Качественный и количественный метод гепатит в
Многие знают, что гепатит — болезнь не только опасная, но и коварная, ведь диагностировать ее непросто. Иногда пациенту приходится пройти целый ряд исследований — от анализа крови на наличие антител до УЗИ печени. Заболевание диагностируется непосредственно по крови, а остальные исследования демонстрируют, в какой степени печень повреждена гепатитом.
Наиболее эффективный и современный метод — это метод ПЦР (полимеразная цепная реакция). Расшифровка количественного анализа на вирус гепатита С или В выявляет разновидность болезни и дает понимание, как вирус будет мутировать в организме человека.
ПЦР-анализ и его виды
Быстрый и точный ПЦР-анализ ищет возбудителя следующим образом: при исследовании существенно увеличивается часть ДНК вируса в образце крови. Взятую у человека кровь помещают в особые реактивы, и начинается клонирование клеток. Появление сотен ДНК позволяет обнаружить возбудителя еще на ранней стадии.
ПЦР-анализ бывает нескольких видов:
- Качественный анализ. Это исследование показывает, что в крови присутствуют гены-«вредители». Качественный анализ подтвердил опасения? Значит, следует провести количественное исследование, чтобы установить степень развития вируса. Результат обозначается простыми словами: «обнаружено» или «не обнаружено». В первом случае в организме пациента найдены РНК вируса, значит, человек уже болен. Во втором случае кровь чиста от гена вируса. Чтобы не оставалось сомнений, специалисты рекомендуют спустя 10 дней сдать повторный анализ.
- Количественный анализ. Такой вид исследования определяет, в каком количестве в крови присутствуют гены вируса, насколько тяжелая степень у заболевания. О результате говорят слова «положительно», «отрицательно» и «недействительный».
- Под словом «положительно» понимается инфекционная нагрузка. Такой метод диагностики нужен медикам, чтобы отслеживать, действует ли терапия. Время проведения анализа — 4, 12, 16 и 24 недели болезни. Показатель, не превышающий 8х10т МЕ/мл, свидетельствует об эффективности лечения.
- Результат «отрицательно» говорит, что ген инфекции отсутствует.
- «Недействительный» бывает тогда, когда ген вируса был обнаружен при качественном исследовании, но количественный анализ его не выявил. Такое случается при объеме инфекции ниже уровня.
Не все пациенты сдают количественный анализ (в этом его отличие от качественного). Если качественный подтверждает или опровергает присутствие «врага», то количественный подтверждает диагноз, помогает спрогнозировать развитие заболевания и определиться с терапией.
Количество РНК до начала лечения и во время терапии демонстрирует эффективность работы с пациентом. Кроме того, по числу РНК врачи понимают, какие дозы лекарств нужны больному.
Когда нужен количественный анализ
Если в крови были найдены антитела к гепатиту, то за качественным анализом следует количественный. «Пожертвовать» кровью больному придется несколько раз.
- Сначала — еще до того, как будет принято решение о курсе терапии, т.е. при первичной диагностике.
- Затем во время лечения — это необходимо, чтобы видеть клиническую картину результатов (как правило, на 1, 4, 12 и 24 неделях).
- Финальный анализ проводится после терапии — он показывает, возможен ли рецидив.
Врач, использующий количественный анализ как один из основных методов исследования, преследует несколько целей:
- Медик должен понимать, насколько глубоко вирус проник в организм, какое количество антигенов присутствует в теле больного.
- Доктор определяет, действует ли терапия.
- Врач подбирает метод лечения и составляет прогноз.
- Метод дополняет анализ крови, биопсию, эластометрию и т.п.
Существует несколько показаний к проведению количественного анализа:
- Надо определить вирусную нагрузку и взять под контроль антивирусную терапию.
- Результаты качественного ПЦР-анализа говорят о наличии антител гепатита С.
- Пациент страдает от острого или хронического гепатита С.
- У больного найден микст-гепатит.
- Необходимость четко спланировать терапию.
- После 12 недель лечения результаты качественного анализа все еще показывают присутствие вируса.
Подготовка к сдаче крови
Для исследования нужна кровь из вены. Есть ряд простых стандартных правил, которых должен придерживаться пациент:
- Лучше всего отправиться на анализ утром натощак, до этого в течение 8-12 часов воздерживаться от пищи.
