Качественный анализ гепатита с в хеликсе

[40-094]
Вирусный гепатит С. Анализы для первичного выявления заболевания. Обследование контактных лиц

1460 руб.

Исследование проводится в целях первичного выявления вируса в организме и включает в себя определение в крови специфических маркеров инфицирования – суммарных антител (IgG, IgM) к вирусу гепатита С и вирусной РНК.

anti-HCV, антитела
HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]

Венозную кровь.

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека. Существует 6 генотипов ВГС, не исключена возможность инфицирования человека одновременно несколькими вирусами с различными генотипами. В 60-80 % случаев острая инфекция переходит в хроническую.

В лабораторной диагностике заболевания используют два основных подхода:

— серологические методы, основанные на обнаружении специфических антител к вирусу (anti-HCV);

— молекулярно-биологические методы, основанные на выявлении РНК вируса (реал-тайм ПЦР).

Выявление РНК вируса считается «золотым стандартом» в диагностике гепатита С и подтверждает положительный результат обнаружения антител (anti-HCV) к белкам вируса и свидетельствует о наличии и репликации (размножении) вируса в крови.

Современные молекулярно-биологические методы диагностики обладают высокой чувствительностью (98-99 %) и в сочетании с серологическими исследованиями позволяют правильно оценить стадию заболевания, принять решение о тактике лечения, включая выбор препаратов и сроки медикаментозной терапии.

Для диагностики вирусного гепатита С;
для дифференциальной диагностики гепатитов;
для выявления ранее перенесенного вирусного гепатита С.

При обследовании людей из группы риска по заражению вирусным гепатитом С;
при обнаружении антител к вирусу гепатита С для подтверждения диагноза;
при симптомах вирусного гепатита и повышении уровня печеночных трансаминаз;
если известно о перенесенном гепатите неуточненной этиологии;
при скрининговых обследованиях;
при сомнительных результатах серологического исследования;
если ребенок родился от инфицированной матери;
при гемодиализе;
до начала лечения и в конце терапии вирусного гепатита C, затем через 6 и 24 месяца наблюдения.

Что означают результаты?

Референсные значения

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

[07-009] anti-HCV, антитела
[09-011] HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]

1. Наличие антител (anti-HCV) не свидетельствует о продолжающейся репликации вируса, поскольку может являться признаком как текущей, так и перенесенной инфекции.

2. В ряде случаепри отсутствии антител не исключает инфекции — в ранний период острого гепатита C (ОГС) и при иммунодефицитах.

3. Необходимо учитывать, что у реципиентов, которым была перелита инфицированная кровь, могут обнаруживаться антитела (anti-HCV) донора; их наличие не обязательно свидетельствует о заражении HCV.

4. Одновременное обнаружение в крови РНК вируса и антител (anti-HCV) указывает на текущую острую инфекцию или обострение хронического гепатита С (ХГС). Дифференциальная диагностика острого гепатита С в большинстве таких случаев должна базироваться на наличии соответствующих данных эпидемиологического анамнеза за 1-4 месяца до момента обнаружения антител и увеличения печеночных ферментов.

5. Отсутствие РНК HCV при наличии антител (anti-HCV-позитивные образцы) в крови может являться признаком неустойчивой виремии, перенесенного острого гепатита, а также ложноположительного результата лабораторного исследования.

Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита С

anti-HCV	РНК-HCV	Интерпретация результатов
—	+	Ранний период ОГС; ХГС на фоне иммуносупрессии; ложноположительный тест на РНК-HCV
+	+	Острый или хронический гепатит С
+	—	Элиминация вируса; острый гепатит С в период низкого уровня виремии
—	—	Отсутствие инфекции

Что может влиять на результат?

Присутствие ревматоидного фактора в крови может приводить к ложноположительным результатам при определении антител к HCV.
Присутствие в крови гепарина или высокий уровень криоглобулинов приводит к ложноотрицательным результатам при определении РНК вируса методом ПЦР.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, гепатолог, эпидемиолог, терапевт.

Также рекомендуется

Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С
HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
HCV, РНК количественно, высокочувствительный метод [реал-тайм ПЦР]
[06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
[06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
[06-013] Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
[40-120] Билирубин и его фракции (общий, прямой и непрямой)
[06-045] Фосфатаза щелочная общая
[06-004] Альбумин в сыворотке
[03-011] Фибриноген
[40-483] Лабораторное обследование функции печени
[20-001] Фактор некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа)
[02-029] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Литература:

Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. – М.: ООО «МИА», 2006. – 471-476 с.
Вирусный гепатит С: современные возможности диагностики (клиническая лекция) / А. К. Дуда, В. А. Бойко, И. Н. Агафонкина, А. В. Яковлева // Актуальная инфектология. — 2015. — № 4. — С. 9-16.

