Лабораторная диагностика гепатита а пцр

Гепатит А считается врачами относительно мягкой формой инфекционного процесса из-за редких случаев хронизации заболевания, но в последнее время этот недуг приобретает более широкое распространение. Вирусный гепатит А является наиболее распространенной формой гепатита. Микробиологические исследования доказали, что передается от человека к человеку инфекция  парентальным путем, с пищей и питьем.

В некоторых случаях может иметь место молниеносный гепатит, такая разновидность патологического процесса способна закончиться смертельным исходом. По этой причине пускать развитие недуга на самотек нельзя.

Развитие болезни происходит в три этапа:

  • преджелтушная;
  • разгара болезни — желтушная;
  • реконвалесценции – выздоровления.

Сразу после инфицирования начинается инкубационный период, в течение которого, изменения не выявляются, этот период характеризуется накоплением вирусных частиц в организме.

Патогенез гепатита А сопровождается формированием в организме больного различных синдромов, представляющих собой комплексы симптомов, свидетельствующих о возникновении различных нарушений провоцируемых интоксикацией.

Проведение первичной диагностики

Диагностика гепатита А предполагает использование нескольких диагностических методов. При появлении подозрений на наличие указанной инфекции больной в первую очередь должен обратиться к врачу-инфекционисту для проведения экспресс-теста.

Осуществление первичного обследования у врача

Для диагностирования наличия заболевания инфекционисту достаточно провести беседу с пациентом, в процессе которой выясняются особенности способа жизни человека. После проведения беседы врач осуществляет осмотр больного, обследует печень методом пальпации и ставит первичный диагноз.

Так как большинство симптомов у различных типов вирусных инфекций сходны между собой, поэтому требуется лабораторная диагностика гепатитов.

После первичного осмотра и обследования врач дает направление на анализы.

Проведение лабораторной диагностики гепатита А во многом сходно с лабораторной диагностикой гепатита С.

При проведении первичной диагностики вирусного гепатита А показательной будет следующая информация:

  1. Посещал ли пациент в последнее время страны Азии и Африки, где недостаточно развита работа коммунальных служб. Это связано с тем, что передача инфекции осуществляется пищевым и водным путем.
  2. Соблюдает ли человек элементарные гигиенические правила.
  3. Важной является информация о том, контактировал ли пациент с больными гепатитом А.

На основании полученной информации врач может сделать предварительное заключение и проводить дальнейшую диагностику заболевания. Одновременно с проведением осмотра врач выясняет, как осуществляет функционирование пищеварительная система пациента, присутствуют ли признаки мышечной интоксикации. При проведении процедуры пальпирования доктор определяет размеры печени.

Очень часто течение заболевания происходит в безжелтушной форме, но опытный врач проводит осмотр склер глаз, появление даже небольшой желтушности говорит о возможном факте инфицирования организма.

Применение экспресс-теста в диагностике

В качестве первичного метода диагностики на наличие у пациента вирусной инфекции можно использовать экспресс-тест на определение антигена вируса гепатита А в составе кала или крови.

Фармацевтическая промышленность предлагает использовать два вида тестовых наборов – тест компании Vegal и иммуноферментные тест-системы Vintrotest Vitrotest HAV-IgM TK069.

Первая разновидность экспресс-тестов включает в своем составе весь комплект необходимых реактивов и инструментов. Для проведения исследования требуется не более 15 минут. Этот способ не дает 100% точности.

Иммуноферментные тест-системы Vintrotest Vitrotest HAV-IgM TK069 позволяют достаточно быстро определить присутствие антител IgM к вирусным частицам. Это исследование позволяет получить результат в домашних условиях уже через 15 минут.

Использование результатов гемотестов, несмотря на большое количество положительных отзывов о них, не могут использоваться в качестве единственного способа проведения диагностики.

После использования такого метода рекомендуется  провести дополнительные лабораторные исследования. Помимо этого, в связи с тем, что появляющиеся симптомы могут свидетельствовать о наличии в организме не только гепатита, а также, например, у взрослых людей алкогольного гепатоза и некоторых других заболеваний печени. По этой причине требуется проведение дифференциальной диагностики. Дополнительно нужно установить какая разновидность вируса поразила организм и спровоцировала появление болезни.

Анализы при диагностике гепатита А

Проведение диагностических мероприятий при подозрении на наличие патологии требует проведения целого комплекса исследований.

При диагностировании недуга применяются лабораторные и инструментальные методы проведения исследований.

Использование клинических способов диагностирования патологии

Показательные данные позволяет получить биохимический анализ крови и мочи.

В том случае, если выявлены повышенный билирубин, а также увеличенная концентрация печеночных ферментов, то это означает, что развивающийся в организме гепатит уже привел к нарушению работы клеток печеночной паренхимы.

Проведение детальной расшифровки анализа крови и мочи позволяет определить в некоторых случаях степень повреждения печени и организма в целом.

Наиболее показательными лабораторными методами диагностики гепатита А являются:

  • анализ мочи;
  • общий анализ крови;
  • биохимия крови;
  • коагулограмма.
Читайте также:  Какие анализы на маркеры сдают при гепатите с

Лучше всего сдавать анализы натощак, это позволит получить наиболее точные результаты.

