Элективные среды для кишечных инфекций

Классификация питательных сред производится по их составу и назначению

1.По составу питательные среды делятся на простые и сложные

Различают группу сред общего назначения — простых. К этой группе относят мясо-пептонный бульон (простой питательный бульон), мясо-пептонный агар {простой питательный агар), питательный желатин. Эти среды применяются для выращивания многих патогенных микробов. Среды общего назначения, или простые питательные среды, готовятся обычно из гидролизатов с добавлением пептона и хлористого натрия. Их используют также как основу для приготовления сложных сред.

Также по составу выделяют белковые, безбелковые и минеральные среды.2. По происхождению среды разделяют на искусственные и естественные (природные).

Естественные питательные среды могут содержать компоненты животного (например, кровь, сыворотка, жёлчь) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения.

3.По назначению выделяют консервирующие среды (для первичного посева и транспортировки), среды обогащения (для накопления определённой группы бактерий), среды для культивирования {универсальные простые, сложные специальные и для токсинообразования), среды для выделения и накопления (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идентификации (дифференциальные и элективно-дифференциальные).

Консервирующие питательные среды предупреждают отмирание патогенов и подавляют рост сапрофитов. Наибольшее применение нашли глицериновая смесь, гипертонический раствор, глицериновый консервант с LiCl2, раствор цитрата натрия и дезоксихолата натрия.

Среды обогащения для бактерий

Среды обогащения (например, среда Китта-Тароцци, селенитовый бульон, тиогликолевая среда) применяют для накопления определённой группы бактерий за счёт создания условий, оптимальных для одних видов и неблагоприятных для других. Наиболее часто в качестве подобных агентов используют различные красители и химические вещества — соли жёлчных кислот, тетратионат Na+, теллурит К , антибиотики, фуксин, генциановый фиолетовый, бриллиантовый зелёный и др.

Также по назначению различают среды элективные, специальные и дифференциально-диагностические.

Среды элективные (селективные, избирательные, накопления, обогащения). Принцип создания элективных питательных сред основан на удовлетворении основных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназначены, или на добавление ингибиторов, подавляющих рост сопутствующей микрофлоры. Определенный состав и концентрация питательных веществ, микроэлементов, ростовых факторов при строго определённом значении pH или добавлении ингибиторов обеспечивают оптимальные условия для выращивания одного или нескольких видов микроорганизмов. При посеве на них материала, содержащего смесь различных микробов, раньше всего будет проявляться рост того вида, для которого среда будет элективной. Примером элективных сред являются желчный бульон, селенитовый бульон, среда Плоскирева – для выращивания микробов семейства кишечных, щелочная пептонная вода – для холерного вибриона.

Желчный бульон. К МПБ добавляют 10-20% бычьей желчи. Желчь подавляет рост коков и воздушной флоры, но благоприятна для размножения сальмонелл.

Селенитовый бульон. Состоит из фосфатного бульона с добавлением натриевой соли селенита, которая является ингибитором роста кокковой флоры, кишечной палочки, но не задерживает роста сальмонелл.

Среда Плоскирева. Плотная среда, содержащая ингибиторы кишечной палочки, коков, но благоприятная для роста шигелл и сальмонелл, размножение которых не тормозится бриллиантовым зелёным и желчными солями.

Пептонная вода. Содержит 1% пептона и 0,5% хлористого натрия. Среда является элективной для холерных вибрионов, т.к. они лучше других бактерий размножаются на “голодных средах”, особенно при щелочной реакции, потому что сами выделяют кислые продукты жизнедеятельности.

Специальные среды. Необходимы для культивирования бактерий, не растущих на простых питательных средах. Для некоторых организмов к простым питательным средам необходимо добавлять углеводы, кровь и др. дополнительные питательные вещества. Примерами простых питательных сред являются сахарный бульон и сахарный агар для стрептококка (готовится соответственно из МПБ и МПА, к которым добавляется 0,5-2% глюкозы).

Для пневмококков и менингококков специальной средой являются сывороточный бульон и сывороточный агар (для приготовления сывороточного бульона смешивают 1 часть МПБ с 2 частями свежей сыворотки, для получения, сывороточного агара к расплавленному МПА добавляется 10-25% стерильной лошадиной или бычьей сыворотки).

