Иммуноблоттинг гепатита с что это

Метод определения
Иммуноблот (технология: рекомбинантный Line Blot).

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.

Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.

Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) (см. 

тест № 79

). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы.

Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты 

№ 321

и 

№ 323

).

Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса (см. тест 

№ 324

) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.

Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.

Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.

Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических антител.

Исключения:

  1. «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
  2. иммуносупрессированные пациенты;
  3. новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).

Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.

Источник

Подтверждающий тест на антитела к вирусу гепатита С (иммуноблот) — подтверждение положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.

Гепатит С — наиболее тяжёлая форма вирусного заболевания, которое поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).

Основные пути передачи вируса гепатита С:
   

  • кровь и/или другие жидкости организма инфицированного человека;
  • трансплацентарный путь; 
  • реже — половой и парентеральный пути (от матери к ребенку). 

Одним из основных факторов риска инфицирования является употребление инъекционных наркотиков. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови; заключённые.

Клиническая картина при гепатите С
Основные клинические проявления гепатита С очень неспецифичны: слабость, утомляемость, тошнота, отсутствие аппетита, потеря веса; при циррозе печени может появиться желтуха. Как правило, гепатит С протекает бессимптомно и в большинстве случаев диагностируется случайно. Гепатит C может вызвать как острую, так и хроническую инфекцию гепатита, которая влечет серьёзное пожизненное заболевание. Особо тяжёлый исход хронического гепатита С — цирроз печени и гепато-целлюлярная карцинома.

В норме антитела к вирусу гепатита С в крови отсутствуют.

Подтверждающий тест позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.

Читайте также:  Прививка от гепатита после антибиотиков

Подтвердить результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.

Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3–4 недели инфекции — период появления в крови специфических антител.

Показания
Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.


Подготовка

Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.


Интерпретация результатов

Способ представления результата: на бланке результата отражен результат выявления антител к используемым антигенам, раздельно для Cor-1 и Cor-2, хеликазы, NS3, NS4, NS5 (отрицательный/сомнительный/положительный). Выдаётся общее заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов.

Отрицательный результат иммуноблота: человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов — ложноположительный).

Исключения:

  • «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка еще очень мала;
  • иммуносупрессированные пациенты;
  • новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина, связанная с антителами матери).

В этих случаях подтверждение инфекции вирусом гепатита С возможно только с помощью повторных ПЦР-исследований.

Положительный результат иммуноблота: была инфекция вирусом гепатита С.

Сомнительный результат: возможно, была инфекция вирусом гепатита С.

Источник

1 сентября 201921122 тыс.

Сегодня хочу поговорить о лечении этого безжалостного недуга, разобраться с жизнью после него и затронуть тему планирования беременности в сочетании с вирусным гепатитом С.

Диагностика

Но для начала несколько слов о диагностике

Методы диагностики вируса гепатита С (ВГС) делятся на две группы:

  1. Иммунологические
  2. Молекулярно-генетические

Иммунологические методы (ИФА, иммуноблот)

Эта группа методов выявляет антигены самогО вируса (С-, NS3-, NS4-, NS5-белки) или определяет антитела к белкам вируса – анти-HCV. По антителам к белкам можно установить стадию инфекционного процесса: первыми появляются антитела к С- и NS3-белкам, позже появляются антитела к NS4 и NS5.

Именно суммарные антитела – анти-HCV делают ВСЕМ для скрининга гепатита С. Материал для исследования – венозная кровь.

Если анти-HCV обнаружены, то следующий этап – определение РНК вируса гепатита С.

Молекулярно-генетические методы

  • Определение вируса методом ПЦР

Обнаружение РНК ВГС – это единственный достоверный критерий присутствия вируса в организме. Материал для исследования – венозная кровь, ткань печени.

ПЦР для выявления ВГС может быть:

  • качественная — отвечает на вопрос: «есть ли вирус в организме?»
  • количественная — отвечает на вопрос «какое количество вируса содержится в миллилитре крови?». Это и есть вирусная нагрузка.

Высокая вирусная нагрузка, если в крови содержится вирусных РНК более 800000 МЕ/мл или 2 000 000 копий/мл. Количество копий ВГС важно для лечения.

  • Генотипирование

Для ВГС важно определять генотип вируса (!).

Определяют 5 субтипов вируса гепатита С:

  • 1a
  • 1b
  • 2a
  • 2b
  • 3a.

В РФ преобладает генотип 1b (80 % вируса популяции). Генотип ВГС важен для лечения.

Определение количества ВГС в крови и генотипирование необходимо проводить всем пациентам НЕПОСРЕДСТВЕННО перед началом лечения.

