Характеристика гепатита а и в таблицах

ТОП 10:

Гепатиты	А (HAV)	B (HBV)	С (НСV)	D (HDV)	Е (НЕV)	G (HGV)
Таксономия возбудителя	Сем. Picornaviridae Род. Hepatovirus	Сем. Hepadnaviridae Род. Ortohepadnavirus	Сем. Flaviviridae Род. Hepacivirus	Неклассифицирован, вирус-сателлит (вироид) HBV	Сем. Hepeviridae Род. Hepavirus	Сем. Flaviviridae неклассифицирован,
Морфология (форма, размер, наличие суперкапсида)	простой вирус, капсид икосаэдр 25-30 нм	сложный вируссферической и палочковидной формы 42 нм	сложный вирус сферической формы 55-65 нм	сложный вирус сферической формы 35-40 нм.	простой вирус икосаэдр 27-34нм	сложный вирус сферической формы 60 нм
Геном	+ РHK, линейная, нефрагментированная	ДНК кольцевая, двунитевая с однонитевым участком	+ РHK, линейная, нефрагментированная	— РHK, кольцевая	+ РHK, линейная, нефрагментированная	+ РHK, линейная, нефрагментрованная
Пути передачи	Фекально-оральный	Парентеральный	Парентеральный	Парентеральный	Фекально-оральный	Парентеральный
Инкубацион-ный период	14-45 дней	2- 6 месяцев	14 дней — 3 месяца	2 — 6 месяцев	14-45 дней	14 дней — 6 месяцев
Клинические проявления	Острые гепатиты	Часто хронический гепатит, цирроз, нередко рак	Часто хронический гепатит, цирроз, часто рак	Часто хронический гепатит, цирроз, нередко рак	Острые гепатиты, тяжело протекают у беременных	Часто хронический гепатит
Специфичес-кая профилак-тика	Инактивированная культуральная по эпид. с 3 лет, ревакцинация через 4 года	Рекомбинантная, плановая с 1996 года. 12час, 1месяц,3 месяца ревакцинация через 5 лет	Нет	Вакцина против гепатита В из-за общности поверхностного HBsAg	Инактивированная культуральная по эпид. с 3 лет.	Нет
Исследуемый материал	сыворотка крови, фекалии, вода и пищевые продукты.	сыворотка крови, биоптаты печени	сыворотка крови, биоптаты печени	сыворотка крови, биоптаты печени	сыворотка крови, фекалии, вода и пищевые продукты	сыворотка крови, биоптаты печени
Маркеры	HAV РНК, HAV Ag, anti-HAV IgM, IgG	HBV ДНК, HBsAg, HBeAg, anti-HBsAg, anti-HBeAg, anti-HBc IgM, IgG	HCV РНК, anti-HCV IgM, anti-HCV IgG	HDV РНК, HDAg, anti-HDV IgM, IgG	HEV PНК, HEV Ag, anti-HEV IgM, IgG,	HGV РНК, anti-HGV
Экспресс-диагностика	1) ПЦР — РНК вируса (HAVRNA) выявляют в сыворотке крови, фекалиях, воде и пищевых продуктах. 2) ИФА — антиген вируса (HAVAg) выявляют в экстрактах фекалий; 3) Иммунная электрон-ная микроскопия (ИЭМ).	1) ПЦР, метод молекулярной гибридизации — ДНК вируса (HBV DNA) в крови, биоптатах печени. 2) ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют антигены вируса : поверхностный антиген (HВsAg), “антиген инфекционности” (HВеAg);	ПЦР, метод молекулярной гибридизации в сыворотке крови — РНК вируса (HCV RNA)2)	1) ПЦР, и метод молекулярной гибридизации — РНК вируса (HDV RNA) ; 2) ИФА, РИА, иммуноблотинг -антиген вируса (HDV Ag) .	1) ПЦР обнаружение РНК вируса (HEV RNA) в сыворотке крови, испражнениях 2) ИФА — антиген вируса (HЕVAg),	ПЦР с предварительным этапом обратной транскрипции (RT-PCR)обнаружение РНК вируса (HGV RNA) ;
Вирусологичес-кие методы	Заражение клеточных культур, обезьян (шимпанзе) только для научных и производственных целей, в диагностике не применяют	Заражение обезьян (шимпанзе) только для научных целей, в диагностике не применяют	Нет	Нет	Нет	Нет
Серологическаядиагностика	ИФА, РИА в сыворотке крови выявляют Ig M-антитела (анти-HAV IgM) и Ig G-антитела (анти-HAV IgG).	ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют противовирусные антитела: антитела к поверхностному антигену (анти-HВsAg); антитела к сердцевинному антигену (анти-HВсAg IgM, IgG; антитела к “антигену инфекционности” (анти-HВеAg);	ИФА,в сыворотке антитела к вирусу (анти-HCV IgM, анти-HCV IgG) В донорской крови 1) ИФА с раздельным определением антител к различным белкам вируса, 2) иммуноблоттинг с рекомбинантными антигенами к белкам капсида (С22) и функциональным белкам (NS3-NS5) для выявления антител.	ИФА в сыворотке крови- антитела к вирусу (анти-HDV IgM, анти-HDV IgG).	ИФА в сыворотке крови- антитела к вирусу (анти-HЕV IgM, анти-HЕV IgG	ИФА в сыворотке крови- антитела против вирусного белка Е2 (анти-HGV Е2)