Дифференциально-диагностические среды используют для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ. По своему назначению дифференциально-диагностические среды разделяют следующим образом:

1. Среды для выявления протеолитической способности микробов, содержащие в своем составе молоко, желатин, кровь и т.д.

2. Среды с углеводами и многоатомными спиртами для

обнаружения различных сахаролитических ферментов.

В состав дифференциально-диагностических сред, предназначенных для выявления сахаролитических свойств и окислительно-восстановительных ферментов, вводят индикаторы: нейтральную красную, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой с розоловой кислотой (ВР). Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на наличие фермента и расщепление введённого в среду ингредиента.

Примеры дифференциально-диагностических сред:

Среда Эндо. Состоит из МПА с добавлением 1% лактозы и обесцвеченного сульфитом натрия основного фуксина (индикатор). Среда Эндо имеет слаборозовый цвет. Используется в диагностике кишечных инфекций для дифференциации бактерий, разлагающих лактозу с образованием кислых продуктов, от бактерий, не обладающих этой способностью. Колонии лактозопозитивных микробов (кишечная палочка) имеют красный цвет вследствие восстановления фуксина. Колонии лактозонегативных микроорганизмов — сальмонелл, шигелл и др. -бесцветны.

К дифференциально-диагностическим средам относятся короткий и развёрнутый пёстрый ряд. Он состоит из сред с углеводами (среды Гисса), МПБ, молока, мясопептонной желатины.

Среды Гисса готовятся на основе пептонной воды, к которой прибавляются химически чистые моно-, ди- или полисахариды (глюкоза, лактоза, крахмал и др.).

Для обнаружения сдвигов рН в результате образования кислот и разложения углевода в среды прибавляют индикатор. При более глубоком расщеплении углеводов образуются газообразные продукты (СО2, СН4 и др.), которые улавливаются при помощи поплавков — маленьких пробирочек, опущенных в среду кверху дном. Среды с углеводами могут готовиться и плотными – с добавлением 0,5-1% агар-агара. Тогда газообразование улавливается по образованию пузырьков (разрывов) в столбике среды.

На МПБ, входящем в пёстрый ряд, обнаруживают продукты, образующиеся при расщеплении аминокислот и пептонов (индол, сероводород). Сероводород обнаруживается путем помещения в МПБ после засева культуры полоски фильтровальной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свинца. При расщеплении аминокислот, содержащих серу, выделяется сероводород, бумажка чернеет за счёт образования сернистого свинца. Для определения индола можно использовать сложный индикатор. Индол образуется при расщеплении триптофана, и его можно обнаружить при добавлении к культуре, выращенной на МПБ, этого индикатора. При наличии индола МПБ окрашивается в зеленый или синий цвет.

В практических бактериологических лабораториях широко применяют микро- и экспресс-методы для ориентировочного изучения биохимических свойств микроорганизмов. Для этой цели существует множество тест-систем. Наиболее часто используют систему индикаторных бумаг (СИБ). СИБы представляют из себя диски фильтровальной бумаги, пропитанные растворами сахаров или других субстратов в сочетании с индикаторами. Такие диски опускают в пробирку с выросшей в жидкой питательной среде культурой. По изменению цвета диска с субстратом судят о работе фермента. Микро-тест системы для изучения идентификации энтеробактерий представлены одноразовыми пластиковыми контейнерами со средами, содержащими различные субстраты, с добавлением индикаторов. Посев чистой культуры микроорганизмов в такие тест-системы позволяет быстро выявить способность бактерий утилизировать цитраты, глюкозу, сахарозу, выделять аммиак, индол, разлагать мочевину, лизин, фенилаланин и т.д.

Питательный агар, а также основные дифференциально-диагностические среды выпускаются в настоящее время в виде сухих препаратов, содержащих все необходимые составные части. К таким порошкам нужно добавить только воду и сварить, а затем, после разливки, простерилизовать.

Дата добавления: 2014-02-01; просмотров: 5580; Опубликованный материал нарушает авторские права? | Защита персональных данных

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: На стипендию можно купить что-нибудь, но не больше… 9400 — | 7443 — или читать все…

Теоретический материал для самоподготовки

Вопрос 1. Эшерихии (род Escherichia)

Типовой
вид — E.coli, имеет наибольшее значение в
медицине. Заболевания, вызываемые
E.coli, называются эшерихиозами.