Лечение. История победы

Вирус гепатита С был выделен очень недавно — в 1989 году. Уже с 1991 г. предпринимались попытки лечения хронического вирусного гепатита С (ХВГС) препаратами интерферона.

До недавнего времени наиболее успешной схемой лечения ХВГС являлась комбинация интерферона с рибавирином. Средняя продолжительность такой терапии составляла от 6 до 12 месяцев в зависимости от генотипа, степени фиброза и некоторых других параметров.

Эффективность коллебалась от 45 до 80%. Лечение требовало регулярных инъекций интерферона и ежедневного приема рибавирина в таблетках. Такая терапия имела немалый перечень противопоказаний и зачастую сопровождалась развитием побочных эффектов вплоть до необходимости отмены препаратов.

С 2011 г. началась регистрация препаратов прямого противовирусного действия, эффективных против вируса гепатита С. В 2014 г. был зарегистрирован первый комбинированный препарат для лечения ХВГС, в котором два действующих вещества (софосбувир и ледипасвир) умещались в одной таблетке для приема один раз в день. Это стало предзнаменованием падения интерфероновой эры лечения ХВГС.

На сегодняшний день существуют различные схемы и сочетания препаратов прямого действия для лечения ХВГС. Лечение показано абсолютно всем пациентам. Чаще всего назначается комбинация из двух действующих веществ, длительность лечения составляет 8-12 недель.

Читайте также:  Какие показатели аст и алт при хроническом гепатите

Основными критериями для коррекции схем терапии являются наличие цирроза печени и истории неуспешного противовирусного лечения в прошлом.

Препараты имеют минимальный перечень противопоказаний и побочных эффектов. И самое главное — эффективность современной терапии более 90% и достигает 98% у отдельных категорий пациентов.

В 2016 году хронический вирусный гепатит С признан полностью излечимым заболеванием! Это прорыв, великое достижение медицинской науки, о котором должен знать каждый! А вы знали?

Лечение. Дженерик VS оригинал

Сегодня, в процессе вступления в пангенотипную эру терапии гепатита С, выделено три основные схемы лечения, которые отвечают поставленным задачам:

  • софосбувир+велпатасвир
  • софосбувир+велпатасвир+воксилапревир
  • глекапревир+пибрентасвир

Что из этого доступно и в каком виде?

Прежде чем ответить на этот вопрос, остановимся на термине, что у всех на слуху, но значение от многих ускользает.

Дженерики

Итак, дженерики — это лекарственные средства, содержащие такое же действующее вещество, что и оригинальный препарат.

Разница в стоимости связана с тем, что создание оригинальной молекулы требует огромных финансовых затрат на всех этапах испытаний. Дженерики же используют уже запантентованную формулу, что значительно уменьшает объем исследований, а значит и себестоимость лекарства.

Это не какое-то уникальное явление для препаратов против гепатита С. Вы в своей жизни точно сталкивались с дженериками, например, приобретая парацетамол разных торговых марок.

Возвращаясь к гепатиту С — главная проблема индийских/египетских препаратов не в том, что они дженерики, а в том, что они не зарегистрированы на территории РФ, а значит — это нелегальный и неконтролируемый рынок.

Покупая эти препараты за пределами аптечной сети, вы по сути приобретаете кота в мешке, который в равной степени может быть как хорошим дженериком, так и просто подделкой. Отследить контрафакт бывает не всегда просто даже с зарегистрированными препаратами, а уж на нелегальной рынке тем более.

Единственное преимущество, вне всякого сомнения, — цена. Весь курс обходится в пределах 60 тыс.руб, если говорить об индийских дженериках.

Сегодня доступна из новейших схем только комбинация: софосбувир+велпатасвир.

Оригиналы

В РФ доступны софосбувир (что бессмысленно, т.к. он не применяется, как монотерапия) и комбинация глекапревир+пибрентасвир (стоимость на курс от 630 до 945 тыс.руб в зависимости от длительности приема).

Да, нам всем бы хотелось, чтобы эти вопросы вообще не стояли и обеспечением терапии занималось государство. Но пост не об этом. Он о реальной жизни, где решение принимаете только вы, исходя из своих возможностей.

Жизнь после лечения

Пациент, завершивший курс противовирусной терапии и имеющий отрицательный результат высокочувствительного теста на РНК вируса, подлежит диспансерному наблюдению. Длительность его принципиально зависит только от одного фактора — степени фиброза.

Если фиброз печени умеренный (F0-2) и не достиг стадии цирроза, то продолжительность наблюдения составляет 2 года. В течение этого времени раз в полгода контролируется РНК HCV, раз в год — уровень АЛТ.

Если вирус не обнаружен, а АЛТ в пределах нормальных значений — это победа, выздоровление. Человек снимается с учёта и в наблюдении не нуждается.

