ru

С — 153

1 330,01

ДС-ИФА-АНТИ-HCV-АВИДНОСТЬ

Тест-система иммуноферментная для определения индекса авидности антител класса IgG к вирусу гепатита С в сыворотке и плазме крови человека. Двухстадийный вариант.Суммарное время инкубаций –

2 ч 10 мин. Срок годности – 12 мес.

Подходит для ручной постановки и постановки на автоматических анализаторах.

С — 651

9 999,99

ИФА-АНТИ-HCVc-M

Тест-система иммуноферментная для выявления антител класса M к core-антигену вируса гепатита С в сыворотке и плазме крови человека. Двухстадийный вариант.

Суммарное время инкубаций – 1 ч 30 мин.

Срок годности – 12 мес.

Подходит для ручной постановки и постановки на автоматических анализаторах.

С — 253

1 897,06

ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР-G

Тест-система иммуноферментная для выявления антител класса G к структурным (core) и неструктурным (NS3, NS4, NS5) белкам вируса гепатита С в сыворотке и плазме крови человека. Двухстадийный вариант. Суммарное время инкубаций – 2 ч.

Срок годности – 12 мес.

Подходит для ручной постановки и постановки на автоматических анализаторах.

С — 351

8 990,30

ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР-M

Тест-система иммуноферментная для выявления спектра антител класса M к структурным (core) и неструктурным (NS3, NS4, NS5) белкам вируса гепатита С в сыворотке и плазме крови человека.

Двухстадийный вариант.

Суммарное время инкубаций – 1 ч 30 мин.

Срок годности – 12 мес.

Подходит для ручной постановки и постановки на автоматических анализаторах.

С – 352

8 990,30

ДС-ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР GM

Тест-система иммуноферментная для выявления спектра антител класса G и M к индивидуальным белкам вируса гепатита С в сыворотке и плазме крови человека.

для выявления спектра антител класса IgG и IgM к структурным (core) и неструктурным (NS3, NS4, NS5) белкам, сорбированным раздельно на 4-х стрипах.

для выявления антител класса IgG и IgM к структурным (core) и смеси неструктурных (NS3, NS4, NS5) белков, сорбированных на 2-х стрипах.

Двухстадийный вариант.

Суммарное время инкубаций – 2 ч.

Срок годности – 12 мес.

Подходит для ручной постановки и постановки на автоматических анализаторах.

C — 455

24 х 5

8 023,40

С — 451

1 930,50

С — 452

1 750,10

Контрольная панель сывороток, содержащих и не содержащих анти–HCV (для внутрилабораторного контроля)
Лиофилизированные сыворотки, содержащие анти – HСV. Лиофилизированные сыворотки, не содержащие анти – HCV.
Срок годности – 12 мес.

C — 531

5 фл.

с положит. образцами

3 фл.

с отрицат. образцами

1 298,00

ДС-ВЛК-АНТИ-HCV

Образец для внутрилабораторного контроля качества исследований на HCV.

Срок годности – 24 мес.

C — 731

24 флакона

по 0,3 мл

1 652,00

ДС-Стандартная панель-анти-HCV

Предназначена для контроля чувствительности и специфичности иммуноферментных тест-систем, выявляющих антитела к вирусу гепатита C

Срок годности 24 мес.

C — 0380

20 фл.

с положит. образцами

8 фл. с отрицат. образцами

5 500,00

Источник: lab1.ru

Что такое антитела к гепатиту С в крови?

Чтобы разобраться в вопросе, что это значит, антитела к вирусу гепатита С, следует кратко остановиться на механизме формирования иммунного ответа. Это соединения белковой структуры, которые при проникновении патогена в организм вырабатываются на поверхности определенного вида лимфоцитов и попадают в системный кровоток. Основная функция антител состоит в связывании с вирусом, препятствуя проникновению в клетку и последующей репликации.