Иммуноблоттинг—метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их (блоттинг — от англ. blot, пятно) из геля на нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Полоски с “блотами” антигенов выпускаются различными фирмами. 1. На эти полоски наносят сыворотку больного. 2. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. 3. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

Иммуноферментный анализ, или метод (ИФА) — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител

Иммунная электронная микроскопия – электронная микроскопия чаще вирусов, обработанных соответствующими антителами. Вирусы, обработанные иммунной сывороткой, образуют иммунные агрегаты (микропреципитаты). Вокруг вирионов образуется “венчик“ из антител, контрастированный фосфорно-вольфрамовой кислотой или другими электроннооптически плотными препаратами хорошо видимый в электронном микроскопе.

Радиоиммунный анализ (РИА), — высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген — антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (125J, 14С, 3Н, 51Сr и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение): интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

Читайте также: Эко гепатитом в у женщин

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) основана на амплификации, т. е . увеличении количества копий специфического (маркерного) гена возбудителя . Для этого двунитевую ДНК, выделенную из исследуемого материал а, денатурируют ( «расплетают» при нагревании) и достраивают (при охлаждении) к расплетенным нитям ДНК новые комплементарные нити . В результате из одного гена образуются два. Этот процесс копирования генов многократно по вторяется при заданных температурных режимах . Достраивание новых комплементарных нитей ДНК происходит при добавлении к искомым генам прай меров (затравки из коротких однонитевых ДНК, комплементарных 3′- концам ДНК искомого гена), ДНК — полимеразы и нуклеотидов.Для амплификации РНК вирусов применяют ПЦР с предварительным этапом обратной транскрипции (RT-PCR).

Маркеры гепатита В

Гепатит B (ГВ) – острое или хроническое заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита В (ВГВ), протекающее в различных клинико-морфологических вариантах: от бессимптомных форм до злокачественных (цирроз печени, гепатоцеллюлярная карцинома). Гепатит В встречается гораздо чаще протекает более остро и о заканчивается без осложнений. Но у 10% больных ВГВ переходит в хроническое течение, а в 1 % случаев развивается цирроз и первичный рак печени. На долю ГВ приходится около 15% всех острых гепатитов и не менее 50% хронических. Безжелтушные и субклинические формы инфекции, в основном, остаются нераспознанными (до 95% случаев). Заражение ВГВ происходит от «здоровых» вирусоносителей с нераспознанными хроническими или острыми формами ГВ при переливании крови и ее компонентов, при медицинских манипуляциях и сексуальных контактах. Вирус может передаваться от инфицированной матери к ребенку во время родов при нарушении целостности плаценты. В семьях больных хроническими формами ГВ и носителей HBsAg вследствие реализации гемоконтактов в быту. Вирус гепатита В чрезвычайно устойчив, при комнатной температуре сохраняется в течение 3 мес., в замороженном виде – 15–20 лет.

ВГВ чаще всего поражает печень. однако ДНК и белки вируса обнаруживаются также в почках, селезенке, поджелудочной железе, коже, костном мозге и мононуклеарах периферической крови.

Маркеры ВГВ это ДНКвируса, вирусные антигены HBsAgи HBeAg, а также антитела к ним анти-HBs, анти-HBe, и к ядерному белку HBc -анти-HBc,которые могут бытьобнаружены в организме больного. Комплексное изучение маркёров позволяет правильно установить стадию инфекции ВГВ и прогнозировать ее дальнейшее развитие.

