Характеристика гепатита а и в таблицах

Характеристика гепатита а и в таблицах

ТОП 10:

Гепатиты А (HAV) B (HBV) С (НСV) D (HDV) Е (НЕV) G (HGV)
Таксономия возбудителя Сем. Picornaviridae
Род. Hepatovirus
Сем. Hepadnaviridae
Род. Ortohepadnavirus
Сем. Flaviviridae
Род. Hepacivirus
Неклассифицирован, вирус-сателлит (вироид) HBV Сем. Hepeviridae
Род. Hepavirus
Сем. Flaviviridae
неклассифицирован,
Морфология (форма, размер, наличие суперкапсида) простой вирус, капсид икосаэдр
25-30 нм
сложный вируссферической и палочковидной формы
42 нм
сложный вирус сферической формы
55-65 нм
сложный вирус сферической формы
35-40 нм.
простой вирус икосаэдр
27-34нм
сложный вирус сферической формы
60 нм
Геном + РHK, линейная, нефрагментированная ДНК кольцевая, двунитевая с однонитевым участком + РHK, линейная, нефрагментированная — РHK, кольцевая + РHK, линейная, нефрагментированная + РHK, линейная, нефрагментрованная
Пути передачи Фекально-оральный Парентеральный Парентеральный Парентеральный Фекально-оральный Парентеральный
Инкубацион-ный период 14-45 дней 2- 6 месяцев 14 дней — 3 месяца 2 — 6 месяцев 14-45 дней 14 дней — 6 месяцев
Клинические проявления Острые гепатиты Часто хронический гепатит, цирроз, нередко рак Часто хронический гепатит, цирроз, часто рак Часто хронический гепатит, цирроз, нередко рак Острые гепатиты, тяжело протекают у беременных Часто хронический гепатит
Специфичес-кая профилак-тика Инактивированная культуральная по эпид. с 3 лет, ревакцинация через 4 года Рекомбинантная, плановая с 1996 года. 12час, 1месяц,3 месяца ревакцинация через 5 лет Нет Вакцина против гепатита В из-за общности поверхностного HBsAg Инактивированная культуральная по эпид. с 3 лет. Нет
Исследуемый материал сыворотка крови, фекалии, вода и пищевые продукты. сыворотка крови, биоптаты печени сыворотка крови, биоптаты печени сыворотка крови, биоптаты печени сыворотка крови, фекалии, вода и пищевые продукты сыворотка крови, биоптаты печени
Маркеры HAV РНК, HAV Ag, anti-HAV IgM, IgG HBV ДНК, HBsAg, HBeAg, anti-HBsAg, anti-HBeAg, anti-HBc IgM, IgG HCV РНК, anti-HCV IgM, anti-HCV IgG HDV РНК, HDAg, anti-HDV IgM, IgG HEV PНК, HEV Ag, anti-HEV IgM, IgG, HGV РНК, anti-HGV
Экспресс-диагностика 1) ПЦР — РНК вируса (HAVRNA) выявляют в сыворотке крови, фекалиях, воде и пищевых продуктах.
2) ИФА — антиген вируса (HAVAg) выявляют в экстрактах фекалий;
3) Иммунная электрон-ная микроскопия (ИЭМ).
1) ПЦР, метод молекулярной гибридизации — ДНК вируса (HBV DNA) в крови, биоптатах печени.
2) ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют антигены вируса : поверхностный антиген (HВsAg), “антиген инфекционности” (HВеAg);
ПЦР, метод молекулярной гибридизации в сыворотке крови — РНК вируса (HCV RNA)2) 1) ПЦР, и метод молекулярной гибридизации — РНК вируса (HDV RNA) ;
2) ИФА, РИА, иммуноблотинг -антиген вируса (HDV Ag) .
 