У человека обнаружены пять групп антител (их также именуют иммуноглобулинами – Ig):

тип А – вырабатываются вскоре после инфицирования и постепенно исчезают по мере устранения патогенной флоры (в результате иммунной активности или соответствующей терапии);
тип М – выделяются в острой фазе течения инфекции, обнаруживаются и при активизации хронического патологического процесса;
тип G – составляют более 70% от общей массы иммуноглобулинов человека, «отвечают» за формирование вторичного иммунного ответа;
тип D – выявлен сравнительно недавно, функции практически не изучены;
тип Е – выделяется при развитии аллергической реакции в ответ на попадание специфического раздражителя (аллергена).

Для диагностики гепатита C решающую роль играет наличие антител класса М и G. Положительный анализ методом ИФА не означает 100% диагноза гепатита C. Определение суммарных антител (М + G) – начальный этап диагностического процесса. В дальнейшем для подтверждения инфицирования проверяют наличие и фактический уровень РНК HCV методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

По результатам анализа ИФА доктор может определить, является ли человек носителем вируса, либо заболевание прогрессирует и требует немедленной терапии. Случаи самоизлечения и отсутствие поражений печени является результатом полноценной работы иммунной системы и активной выработки АТ, которые останавливают развитие вирусной инфекции. Именно в таком случае антитела к гепатиту С есть, а ПЦР отрицательный.

Подобную картину отмечают, если АТ обнаружены у ребенка. Обычно это происходит, если беременная женщина была инфицирована вирусом, либо получала соответствующую терапию до зачатия. При соблюдении необходимых мер профилактики и защиты от заражения, АТ исчезнут в 12–18 месяцев.

Виды антител

В клинической практике из всех разновидностей иммуноглобулинов у человека, значение имеют только два вида – IgM и IgG. Первые активно вырабатываются вскоре после проникновения патогена в клетки организма, вторые свидетельствуют о длительном, хроническом течении заболевания.

Однако современные методы диагностики позволили расширить спектр определяемых ИФА антител:

Anti-HCV IgG	Положительный результат свидетельствует о хроническом течении заболевания, при отрицательном ПЦР возможно самоизлечение
Core-Ag HCV	Core — часть структуры генома HCV. Появление АТ указывает на недавнее заражение и острое течение инфекции
Anti-HCV суммарный (total)	Указывает на общий уровень АТ в организме человека. Позитивный результат сохраняется на протяжении всей жизни вне зависимости от ответа на лечение
Anti-HCVNS(3, 4, 5)	Позволяет определить стадию и тяжесть патологии. АТ к NS3 выявляют сразу после заражения. АТ к NS4 указывает на тяжесть нарушений работы печени. АТ к NS 5 демонстрирует хроническое, упорное течение

Из перечисленных исследований на практике реально применяют только три: Anti-HCV IgG, Core Ag (антиген) и суммарный Anti-HCV. Последний анализ на антитела к структурным белкам финансово затратен, поэтому назначается только в критических случаях (например, необъяснимая резистентность к терапии, рецидив и т.д.).

Через какое время возможно выявление антител

Процесс выработки антител в значимых концентрациях в среднем занимает несколько недель. Однако в зависимости от того, какой обнаруживается маркер, возможно определение стадии и степени тяжести HCV-инфекции.

Предполагаемые сроки выявления АТ представлена в таблице:

Тип серологического исследования	Приблизительное время определения методом ИФА
Общий Anti–HCV	На 4–6 неделе после инфицирования
Core-Ag HCV	Может определяться уже через несколько дней после заражения (при высокой чувствительности тест-систем). Однако подобная методика не получила распространения из-за высокой стоимости. Чаще проводится в комплексе с выявлением IgG к гепатиту С
Anti-HCV IgG	На 9–12 неделе после проникновения вируса в организм
Антитела к структурным белкам	Можно выявить позже всех выделяющихся АТ

Тест, предполагающий выявление антител гепатита С, лучше проводить по назначению врача. В отличие от качественного ПЦР, в результатах которого указан однозначный вывод – обнаружен в организме HCV или нет, профессионально расшифровать данные серологического исследования может только специалист.