HBsAg —поверхностный антигенВГВ — белок его внешней оболочки. Это сложный антиген, состоящий из несколько антигенных детерминант, определяющих субтип HBsAg. Известны десять субтипов HBsAg: 7 основных — ауw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adr, adw2, adw4, adrq+, adrq– , и 5 редких: awr, adrw, adyr и adywr. На территории РБ преобладает HBsAg субтипа ауw (ayw2 – 57%; ayw3 – 37%)

HBсAg (HBcoreAg) — внутренний или сердцевинный (ядерный) антиген — белок нуклеокапсида, обеспечивающий репликативную активность ВГВ. HBeAg (HBprecoreAg) окружает ядерный, это конформационно измененный HBcAg. HBeAgобнаруживается исключительно в биоптатах печени в ядрах гепатоцитов, а HBeAgциркулирует в крови инфицированных лиц.

Источник

ЗАНЯТИЕ № 31 ТЕМА:
ГЕПАТОТРОПНЫЕ ВИРУСЫ

ПЕРЕЧЕНЬ
КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

Вирусные гепатиты
A, B, C, D, E, G. Этиология. Сравнительная
характеристика основных биологических
свойств возбудителей вирусных гепатитов.
Вирус
гепатита А. Структура и свойства HAV.
Пути проникновения и циркуляция в
организме. Патогенез, клиника, исход
заболевания. Лабораторная диагностика
гепатита А. Иммунитет, специфическая
профилактика, лечение.
Вирус
гепатита E.
Структура вируса. Эпидемиология,
клинические формы, исход заболевания.
Вирусологическая и серологическая
диагностика.
Гепаднавирусы.
Морфология, особенности репродукции
вируса гепатита В. Структура генома,
антигены, полипептидные фрагменты
HBs-Ag,
подтипы вируса.
Гепатит В:
эпидемиология, патогенез, клинические
формы течения заболевания, исходы.
Лабораторная диагностика. Иммунитет,
специфическая профилактика, лечение.
Гепатит D. Особенности
строения вируса. Характеристика
заболевания: коинфекция, суперинфекция.
Лабораторная диагностика, профилактика.
Гепатит
С: классификация вируса, ультраструктура,
антигены. Общая характеристика
заболевания, исходы заболевания.
Диагностика гепатита C:
скрининговые методы, подтверждающие
тесты.
Гепатит
G:
возбудитель, вирусологическая
диагностика. Посттрансфузионный гепатит
TTV:
характеристика вируса, вирусологическая
диагностика.

ЛАБОРАТОРНАЯ
РАБОТА

Лабораторная
диагностика гепатита А (инкубационный
период 14-45 дней)

Исследуемый
материал:кровь (сыворотка), фекалии,
вода и пищевые продукты

Выявление антигена
(реакции)ИФА — антиген
вируса (HAVAg) выявляют в экстрактах фекалий
со 2-й недели и до конца болезни;

Выявление вируса
(методы) Иммунная электронная
микроскопия (ИЭМ), в научных и
производственных целях используют
заражение обезьян и культур клеток

Выявление антител
(классы Ат, сроки, реакции)ИФА,
РИА IgM 4-8 недели,IgG
с 4 недели, остаются на всю жизнь

Генодиагностика
(сроки, реакции) ПЦР —
РНК вируса (HAV RNA)

Динамика появления
серологических маркеров гепатита А

Характеристика гепатита а и в таблицах

Оценка
результатов серологического
исследования

1.Антиген
HAV
обнаруживается в конце инкубационного,
весь продромальный период, но при
манифестации инфекции с появлением
желтухи исчезает (показатель
заразности инфекции!).

2.Основным
диагностическим критерием текущей
или свежеперенесенной инфекции
являются антитела класса IgM (показатель
заразности инфекции!).

3.Антитела класса
IgG появляются на поздних стадиях
заболевания, сохраняются в течение
длительного времени и свидетельствуют
о перенесенном заболевании.