Источник

[09-011]
HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]

705 руб.

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса в крови.

Синонимы русские

Вирус гепатита С (ВГС), качественное определение РНК.

Синонимы английские

Hepatitis С Virus, RNA, Blood, HCV RNA, Real-Time PCR, Qualitative.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Выявляет генотипы HCV: 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4, 5a, 6.

Специфичность определения: 100 %.

Чувствительность определения: 50 МЕ/мл.

Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых тест-системой: 150-1*10^8 МЕ/мл.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности может избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой). У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и помогает диагностировать заболевание. Генетический материал вируса можно обнаружить методом ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений. РНК вируса гепатита С с высокой специфичностью и чувствительностью определяют качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается факт инфицирования или гибели вируса. Это особенно важно в ранней диагностике вирусного гепатита у людей, подвергшихся риску заражения, а также при контроле за противовирусной терапией. При лечении альфа-интерфероном отсутствие РНК вируса через 24 недели после завершения терапии служит критерием ее эффективности.

Для чего используется исследование?

Для раннего выявления вирусного гепатита С.
Для дифференциальной диагностики гепатитов.
Для контроля за эффективностью противовирусного лечения.
Для мониторинга течения вирусного гепатита С.
Для проверки донорской крови.

Когда назначается исследование?

При сомнительных результатах серологического исследования.
При обследовании людей из группы риска по заражению вирусным гепатитом С.
Если ребенок родился от инфицированной матери.
При симптомах гепатита и повышенных биохимических показателях функции печени.
До лечения и в конце терапии, затем через 6 и 24 месяца наблюдения.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

Причины положительного результата

Вирусный гепатит С.

Причины отрицательного результата

Отсутствие вируса гепатита С в крови исследуемого.

Что может влиять на результат?

Причины ложноотрицательного результата:

минимальная вирусная нагрузка крови (50 МЕ/мл);
наличие в образце ингибиторов – химических и белковых субстанций, влияющих на различные компоненты ПЦР;
присутствие в крови гепарина;
высокий уровень криоглобулинов в крови.

Важные замечания

Само по себе наличие РНК вируса гепатита С при отсутствии изменений других лабораторных показателей не позволяет диагностировать инфекцию со стопроцентной уверенностью. При этом необходимо повторное выявление РНК вируса методом ПЦР и комплексная оценка всех исследований. При хроническом гепатите С концентрация вирусного РНК меняется волнообразно – положительные и отрицательные результаты могут чередоваться, что требует проведения биопсии печени для уточнения диагноза и тактики лечения.
Прямой зависимости между активностью размножения вируса и изменением биохимических показателей функции печени нет.

Также рекомендуется

Anti-HCV, антитела, ИФА
Аnti-HCV, антитела
Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита
HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
Фосфатаза щелочная общая
Альбумин в сыворотке
Билирубин общий
Холестерол общий
Тромбиновое время
Фибриноген
Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
Лейкоцитарная формула
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог.

Литература

Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000 – Т.1.: 600-690.
Кишкун А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006 – 471-476 с.
Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.

Источник

HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается. Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса. Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

Для чего используется исследование?

Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
При остром и хроническом вирусном гепатите С.
При микст-гепатитах.
При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Источник

Полимеразной цепной реакцией (ПЦР) в молекулярной биологии называют экспериментальный метод выявления вирусов. Он позволяет значительно увеличивать концентрации определенных фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в пробах биологического материала, что дает возможность их детерминировать (распознавать) и подсчитывать.

Проведение анализа выполняют следующим образом. Генетический материал (пробу крови), который потенциально может включать искомый ген, вносится в пробирку. Туда же помещают праймеры –синтезированные химическим путем отрезки небольшой длины искомого гена.

В сосуд также добавляют ДНК или РНК полимеразу, она способна выстроить цепочку нуклеиновой кислоты, которая полностью идентична первоначальной. В полученный состав вводят и набор из четырех свободных нуклеотидов – особого строительного материала для РНК или ДНК, один их которых содержит радиоактивные частицы фосфора.

Полученную смесь подогревают до 95–96°С, из-за чего две спирали ДНК, которые в обычном состоянии переплетены между собой, расплетаются. Затем препарат охлаждают, в это время праймеры сами прикрепляются к искомому участку генома вируса, не давая РНК (либо ДНК) вновь сформировать двойную спираль.