В зависимости от того, когда появляются те или иные антитела, доктор подбирает оптимальную схему терапии. Резистентные и хронические формы патологии часто требуют не только применения комбинации современных противовирусных препаратов, но и дополнительного назначения Рибавирина и/или Интерферонов пролонгированного действия (ПЕГ-ИФН).

Анализ ПЦР и ИФА: этапы диагностирования вируса

В настоящее время существуют два основных метода выявления HCV-инфекции:

серологические анализы (ИФА) – выявление специфических антител к HCV (anti-hcv);
молекулярно-биологические исследования, обнаруживающие РНК вируса (качественная и количественная ПЦР, генотипирование).

Двойная диагностика исключает риск ложноположительной, как и ложноотрицательной реакции. При выявлении anti-hcv с помощью ИФА доктор рекомендует исследование ПЦР (сначала качественное, затем количественное).

Но иногда результаты обследования являются противоречивыми, и ответ на вопрос, что значит, антитела к гепатиту С обнаружены, а ПЦР отрицательная, зависит от ряда факторов.

Методика расшифровки результатов ПЦР и ИФА приведена в таблице.

Данные Anti-HCV и HCV РНК	Предполагаемый диагноз
+/+	Острая или хроническая фаза HCV (требует дополнительной диагностики)
+/-	Острое течение HCV, когда произошло выделение АТ, но РНК вируса в крови не обнаруживается. Такие же результаты возможны в период после перенесенного острого гепатита С
-/+	Ранний период после заражения; хронический гепатит C на фоне иммунодефицита; ложноположительный результат ПЦР.
-/-	Отсутствие гепатита С

Обнаружение антигенов гепатита

Первичная лабораторная диагностика HCV начинается с определения основного маркера инфицирования – антител к антигенам вируса гепатита С. Они начинают появляться практически сразу после заражения, но в терапевтически значимых концентрациях обнаруживаются спустя несколько недель. Наличие АТ свидетельствует о перенесенном или текущем вирусе (при положительном результате ПЦР).

ИФА проводится при помощи высокочувствительных современных, но в то же время финансово доступных тест-систем 2 и 3 поколения. Подобные наборы реагентов основаны на захвате специфических к HCV антител рекомбинантными белками, а затем определении вторичных АТ против IgG или IgM. Эти антитела помечены ферментами, катализирующими проведение реакции.

ИФА тест-системы II поколения помимо обнаружения основных АТ способны обнаружить антитела против эпитопов, полученных из участка core и неструктурных белков (NS3, NS4). Таким образом достигается высокая чувствительность исследования и низкая вероятность ложных результатов. При помощи таких тестов HCV можно обнаружить через 2,5 месяца после заражения.

ИФА – системы III поколения разработаны на основе антигена структурного протеина NS5 и высокоиммуногенного эпитопа NS3. Подобная методика позволяет существенно сократить время от попадания вируса в организм до выработки антител.

Обнаружение IgM недостаточно для выявления острого или хронического течения HCV, так как у некоторых пациентов при длительном течении заболевания регулярно вырабатываются IgM, но в то же время не все больные «отвечают» на острую форму заболевания выделением IgM.

Вероятность ложноположительных результатов (впоследствии отмечают исчезновение АТ) возрастает при:

беременности;
аутоиммунных патологиях;
положительных ревмопробах и др.

Возможность ложноотрицательных результатов присутствует при:

регулярном проведении гемодиализа;
ВИЧ;
злокачественных поражениях системы кроветворения.

Считается, что при HCV-инфекции одного ИФА недостаточно, так как АТ появляются не сразу. Кроме того, всегда присутствует вероятность ложных результатов. Поэтому обязательным в диагностике гепатита С является дополнительное проведение качественной и количественной ПЦР.

Носитель HCV

Некоторые гепатологи считают, что такого термина, как «носитель HCV» не существует, человек или болен гепатитом С, или нет. Иногда подобный диагноз ставят при выявлении в крови антител к HCV, но отрицательном результате ПЦР.