Лабораторная
диагностика гепатита В (инкубационный
период 2- 6 месяцев)

Исследуемый
материал
кровь
(сыворотка), биоптаты печени

Выявление
антигенов (очередность, сроки, длительность)
ИФА,РПГА
в сыворотке крови определяют поверхностный
антиген HВsAg
1-5
месяцев, “антиген инфекционности”
HBеAg
2-3 месяца; HBс
Ag в
крови не циркулирует в свободном виде,
его можно обнаружить только в биоптатах
печени- в ядрах гепатоцитов

Выявление
антител (классы Ат, сроки, реакции)
ИФА, РПГА
в сыворотке крови определяют: антитела
к поверхностному антигену (анти-HВsAg)-
с 6 месяцев; антитела к “антигену
инфекционности” анти-HВеAg с 4-5 месяцев).
Антитела к сердцевинному антигену
(анти-HВсAg IgM и антиHВcAg IgG) служат индикатором
вирусемии и могут определяться в
гепатоцитах методом РИФ с 2 месяцев;

Генодиагностика.Выявление НК (сроки, реакции) ДНК
(HBV DNA вируса в крови и биоптатах печени
с момента заражения до выздоровления
(в среднем 6 месяцев) методом
ПЦР и молекулярной гибридизации
.

Динамика появления
серологических маркеров гепатита В

Характеристика гепатита а и в таблицах

Оценка результатов
серологического исследования

1.
HBsAg выявляется
в крови в последние дни инкубационного
периода, достигает максимальных
концентраций в период острых клинических
проявлений (желтуха, повышение уровней
АлАТ, АсАТ, билирубина и др.). В большинстве
случаев HBsAg исчезает в течении 3-5 недель
от начала заболевания. Персистенция
HBsAg (>6 месяцев) – предиктор хронизации
гепатита.

2.
HBeAg выявляют
при ОГВ в течение 6-8 недель. Более
длительная его персистенция указывает
на хронизацию инфекции.

3.
Присутствие анти-НВe
класса IgM достоверно свидетельствует
об остром гепатите В

4.Антитела
к HBe
обнаруживаются после появления анти
— НВс класса
IgM и исчезают
в течение года у 50% пациентов.

5. Анти-HBs-антитела
можно выявить через 1-3 месяца после
исчезновения HBs-антигена. Они присутствуют
в крови в течение 4-5 лет.

Интерпретация
результатов серологического обследования
на гепатит В

Серологический диагноз	HBsAg	Анти-HBs	анти-НВс суммарные		HBеAg	Анти-HBе	ДНК ВГВ, копий/мл
Серологический диагноз	HBsAg	Анти-HBs	HBc IgМ	HBc IgG	HBеAg	Анти-HBе	ДНК ВГВ, копий/мл
Острый гепатит В	+/–	–/+	+	+	+/–	–/+	+/–
Хронический интегративный ГВ (носительство HBsAg)	+	–	–	+	–	+	<105
Хронический репликативный ГВ	+	–	+/–	+	+/–*	–/+*	>105
Иммунитет после вакцинации	–	+	–	–	–	–	–
Иммунитет после перенесенного ГВ	–	+	–	+	–	+/–	–

Лабораторная
диагностика гепатитов C, D, E

Гепатит
С (инкубационный
период 2 недели -3месяца)

Исследуемый
материал
кровь
(сыворотка), биоптаты печени

Скрининговые
тесты:
выявление
в
донорской крови
антител к белкам капсида (С22) и
функциональным белкам (NS3-NS5) вируса
тест-системами третьего поколения
ИФА-3,

Подтверждающие
тесты
в образцах с первично положительным
результатом ИФА проводят:

ИФА
с раздельным определением антител к
различным белкам вируса,
иммуноблоттинг
с
использованием рекомбинантных антигенов
к белкам капсида
(С22) и функциональным белкам (NS3-NS5).

Оценка
результатов иммуноблотанализа
положительный
при выявлении антител к двум и более
АГ

Генодиагностика
РНК вируса
(HCV RNA) методом ПЦР и молекулярной
гибридизации на протяжении болезни

D
(инкубационный
период 2 недели -6 месяцев)

Исследуемый
материал
кровь
(сыворотка), биоптаты печени

Выявление
антигенов
(антигены, реакции) ИФА,
РИА,
иммуноблотинг
—
антиген вируса (HDVAg)

Выявление
антител
(реакции) Сыворотка
крови
ИФА
— анти-HDV IgM, анти-HDV IgG.