В процессе охлаждения полимераза отыскивает свободную цепочку нуклеотидов. Для функционирования данного фермента необходима именно одиночная цепь нуклеотидов. Поскольку полимераза проскальзывает по цепи ДНК (как кольцо по веревке), на двойной спирали она не способна работать.

После этого выполняют повторный цикл нагревания, из-за чего между собой разделяются цепочки нуклеотидов. При каждом из таких циклов ПЦР количество в пробе именно искомого гена гепатита возрастает в геометрической прогрессии, а остальной генетический материал продуцируется (вырастает) линейно.

После очистки раствора от остатков нуклеотидов и разделения при помощи электрофореза цепочек ДНК по параметру молекулярной массы, можно легко определить: есть ли искомый ген в исследуемом образце или нет.

Преимущества ПЦР

Лабораторное исследование методом ПЦР позволяет получить даже больше информации, чем просто присутствие РНК вируса. Определяя параметр уровня радиоактивного излучения, есть возможность выявить, какое количество генетического материала содержалось изначально в исследуемом образце. В случае гепатита – определить показатель уровня вирусной нагрузки.

Еще одним достоинством этого метода является очень высокая степень чувствительности реакции ЦР. Она гораздо выше, чем у классических методов выявления вирусов. В идеальном варианте, для того чтобы выявить искомый ген, для ПЦР достаточно всего одного вируса в пробе.

Кроме этого, ПЦР полностью специфична. Ее праймеры создаются таким образом, чтобы они полностью соответствовали уникальным участкам искомых генов, которых нет ни у какой другой последовательности. Как уникальны отпечатки пальцев, так и в каждом гене есть уникальные последовательности из нуклеотидов.

Качественный анализ ПЦР

Качественный анализ позволяет выявить только факт наличия вируса в крови. Этот тест нужно проводить для всех пациентов, у которых были обнаружены в крови антитела к гепатиту С. Его результатом может быть лишь одно значение из двух: «обнаружено» либо «не обнаружено». У здорового человека в норме (референсное значение) должно быть «не обнаружено».

Есть и специальная интерпретация таких результатов проведенного качественного исследования:

Результат «обнаружено». Это означает, что в анализируемом образце взятого биологического материала был найден фрагмент РНК, который специфичен для вируса гепатита С. Следовательно, есть факт инфицирования пациента вирусом гепатита С. Если результатом качественного ПЦР является «обнаружено», то это свидетельствует о том, что вирус размножается и в это время инфицирует в организме новые клетки печени.
Результат «не обнаружено». Такой вердикт говорит о том, что в анализируемом образце полученного биологического материала в данной лаборатории не обнаружен фрагмент РНК, который специфичен для вируса гепатита С. Либо же концентрация РНК инфекции-возбудителя в данном образце была ниже границы чувствительности теста.

В острой фазе РНК вируса гепатита С такие качественные исследования по методике ПЦР могут выявить уже спустя 1–2 недели непосредственно после инфицирования организма, то есть задолго до появления антител к самому гепатиту.

Недостоверные результаты анализов такого исследования могут быть получены при:

загрязненном биоматериале;
присутствии в крови пациента гепарина;
наличии в образце химических или белковых субстанций (ингибиторов), которые влияют на различные компоненты ПЦР.

Для проведения качественного анализа ПЦР специальной подготовки пациента к исследованию не требуется. В качестве материала используется венозная кровь.

Оценка результатов

Качественные тесты ПЦР имеют определенную степень чувствительности, и в зависимости от точности проведения исследований и уровня аппаратуры в лаборатории могут варьироваться в пределах от 10 до 500 МЕ/мл.

Это обозначает, что если вирус в пробе крови присутствует в очень малой концентрации (меньше порогового значения чувствительности данной лаборатории), то у больного пациента может быть определен результат как «не обнаружено». Из-за этого при проведении качественного анализа ПЦР с низким уровнем виремии (малой концентрацией вируса), к примеру, для больных, проходящих лечение противовирусной терапией, очень важно знать и порог чувствительности данной диагностической системы.

Варианты диагностических систем

Для контролирования вирусологического ответа, при проведении противовирусного лечения рекомендуется использовать диагностические системы с порогом чувствительности не меньше 50 МЕ/мл. Этим критериям соответствуют, к примеру: анализаторы Cobas Ampicolor ВГС-Теst (c точностью 50 МЕ/мл), а также РеалБест РНК ВГС (с чувствительностью 15 МЕ/мл).