Дополнительное обследование требуется при наличии сопутствующих заболеваний:

  • алкоголизма
  • ожирения
  • сахарного диабета 2 типа.

Пациенты с циррозом и с тяжёлым фиброзом F3 наблюдаются пожизненно, т.к. избавление от вируса не позволяет излечить цирроз, а лишь замедлить/приостановить прогрессирование. Сохраняются риски развития рака печени.

Поэтому, кроме вышеуказанных обследований, рекомендовано:

  • УЗИ органов брюшной полости каждые 6 месяцев
  • Анализ на альфафетопротеин каждые 6 месяцев
  • ФЭГДС для контроля состояния вен пищевода раз в 1-2 года.

Как видите, тактика очень разная. Поэтому ещё раз напоминаю, что лечение хронического гепатита С должно быть начато как можно раньше после выявления и показано абсолютно всем пациентам с этим диагнозом.

Ещё один важный момент

После выздоровления возможно повторное заражение, потому при наличии факторов риска требуется обследование.

Гепатит С и планирование беременности

Этот серьёзный и важный разбел начну с утверждения: “Сначала — лечение гепатита С, потом — беременность”.

А теперь аргументы в пользу такого подхода.

Если гепатит С у женщины

  • Беременность может провоцировать рост вирусной нагрузки и активности гепатита.
  • Наличие гепатита С увеличивает риск развития внутрипеченочного холестаза беременных.
  • На сегодняшний день не существует препаратов от гепатита С, совместимых с беременностью и грудным вскармливанием.
  • Риск передачи гепатита С от матери плоду в процессе родов небольшой (около 6%), но он есть, а эффективных мер профилактики нет.
  • Да, я в курсе про овариальный резерв, но продолжительность современной терапии в среднем 8-12 недель. Это максимум 2-3 овуляции.
Читайте также:  Пути распространения инфекционного гепатита а

Если гепатит С у мужчины:

  • Риск передачи вируса половым путём при регулярном незащищённом сексе примерно 2%.
  • Есть несколько исследований, демонстрирующих снижение количества сперматозоидов, снижение их подвижности и нарушение строения в образцах спермы мужчин, инфицированных гепатитом С. Несмотря на это, не выявлено значимых различий в успешности вспомогательных репродуктивных технологий по сравнению с здоровыми донорами.
  • В отношении влияния вируса на естественное оплодотворение данных немного, но большинство исследований не подтверждают негативных воздействий. В то же время есть доказательства, что качество спермы улучшается после проведённого лечения.

В “интерфероновую эру” действительно существовало ограничение на планирование беременности в течение 6 месяцев после лечения из-за тератогенного эффекта препаратов. Но сейчас, если в схему не включен рибавирин, то планировать можно сразу после окончания курса.

В конце хочу напомнить, основные характеристики современной терапии:

  • высокая эффективность;
  • хорошая переносимость;
  • непродолжительный курс;
  • показана всем больным гепатитом С.

Источник

Описание

Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации
положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу
гепатита С.
Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое
исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного
анализа (ИФА). Положительный результат теста на антитела, полученный при
первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных
более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские
исследования и лишние психологические травмы.

Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный
результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания,
определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии
скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в
некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При
выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать
в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее
важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для
этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты).

  Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса
гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса помогает
определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит
об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае,
если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса
после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного
подавления репликации вируса.

Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат
ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально
инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически,
убедиться в достоверности результатов определения антител.

Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает
высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое
позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные
против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С,
имеющих разную значимость. Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем,
начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических
антител.

Исключения:

  1. «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней
    острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка
    очень мала;
  2. иммуносупрессированные пациенты;
  3. новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с
    антителами матери).

Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь
положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.

Подготовка

Специальной подготовки к исследованию не требуется.
С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться
здесь >>.
 

Показания

  • Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных
    при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.

Интерпретация результатов

Способ представления результата: на
бланке результата отражено наличие или отсутствие антител к используемым
антигенам (положительно/отрицательно/слабоположительно). Выдаётся общее
заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов.

Отрицательный результат иммуноблота:
человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА
тестов – ложноположительный).

Исключения:

  1. «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень
    ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку
    вирусная нагрузка еще очень мала;
  2. иммуносупрессированные пациенты;
  3. новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина
    связанная с антителами матери).

В этих случаях подтверждение инфекции вирусом гепатита С возможно только с
помощью повторных ПЦР-исследований.

Положительный результат иммуноблота:
была инфекция вирусом гепатита С.
Пограничный результат: возможно, была
инфекция вирусом гепатита С.

Источник