- У человека не всегда есть возможность пройти исследование именно утром. В таком случае завтрак должен быть диетическим; после завтрака также следует «пост» (8-12 часов).
- За 1-2 дня до сдачи крови пациент должен отказаться от спиртного и жирной/жареной пищи.
- После обильного застолья приходить на анализ нельзя.
- Как минимум за час до сдачи крови человек не должен курить.
- Пациенту понадобится 10-15 минут спокойствия перед тем, как сдать биоматериал. Для чего нужна такая релаксация? Физическое и эмоциональное напряжение способно повлиять на результат, следовательно, человеку необходимо расслабиться.
- Лечащий врач должен знать, принимает ли пациент какие-то препараты. Если да, то после последнего приема надо выждать 10-14 дней. Возможно, доктор изменит условия.
- Если человек проходил физиотерапевтические процедуры, рентгенографию или ректальное исследование, то сдавать кровь придется через определенное время.
- Реагенты, оборудование, единицы измерения и, конечно, точность в разных лабораториях могут отличаться. Лучше сдавать первичный и повторные анализы в одном месте.
Когда будут известны результаты? Зависит от конкретной лаборатории и занятости ее сотрудников. Уже через 4-5 часов можно подвести итоги и уже на следующий день получить заключение.
Расшифровка результатов
Иногда о результатах говорят не цифры, а слова — «не обнаружено» или «ниже диапазона измерений».
- «Не обнаружено» означает, что вирус не найден.
- Слова «ниже диапазона изменений» говорят о том, что инфекция присутствует в небольшом количестве. В таком случае нужен количественный анализ, который «чувствительнее» качественного.
Медики ориентируются на вирусную нагрузку. Специалисты должны выяснить, сколько вирусных РНК содержится в 1 мл крови.
Принято пользоваться формулой МЕ/мл, но в некоторых лабораториях число измеряется в копиях/мл. Коэффициенты перевода варьируются от 1 до 5, важно, какой метод используется при определении количества.
Разные тест-системы предлагают свои варианты перевода компонентов в международные значения. Разработана таблица расшифровки количественного анализа на гепатит С, и вы можете ознакомиться с ее данными. Нормам ПЦР соответствуют определенные значения вирусной нагрузки:
Не обнаружено | Это значит, что все в норме, вирус не найден, человек здоров. |
До 1.8*102 МЕ/мл (7,5*102 копий/мл) | Такая концентрация вируса не превышает линию границы. |
До 8*105 МЕ/мл (2*106 копий/мл) | Вирусная нагрузка низкая. Терапия оказывает хорошее действие, прогноз благоприятен. |
Больше 8*105 МЕ/мл (2*106 копий/мл) | Вирусная нагрузка большая. |
Больше 2,4*107 МЕ/мл (1*108 копий/мл) | Концентрация вируса превышает линейный диапазон. |
Если здоровый человек сдает количественный анализ на гепатит С, то его норма — результат «не обнаружено». Для тех, кому не повезло заболеть, нормы другие. Количество вируса в их организме должно снижаться, о чем говорит убывание нулей в результате анализа: с 1*106 МЕ/мл до 1*105 МЕ/мл и т.д. При использовании амплификатора концентрация вируса не должна покидать границы от 1,8*102 до 2,4*107 МЕ/мл.
Когда можно утверждать, что лечение производит нужный эффект? В том случае, если при повторном исследовании нагрузка меньше 8*105 МЕ/мл.
Какова вероятность раннего вирусологического ответа? Примерно 85%. В таком случае на третий день терапии снижается количество вирусных РНК.
При показателе, превышающем 8*105 МЕ/мл, необходимо поменять тактику лечения. Зависимость простая: чем выше уровень, тем печальнее прогноз.
Что касается гепатита В, то за норму приняты такие значения вирусной нагрузки:
Меньше 103 | Вирусная нагрузка низкая, вирус пассивен. |
От 104 до 105 | Вирусная нагрузка низкая, как правило, вирус пассивен. |
От 106 | Вирусная нагрузка умеренная. Вирус проявляет активность. |
От 107 | Вирусная нагрузка высокая. Вирус очень активен. |
Узнав количество вируса, медики получают возможность определить форму болезни — острую, хроническую или носительство. Эта информация помогает понять, надо ли проводить дополнительные исследования. Результаты рассказывают, как вирус и пораженный им организм реагируют на терапию:
- Превышающее норму значение трансаминазы говорит о хроническом гепатите В, как и активность вируса больше 4 наравне с количеством ДНК-копий 105/мл.