1) ПЦР обнаружение РНК вируса (HEV RNA) в сыворотке крови, испражнениях
2) ИФА — антиген вируса (HЕVAg),
ПЦР с предварительным этапом обратной транскрипции (RT-PCR)обнаружение РНК вируса (HGV RNA) ;
Вирусологичес-кие методы Заражение клеточных культур, обезьян (шимпанзе) только для научных и производственных целей, в диагностике не применяют Заражение обезьян (шимпанзе) только для научных целей, в диагностике не применяют Нет Нет Нет Нет
Серологическаядиагностика ИФА, РИА в сыворотке крови выявляют Ig M-антитела (анти-HAV IgM) и Ig G-антитела (анти-HAV IgG). ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют противовирусные антитела: антитела к поверхностному антигену (анти-HВsAg); антитела к сердцевинному антигену (анти-HВсAg IgM, IgG; антитела к “антигену инфекционности” (анти-HВеAg); ИФА,в сыворотке антитела к вирусу (анти-HCV IgM, анти-HCV IgG)
В донорской крови
1) ИФА с раздельным определением антител к различным белкам вируса,
2) иммуноблоттинг с рекомбинантными антигенами к белкам капсида (С22) и функциональным белкам (NS3-NS5) для выявления антител.
ИФА в сыворотке крови- антитела к вирусу (анти-HDV IgM, анти-HDV IgG).
 
ИФА в сыворотке крови- антитела к вирусу (анти-HЕV IgM, анти-HЕV IgG ИФА в сыворотке крови- антитела против вирусного белка Е2 (анти-HGV Е2)
 
 

Иммуноблоттинг—метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их (блоттинг — от англ. blot, пятно) из геля на нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Полоски с “блотами” антигенов выпускаются различными фирмами. 1. На эти полоски наносят сыворотку больного. 2. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. 3. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

Иммуноферментный анализ, или метод (ИФА) — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител

Иммунная электронная микроскопия – электронная микроскопия чаще вирусов, обработанных соответствующими антителами. Вирусы, обработанные иммунной сывороткой, образуют иммунные агрегаты (микропреципитаты). Вокруг вирионов образуется “венчик“ из антител, контрастированный фосфорно-вольфрамовой кислотой или другими электроннооптически плотными препаратами хорошо видимый в электронном микроскопе.

Радиоиммунный анализ (РИА), — высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген — антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (125J, 14С, 3Н, 51Сr и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение): интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

Читайте также:  Эко гепатитом в у женщин

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) основана на амплификации, т. е . увеличении количества копий специфического (маркерного) гена возбудителя . Для этого двунитевую ДНК, выделенную из исследуемого материал а, денатурируют ( «расплетают» при нагревании) и достраивают (при охлаждении) к расплетенным нитям ДНК новые комплементарные нити . В результате из одного гена образуются два. Этот процесс копирования генов многократно по вторяется при заданных температурных режимах . Достраивание новых комплементарных нитей ДНК происходит при добавлении к искомым генам прай меров (затравки из коротких однонитевых ДНК, комплементарных 3′- концам ДНК искомого гена), ДНК — полимеразы и нуклеотидов.Для амплификации РНК вирусов применяют ПЦР с предварительным этапом обратной транскрипции (RT-PCR).

Маркеры гепатита В

Гепатит B (ГВ) – острое или хроническое заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита В (ВГВ), протекающее в различных клинико-морфологических вариантах: от бессимптомных форм до злокачественных (цирроз печени, гепатоцеллюлярная карцинома). Гепатит В встречается гораздо чаще протекает более остро и о заканчивается без осложнений. Но у 10% больных ВГВ переходит в хроническое течение, а в 1 % случаев развивается цирроз и первичный рак печени. На долю ГВ приходится около 15% всех острых гепатитов и не менее 50% хронических. Безжелтушные и субклинические формы инфекции, в основном, остаются нераспознанными (до 95% случаев). Заражение ВГВ происходит от «здоровых» вирусоносителей с нераспознанными хроническими или острыми формами ГВ при переливании крови и ее компонентов, при медицинских манипуляциях и сексуальных контактах. Вирус может передаваться от инфицированной матери к ребенку во время родов при нарушении целостности плаценты. В семьях больных хроническими формами ГВ и носителей HBsAg вследствие реализации гемоконтактов в быту. Вирус гепатита В чрезвычайно устойчив, при комнатной температуре сохраняется в течение 3 мес., в замороженном виде – 15–20 лет.

