Гепатит с в скрининговом тесте

Àâòîð ìàòåðèàëîâ ñòàòüè: Âåðà Ñèäèõèíà

Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.

Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.

Симптомы гепатита выявить трудно на первых этапах заражения, поэтому рекомендуется проходить скрининговое обследования всем, кто находится в группе риска. Скрининг-комплекс включает анализы крови, кала и ИФА. В обязательном порядке скрининговое обследование проходят доноры крови и органов, перед плановыми операциями. Часто скрининг применяется при дифдиагностике гепатитов.

Описание скрининг-теста

Скрининг-тест — сбор и лабораторная оценка определенного перечня анализов для выявления наличия гепатитов разных типов. Несмотря на возможность выявления вируса болезни в ранней стадии, необходима дополнительная проверка данных по истечении нескольких недель с целью подтверждения достоверности результатов скрининга. Проведение скрининг-теста предполагает сбор необходимых данных, по результатам которых определяется штамм вируса (А, В, С) и ставится диагноз.

Вернуться к оглавлению

Показания к проведению

Скрининг-тесты на гепатит проводятся, чтобы вовремя выявить вирус в организме и принять меры по излечению пациента. Исследования необходимы людям в группе риска (донорам, больным в предоперационном состоянии). Особенно важно пройти скрининг тем, у кого появились такие симптомы (один или сразу несколько):

• пожелтение кожи (желтуха);
• боли в суставах и мышцах;
• общая слабость;
• тошнота, боли в желудке.

Подтверждение осуществляется, когда появились симптомы запущенной стадии. Например, при гепатите С это:

• появление синяков и выступающих сосудов;
• путаница в сознании;
• отечность;
• резкая потеря веса.

В группе риска находят люди, которые:

• использовали нестерильные шприцы, иголки, хирургические инструменты;
• проживают в одной квартире с человеком, страдающим гепатитом;
• употребляющие некачественную питьевую воду;
• занимаются донорством крови;
• постоянно находятся в местах с низким уровнем чистоты.

Вернуться к оглавлению

Виды скрининга

Исследование кала

Для более полной картины заболевания нужно здать комплекс анализов .

С целью подтверждения опасений заражение гепатитом любой формы берется кал на общий анализ. Характерным признаком вируса считается изменение цвета каловых масс в сторону осветления и выявление резкого, специфичного запаха. Первичный осмотр проводится под микроскопом. Вторым показателем, интересующим врача, считается стеркобилин. При его обнаружении, говорят о длительном присутствии вируса в организме.

Вернуться к оглавлению

Анализ крови

Различают два вида обязательных анализов:

• общий ― с целью выявления лейкоцитоза, свидетельствующего о воспалении;
• биохимия ― с оценкой уровня специфичных для гепатита показателей крови, а именно уровень повышения билирубина и холестерина.

Вернуться к оглавлению

Иммунологическое исследование

Иммунологическое исследование — анализ крови, по результатам которого делается иммунограмма. Это обязательный тип скрининг-теста, который показывает, имеет ли зараженный дело с острым или хроническим заболеванием. Анализ позволяет определить тип вируса. Цель — выявить иммуноглобин М и G. В таблице приведения расшифровка:

ПЦР-диагностика необходима для определения РНК вируса:

Вернуться к оглавлению

Исследование мочи

Оценка состояния биожидкости проводится по общему анализу. Из-за деятельности вируса урина окрашивается в темный цвет. Врач обращает внимание на измененный уровень таких веществ, как диастаза и уробилин — именно они отвечают за цвет. Повышение диастазы, отвечающего за работоспособность поджелудочной железы, говорит об осложнении острой формы гепатита.

К дополнительным методам обнаружения вируса заболевания является мазок из полости рта.

Вернуться к оглавлению

Подготовка к скринингу гепатита

Диета перед скринингом, позволит более точно определить степень заболевания.

Чтобы получить достоверный результат, важно правильно подготовиться к скринингу. Перед сдачей анализов ограничивают употребление жирной и острой пищи, исключить алкоголь и физические нагрузки. Кровь сдается натощак. Также лучше отменить употребление лекарственных препаратов. Гепатит — серьезное заболевание, которое грозит осложнениями не только его носителю, но и его ближайшему окружению. Поэтому следует позаботиться о себе и своих близких и пройти скрининг-тест на гепатит при первых симптомах недуга.