- Стандартный уровень трансаминазы и концентрация ниже 105/мл — это носительство.
- При гепатите В нужно все время отслеживать устойчивость, каждые 3 месяца отправляясь на анализы. Внезапно увеличившаяся в 10 раз вирусная нагрузка — свидетельство того, что коварный вирус стал устойчив к лекарствам.
- Если через 3 дня лечения нагрузка снизилась на 85%, то ход терапии можно назвать благоприятным.
- Иногда показатель АЛТ превышает норму (не чаще 2 раз за полгода), а вирусная нагрузка становится выше 105/мл. В таком случае нужна биопсия печени. Если же уровень АЛТ повышается чаще 2 раз за 6 месяцев, а вирус очень активен, то немедленно назначается антивирусная терапия.
И доктору, и пациенту хочется знать, как вирус поведет себя, переходя из острой формы в хроническую. Прогноз таков:
Количество ДНК гепатита В меньше 2*104 копий/мл | Острый гепатит не превратится в хронический. |
Количество ДНК варьируется от 2*104 копий/мл до 2*106 копий/мл | 25-30% хронизации. Каждый четвертый пациент останется с хроническим гепатитом В. |
Количество ДНК превышает 2*106 копий/мл | К сожалению, хронической формы не избежать. |
Результаты, выходящие за пределы нормы, — это тревожный сигнал: вирус размножается, и болезнь готова вернуться.
Преимущества методики
У ПЦР-анализа масса плюсов:
- Точность метода позволяет быстро определиться с диагнозом и начать лечение.
- Скорость. Нет необходимости разграничивать и выращивать разные виды возбудителя. Четко налаженный процесс позволяет оперативно получить результат всего за 4-5 часов.
- Возбудитель определяется прямым путем. Найдена «та самая» часть ДНК? Значит, диагноз ясен. Например, обнаруживающий белки-маркеры ИФА находит лишь продукты жизнедеятельности бактерий, но не дает полной гарантии.
- Специфичность исследования. Возможна реакция на ложные совместно-реагирующие агенты, но в данном случае исследуется только то вещество, которое характерно именно для конкретного возбудителя.
- Даже самое незначительное количество вируса будет обнаружено, значит, восприимчивость — еще один плюс.
- Универсальность метода. Способность найти фрагменты ДНК или РНК конкретных организмов позволяет работать при беспомощности других методов и использовать один материал для диагностики.
- ПЦР-анализ обнаруживает и явные, и скрытые инфекции, изучая даже стойкие и не выращиваемые агенты.
Ошибочные случаи
Медицина — это не математика, иногда расшифровка количественного анализа на гепатит С или В оказывается ошибочной.
Важно сдавать ПЦР-анализ в клинике, заработавшей себе хорошую репутацию и отзывы. ПЦР находит вирус с точностью до 100%, но иногда показатели падают до 95%. Причина тому — некачественные реактивы, устаревшее оборудование и т.д.
Если за дело берутся профессионалы, работающие в авторитетном медицинском учреждении, то можно не беспокоиться, вероятность ошибки практически нулевая.
Автор статьи врач-инфекционист, гепатолог
© 2019. Все права защищены.
Источник
Гепатит В – инфекционное заболевание печени, протекающее по аутоиммунному механизму. Вирус, попадая в кровь, размножается в гепатоцитах, вызывает их гибель. В затяжной хронической форме гепатит В вызывает рак и цирроз. По симптоматике заболевание схоже с простудой, выявить его на ранней стадии сложно. После контакта с больным или посещении стран с высокой заболеваемостью, угрозе потенциального заражения проводятся исследования крови. Анализ ПЦР на гепатит B с высокой точностью определяет присутствие вируса, степень активности возбудителя.
Качественная оценка выявляет возбудителя, количественная помогает установить степень вирусной нагрузки. Повторное исследование помогает увидеть клиническую картину течения заболевания в динамике.