Генодиагностика
ПЦР, метод
молекулярной гибридизации — РНК вируса
(HDV RNA

Гепатит
Е (инкубационный
период 14-45 дней)

Исследуемый
материал:
кровь (сыворотка), фекалии, вода и пищевые
продукты

Выявление
антигена (реакции)
ИФА
— антиген вируса (HЕVAg),

Выявление
вируса (методы)
Иммунная
электронная микроскопия( ИЭМ),

Выявление
антител
ИФА
— анти-HЕV IgM в начале заболевания , анти-HЕV
IgG после заболевания)

Генодиагностика
сыворотка
крови, кал обнаружение РНК вируса (HEV
RNA) в ПЦР
на протяжении болезни

Гепатиты	А (HAV)	B (HBV)	С (НСV)	D (HDV)	Е (НЕV)	G (HGV)
Таксономия возбудителя	Сем. Picornaviridae Род. Hepatovirus	Сем. Hepadnaviridae Род. Ortohepadnavirus	Сем. Flaviviridae Род. Hepacivirus	Неклассифицирован, вирус-сателлит (вироид) HBV	Сем. Hepeviridae Род. Hepavirus	Сем. Flaviviridae неклассифицирован,
Морфология (форма, размер, наличие суперкапсида)	простой вирус, капсид икосаэдр 25-30 нм	сложный вирус сферической и палочковидной формы 42 нм	сложный вирус сферической формы 55-65 нм	сложный вирус сферической формы 35-40 нм.	простой вирус икосаэдр 27-34нм	сложный вирус сферической формы 60 нм
Геном	+ РHK, линейная, нефрагментированная	ДНК кольцевая, двунитевая с однонитевым участком	+ РHK, линейная, нефрагментированная	— РHK, кольцевая	+ РHK, линейная, нефрагментированная	+ РHK, линейная, нефрагментрованная
Пути передачи	Фекально-оральный	Парентеральный	Парентеральный	Парентеральный	Фекально-оральный	Парентеральный
Инкубацион-ный период	14-45 дней	2- 6 месяцев	14 дней — 3 месяца	2 — 6 месяцев	14-45 дней	14 дней — 6 месяцев
Клинические проявления	Острые гепатиты	Часто хронический гепатит, цирроз, нередко рак	Часто хронический гепатит, цирроз, часто рак	Часто хронический гепатит, цирроз, нередко рак	Острые гепатиты, тяжело протекают у беременных	Часто хронический гепатит
Специфичес-кая профилак-тика	Инактивированная культуральная по эпид. с 3 лет, ревакцинация через 4 года	Рекомбинантная, плановая с 1996 года. 12час, 1месяц,3 месяца ревакцинация через 5 лет	Нет	Вакцина против гепатита В из-за общности поверхностного HBsAg	Инактивированная культуральная по эпид. с 3 лет.	Нет
Исследуемый материал	сыворотка крови, фекалии, вода и пищевые продукты.	сыворотка крови, биоптаты печени	сыворотка крови, биоптаты печени	сыворотка крови, биоптаты печени	сыворотка крови, фекалии, вода и пищевые продукты	сыворотка крови, биоптаты печени
Маркеры	HAV РНК, HAV Ag, anti-HAV IgM, IgG	HBV ДНК, HBsAg, HBeAg, anti-HBsAg, anti-HBeAg, anti-HBc IgM, IgG	HCV РНК, anti-HCV IgM, anti-HCV IgG	HDV РНК, HDAg, anti-HDV IgM, IgG	HEV PНК, HEV Ag, anti-HEV IgM, IgG,	HGV РНК, anti-HGV
Экспресс—диагностика	1) ПЦР — РНК вируса (HAVRNA) выявляют в сыворотке крови, фекалиях, воде и пищевых продуктах. 2) ИФА — антиген вируса (HAVAg) выявляют в экстрактах фекалий; 3) Иммунная электрон-ная микроскопия (ИЭМ).	1) ПЦР, метод молекулярной гибридизации — ДНК вируса (HBV DNA) в крови, биоптатах печени. 2) ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют антигены вируса : поверхностный антиген (HВsAg), “антиген инфекционности” (HВеAg);	ПЦР, метод молекулярной гибридизации в сыворотке крови — РНК вируса (HCV RNA) 2)	1) ПЦР, и метод молекулярной гибридизации — РНК вируса (HDV RNA) ; 2) ИФА, РИА, иммуноблотинг — антиген вируса (HDV Ag) .	1) ПЦРобнаружение РНК вируса (HEV RNA) всыворотке крови, испражнениях 2) ИФА — антиген вируса (HЕVAg),	ПЦРс предварительным этапом обратной транскрипции(RT-PCR) обнаружение РНК вируса (HGV RNA) ;
Вирусологичес-кие методы	Заражение клеточных культур, обезьян (шимпанзе) только для научных и производственных целей, в диагностике не применяют	Заражение обезьян (шимпанзе) только для научных целей, в диагностике не применяют	Нет	Нет	Нет	Нет
Серологическаядиагностика	ИФА, РИА в сыворотке крови выявляют Ig M-антитела (анти-HAV IgM) и Ig G-антитела (анти-HAV IgG).	ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют противовирусные антитела: антитела к поверхностному антигену (анти-HВsAg); антитела к сердцевинному антигену (анти-HВсAg IgM, IgG; антитела к “антигену инфекционности” (анти-HВеAg);	ИФА, в сыворотке антитела к вирусу (анти-HCV IgM, анти-HCV IgG) В донорской крови 1) ИФА с раздельным определением антител к различным белкам вируса, 2) иммуноблоттинг с рекомбинантными антигенами к белкам капсида (С22) и функциональным белкам (NS3-NS5) для выявления антител.	ИФА в сыворотке крови- антитела к вирусу (анти-HDV IgM, анти-HDV IgG).	ИФА в сыворотке крови- антитела к вирусу (анти-HЕV IgM, анти-HЕV IgG	ИФА в сыворотке крови- антитела против вирусного белка Е2 (анти-HGV Е2)