ВГВ чаще всего поражает печень. однако ДНК и белки вируса обнаруживаются также в почках, селезенке, поджелудочной железе, коже, костном мозге и мононуклеарах периферической крови.

Маркеры ВГВ это ДНКвируса, вирусные антигены HBsAgи HBeAg, а также антитела к ним анти-HBs, анти-HBe, и к ядерному белку HBc -анти-HBc,которые могут бытьобнаружены в организме больного. Комплексное изучение маркёров позволяет правильно установить стадию инфекции ВГВ и прогнозировать ее дальнейшее развитие.

HBsAg —поверхностный антигенВГВ — белок его внешней оболочки. Это сложный антиген, состоящий из несколько антигенных детерминант, определяющих субтип HBsAg. Известны десять субтипов HBsAg: 7 основных — ауw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adr, adw2, adw4, adrq+, adrq– , и 5 редких: awr, adrw, adyr и adywr. На территории РБ преобладает HBsAg субтипа ауw (ayw2 – 57%; ayw3 – 37%)

HBсAg (HBcoreAg) — внутренний или сердцевинный (ядерный) антиген — белок нуклеокапсида, обеспечивающий репликативную активность ВГВ. HBeAg (HBprecoreAg) окружает ядерный, это конформационно измененный HBcAg. HBeAgобнаруживается исключительно в биоптатах печени в ядрах гепатоцитов, а HBeAgциркулирует в крови инфицированных лиц.



Источник

ЗАНЯТИЕ № 31 ТЕМА:
ГЕПАТОТРОПНЫЕ ВИРУСЫ

ПЕРЕЧЕНЬ
КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

  1. Вирусные гепатиты
    A, B, C, D, E, G. Этиология. Сравнительная
    характеристика основных биологических
    свойств возбудителей вирусных гепатитов.

  2. Вирус
    гепатита А. Структура и свойства HAV.
    Пути проникновения и циркуляция в
    организме. Патогенез, клиника, исход
    заболевания. Лабораторная диагностика
    гепатита А. Иммунитет, специфическая
    профилактика, лечение.

  3. Вирус
    гепатита E.
    Структура вируса. Эпидемиология,
    клинические формы, исход заболевания.
    Вирусологическая и серологическая
    диагностика.

  4. Гепаднавирусы.
    Морфология, особенности репродукции
    вируса гепатита В. Структура генома,
    антигены, полипептидные фрагменты
    HBs-Ag,
    подтипы вируса.

  5. Гепатит В:
    эпидемиология, патогенез, клинические
    формы течения заболевания, исходы.
    Лабораторная диагностика. Иммунитет,
    специфическая профилактика, лечение.

  6. Гепатит D. Особенности
    строения вируса. Характеристика
    заболевания: коинфекция, суперинфекция.
    Лабораторная диагностика, профилактика.

  7. Гепатит
    С: классификация вируса, ультраструктура,
    антигены. Общая характеристика
    заболевания, исходы заболевания.
    Диагностика гепатита C:
    скрининговые методы, подтверждающие
    тесты.

  8. Гепатит
    G:
    возбудитель, вирусологическая
    диагностика. Посттрансфузионный гепатит
    TTV:
    характеристика вируса, вирусологическая
    диагностика.