Вы знаете как расшифровывается ПЦР?
ДаНет
Что такое ПЦР на гепатит В?
Метод полимеразной реакции (ПЦР) разработан лауреатом нобелевской премии Мюллисом. Он основан на принципе копирования структуры возбудителя. Определяет в крови ДНК вирус HBV и его концентрацию. В период заболеваемости в сыворотке присутствует белковый антиген – часть оболочки возбудителя. Именно его распознает и атакует иммунная система организма.
По концентрации антигенов и антител в сыворотке крови можно судить о степени активности возбудителя.
ПЦР дает оценку HBV на момент взятия проб. В процессе молекулярного исследования сначала расщепляется цепочка ДНК, для этого в амплификаторе сначала повышается температура, затем резко снижается. Маркеры в нужной последовательности присоединяются к ДНК – создаются копии исследуемого материала, по ним определяют концентрацию возбудителя в расчете на 1 мл.
Показания к исследованию
Качественный анализ ПЦР выявляет возбудителя. По результатам судят о стадии гепатита.
Исследования проходят:
- реципиенты донорской крови;
- больные с почечной недостаточностью, находящиеся на гемодиализе;
- инфицированные ВИЧ;
- беременные женщины;
- медицинские работники инфекционных отделений;
- лаборанты, исследующие кровь;
- больные с печеночными патологиями;
- все потенциально зараженные;
- люди, побывавшие в странах с высоким уровнем заболеваемости.
Количественный ПЦР проводится:
- если ранее был выявлен возбудитель HBV, проводится лечение;
- после положительных проб ИФА (иммуноферментного анализа);
- при печеночных заболеваниях, причиной которых бывает вирус гепатита В.
Для исследования берется венозная кровь, делается это на голодный желудок. Точность оценки зависит от правильности подготовки пациента перед исследованиями.
Виды ПЦР
Количественный и качественный методы диагностики гепатита В по сути не различаются. Они основаны на свойствах ДНК-вируса, его способности синтезировать особые белки, которых нет в организме человека. Метод полимеразной реакции с высокой долей вероятности выявляет возбудитель, имеющий сложную структуру.
В зависимости от концентрации HBsAg, HBeAg судят о стадии развития заболевания, правильности лечения. При остром гепатите они присутствуют в крови одновременно, при наличии HBeAg больной является вирусоносителем, способен заражать других. Методику ПЦР определяет врач на основании анамнеза пациента.
Количественный ПЦР на гепатит В
Показатель ПЦР количественный при гепатите B характеризует:
- интенсивность деления вируса в клетках печени;
- способность организма противостоять инфекции;
- правильность выбора противовирусных средств.
В ходе болезни неоднократно проводится анализ полимеразной цепной реакции, количество вирусов в крови постоянно меняется. После инкубационного периода возрастает уровень HBsAg. Затем появляется HBeAg – антиген, находящийся в ядре возбудителя. Когда этот антиген исчезает, вместо него появляются антитела. Это говорит о борьбе организма с возбудителем. Метод определяет вирусную нагрузку на иммунную систему.
По количественному показателю ПЦР выявляется опасность хронической формы заболевания. Установлена норма трансаминазы, при которой вирус неактивен для окружающих. Больным, состоящим на учете, исследования проводятся каждые три месяца. По вирусной нагрузке определяют степень тяжести болезни. Если она превышает допустимую в два раза, больному назначают дополнительное обследование, меняют тактику лечения.
Качественный ПЦР
Метод полимеразной реакции самый надежный для выявления возбудителя. Качественный ПЦР анализ на гепатит В с высокой точностью устанавливает факт заражения вирусом HBV. Он подтверждает или опровергает предварительный диагноз.
В 50% ДНК вирус выявляется на стадии, пока организмом не вырабатываются антитела. Иммунная система не сразу распознает чужеродные белки, они выявляются, когда размножившийся вирус покидает гепатоциты.
Уничтожая HBsAg и HBeAg, организм попутно разрушает гепатоциты. Это приводит к серьезным осложнениям. Когда HBV присутствует в крови более двух месяцев, гепатит В переходит в хроническую форму. В течение первых двух недель с вирусом бороться легче.
