Гепатит с антитела к неструктурным белкам вируса

Антитела к NS и core гепатита С – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются к структурным и неструктурным белкам вируса. Антигены вируса и антитела к нему обнаруживаются в рамках серологического исследования, которое называется иммуноферментным анализом (ИФА). Его выполняют при подозрении на гепатит С, во время противовирусной терапии и после нее. Снижение уровня антител (anti-HCV) отдельных классов указывает на полное уничтожение возбудителя инфекции.

Структурные и неструктурные белки гепатовируса

HCV – вирус рода Hepacivirus из семейства Flaviviridae, провоцирующий инфекционное воспаление печени. Когда антиген (чужеродное вещество) проникает в организм, возникает иммунный ответ, который характеризуется выработкой антител. При заражении гепатитом С специфические иммуноглобулины синтезируются к разным частям вируса:

• Ядро – содержит структурный белок core. При инфицировании он встраивается в геном клеток печени. В результате они превращаются в фабрику по производству дочерних вирионов. В 1 зараженной клетке ежедневно синтезируется от 30 до 50 вирусов.
• Оболочка – нуклеотидные протеины типа Е1 и Е2. Участвуют во взаимодействии возбудителя с иммунными клетками крови. Они помогают вирусу гепатита С (ВГС) защищаться от Т-лимфоцитов, гранулоцитов, фагоцитов и других клеток, борющихся с антигенами.
• Фрагменты генома – неструктурные белки типа NS2, NS3, NS4, NS5. Выполняют регуляторные функции, участвуют в репликации, то есть образовании копий вируса.

Структурные и неструктурные белки ВГС – антигены, к которым иммунная система вырабатывает антитела. Поэтому анализ на anti-HCV назначается всем людям с подозрением на гепатит С.

В рамках иммуноферментного анализа определяют только три неструктурных белка – NS3, NS4 и NS5. В действительности их больше и каждый выполняет определенные функции. Одни участвуют в расщеплении ферментов и белков, а другие – в сборке скопированного генетического материала. Учеными обнаружено 11 неструктурных белков, но функции некоторых из них до сих пор неизвестны.

Как проводят анализ на антигены и антитела к вирусу гепатита

Анализ на антитела к ВГС (anti HCV) – молекулярно-биологическое исследование, направленное на выявление иммуноглобулинов к гепатиту С. В его основе лежит реакция антиген-антитело, при которой формируются устойчивые комплексы из белков возбудителя и плазмы крови.

Чтобы обнаружить anti-HCV, во время анализа используют специальные ферменты. Они выполняют функцию меток, позволяющих регистрировать соответствующие сигналы. Главное преимущество серологического анализа – высокая специфичность. Полученные результаты дают информацию о:

1. типе возбудителя;
2. стадии заболевания;
3. форме гепатита (острый или хронический).

Для анализа берут венозную кровь из локтевой вены. Подготовка к исследованию не занимает много времени. Пациентам рекомендуют выполнять процедуру натощак в утренние часы, не курить за полчаса до сдачи крови.

Для чего назначается анализ на anti-HCV:

• первичная диагностика HCV-инфекции;

• дифференциальная диагностика гепатитов;

• выявление ранее перенесенного заболевания.

В случае раннего заражения (период до 4 недель) возрастает риск ложноотрицательного результата анализа. Поэтому даже при отсутствии в крови иммуноглобулинов дополнительно выполняется ПЦР на гепатит С. Если РНК возбудителя обнаруживается, диагноз подтверждают.

Анализ на anti-HCV выполняется при:

1. обследовании лиц из группы риска (хирургов, прооперированных пациентов, реципиентов крови);
2. признаках инфекционного поражения печени;
3. повышенном содержании печеночных ферментов;
4. планировании беременности;
5. мониторинге эффективности антивирусной терапии.

Сразу после забора крови лаборант подписывает образец и отправляет его в лабораторию для анализа. На исследование уходит не более 2-3 рабочих дней.