Вернуться к оглавлению

Преимущества раннего диагностирования

Раннее диагностирование гепатита позволяет сократить риск осложнения течения недуга, исключить заражение других людей с распространением вируса. Скрининговая диагностика гепатита женщины, планирующей беременность, снижает риск заражения ребенка. Если человек недавно был донором крови, делал тату или пирсинг в сомнительных салонах, а позже почувствовал недомогание — стоит пройти обследование.

Вирус гепатита С относится к флавивирусам и достаточно устойчив во внешней среде.
Пути передачи вируса гепатита С:
•    Парентеральный (с кровью и биологическими жидкостями)
•    Половой
•    Трансплацентарный

Группы повышенного риска:

•    лица, практикующие внутривенную наркоманию
•    лица, практикующие беспорядочные половые связи
•    медицинские работники
•    больные находящиеся на гемодиализе или перенесшие переливания крови
•    заключенные

Клиническое течение.

Проникая в организм, HCV попадает в макрофаги крови и гепатоциты печени, где происходит его репликация. Повреждение печени происходит в основном за счет иммунного лизиса, также вирус оказывает прямое цитопатическое действие. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит С имеет менее яркую клиническую картину, чаще переходит в хронические формы. В 20 — 50% случаев хронический гепатит С приводит к развитию цирроза печени и в 1,25 — 2,50% — к развитию гепато-целлюлярной карциномы. Инкубационный период — 5 — 20 дней. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз, возможно увеличение печени и селезенки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В трети случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Холестаз возникает крайне редко (5% случаев). Лабораторные показатели отражают цитолиз. При высоком уровне трансаминаз (более 5 норм) и признаках печеночно-клеточной недостаточности следует заподозрить микст-инфекцию – вирусный гепатит С и В.

Генотипы вируса гепатита С.

Вирус гепатита С отличается высокой изменчивостью и наличием нескольких вариантов генотипа. В настоящее время выделено 6 генотипов вируса. Для клинической практики достаточно разграничивать 5 субтипов ВГС: 1a, 1b, 2a, 2b, 3a. На территории России преобладающим генотипом является 1b, далее с убывающей частотой — 3a, 1a, 2a.
У пациентов с субтипом 1b хронизация вируса гепатита С происходит в 90% случаев, а с генотипами 2а и 3а в 33 — 50%. Инфицирование генотипом 1b сопровождается более тяжелым течением заболевания, развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Пациенты с субтипом 3a имеют более выраженный стеатоз и поражения желчевыводящих путей, а также более высокий уровень АлАТ, чем пациенты с генотипом 1b. При этом уровень фиброза более выражен у пациентов с вирусом субтипа 1b.
При монотерапии интерфероном устойчивый ответ наблюдается у 18% пациентов, инфицированных субтипа 1b, и у 55% — инфицированных другими генотипами. При комбинированной схеме лечения интерферон+рибаверин стойкий ответ наблюдается у 28% пациентов, инфицированных субтипом 1b и у 66% пациентов, инфицированных другими генотипами.

Диагностика.

Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы. Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрестных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови, как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию.).
Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса (см. тест № 324) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы — что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.
Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.
Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развернутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определенных структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.

Антитела к антигенам вируса гепатита C.
Антитела класса М начинают вырабатываться через 4 — 6 недель после инфицирования, их концентрация быстро достигает максимума. По прошествии 5 — 6 месяцев уровень IgM падает и повышается вновь во время следующей реактивации инфекции. Антитела класса G появляются с 11 — 12 недели после инфицирования, достигают пика концентрации к 5 — 6 месяцу и сохраняются в крови на более-менее постоянном уровне в течение всего периода болезни и реконвалесценции. Таким образом, суммарный уровень антител (total) определяется с 4 — 5 недели после инфицирования и далее.

Показания к назначению
•    Повышение уровня АлАТ и АсАТ
•    Подготовка к оперативному вмешательству
•    Парентеральные манипуляции
•    Подготовка к беременности
•    Клинические признаки вирусного гепатита
•    Незащищенные половые контакты, частая смена половых партнеров
•    Внутривенная наркомания
•    Холестаз

Интерпретация результатов – тест качественный.
«Положительно» — в случае обнаружения антиHCV-антител, при этом тестирование проводится повторно другим методом. При повторно положительном результате выдается ответ HCV — «Положительно», HCV (подтверждающий) — «Положительно».
«Отрицательно» — при отсутствии антиHCV-антител.
Положительный результат:
•    Гепатит С или реконвалесценция после гепатита С. Нельзя различить острый и хронический гепатит, а также гепатит и реконвалесценцию.
Отрицательный результат:
•    Гепатит С не выявлен;
•    Первые 4 — 6 недель инкубационного периода гепатита С;
•    Гепатит С, серонегативный вариант