Расшифровка результатов ПЦР на гепатит В
Человек здоров, если возбудитель не присутствует в крови, или концентрация HBsAg ничтожна, а HBеAg отсутствует полностью. Результат в этом случае отрицательный. Только в единичных случаях при отрицательном результате выявляется заболевание, это говорит о быстром течении болезни или злокачественным ее характере. Антитела, вырабатываемые иммунной системой, нейтрализуют ДНК-вирус. Но в этом случае возможно обширное поражение печени.
Если результат HBsAg выше нормативных показателей и есть HBеAg, то дополнительно проводится количественный анализ на гепатит В, чтобы узнать, насколько активизировался возбудитель.
Что делать если при ПЦР подтвердили гепатит В?
Важно обезопасить близких:
- отдельно держать предметы личной гигиены, способные повреждать кожу и слизистые (зубную щетку, бритву, маникюрные принадлежности);
- пользоваться индивидуальным полотенцем;
- изолировать раны.
Полезно придерживаться диеты, отказаться от вредных привычек. При соблюдении всех назначений врача от вируса избавляются навсегда.
( 1 оценка, среднее 5 из 5 )
Источник
ПЦР (Полимеразная цепная реакция) – это способ диагностики ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Впервые был введен американцем Кэри Муллисом порядка 50 лет назад.
ПЦР анализ отличается высокой чувствительностью, поскольку предоставляет возможность обнаружить возбудителя гепатита всего по одной молекуле, выявленной в биологической жидкости или коже.
Что такое ПЦР диагностика при гепатите
Сущность диагностики состоит в том, что частицу вируса принуждают размножаться in vitro (в пробирке) путем создания определенных условий и с применением специальных ферментативных веществ. ПЦР позволяет провести генотипирование возбудителя гепатита С. Это обеспечивает эффективность терапии, поскольку различные штаммы вируса неодинаково реагируют на противовирусные лекарственные средства.
Существует 2 вида ПЦР анализов на гепатит:
- качественный;
- количественный.
Проводимое лечение противовирусными препаратами следует систематически контролировать, так как иногда возникает необходимость корректировки терапии. С этой целью выполняют ПЦР диагностику.
Качественное и количественное исследование
- В первом случае выявляют в крови больного возбудителя и устанавливают его генотип. Генотипирование нужно для правильной диагностики, прогноза болезни и выбора тактики лечения.
- Если вирус гепатита С методом ПЦР в крови обнаружен, проводится количественное исследование. Последнее помогает высчитать количество молекул РНК возбудителя, находящихся в биологической жидкости пациента.
Подготовка к ПЦР диагностике гепатита
Для осуществления процедуры берут кровь из вены. Это лучше выполнять утром натощак.
Больному необходимо правильно подготовиться к ПЦР анализу на гепатит С:
- За 10 часов до манипуляции исключить прием пищи, допускается употреблять чистую воду.
- За день до процедуры исключить прием алкогольных напитков, за 4 часа до анализа не курить.
- Перед исследованием не подвергаться физическим нагрузкам и эмоциональным потрясениям.
- За 2 дня до взятия крови для проведения ПЦР на гепатит С перестать принимать лекарственные препараты. Если данное условие не выполняется, следует поставить в известность лаборанта, поскольку употребление некоторых лекарств приводит к ошибочно положительному результату исследования.
ПЦР на гепатит С
Положительный ПЦР анализ на гепатит С свидетельствует о неустанном размножении возбудителя и повреждении гепатоцитов.
Последующую количественную ПЦР диагностику гепатита С измеряют в МЕ/мл, или в копиях/мл. Это значит, какое количество копий РНК возбудителя гепатита С определенного генотипа выявлено в 1 мл крови.
Уровнем вирусной нагрузки определяется содержание РНК возбудителя в биологической жидкости пациента. У здорового человека результат ПЦР на гепатит С – отрицательный. Это говорит о том, что в крови исследуемого возбудитель выявлен не был.
Ниже в таблице представлена расшифровка количественного исследования на гепатит С методом ПЦР:
Вирусная нагрузка (содержание вируса в копиях/мл) | Оценка нагрузки | Характер репликации возбудителя |
103 и меньше | Крайне низкая | Неактивная |
104 — 105 | Низкая | Как правило, неактивная |
106 | Средняя | Активная |
107 | Высокая | Очень активная |
- Низкая вирусная нагрузка свидетельствует о том, что лечение выбрано правильно, и исход болезни – благоприятный.
