Иммуноблоттинг гепатита с что это
Метод определения
Иммуноблот (технология: рекомбинантный Line Blot).
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.
Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.
Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) (см.
тест № 79
). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы.
Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты
№ 321
и
№ 323
).
Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса (см. тест
№ 324
) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.
Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.
Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.
Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических антител.
Исключения:
- «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
- иммуносупрессированные пациенты;
- новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).
Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.
Источник
Подтверждающий тест на антитела к вирусу гепатита С (иммуноблот) — подтверждение положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.
Гепатит С — наиболее тяжёлая форма вирусного заболевания, которое поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).
Основные пути передачи вируса гепатита С:
- кровь и/или другие жидкости организма инфицированного человека;
- трансплацентарный путь;
- реже — половой и парентеральный пути (от матери к ребенку).
Одним из основных факторов риска инфицирования является употребление инъекционных наркотиков. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови; заключённые.
Клиническая картина при гепатите С
Основные клинические проявления гепатита С очень неспецифичны: слабость, утомляемость, тошнота, отсутствие аппетита, потеря веса; при циррозе печени может появиться желтуха. Как правило, гепатит С протекает бессимптомно и в большинстве случаев диагностируется случайно. Гепатит C может вызвать как острую, так и хроническую инфекцию гепатита, которая влечет серьёзное пожизненное заболевание. Особо тяжёлый исход хронического гепатита С — цирроз печени и гепато-целлюлярная карцинома.
В норме антитела к вирусу гепатита С в крови отсутствуют.
Подтверждающий тест позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.
Подтвердить результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.
Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3–4 недели инфекции — период появления в крови специфических антител.
Показания
Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.
Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.
Интерпретация результатов
Способ представления результата: на бланке результата отражен результат выявления антител к используемым антигенам, раздельно для Cor-1 и Cor-2, хеликазы, NS3, NS4, NS5 (отрицательный/сомнительный/положительный). Выдаётся общее заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов.
Отрицательный результат иммуноблота: человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов — ложноположительный).
Исключения:
- «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка еще очень мала;
- иммуносупрессированные пациенты;
- новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина, связанная с антителами матери).
В этих случаях подтверждение инфекции вирусом гепатита С возможно только с помощью повторных ПЦР-исследований.
Положительный результат иммуноблота: была инфекция вирусом гепатита С.
Сомнительный результат: возможно, была инфекция вирусом гепатита С.
Источник
1 сентября 201921122 тыс.
Сегодня хочу поговорить о лечении этого безжалостного недуга, разобраться с жизнью после него и затронуть тему планирования беременности в сочетании с вирусным гепатитом С.
Диагностика
Но для начала несколько слов о диагностике
Методы диагностики вируса гепатита С (ВГС) делятся на две группы:
- Иммунологические
- Молекулярно-генетические
Иммунологические методы (ИФА, иммуноблот)
Эта группа методов выявляет антигены самогО вируса (С-, NS3-, NS4-, NS5-белки) или определяет антитела к белкам вируса – анти-HCV. По антителам к белкам можно установить стадию инфекционного процесса: первыми появляются антитела к С- и NS3-белкам, позже появляются антитела к NS4 и NS5.
Именно суммарные антитела – анти-HCV делают ВСЕМ для скрининга гепатита С. Материал для исследования – венозная кровь.
Если анти-HCV обнаружены, то следующий этап – определение РНК вируса гепатита С.
Молекулярно-генетические методы
Определение вируса методом ПЦР
Обнаружение РНК ВГС – это единственный достоверный критерий присутствия вируса в организме. Материал для исследования – венозная кровь, ткань печени.
⠀
ПЦР для выявления ВГС может быть:
- качественная — отвечает на вопрос: «есть ли вирус в организме?»
- количественная — отвечает на вопрос «какое количество вируса содержится в миллилитре крови?». Это и есть вирусная нагрузка.
Высокая вирусная нагрузка, если в крови содержится вирусных РНК более 800000 МЕ/мл или 2 000 000 копий/мл. Количество копий ВГС важно для лечения.
Генотипирование
Для ВГС важно определять генотип вируса (!).
Определяют 5 субтипов вируса гепатита С:
- 1a
- 1b
- 2a
- 2b
- 3a.
В РФ преобладает генотип 1b (80 % вируса популяции). Генотип ВГС важен для лечения.
Определение количества ВГС в крови и генотипирование необходимо проводить всем пациентам НЕПОСРЕДСТВЕННО перед началом лечения.