Качественное определение РНК вируса гепатита С методом ПЦР

Маркер активной репликации вируса. Определяемый фрагмент — консервативный участок генома вируса гепатита С. Специфичность определения — 98%. Чувствительность определения до 50 МЕ/мл в прошедшей обработку (выделение РНК вируса и процесс обратной транскрипции в к ДНК) пробе.
Согласно рекомендации ВОЗ установление диагноза гепатита С возможно на основании троекратного обнаружения РНК вируса гепатита С в сыворотке крови больного при отсутствии других маркеров гепатита. РНК вируса гепатита С выявляется в крови уже через 5 дней после инфицирования, т.е. задолго до появления антител к гепатиту С. Время появления anti-HCV различно: в одних случаях — через 2 — 4 недели после начала гепатита, в других — через месяцы после повышения уровня аминотрансфераз. У ряда больных с самоограничивающимся течением инфекции anti-HCV никогда не появляются.
Серологические тесты являются свидетельством HCV инфекции, тогда как только определение РНК вируса гепатита С позволяет различать активную инфекцию от прошедшей. Проведение ПЦР позволяет выявить РНК вируса гепатита С не только в сыворотке крови, но и в биоптате печени, что важно при подтверждении роли вируса гепатита С в формировании гепатоцеллюлярной карциномы. У подобных больных РНК вируса гепатита С регистрируется в гепатоцитах и при отсутствии anti-HCV и РНК вируса гепатита С в сыворотке крови.

Показания к назначению
•  Профилактические скрининговые исследования (РНК вируса гепатита С — самый ранний маркер при острой инфекции)
•    Обследования контактных лиц
•    Диагностика гепатитов смешанной этиологии — выявление ведущего вируса
•    Выявление стадии активной репликации вируса при хроническом состоянии
•    Контроль эффективности проводимой терапии
•    Цирроз печени
•  Слабость, недомогание, быстрая утомляемость, снижение аппетита, тошнота, тяжесть в правом подреберье, увеличение печени, а также боли в мышцах, суставах
•   Желтуха, кожный зуд, увеличение селезенки, сосудистые «паучки», в некоторых случаях покраснение ладоней и стоп
Интерпретация результатов
В норме — не обнаружено.

Количественное определение РНК вируса гепатита С методом ПЦР (вирусная нагрузка).

Определяемый фрагмент — консервативный участок генома вируса гепатита С. Специфичность определения — 98%. Чувствительность определения — от 850000МЕ/мл до 600 МЕ/мл вирусных частиц в сыворотке крови.
Количественная характеристика содержания РНК вируса гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии. Если концентрация вируса меньше 8х105 МЕ/мл (2х106 копий/мл), то прогноз курса лечения благоприятный, если выше, то необходимо апробировать другие схемы лечения. Вирусная нагрузка ниже 8х105 МЕ/мл (2х106 копий/мл) наряду с определением генотипа вируса является независимым и наиболее информативным параметром прогнозирования эффективности лечения.
Эффективность выбранной схемы лечения на 85% определяется снижением концентрации РНК вируса гепатита С к третьему дню от начала лечения. Ранний вирусологический контроль осуществляется на 3 — 4 неделе с момента начала противовирусной терапии.

Показания к назначению
•    Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови;
•    Определение тактики лечения пациентов;
•    Точная оценка эффективности лечения.

Определение генотипа вируса гепатита С методом ПЦР.

Определяемый фрагмент — консервативный участок генома вируса, свойственный конкретному генотипу. Специфичность определения — 98%.
Определение генотипа вируса гепатита С является достоверным прогностическим фактором развития инфекции и ответа на противовирусную терапию, а также определяется продолжительность курса лечения.

Показания к назначению
•    Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови
•    Определение тактики лечения пациентов
•    Точная оценка эффективности лечения
•    Прогноз хронизации инфекционного процесса
•    Определение прогрессирования заболевания

Иммуноблот рекомбинантный, IgG к вирусу гепатита С.

Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определенных структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.
Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3-4 недели инфекции – период появления в крови специфических антител, но есть исключения:
•   «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
•    иммуносупрессированные пациенты;
•    новорожденные с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).
Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.

Показания к назначению
•  Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.
Интерпретация результатов
«Отрицательный результат» — человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов – ложноположительный).
«Положительный результат»- была инфекция вирусом гепатита С.
«Пограничный результат» —  возможно, была инфекция вирусом гепатита С.