Морфологические
признаки: E.coli
— мелкие палочки с закругленными концами,
грамотрицательные, спор не образуют,
перитрихи. Некоторые штаммы имеют
микрокапсулу.

Элективные среды для кишечных инфекций

Чистая
культура E.coli.
Колонии кишечной палочки
на среде Эндо.

Окраска
по Граму.

Культуральные
признаки: E.coli
– факультутативный анаэроб, хорошо
растет на простых питательных средах,
давая на жидких – помутнение, на плотных
– выпуклые колонии серого цвета S-
или R-типа.
Элективной средой является среда Эндо,
на которой E.coli
образует красные
колонии с металлическим блеском.

Антигенная
структура: E.coli
имеет:

—
соматический О-антиген (имеет более 170
вариантов), который определяет серогруппу,

—
поверхностный К-антиген, который по
чувствительности к температуре
подразделяется на А, В и L-
фракции (чаще преобладает В-фракция),
К-антиген имеет более 100 вариантов,

—
Н-антиген имеет более 50 вариантов,
определяет серовар.

Штаммы
E.coli, отличающиеся по антигенам (антигенной
формуле), называются сероварами
(серотипами). Например, штамм О55:К5:H21
относится к серогруппе О55.

Биохимические
признаки. Наиболее
важным признаком E.coli является ее
способность ферментировать лактозу.
Дифференциально-диагностические
признаки E.coli:

—
ферментация глюкозы с образованием
кислоты и газа,

—продукция
индола и неспособность образовывать
сероводород.

По
антигенным и токсигенным свойствам
возбудителей разделяют на условно-патогенные
и патогенные кишечные палочки:

—
условно-патогенные
кишечные палочки
— комменсалы (представители нормальной
микрофлоры кишки), возбудители
оппортунистических инфекций (парентеральных
эшерихиозов) в виде сепсиса, перитонита,
цистита т.д.; —

—
патогенные,
или диареегенные кишечные палочки
— вызывают энтеральные эшерихиозы
(гастроэнтериты, колиты и др.).

Заболевания,
вызываемые диареегенными Escherichia coli:

1.
Энтеротоксигенные кишечные палочки
(ЭТКП)
– факторы
патогенности: пили, факторы колонизации
(CF),
термолабильный (LT
= аналог холерного токсина) и термостабильный
(ST)
токсины.
Поражается тонкая кишка . Заболевания
— диарея путешественников, холероподобная
диарея у детей и взрослых.

2.
Энтероинвазивные кишечные палочки
(ЭИКП)
–
факторы
патогенности
:
факторы инвазии — поверхностные белки,
кодируемые большой плазмидой, определяющие
ивазию ЭИКП в клетки эпителия толстой
кишки с последующим разрушением
эпителия. Вызывают дизентериеподобное
заболевание (стул с небольшой примесью
крови).

3.
Энтеропатогенные кишечные палочки
(ЭПКП),
разрушающие микроворсинки и повреждающие
апикальную часть эпителия тонкой кишки.
Факторы
патогенности — белок-адгезин
наружной мембраны,
кодируемый плазмидой, и белок
наружной мембраны интимин,
кодируемый хромосомным геном. Вызывают
диарею у детей 1 года жизни.

4.
Энтерогеморрагические кишечные палочки
(ЭГКП,
например, E. coli О157:Н7) с преобладанием
геморрагического фактора, вызывающего
гемолитический уремический синдром.
Поражается толстая кишка . Факторы
патогенности: пили, шигаподобные токсины
(SLT
I,SLT II; веротоксины), разрушающие эндотелий
мелких кровеносных сосудов; белок
наружной мембраны интимин,
кодируемый хромосомным геном. Вызывают
геморрагический колит(диарея с примесью
крови); гемолитико-уремический синдром.

5.
Энтероаггрегирующие кишечные палочки
(ЭАГКП)
с персистенцией, вызывают тяжелое
обезвоживание детей. Аггрегируют на
культуре клеток Нер-2. Поражается тонкая
кишка . Механизм поражения:
плазмидоопосредованное аггрегативное
прикрепление, предупреждающее абсорбцию
жидкости . Вызывают диарею у детей.