Расшифровка результатов

Если в крови обнаруживают иммуноглобулины к ВГС, это еще не свидетельствует о заражении. По статистике, до 30% пациентов излечиваются самостоятельно. Все они даже не догадываются, что переболели опасным заболеванием, исходом которого нередко становится фиброз, цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.

Виды антител, которые выявляются при иммуноферментном анализе:

• Anti-HCV core IgM – иммуноглобулины, которые синтезируются к ядру возбудителя. Они начинают циркулировать в крови раньше других антител. При хронической форме гепатита их концентрация сильно уменьшается.
• Anti-HCV NS – антитела, синтезированные к неструктурным белкам ВГС. Если при анализе выявляются anti-NS3, это свидетельствует об острой форме гепатита. Белковые комплексы anti-NS4 и anti-NS5 обнаруживаются преимущественно при переходе гепатита в вялотекущую форму.
• Anti-HCV total – суммарные антитела, которые возникают к возбудителю. Если они выявляются во время анализа, это значит, что человек либо заражен гепатитом, либо перенес инфекцию.

Во время диагностики вирусной болезни учитываются результаты качественной ПЦР. При выявлении HCV RNA, то есть РНК возбудителя, диагноз подтверждается.

Пример иммуноферментного анализа с расшифровкой данных

Во время иммуноферментного анализа обязательно определяют позитивность пробы на структурный белок ВГС – КП (core-Ag). Коэффициент позитивности применяется для оценки уровня иммуноглобулинов в крови. В мировой практике он измеряется в МЕ/мл. Результаты анализа считаются положительными, если этот коэффициент превышает 1. Иными словами, чем выше КП, тем больше содержание иммуноглобулинов в образце.

Если данные иммуноферментного анализа указывают на инфицирование, выполняют ПЦ.

После подтверждения диагноза проводят дополнительные инструментально-лабораторные исследования, посредством которых определяются:

1. структурные изменения – фиброз, цирроз печени, печеночно-клеточный рак;
2. вирусная нагрузка – концентрация РНК возбудителя в 1 мл крови;
3. активность воспаления – стадия гепатита С;
4. генотип ВГС – тип и подтип возбудителя.

С учетом результатов анализов составляют схему противовирусной терапии. При курсовом приеме ингибиторов неструктурных белков ВГС – Софосбувира, Нарлапревира, Ледипасвира Омбитасвира, Даклатасвира – выздоровления достигают 96-100% пациентов. Поэтому если вы подозреваете гепатит, запишитесь на прием к врачу.

Anti-HCV к гепатиту С (NS5, NS4, NS3) – иммуноглобулины, которые вырабатываются к неструктурным белкам вируса, провоцирующего воспалительное заболевание печени. Антитела к возбудителю инфекции определяются в рамках иммуноферментного анализа (ИФА). Наличие в крови иммуноглобулинов класса IgM и IgG свидетельствует о перенесенном заболевании или недавнем заражении вирусом. Для подтверждения диагноза проводят реал-тайм ПЦР. Если в плазме выявляется РНК HCV, положительный результат ИФА подтверждается.

Антигены вируса гепатита

Антигены – потенциально опасные чужеродные вещества, структура которых зависит от типа возбудителя инфекции. При их попадании в организм возникает иммунный ответ, характеризующийся формированием антител. С точки зрения биохимии, антигеном называется любая молекула, провоцирующая выработку специфических иммуноглобулинов.

Вирус гепатита С (ВГС) – одноцепочечный РНК-содержащий вирус, который относится к семейству Flaviviridae. Во время самокопирования (репликации) его геном преобразуется в белок, состоящий из 3000 аминокислот. Под действием специальных ферментов он разрезается, вследствие чего появляются:

1. неструктурные белки (NS2, NS3, NS4, NS5, p7) – при репликации вируса гепатита С выполняют регуляторные функции;
2. структурные белки (core, E1, E2) – участвуют в образовании капсида, то есть внешней оболочки вируса гепатита.

Неструктурных белков вируса много, но в лабораторных условиях чаще всего определяются антитела только к трем из них – NS3, NS4, NS5.