Иммуноблоттинг
— метод
выявления белков, основанный на сочетании
электрофореза и ИФА или РИА. Антигены
возбудителя разделяют с помощью
электрофореза
в полиакриламидном геле, затем переносят
их (блоттинг — от англ. blot, пятно) из геля
на нитроцеллюлозную мембрану и проявляют
с помощью ИФА.
Полоски с “блотами” антигенов выпускаются
различными фирмами. 1. На эти полоски
наносят сыворотку больного. 2. Затем,
после инкубации, отмывают от несвязавшихся
антител больного и наносят сыворотку
против иммуноглобулинов человека,
меченную ферментом. 3. Образовавшийся
на полоске комплекс [антиген + антитело
больного + антитело против Ig человека]
выявляют добавлением хромогенного
субстрата, изменяющего окраску под
действием фермента.

Иммуноферментный
анализ, или метод (ИФА)
— выявление антигенов с помощью
соответствующих им антител, конъюгированных
с ферментом-меткой (пероксидазой хрена,
бета-галактозидазой или щелочной
фосфатазой). После соединения антигена
с меченой ферментом иммунной сывороткой
в смесь добавляют субстрат/хромоген.
Субстрат расщепляется ферментом и
изменяется цвет продукта реакции —
интенсивность окраски прямо пропорциональна
количеству связавшихся молекул антигена
и антител

Иммунная
электронная микроскопия
– электронная микроскопия чаще вирусов,
обработанных соответствующими антителами.
Вирусы, обработанные иммунной сывороткой,
образуют иммунные агрегаты
(микропреципитаты). Вокруг вирионов
образуется “венчик“ из антител,
контрастированный фосфорно-вольфрамовой
кислотой или другими электроннооптически
плотными препаратами хорошо видимый в
электронном микроскопе.

Радиоиммунный
анализ (РИА),
— высокочувствительный метод, основанный
на реакции антиген — антитело с
применением антигенов или антител,
меченных радионуклидом (125J, 14С, 3Н, 51Сr и
др.). После их взаимодействия отделяют
образовавшийся радиоактивный иммунный
комплекс и определяют его радиоактивность
в соответствующем счетчике (бета- или
гамма-излучение): интенсивность излучения
прямо пропорциональна количеству
связавшихся молекул антигена и антител.

Полимеразная
цепная реакция (ПЦР)
основана на амплификации,
т. е . увеличении количества копий
специфического (маркерного) гена
возбудителя
. Для этого двунитевую ДНК, выделенную
из исследуемого материал а, денатурируют
( «расплетают» при нагревании) и
достраивают (при охлаждении) к расплетенным
нитям ДНК новые комплементарные нити
. В результате из одного гена образуются
два. Этот
процесс копирования генов многократно
по вторяется при заданных температурных
режимах . Достраивание новых комплементарных
нитей ДНК происходит при добавлении к
искомым генам прай меров (затравки из
коротких однонитевых ДНК, комплементарных
3′- концам ДНК искомого гена), ДНК —
полимеразы и нуклеотидов.Для
амплификации РНК вирусов применяют
ПЦР с
предварительным этапом обратной
транскрипции (RT-PCR).

Соседние файлы в папке Занятия

Источник