Лечение. История победы
Вирус гепатита С был выделен очень недавно — в 1989 году. Уже с 1991 г. предпринимались попытки лечения хронического вирусного гепатита С (ХВГС) препаратами интерферона.
До недавнего времени наиболее успешной схемой лечения ХВГС являлась комбинация интерферона с рибавирином. Средняя продолжительность такой терапии составляла от 6 до 12 месяцев в зависимости от генотипа, степени фиброза и некоторых других параметров.
Эффективность коллебалась от 45 до 80%. Лечение требовало регулярных инъекций интерферона и ежедневного приема рибавирина в таблетках. Такая терапия имела немалый перечень противопоказаний и зачастую сопровождалась развитием побочных эффектов вплоть до необходимости отмены препаратов.
С 2011 г. началась регистрация препаратов прямого противовирусного действия, эффективных против вируса гепатита С. В 2014 г. был зарегистрирован первый комбинированный препарат для лечения ХВГС, в котором два действующих вещества (софосбувир и ледипасвир) умещались в одной таблетке для приема один раз в день. Это стало предзнаменованием падения интерфероновой эры лечения ХВГС.
На сегодняшний день существуют различные схемы и сочетания препаратов прямого действия для лечения ХВГС. Лечение показано абсолютно всем пациентам. Чаще всего назначается комбинация из двух действующих веществ, длительность лечения составляет 8-12 недель.
Основными критериями для коррекции схем терапии являются наличие цирроза печени и истории неуспешного противовирусного лечения в прошлом.
Препараты имеют минимальный перечень противопоказаний и побочных эффектов. И самое главное — эффективность современной терапии более 90% и достигает 98% у отдельных категорий пациентов.
В 2016 году хронический вирусный гепатит С признан полностью излечимым заболеванием! Это прорыв, великое достижение медицинской науки, о котором должен знать каждый! А вы знали?
Лечение. Дженерик VS оригинал
Сегодня, в процессе вступления в пангенотипную эру терапии гепатита С, выделено три основные схемы лечения, которые отвечают поставленным задачам:
- софосбувир+велпатасвир
- софосбувир+велпатасвир+воксилапревир
- глекапревир+пибрентасвир
Что из этого доступно и в каком виде?
Прежде чем ответить на этот вопрос, остановимся на термине, что у всех на слуху, но значение от многих ускользает.
Дженерики
Итак, дженерики — это лекарственные средства, содержащие такое же действующее вещество, что и оригинальный препарат.
Разница в стоимости связана с тем, что создание оригинальной молекулы требует огромных финансовых затрат на всех этапах испытаний. Дженерики же используют уже запантентованную формулу, что значительно уменьшает объем исследований, а значит и себестоимость лекарства.
Это не какое-то уникальное явление для препаратов против гепатита С. Вы в своей жизни точно сталкивались с дженериками, например, приобретая парацетамол разных торговых марок.
Возвращаясь к гепатиту С — главная проблема индийских/египетских препаратов не в том, что они дженерики, а в том, что они не зарегистрированы на территории РФ, а значит — это нелегальный и неконтролируемый рынок.
Покупая эти препараты за пределами аптечной сети, вы по сути приобретаете кота в мешке, который в равной степени может быть как хорошим дженериком, так и просто подделкой. Отследить контрафакт бывает не всегда просто даже с зарегистрированными препаратами, а уж на нелегальной рынке тем более.
Единственное преимущество, вне всякого сомнения, — цена. Весь курс обходится в пределах 60 тыс.руб, если говорить об индийских дженериках.
Сегодня доступна из новейших схем только комбинация: софосбувир+велпатасвир.
Оригиналы
В РФ доступны софосбувир (что бессмысленно, т.к. он не применяется, как монотерапия) и комбинация глекапревир+пибрентасвир (стоимость на курс от 630 до 945 тыс.руб в зависимости от длительности приема).
Да, нам всем бы хотелось, чтобы эти вопросы вообще не стояли и обеспечением терапии занималось государство. Но пост не об этом. Он о реальной жизни, где решение принимаете только вы, исходя из своих возможностей.
Жизнь после лечения
Пациент, завершивший курс противовирусной терапии и имеющий отрицательный результат высокочувствительного теста на РНК вируса, подлежит диспансерному наблюдению. Длительность его принципиально зависит только от одного фактора — степени фиброза.
Если фиброз печени умеренный (F0-2) и не достиг стадии цирроза, то продолжительность наблюдения составляет 2 года. В течение этого времени раз в полгода контролируется РНК HCV, раз в год — уровень АЛТ.