Микробиологическая
диагностика.

Основной
метод — бактериологический. Материал
засевают на среду Эндо. Выбирают не
менее 10 колоний красного цвета с
металлическим блеском и ставят реакцию
агглютинации на стекле с О-сыворотками.
Определяют вид чистой культуры
(грамотрицательные палочки,
оксидазоотрицательные, ферментирующие
глюкозу и лактозу до кислоты и газа,
образующие индол, не образующие H2
S) и принадлежность к серогруппе, что
позволяет отличить условно-патогенные
кишечные палочки от диареегенных.
Внутривидовая идентификация, имеющая
эпидемиологическое значение, заключается
в определении серовара с помощью
диагностических адсорбированных
иммунных сывороток.

Лечение.

Для
лечения применяют антибиотики
тетрациклинового ряда, цефалоспорины
последних поколений, фторхинолон,
хлорамфеникол, для предупреждения
развития грибков в ЖКТ параллельно
назначают антимикотики, например,
нистатин; при непереносимости антибиотиков
или детям до года назначают коли-протейный
бактериофаг. Для восстановления
нормальной микрофлоры ЖКТ после
применения антибиотиков или одновременно
с ними рекомендуется назначать эубиотики:
бифидумбактерин, лактобактерин,
колибактерин и др.

Профилактика.

Специфической
профилактики нет. В экстренных случаях
всем контактировавшим с больным назначают
коли-протейный бактериофаг и эубиотики:
бифидумбактерин, лактобактерин,
колибактерин и др.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Источник

Тема:
Возбудители бактериальных кишечных
инфекций: эшерихиозов, брюшного тифа,
паратифов А и В, сальмонеллезов,
дизентерии, холеры.

Цель:
Уметь охарактеризовать морфологические,
культуральные, ферментативные, антигенные
и другие свойства возбудителей
эшерихиозов, сальмонеллезов, брюшного
тифа и паратифов, холеры знать эпидемиологию
(источник механизм и пути передачи),
особенности патогенеза и клинического
течения, знать принципы лабораторной
диагностики, лечения и профилактики
кишечных инфекций.

Возбудители
бактериальных кишечных инфекций
относятся
к семейству Enterobacteriaceae,
включающему 12 родов.

Возбудители
эшерихиозов
– Escherichia
coli,
относится к
роду Escherichia.
Возбудители брюшного тифа – Salmonella
typhi,
паратифов А и В – Salmonella
paratyphi
A,
Salmonella
schottmuelleri,
а также возбудители сальмонеллезов –
Salmonella
typhimurium,
Salmonella
enteritidis,
Salmonella
cholerae
– suis
и др. относится
к роду Salmonella.

Возбудители
дизентерии – Shigella
Flexneri,
Shigella
Sonnei,
Shigella
disenteriae
и др. относится
к роду Shigella.

Возбудители холеры
– Vibrio
cholerae
относится к
семейству Vibrio.

Все представители
семейства
Enterobacteriaceae
имеют общие морфологические тинкториальные
свойства, общую антигенную структуру,
не образуют спор, факультативные
анаэробы.

Кишечные инфекции
имеют общие признаки: заражение через
рот, поражение пищеварительного тракта,
выделение возбудителя с фекалиями
и др. Клиническое течение заболеваний,
общие свойства, присущие энтеробактериям,
механизм заражения затрудняют
дифференциальную диагностику кишечных
инфекций.

Таксономия
возбудителей кишечных инфекций.
Морфология и
тинкториальные свойства.
Культуральные
свойства кишечной палочки, сальмонелл,
шигелл, холерного вибриона.
Ферментативные
свойства.
Антигенная
структура возбудителей бактериальных
кишечных инфекций.
Факторы вирулентности
и резистентности.
Источник, механизм
и пути передачи кишечных инфекций.
Патогенез и клиника
эшерихиозов, брюшного тифа, паратифов
А и В, сальмонеллезов, дизентерии,
холеры.
Иммунитет.
Принципы лабораторной
диагностики кишечных инфекций.
Лечение и
профилактика.