ЛАБОРАТОРНАЯ
РАБОТА

Лабораторная
диагностика гепатита А
(инкубационный
период 14-45 дней)

Исследуемый
материал
:кровь (сыворотка), фекалии,
вода и пищевые продукты

Выявление антигена
(реакции)
ИФА — антиген
вируса (HAVAg) выявляют в экстрактах фекалий

со
2-й недели и до конца болезни;

Выявление вируса
(методы
) Иммунная электронная
микроскопия (ИЭМ), в научных и
производственных целях используют
заражение обезьян и культур клеток

Выявление антител
(классы Ат, сроки, реакции)
ИФА,
РИА
IgM 4-8 недели,IgG
с 4 недели, остаются на всю жизнь

Генодиагностика
(сроки, реакции)
ПЦР
РНК вируса (HAV RNA)

Динамика появления
серологических маркеров гепатита А

Характеристика гепатита а и в таблицах

Оценка
результатов серологического
исследования

1.Антиген
HAV
обнаруживается в конце инкубационного,
весь продромальный период, но при
манифестации инфекции с появлением
желтухи исчезает (показатель
заразности инфекции!
).

2.Основным
диагностическим критерием текущей
или свежеперенесенной инфекции
являются антитела класса IgM (показатель
заразности инфекции!
).

3.Антитела класса
IgG появляются на поздних стадиях
заболевания, сохраняются в течение
длительного времени и свидетельствуют
о перенесенном заболевании.

Читайте также:  Гепатит с пути заражения лечение

Лабораторная
диагностика гепатита В
(инкубационный
период 2- 6 месяцев)

Исследуемый
материал

кровь
(сыворотка), биоптаты печени

Выявление
антигенов (очередность, сроки, длительность)
ИФА,РПГА
в сыворотке крови определяют поверхностный
антиген
HВsAg
1-5
месяцев, “антиген инфекционности

HBеAg

2-3 месяца;
HBс
Ag
в
крови не циркулирует в свободном виде,
его можно обнаружить только в биоптатах
печени- в ядрах гепатоцитов

Выявление
антител (классы Ат, сроки, реакции)

ИФА, РПГА
в сыворотке крови определяют: антитела
к поверхностному антигену (
анти-HВsAg)-
с 6 месяцев; антитела к “антигену
инфекционности” анти-HВеAg с 4-5 месяцев).
Антитела к сердцевинному антигену
(анти-HВсAg IgM и антиHВcAg IgG) служат индикатором
вирусемии и могут определяться в
гепатоцитах методом РИФ с 2 месяцев;

Генодиагностика.Выявление НК (сроки, реакции) ДНК
(HBV DNA вируса в крови и биоптатах печени
с момента заражения до выздоровления
(в среднем 6 месяцев)
методом
ПЦР и молекулярной гибридизации

Динамика появления
серологических маркеров гепатита В

Характеристика гепатита а и в таблицах

Оценка результатов
серологического исследования

1.
HBsAg выявляется
в крови в последние дни инкубационного
периода, достигает максимальных
концентраций в период острых клинических
проявлений (желтуха, повышение уровней
АлАТ, АсАТ, билирубина и др.). В большинстве
случаев HBsAg исчезает в течении 3-5 недель
от начала заболевания. Персистенция
HBsAg (>6 месяцев) – предиктор хронизации
гепатита.

2.
HBeAg выявляют
при ОГВ в течение 6-8 недель. Более
длительная его персистенция указывает
на хронизацию инфекции.

3.
Присутствие анти-НВe
класса IgM достоверно свидетельствует
об остром гепатите В

4.Антитела
к HBe
обнаруживаются после появления анти
— НВс класса
IgM и исчезают
в течение года у 50% пациентов.

5. Анти-HBs-антитела
можно выявить через 1-3 месяца после
исчезновения HBs-антигена. Они присутствуют
в крови в течение 4-5 лет.