Особенности антигенов HCV:

• NS3 – антиген, к которому быстрее всего возникает иммунный ответ. Высокое содержание anti-NS3 указывает на острое течение гепатита С.
• NS4 – белок, антитела к которому возникают преимущественно после хронизации воспаления в печени. Высокие титры anti-NS4 в острой фазе – признак скорого перехода гепатита в вялотекущую форму.
• NS5 – маркер хронического гепатита С. Уменьшение титров anti-NS5 во время противовирусной терапии (ПВТ) указывает на положительную динамику, скорое достижение устойчивого вирусологического ответа.

После выздоровления иммуноглобулины к антигенам NS4 и NS5 циркулируют в крови еще много лет. В случае полной эрадикации (уничтожения) вируса они исчезают у 90% пациентов спустя 10 лет.

На чем основан анализ на антитела

Иммуноферментный анализ (ИФА) – высокоточный метод определения антител к возбудителю инфекции. Серологическое исследование основано на реакции антиген-антитело, которая происходит при попадании в кровь вируса Hepatitis C Virus. Чтобы выявить сформировавшийся комплекс из неструктурных белков HCV и иммуноглобулинов, в образцы крови вносят ферменты, посредством которых регистрируются сигналы.

Теория серологического исследования базируется на:

1. знаниях физико-химических закономерностей;
2. принципах химической энзимологии и иммунохимии;
3. законах аналитической химии.

При заражении гепатитом С выявляются антитела двух типов – IgG и IgM, что указывает на контакт организма с белками вируса.

Гепатит С – болезнь с малосимптомным течением. Поэтому ИФА назначается всем людям из группы риска – хирургам, инъекционным наркоманам, реципиентам и донорам крови.

Серологический тест входит в скрининговое обследование, при котором выявляются маркеры инфицирования вирусом HCV:

• Anti-HCV IgM – иммуноглобулины класса M, которые обнаруживаются в плазме через месяц после инфицирования. При переходе гепатита С в вялотекущую форму их содержание резко уменьшается.
• Anti-HCV core IgG – иммуноглобулины, которые возникают к структурным белкам ВГС. Обнаруживаются только через 10-12 недель после заражения гепатитом. Пиковая концентрация антител IgG приходится на 5-6 месяц перед хронизацией воспаления.
• Anti-HCV Total – суммарные антитела классов M и G к антигенам возбудителя гепатита.

Если иммуноглобулины к антигенам ВГС обнаруживаются, это еще не значит, что пациент болен гепатитом. В 15-30% случаев организм справляется с инфекцией без ПВТ, поэтому при выявлении IgM и IgG потребуются дополнительные исследования.

Что делать при положительном результате анализа

Вне зависимости от данных серологического теста, пациентам назначают полимеразную цепную реакцию. Анализ ПЦР на гепатит С – быстрый способ подтверждения результатов ИФА. Основная цель исследования – выявление РНК возбудителя.

Реал-тайм ПЦР – золотой стандарт в диагностике вирусного гепатита С. Чувствительность и специфичность метода достигает 98-100%.

Для исследования берут кровь из локтевой вены. В отличие от антител, РНК вируса обнаруживается в плазме уже через 10 суток после заражения. Если генетический материал ВГС выявляется, диагноз подтверждают.

Чтобы составить подходящую схему ПВТ, нужно дополнительное обследование:

1. УЗИ печени;
2. печеночные пробы;
3. клинический анализ крови;
4. генотипирование;
5. количественную ПЦР;
6. биопсию печени;
7. фибросканирование.

Раньше гепатит С лечили исключительно интерферонами, эффективность которых иногда не превышала 45-60%. Сейчас применяют безынтерфероновые схемы, основу которых составляют ингибиторы неструктурных белков ВГС – Ледипасвир, Элбасвир, Софосбувир, Нарлапревир, Омбитасвир, Даклатасвир и т.д. Результативность терапии даже при хроническом воспалении превышает 97%.

Гепатит С – опасная болезнь, исходом которой является цирроз и рак печени. Она протекает малосимптомно, поэтому при малейших подозрениях обращайтесь к врачу. Своевременная терапия предупреждает необратимые изменения в печени.