Подобная ситуация возможна в нескольких случаях:

пренатальный контакт с вирусом, АТ в крови ребенка сохраняются до 1,5–3 лет, затем отмечают, что они просто пропали;
перенесенная острая форма HCV, которая либо проходит без симптомов, либо протекает с вариабельной клинической картиной.

В любом случае эта проблема требует постоянного наблюдения врача. Обязательна ПЦР, ее повторяют регулярно (раз в несколько месяцев) и проведение других диагностических мероприятий. Также необходимо исключить состояния, повышающие риск ложноположительного результата ИФА.

Почему после лечения антитела остаются

При проведении контрольных анализов после окончания противовирусной терапии многих пациентов интересует вопрос, когда исчезают АТ и надолго остаются ли антитела после лечения гепатита С. Доктора предупреждают, что IgG могут циркулировать в крови несколько лет, однако их уровень должен постепенно снижаться.

При проведении исследование методом ИФА на выявление суммарных антител, также возможен положительный результат. Но в таком случае требуется дифференцировать IgG и IgM. Обнаружение последних говорит в пользу рецидива заболевания и требует срочного начала дополнительного курса медикаментозного лечения оставшейся в организме инфекции.

В норме после лечения гепатита С остаются IgG.

Суммарные антитела

Анализ на суммарные антитела к вирусу гепатита С выявляет общее количество иммуноглобулинов без их дифференцировки – IgG + IgM. В бланках лабораторий такое исследование часто называют Anti-HCV Total. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии заболевания (за исключением отдельных случаев). Положительный результат требует дальнейшей диагностики.

Пациенту назначают:

ПЦР (сначала качественную, затем количественную);
дифференцированную серодиагностику (анализ для выявления титров IgG и IgM по отдельности);
ультразвуковое исследование печени;
печеночные пробы;
анализ на сопутствующие заболевания (ВИЧ, аутоиммунные патологии, расстройства кроветворения и иммунной функции).

Окончательный диагноз врач ставит только после получения всех результатов. Также обращают внимание на анамнез. Прохождение противовирусной терапии обязательно только после достоверного подтверждения наличия вируса в крови.

Если суммарное определение АТ к HCV не укладывается в общепринятые нормы показано дальнейшее обследование. Начало лечения без дополнительных исследований противопоказано.

Расшифровка результата анализа

Как правило, в бланке анализа на антитела к вирусу гепатита С приведены результаты и норма параметров. При некоторых типах исследований пишут титр АТ.

Данные анализа	Предполагаемое состояние пациента
Anti-HCV суммарные положительные (с указанием титра)	наличие инфекции в острой или хронической форме; остаточные явления после лечения; рецидив; «носительство» HCV (у детей до 3 лет); ложноположительный результат.
Anti-HCV суммарные отрицательные	человек здоров; ложноотрицательный результат.
Обнаружен IgM (с указанием титра), IgG отрицательный	Начало развития инфекции (недавнее заражение)
Выявление IgG (с указанием титра), IgM отрицательный	хроническое течение инфекции; самоизлечение после перенесенной острой формы заболевания; последствия противовирусного терапевтического курса (отмечается тенденция к снижению).
Выявлены и IgG и IgM	Рецидив хронического заболевания

Расшифровкой показателей ИФА должен заниматься только врач. Самолечение по результатам одного или нескольких исследований противопоказано.

Пациенты из группы риска

Регулярно проводить серологическое исследование на выявление маркеров гепатита С необходимо определенной категории людей:

работникам медицинских учреждений;
с диагностированным ВИЧ;
при подготовке и в период беременности;
после полового акта с носителем вируса;
больным с онкологическими патологиями крови;
при неразборчивости в сексуальных контактах.

Также в категорию риска попадают люди, пристрастившиеся к инъекционным наркотическим препаратам, постоянно контактирующие с носителем вируса (например, муж/жена больны HCV). Но врачи-гепатологи обращают внимание пациентов на возможность ложных показателей исследования, что требует комплексной диагностики.

Автор: Александра Малкина

Источник: med88.ru