Интерпретация
результатов серологического обследования
на гепатит В

Серологический
диагноз

HBsAg

Анти-HBs

анти-НВс
суммарные

HBеAg

Анти-HBе

ДНК ВГВ, копий/мл

HBc IgМ

HBc IgG

Острый гепатит
В

+/–

–/+

+

+

+/–

–/+

+/–

Хронический
интегративный ГВ (носительство HBsAg)

+

+

+

<105

Хронический
репликативный ГВ

+

+/–

+

+/–*

–/+*

>105

Иммунитет после
вакцинации

+

Иммунитет после
перенесенного ГВ

+

+

+/–

Лабораторная
диагностика гепатитов C, D, E

Гепатит
С
(инкубационный
период 2 недели -3месяца)

Исследуемый
материал

кровь
(сыворотка), биоптаты печени

Скрининговые
тесты:

выявление
в
донорской крови

антител к белкам капсида (С22) и
функциональным белкам (NS3-NS5) вируса
тест-системами третьего поколения
ИФА-3,

Подтверждающие
тесты

в образцах с первично положительным
результатом ИФА проводят:

  1. ИФА
    с раздельным определением антител к
    различным белкам вируса,

  2. иммуноблоттинг
    с
    использованием рекомбинантных антигенов
    к белкам
    капсида
    (С22) и функциональным белкам (NS3-NS5)
    .

Оценка
результатов иммуноблотанализа

положительный
при выявлении антител к двум и более
АГ

Генодиагностика
РНК вируса
(HCV RNA) методом ПЦР и молекулярной
гибридизации на протяжении болезни

D
(инкубационный
период 2 недели -6 месяцев)

Исследуемый
материал

кровь
(сыворотка), биоптаты печени

Выявление
антигенов

(антигены, реакции) ИФА,
РИА
,
иммуноблотинг

антиген вируса (HDVAg)

Выявление
антител

(реакции) Сыворотка
крови

ИФА

— анти-HDV IgM, анти-HDV IgG.

Генодиагностика
ПЦР, метод
молекулярной гибридизации — РНК вируса
(HDV RNA

Гепатит
Е
(инкубационный
период 14-45 дней)

Исследуемый
материал:
кровь (сыворотка), фекалии, вода и пищевые
продукты

Выявление
антигена (реакции
)
ИФА
— антиген вируса (HЕVAg),

Выявление
вируса (методы)

Иммунная
электронная микроскопия( ИЭМ),

Выявление
антител

ИФА

— анти-HЕV IgM в начале заболевания , анти-HЕV
IgG после заболевания)

Генодиагностика
сыворотка
крови, кал обнаружение РНК вируса (H
EV
RNA) в
ПЦР
на протяжении болезни

Гепатиты

А (HAV)

B (HBV)

С (НСV)

D (HDV)

Е (НЕV)

G (HGV)

Таксономия
возбудителя

Характеристика гепатита а и в таблицах

Сем. Picornaviridae

Род.
Hepatovirus

Характеристика гепатита а и в таблицах

Сем.
Hepadnaviridae

Род.
Ortohepadnavirus

Характеристика гепатита а и в таблицахСем.
Flaviviridae

Род.
Hepacivirus

Характеристика гепатита а и в таблицахНеклассифицирован,
вирус-сателлит
(вироид) HBV

Характеристика гепатита а и в таблицах

Сем.
Hepeviridae

Род.
Hepavirus

Характеристика гепатита а и в таблицахСем.
Flaviviridae

неклассифицирован,

Морфология
(форма, размер, наличие суперкапсида)

простой
вирус
,
капсид икосаэдр

25-30
нм

сложный
вирус
сферической
и палочковидной формы

42 нм

сложный
вирус

сферической формы

55-65 нм

сложный
вирус

сферической формы

35-40 нм.