Если вирус не обнаружен, а АЛТ в пределах нормальных значений — это победа, выздоровление. Человек снимается с учёта и в наблюдении не нуждается.
Дополнительное обследование требуется при наличии сопутствующих заболеваний:
- алкоголизма
- ожирения
- сахарного диабета 2 типа.
Пациенты с циррозом и с тяжёлым фиброзом F3 наблюдаются пожизненно, т.к. избавление от вируса не позволяет излечить цирроз, а лишь замедлить/приостановить прогрессирование. Сохраняются риски развития рака печени.
Поэтому, кроме вышеуказанных обследований, рекомендовано:
- УЗИ органов брюшной полости каждые 6 месяцев
- Анализ на альфафетопротеин каждые 6 месяцев
- ФЭГДС для контроля состояния вен пищевода раз в 1-2 года.
Как видите, тактика очень разная. Поэтому ещё раз напоминаю, что лечение хронического гепатита С должно быть начато как можно раньше после выявления и показано абсолютно всем пациентам с этим диагнозом.
Ещё один важный момент
После выздоровления возможно повторное заражение, потому при наличии факторов риска требуется обследование.
Гепатит С и планирование беременности
Этот серьёзный и важный разбел начну с утверждения: “Сначала — лечение гепатита С, потом — беременность”.
А теперь аргументы в пользу такого подхода.
Если гепатит С у женщины
- Беременность может провоцировать рост вирусной нагрузки и активности гепатита.
- Наличие гепатита С увеличивает риск развития внутрипеченочного холестаза беременных.
- На сегодняшний день не существует препаратов от гепатита С, совместимых с беременностью и грудным вскармливанием.
- Риск передачи гепатита С от матери плоду в процессе родов небольшой (около 6%), но он есть, а эффективных мер профилактики нет.
- Да, я в курсе про овариальный резерв, но продолжительность современной терапии в среднем 8-12 недель. Это максимум 2-3 овуляции.
Если гепатит С у мужчины:
- Риск передачи вируса половым путём при регулярном незащищённом сексе примерно 2%.
- Есть несколько исследований, демонстрирующих снижение количества сперматозоидов, снижение их подвижности и нарушение строения в образцах спермы мужчин, инфицированных гепатитом С. Несмотря на это, не выявлено значимых различий в успешности вспомогательных репродуктивных технологий по сравнению с здоровыми донорами.
- В отношении влияния вируса на естественное оплодотворение данных немного, но большинство исследований не подтверждают негативных воздействий. В то же время есть доказательства, что качество спермы улучшается после проведённого лечения.
В “интерфероновую эру” действительно существовало ограничение на планирование беременности в течение 6 месяцев после лечения из-за тератогенного эффекта препаратов. Но сейчас, если в схему не включен рибавирин, то планировать можно сразу после окончания курса.
В конце хочу напомнить, основные характеристики современной терапии:
- высокая эффективность;
- хорошая переносимость;
- непродолжительный курс;
- показана всем больным гепатитом С.
Источник
Описание
Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации
положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу
гепатита С. Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое
исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного
анализа (ИФА). Положительный результат теста на антитела, полученный при
первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных
более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские
исследования и лишние психологические травмы.
Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный
результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания,
определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии
скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в
некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При
выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать
в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее
важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для
этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты).
Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса
гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса помогает
определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит
об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае,
если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса
после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного
подавления репликации вируса.
Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат
ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально
инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически,
убедиться в достоверности результатов определения антител.
Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает
высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое
позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные
против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С,
имеющих разную значимость. Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем,
начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических
антител.
Исключения:
- «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней
острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка
очень мала; - иммуносупрессированные пациенты;
- новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с
антителами матери).
Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь
положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.
Подготовка
Специальной подготовки к исследованию не требуется.
С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться
здесь >>.
Показания
- Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных
при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.
Интерпретация результатов
Способ представления результата: на
бланке результата отражено наличие или отсутствие антител к используемым
антигенам (положительно/отрицательно/слабоположительно). Выдаётся общее
заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов.
Отрицательный результат иммуноблота:
человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА
тестов – ложноположительный).
Исключения:
- «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень
ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку
вирусная нагрузка еще очень мала; - иммуносупрессированные пациенты;
- новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина
связанная с антителами матери).
В этих случаях подтверждение инфекции вирусом гепатита С возможно только с
помощью повторных ПЦР-исследований.
Положительный результат иммуноблота:
была инфекция вирусом гепатита С.
Пограничный результат: возможно, была
инфекция вирусом гепатита С.
Источник