Гепатит с анализ ифа к оптическая плотность

Гепатиты выделяют в отдельную группу воспалительных заболеваний печени. Они могут иметь разную этиологию и форму. При первых подозрениях на такие заболевания врач назначает соответствующие анализы. Но так как патологии рознятся своей природой, то и методы обнаружения вируса тоже отличаются.

Чаще всего фиксируются вирусы гепатитов А, В, С, D, E, F, G, которые вызваны количественным вирусным инфицированием. Помимо этого, показатели заболевания могут наблюдаться при желтой лихорадке, паротите, болезни Эпштейна — Барра, герпесе, краснухе, цитомегаловирусах, лихорадке Ласса, СПИДе.

Бактериальные причины развития патологий наблюдаются при наличии сифилиса, лептоспирозе, токсические – при алкоголизме, лекарственной, химической интоксикации. Также существуют гепатиты, вызванные лучевой болезнью и аутоиммунными патологиями. Каждый из этих видов патологии требует индивидуального подхода в лечении.

Поэтому при наличии у больного клинических симптомов заболевания назначается исследование крови на маркеры различных типов заболеваний.

Подготовка и сдача анализов

Чтобы точно установить вид гепатита (вирусный, невирусный, острый, хронический или диффузный), больным следует сдать кровь на антитела. Но такая процедура в обязательном порядке требует предварительной качественнойподготовки.

Поэтому прежде чем делать анализ, следует учитывать такие пункты:

Сдачу крови надо проводить натощак, так как на протяжении дня ее характеристики значительно отличаются.
Последнее употребление пищи должно быть минимум за восемь часов до анализа. Не позволяется пить кофе, сок, чай и другие подобные напитки, разрешается только питьевая вода.
В течение двух дней перед исследованием нельзя есть жирные и жареные продукты, пить алкоголь.
Несколько часов перед процедурой запрещается курить.
Кровь на гепатит не сдается после рентгена, ультразвука, массажа, физиотерапии.
За сутки до процедуры полностью прекращается употребление лекарств, снижаются физические и эмоциональные нагрузки.
Если невозможно отменить лекарственные препараты, перечень этих средств должен быть указан отдельно еще до проведения анализа.

Периоды, когда необходимо сдавать кровь на подтверждение вида гепатита, разнятся. Так, выявить маркеры вируса группы А можно еще при первых симптомах патологии, так как максимально количественная концентрация антител к нему наблюдается на протяжении тридцати дней.

Вирус гепатита С определяется не раньше, нежели через полтора месяца после предполагаемого заражения.

Кровь на вирус можно сдать как в больнице, так и вызвать врача на дом. В любом случае, в процессе процедуры медик должен придерживаться необходимых стерильных мер, то есть использовать одноразовые материалы и инструменты.

Последовательность сдачи крови на анализ:

Рука в районе предплечья перевязывается медицинским жгутом. Из-за этого движение крови в сосуде приостанавливается, участок вены в районе локтя становится выпуклым. В это место медик и будет вводить иглу.
Район локтевого сгиба, наполненный кровью, хорошо дезинфицируется, смоченной в спирте ваткой.
К шприцу подсоединяется игла и вводится в вену. Сразу после этого жгут снимается.
После того как отобрано необходимое количество жидкости, иглу убирают из сосуда, а к ранке прикладывают ватку, смоченную в спирте. Чтобы быстро остановить кровь и не допустить образования гематомы, его сильно прижимают, затем руку сгибают и прислоняют к туловищу.

Нормальные показатели и расшифровка

Для определения вируса гепатита А применяется имуннохемилюминисцентный способ установления маркеров lg G вируса. Норма — показатель меньше 1 S/CO. Если результаты выше, это может говорить о присутствии вируса либо ранее перенесенном заболевании.

Маркер гепатита В определяется наличием антител Lg M. Любое их количественное значение является основанием для подтверждения диагноза гепатита В.

Вирус гепатита С диагностируется методом ИФА. В норме анти HCV-антитела должны отсутствовать. В случае их обнаружения, необходима повторная сдача анализа. Если и дополнительные исследования дали позитивный результат, вирус гепатита С подтверждается.

Маркеры гепатитов D-G тоже устанавливаются посредством иммуноферментного анализа. В случае присутствия антител к вирусам и их рекомбинантам, диагноз подтверждается после двух положительных проб.