простой
вирус

икосаэдр

27-34нм

сложный
вирус

сферической формы

60 нм

Геном

+ РHK, линейная,
нефрагментированная

ДНК кольцевая,
двунитевая с однонитевым участком

+ РHK, линейная,
нефрагментированная


РHK, кольцевая

+ РHK, линейная,
нефрагментированная

+
РHK, линейная, нефрагментрованная

Пути передачи

Фекально-оральный

Парентеральный

Парентеральный

Парентеральный

Фекально-оральный

Парентеральный

Инкубацион-ный
период

14-45 дней

2- 6 месяцев

14 дней — 3 месяца

2 — 6 месяцев

14-45 дней

14 дней — 6
месяцев

Клинические
проявления

Острые гепатиты

Часто
хронический гепатит, цирроз, нередко
рак

Часто
хронический гепатит, цирроз, часто
рак

Часто
хронический гепатит, цирроз, нередко
рак

Острые
гепатиты, тяжело
протекают у беременных

Часто
хронический гепатит

Специфичес-кая
профилак-тика

Инактивированная
культуральная по эпид. с 3 лет,
ревакцинация через 4 года

Рекомбинантная,
плановая с 1996 года. 12час, 1месяц,3
месяца ревакцинация через 5 лет

Нет

Вакцина
против гепатита В из-за общности
поверхностного HBsAg

Инактивированная
культуральная по эпид. с 3 лет.

Нет

Исследуемый
материал

сыворотка
крови, фекалии, вода и пищевые продукты.

сыворотка крови,
биоптаты печени

сыворотка крови,
биоптаты печени

сыворотка крови,
биоптаты печени

сыворотка крови,
фекалии, вода и пищевые продукты

сыворотка крови,
биоптаты печени

Маркеры

HAV
РНК,
HAV Ag, anti-HAV IgM, IgG

HBV
ДНК,
HBsAg, HBeAg, anti-HBsAg, anti-HBeAg, anti-HBc IgM, IgG

HCV
РНК,
anti-HCV IgM, anti-HCV IgG

HDV
РНК,
HDAg, anti-HDV IgM, IgG

HEV
PНК,
HEV Ag, anti-HEV IgM, IgG,

HGV
РНК,
anti-HGV

Экспрессдиагностика

1)
ПЦР
— РНК вируса (HAVRNA)
выявляют в сыворотке крови, фекалиях,
воде и пищевых продуктах.

2)
ИФА
— антиген вируса (HAVAg) выявляют в
экстрактах фекалий;

3)
Иммунная электрон-ная
микроскопия
(ИЭМ).

1)
ПЦР, метод молекулярной гибридизации

— ДНК вируса (HBV DNA) в крови, биоптатах
печени.

2) ИФА,
РПГА
в
сыворотке крови определяют антигены
вируса : поверхностный антиген
(HВsAg), “антиген инфекционности”
(HВеAg);

ПЦР,
метод
молекулярной гибридизации

в сыворотке крови — РНК вируса (HCV RNA)
2)

1)
ПЦР,
и
метод
молекулярной гибридизации

— РНК вируса (HDV RNA) ;

2)
ИФА, РИА, иммуноблотинг

антиген
вируса (HDV Ag) .

1) ПЦРобнаружение РНК вируса (HEV
RNA) всыворотке крови, испражнениях

2) ИФА
— антиген вируса (HЕVAg),

ПЦРс
предварительным этапом обратной
транскрипции(RT-PCR) обнаружение
РНК вируса (HGV RNA) ;

Вирусологичес-кие
методы

Заражение
клеточных культур, обезьян (шимпанзе)
только для научных и производственных
целей, в диагностике не применяют

Заражение
обезьян (шимпанзе) только для научных
целей, в диагностике не применяют

Нет

Нет

Нет

Нет

Серологическаядиагностика

ИФА,
РИА
в
сыворотке крови выявляют Ig M-антитела
(анти-HAV IgM) и Ig G-антитела (анти-HAV IgG).

ИФА,
РПГА
в
сыворотке крови определяют
противовирусные антитела: антитела
к поверхностному антигену (анти-HВsAg);
антитела к сердцевинному антигену
(анти-HВсAg IgM, IgG; антитела к “антигену
инфекционности” (анти-HВеAg);

ИФА,
в сыворотке
антитела к вирусу (анти-HCV IgM, анти-HCV
IgG)

В
донорской крови

1) ИФА с раздельным
определением антител к различным
белкам вируса,

2)
иммуноблоттинг с рекомбинантными
антигенами к белкам капсида (С22) и
функциональным белкам (NS3-NS5) для
выявления антител.