Литература

Дикий И.Л., Холупяк
И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю.
Микробиология. – Х.: Прапор,
Издательство УкрФА, 1999. – С. 224-236, 242-247.
Н.П.Елинов,
Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руководство
к лабораторным занятиям по микробиологии.
– М.: Медицина, 1988. – С. 142-153.

Материал для исследований

Бактериологически
исследуют: рвотные массы, промывные
воды желудка и кишок, фекалии, мочу,
желчь, гной или экссудат из очагов
воспаления (при сальмонеллезе, эшерихиозе,
шигеллезе); отделяемое из скарифицированных
розеол, в отдельных случаях пунктат
костонго мозга, спинномозговую жидкость,
некротизированные ткани (при брюшном
тифе, паратифах А и В); а также пищевые
продукты, подозреваемые в качестве
источников инфекции-остатки пищи,
продукты из которых она готовилась,
смывы со столов, разделочных досок, с
рук обслуживающего персонала и др. (при
пищевых токсикоинфекциях).

Для исследований
выбирают наиболее измененные частицы
свежих испражнений (слизь, прожилки
крови, гной). Материал, который не может
быть посеян без предварительной обработки
(фекальные и рвотные массы густой
консистенции, остатки пищи и др.),
растирают в фарфоровых ступках и
суспендируют в изотоническом растворе
натрия хлорида.

Среды для выделения микробов семейства кишечных

Для выделения
патогенных бактерий семейства кишечных
применяют среды, которые позволяют их
дифференцировать от постоянных обитателей
кишечника-микробов, разлагающих лактозу.
Это так называемые дифференциальные
среды. Имеется несколько групп
дифференциальных сред.

Среды первой группы
содержат лишь лактозу и индикатор (среды
с красным конго, бромкрезоловым пурпурным
и др.). Они не обладают элективными
свойствами для палочек семейства
кишечных. На них растут также
грамположительные микробы и вульгарный
протей.

Бромкрезоловая
среда
имеет сине-фиолетовый цвет; содержит
лактозу, спиртовый раствор
бромкрезолового пурпурного и спиртововодный
раствор метиленового синего. На этой
среде колонии кишечной палочки имеют
зеленый цвет, а колонии сальмонелл и
шигелл – сине-голубой.

Среды второй группы
– так называемые элективные – содержат
дополнительные вещества (малахитовый
зеленый, бриллиантовый зеленый, желчь,
метиленовый синий), которые задерживают
рост грамположительных микробов. Среди
них наиболее широкое применение имеют
среды Эндо и Левина.

Среда Эндо
применяется при исследованиях на
сальмонеллы и патогенные серотипы
кишечной палочки; содержит лактозу и в
качестве индикатора фуксин,
обесцвеченный сульфитом натрия. Горячий
агар имеет бледно-розовый цвет, при
застывании он становится бесцветным.
Колонии кишечной палочки на этой среде
имеют фуксиново-красный цвет с
металлическим блеском, тогда как колонии
сальмонелл и шигелл бесцветные и
прозрачные.

Среда Левина
применяется для выращивания всех
энтеробактерий; содержит лактозу, эозин
и метиленовый синий, имеет фиолетовый
цвет. Колонии патогенных кишечных
бактерий на этой среде прозрачны или
имеют розовый оттенок. Кишечная
палочка образует синие или черные
колонии.

Среды третьей
группы — селективные — содержат кроме
веществ, подавляющих рост кишечной
палочки и других сопутствующих микробов,
вещества, стимулирующие рост определенных
патогенных энтеробактерий. Селективной
средой для сальмонелл является
висмут-сульфитная
среда, на
которой бактерии брюшного тифа и паратифа
В растут в виде черных колоний с ободком,
а паратифа А — нежных колоний с зеленоватым
оттенком, другие сальмонеллы растут в
виде колоний черного цвета с металлическим
блеском.

Для дизентерийных
бактерий (кроме бактерий Григорьева-Шига)
селективной средой является среда
Плоскирева. На ней хорошо растут тифозные
и паратифозные бактерии; колонии
сальмонелл и шигелл бесцветные,
мутноватые, колонии кишечной палочки
— розового цвета.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Источник