- Большая концентрация возбудителя говорит об остром заболевании. Пациент заразен для окружающих.
- Средние показатели вирусной нагрузки — свидетельство хронического гепатита. Они могут изменяться в сторону и увеличения, и уменьшения.
Количественное исследование методом ПЦР больному с гепатитом С выполняют на протяжении всего противовирусного лечения: через 1 месяц, 3 и 6 месяцев.
По окончании терапии назначают контрольную ПЦР диагностику.
ПЦР на гепатит B
ПЦР на гепатит B выполняют с целью выявления ДНК возбудителя.
Содержание ДНК определяют в копиях/мл или МЕ/мл. Результат исследования оценивают следующим образом:
- < 2х10, говорит о том, что острая стадия не перейдет в хроническую;
- от 2х104 до 2х106 – в 30% случаев имеет место хронизация процесса;
- >2х106 – в 95% случаев процесс будет хроническим.
Количественная ПЦР диагностика – основной способ определения обострения заболевания, обнаружения латентного носительства инфекции.
Расшифровка ПЦР диагностики
Качественное исследование может быть:
- положительным;
- отрицательным.
Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии вируса гепатита в крови.
Положительный анализ говорит о выявлении РНК возбудителя определенного штамма.
Достоверность ПЦР анализа на гепатит составляет 95%. 5% —ошибка из-за халатности персонала. Такое случается вследствие повышенных требований к выполнению анализа:
- соблюдение определенных условий хранения реактивов;
- высокая квалификация медицинских работников;
- чистота взятого материала.
Сам анализ характеризуется 100% диагностической точностью.
Количественное ПЦР исследование на гепатит дает возможность оценить вирусную нагрузку на организм. Анализ позволяет:
- уточнить стадию болезни;
- узнать эффективность противовирусной терапии;
- определить необходимость проведения биопсии печени.
Иногда пациент не ощущает себя заболевшим, а ПЦР анализ выявляет инфицирование. Это говорит о ранней стадии болезни или хронической форме. Для точной диагностики следует провести дополнительные исследования и начать адекватную противовирусную терапию.
Государственные учреждения выполняют анализ на бесплатной основе. Достаточно направления от врача-инфекциониста или гепатолога.
Платно исследование делают во всех больших городах нашей страны. Цену определяют тип исследования, имеющееся оборудование, время, затраченное на анализ.
- Качественная ПЦР диагностика в Москве и Санкт-Петербурге будет стоить 600-900 руб. В области –300-800 руб.
- Количественный ПЦР анализ на гепатит С обойдется в 17000-22000 руб., на гепатит В — 1200-10000 руб.
Преимущества и недостатки исследования
Основными достоинствами ПЦР диагностики становятся:
- Широкий диапазон использования. Применяя стандартное оборудование, можно выявить любой вирус.
- Точность обнаружения вируса. Используя разные сочетания ферментов и технику выполнения анализа, получают 100% спецификацию анализа для нужного возбудителя.
- Высокая чувствительность. Данным методом обнаруживается в крови даже одна молекула возбудителя.
- Быстрота. На качественный анализ уходит несколько часов, количественный готов через пару суток.
- Определение возбудителя в инкубационном периоде. ПЦР выявляет вирус гепатита С не по наличию иммуноглобулинов, когда уже сформировался иммунный ответ, а до развития патологической реакции, что облегчает терапию.
Недостатки ПЦР диагностики становятся следствием ее преимуществ:
- необходима высокая степень чистоты, в том числе, лабораторного воздуха, чтобы другие РНК не проникли в образец;
- повышенные требования к медицинскому персоналу.
Результаты оценивает специалист, способный отличить подлинный анализ от ошибочно положительного (когда терапия завершена, а в крови остался нежизнеспособный возбудитель). Встречаются ложноотрицательные анализы (при клинической картине возбудителя не находят).
Автор статьи врач-инфекционист, гепатолог
© 2019. Все права защищены.
Источник: MyPechen.com
Читайте также
Вид:
Источник