ИФА
в сыворотке крови- антитела
к вирусу (анти-HDV
IgM, анти-HDV IgG).

ИФА
в сыворотке крови- антитела
к вирусу (анти-HЕV
IgM, анти-HЕV IgG

ИФА
в сыворотке крови- антитела
против вирусного белка Е2 (анти-HGV
Е2)

Читайте также:  Прививки от гепатита детям анализы

Иммуноблоттинг
метод
выявления белков, основанный на сочетании
электрофореза и ИФА или РИА. Антигены
возбудителя разделяют с помощью
электрофореза
в полиакриламидном геле, затем переносят
их (блоттинг — от англ. blot, пятно) из геля
на нитроцеллюлозную мембрану и проявляют
с помощью ИФА.
Полоски с “блотами” антигенов выпускаются
различными фирмами. 1. На эти полоски
наносят сыворотку больного. 2. Затем,
после инкубации, отмывают от несвязавшихся
антител больного и наносят сыворотку
против иммуноглобулинов человека,
меченную ферментом. 3. Образовавшийся
на полоске комплекс [антиген + антитело
больного + антитело против Ig человека]
выявляют добавлением хромогенного
субстрата, изменяющего окраску под
действием фермента.

Иммуноферментный
анализ, или метод (ИФА)

— выявление антигенов с помощью
соответствующих им антител, конъюгированных
с ферментом-меткой (пероксидазой хрена,
бета-галактозидазой или щелочной
фосфатазой). После соединения антигена
с меченой ферментом иммунной сывороткой
в смесь добавляют субстрат/хромоген.
Субстрат расщепляется ферментом и
изменяется цвет продукта реакции —
интенсивность окраски прямо пропорциональна
количеству связавшихся молекул антигена
и антител

Иммунная
электронная микроскопия

– электронная микроскопия чаще вирусов,
обработанных соответствующими антителами.
Вирусы, обработанные иммунной сывороткой,
образуют иммунные агрегаты
(микропреципитаты). Вокруг вирионов
образуется “венчик“ из антител,
контрастированный фосфорно-вольфрамовой
кислотой или другими электроннооптически
плотными препаратами хорошо видимый в
электронном микроскопе.

Радиоиммунный
анализ (РИА),

— высокочувствительный метод, основанный
на реакции антиген — антитело с
применением антигенов или антител,
меченных радионуклидом (125J, 14С, 3Н, 51Сr и
др.). После их взаимодействия отделяют
образовавшийся радиоактивный иммунный
комплекс и определяют его радиоактивность
в соответствующем счетчике (бета- или
гамма-излучение): интенсивность излучения
прямо пропорциональна количеству
связавшихся молекул антигена и антител.

Полимеразная
цепная реакция (ПЦР)

основана на амплификации,
т. е . увеличении количества копий
специфического (маркерного) гена
возбудителя

. Для этого двунитевую ДНК, выделенную
из исследуемого материал а, денатурируют
( «расплетают» при нагревании) и
достраивают (при охлаждении) к расплетенным
нитям ДНК новые комплементарные нити
. В результате из одного гена образуются
два. Этот
процесс копирования генов многократно
по вторяется при заданных температурных
режимах . Достраивание новых комплементарных
нитей ДНК происходит при добавлении к
искомым генам прай меров (затравки из
коротких однонитевых ДНК, комплементарных
3′- концам ДНК искомого гена), ДНК —
полимеразы и нуклеотидов.Для
амплификации РНК вирусов применяют
ПЦР
с
предварительным этапом обратной
транскрипции (RT-PCR).

Соседние файлы в папке Занятия

  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #

Источник