Согласно рекомендациям ВОЗ, для установления окончательного диагноза гепатит С, необходимо основываться лишь на основании трехкратного обнаружения РНК вируса С в пробах сыворотки крови у больного, при отсутствии других разновидностей маркеров гепатита.

Кроме методов ПЦР для выявления у пациентов РНК ВГС также применяют исследование ТМА (метод транскрипционной амплификации). Он обладает лучшим порогом чувствительности (5–10 МЕ/мл), но в нашей стране такой метод тестирования пока не очень распространен.

Диапазон выявляемых модификаций вирусов

Такое качественное определении в сыворотке крови наличия РНК вируса гепатита С позволяет определять несколько генотипов этого вируса. В настоящее время науке известно более шести генотипов этого вируса, а также около 10 субтипов данного заболевания.

В нашей стране распространены вирусы 1, 2, 3 генотипов. Лаборатории могут выявлять следующие генотипы: 1а и 1в, 2а, 2в и 2с, а также 3, 4, 5а и 6 независимо от субтипов. Для всех модификаций вирусов специфичность определения составляет 100%.

Количественный анализ ПЦР

При помощи количественного теста ПЦР определяется уровень концентрации вируса гепатита в пробах крови (вирусная нагрузка). Данный тест на виремию (концентрацию вируса) позволяет определить количество единиц определенного генетического материала (самой вирусной РНК), которую выявляют в определенном объеме. В данном случае определяют его концентрацию в 1 мл, что соответствует 1 куб. см.

Количественные параметры анализа выражаются в цифрах, для этого используют как единицы измерения международные единицы (МЕ) на миллилитр (мл), обозначающийся как МЕ/мл. Сейчас в некоторых лабораториях количество вируса может определяться и в других единицах измерения: количестве копий на мл, обозначается как копии/мл.

Сроки проведения.Для гепатита С такой количественный анализ ПЦР делают непосредственно перед началом проведения терапии. Затем на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Оценивание на 12-й неделе является показательным, оно позволяет определить эффективность проведения терапии.
Подготовка к анализу. Для проведения количественного анализа ПЦР специальной подготовки пациента к исследованию не требуется. За полчаса до взятия проб не следует курить. В качестве лабораторного материала используется венозная кровь.

Оценка результатов

Для разных лабораторных тест-систем существуют разные коэффициенты перевода этого показателя в МЕ/мл. В среднем берут параметр пересчета, при котором 4 копии/мл=1 МЕ/мл. То есть к примеру, если лаборатория выдает результат анализа ПЦР 2,4*106 копий/мл, то этот параметр нужно разделить на 4 и получим 6*105 МЕ/мл.

Высокой считается уровень нагрузки в 800000 МЕ/мл, это примерно соответствует показателю в 3000000 копий/мл. Низкая виремия, согласно данным некоторых авторов, соответствует параметрам количественного ПЦР ниже 400000 МЕ/мл.

В результате проведения количественного теста могут быть поставлены окончательные результаты не в виде цифрового значения, а: «ниже диапазона измерений», или же «не обнаружено».

Оценка: «ниже диапазона измерений». Это свидетельствует о том, что количественный тест не смог выявить вирусные РНК гепатита С, однако сам вирус в организме присутствует в очень малых концентрациях. Об этом говорит дополнительно проведенный качественный тест, подтверждающий сам факт присутствия вируса.
Оценка: «не обнаружено». Такой результат свидетельствует, что количественный тест не обнаружил в пробе РНК вируса.

Параметр вирусной нагрузки, прежде всего, определяет степень инфекционности болезни, уровень «заразности» больного. Чем выше у пациента показатель концентрации вируса, тем больше вероятность риска передачи его другим людям. К примеру, при половых контактах с больным человеком, либо вертикальным путем. Такой количественный показатель также помогает определить эффективность проведения лечения больного.

Проведение количественного анализа ПЦК важно для противовирусной терапии, оценивания ее успешности и планирования сроков продолжительности курса. Так, при быстром ответе организма на лечение и низкой степени виремии, срок терапии может быть и сокращен.

При медленном снижении параметра количественного ПЦР противовирусную терапию следует продлить либо модифицировать. Если уровень вирусной нагрузки низкий, то это благоприятный фактор проведения терапии, если же повышенный, то применяемый метод лечение неэффективен и следует менять препараты или методы их использования.

Source: veneradoc.ru