Определение токсических, аутоиммунных, лучевых, то есть невирусных гепатитов несколько отличается.

В таких случаях используются косвенные методы подтверждения диагноза:

Анализ на фибриноген. Норма этого белка находится в пределах 1,8 — 3,5 г/л. Пониженное число говорит о гепатите и повреждении тканей печени.
Анализы на АСТ и АЛТ. Норма для АСТ от 0 до 75 Ед/л, для АЛТ от о до 50-ти Ед/л. Количественное повышение показателей указывает на наличие заболевания.
Анализ на билирубин. Норма в пределах 5- 21 мкмоль/л. Большее число говорит о развитии патологии.
Общий белок сыворотки. Норма взрослых 66 — 83 г/л., если числовое значение ниже — это свидетельствует об уменьшении альбумина, то есть о наличии заболевания.

Для подтверждения аутоиммунного гепатита проводятся микроскопические изучения биоптата печени. Такой анализ позволяет выявить количественные специфические поражения органа. Для этого при помощи специальной иглы берется фрагмент ткани печени. Затем материал подвергается обработке особыми реагентами и изучению под микроскопом. Также аутоиммунный гепатит подтверждается, если расшифровка анализа говорит, что уровень гамма глобулина G выше в 1,5 раза и когда антигладкомышечные, антиядерные, антимитохондриальные антитела в высоком титре имеют соотношение более чем 1:80.

Помимо этого, при таком диагнозе у больного присутствуют признаки воспаления тканей печении и ее недостаточность.

Все тонкости расшифровки анализа может знать только опытный специалист, так как, например, отдельное количественное увеличение общего белка необязательно является подтверждением болезни печени, а понижение альбумина может говорить о патологии почек.

Дополнительные анализы

Одно только исследование крови не всегда позволяет правильно установить диагноз и выяснить точную причину болезни. В некоторых вариантах делается бромсульфалеиновая проба. Это исследование позволяет проанализировать работу печени.

Бромсульфалеин вводится в кровь, из нее попадает в печень, затем в желчь и выводится естественным путем. Помимо этого, при подозрении на патологию может быть назначено ультразвуковое обследование печени. Это позволит определить размер органа (увеличен или нет), неоднородность его тканей (наличие фиброза, гипертрофии и др.), неточность контуров. Подобные изменения как раз и характерны для гепатитов.

В нынешнее время, чтобы определить вирус, часто применяется такой метод молекулярной диагностики, как полимеразная цепная реакция (ПЦР). Его преимущество в высокой чувствительности, а значит, большой точности.

Этот анализ основан на неоднократном копировании определенной части ДНК или РНК посредством ферментного воздействия. В результате образуются задвоенные отрезки генетической цепочки, благодаря которым можно выявить даже незначительное количество возбудителя.

ПЦР-исследования позволяют, определить вирус и поставить точный диагноз уже через несколько часов. Этот метод выявляет именно возбудителя, в то время, как другие анализы устанавливают лишь реакцию организма на вирус. Но у этого способа есть и свои недостатки. Все исследования должны проводиться только в стерильных условиях. Даже малейшее загрязнение способно повлиять на результаты.

Помимо этого, делать подобные тесты и расшифровку может только медик с большим опытом работы в сфере генетики.

Учитывая все вышеперечисленные факторы, нельзя сказать, что способ ПРЦ всегда точен. Он может показать неправильный результат как в положительную, так и в отрицательную сторону.

Для качественного лечения вирусных видов гепатита применяются иммуномодуляторы и противовирусные средства. Но так как эти препараты оказывают достаточно сильное воздействие на организм, прежде чем их приписать врач должен быть абсолютно уверен, что причиной патологии является именно вирусная инфекция. Поэтому могут быть назначены дополнительные анализы и исследования.

Source: pechen1.ru

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).

Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.

Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.

Преимущества метода

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Показания к назначению и выявляемые заболевания

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:

IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
IgG к ВИЧ;
Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
Ig M и IgG к токсоплазмозу;
Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
IgG к паразитарным заболеваниям;
Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
IgG к хеликобактерной инфекции.

Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.

Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).

Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Анализируемый биоматериал и особенности его забора

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

Сроки готовности результатов ИФА

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Расшифровка иммуноферментного анализа

Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

Анализируемые показатели

IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

Возможные результаты ИФА

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

Источник