Присутствие вируса в организме можно увидеть по анализу мочи, при появлении в ней билирубина, она начинает светлеть. У здорового человека в моче оно не выявляется, при наличии гепатита А наблюдается повышение концентрации в составе мочи уробилиногена. При тяжелом течении патологии в моче выявляется наличие низкомолекулярных плазменных белков, которые не должны выявляться в моче здорового человека.

При общем анализе крови при гепатите А наблюдается снижение концентрации гемоглобина и лейкоцитов. Помимо этого фиксируется снижение концентрации тромбоцитов. Эти изменения свидетельствуют о наличии аномальных процессов в печени.

Биохимия крови позволяет выявить отклонения в концентрации печеночных ферментов. Такие отклонения свидетельствуют о патологических нарушениях в функционировании печени и разрушении гепатоцитов.

После проведения первичного осмотра и лабораторных анализов можно поставить диагноз, но для качественной диагностики требуется проведение дополнительных тестов и исследований.

Использование лабораторных методов

После ряда анализов врач-инфекционист направляет больного для количественных и качественных обследований гепатита А.

Существует ряд методик, позволяющих определить количество вируса в организме и степень его агрессивности.

Наиболее распространенными методами проведения такой диагностики являются:

  1. Иммуноферментная диагностика.
  2. Ультразвуковое исследование.
  3. Полимеразная цепная реакция.

Наиболее точной и специфической диагностикой является выявление РНК вируса в крови при помощи ПЦР.

Применение иммуноферментного обследования

Для точного определения наличия антител к вирусу необходимо проверить кровь на маркеры. Специфическими маркерами являются иммуноглобулины класса М анти-HAV IgM. Наличие этого компонента можно установить с первых дней после проникновения патогена в организм при помощи методики ИФА.

Иммуноглобулины появляются в организме больного в первые месяцы развития патологии. Выработка антител у больного происходит в независимости от тяжести, формы и симптомов болезни. Эти антитела носят название ранних, это связано с тем, что спустя полгода после инфицирования их уже невозможно выявить методом ИФА в организме. Спустя 6 месяцев наблюдается их возврат в крови пациента, после возвращения анти тела способны сохраняться в составе крови на протяжении всей жизни.

Наличие указанных антител к вирусу является доказательством того, что человек инфицировался гепатитом А и у него выработался иммунитет к этому патогену. Аналогичные антитела появляются у человека, если ему делалась прививка против вируса в качестве профилактики развития патологии.

Для определения наличия маркеров требуется сдать кровь для проведения лабораторных тестов. Сотрудники клинической лаборатории в процессе проведения тестов имеют возможность выявить не только само наличие антител, но и их количество в организме пациента.

Эта методика определения патологии относится к высокоточным лабораторным методам, требующим наличие специального оборудования и реактивов.

Проведение ультразвукового исследования

Применение ультразвукового исследования позволяет выявить наличие нарушений вызванных инфекционным процессом в структуре и форме печени. Такие нарушения являются частым спутником при развитии у человека гепатита А.

В процессе исследования выявляется наличие пятен на органе что говорит о повышении эхогенности, наличие уплотнений может свидетельствовать о развитии в печени цирроза.

УЗИ может помочь диагностировать присутствие в железе любых серьезных изменений на самых ранних стадиях их прогрессирования. Так, например, при помощи ультразвука выявляются нарушения, возникающие в результате развития холестаза и цитолиза гепатоцитов.

УЗИ может быть назначено человеку для подтверждения наличия вирусной инфекции даже в случае наличия у него на руках результатов ИФА, это требуется для того чтобы определить полную картину развивающихся патологических изменений в тканях железы.

Для получения максимально точной картины нарушений УЗИ рекомендуется проводить натощак, а за два дня до процедуры исключить из рациона питания такие продукты как:

  • горох;
  • фасоль;
  • свежие фрукты;
  • молоко;
  • капусту;
  • соки.

Исключение указанных компонентов из рациона связано с тем, что они усиливают процессы газообразования, а это в свою очередь приводит к неточностям при проведении ультразвукового обследования.

Осуществление обследования ПЦР

Метод ПЦР дает возможность определить уровень нуклеиновых кислот и присутствие чужеродной ДНК или РНК.

Использование ПЦР позволяет выявить генетический материал патогена еще на самой начальной стадии, когда в составе крови отсутствуют антитела. Эта методика диагностики является наиболее многогранной и точной, что позволяет проводить наиболее раннюю диагностику заболевания.

Использование этого метода оправдано в тех случаях, когда требуется получение наиболее точного результата в максимально короткие сроки для предотвращения распространения инфекционного процесса.

Недостатком методики является высокая стоимость инструментов необходимых в процессе анализа, а также его недоступность в целом ряде стран с высокой степенью распространения вирусной инфекции.

Читайте также:  Сдать анализ на гепатит с качественный

Методика ПЦР дает возможность определить чувствительность вируса к определенным противовирусным препаратам и определяет точное расположение очагов заболевания – мест наибольшего скопления частиц патогена. Наличие у лечащего врача такой информации позволяет подобрать наиболее оптимальный вариант проведения терапевтических мероприятий.

Специфичность методики составляет около 98%. Наличие у ПЦР высокой степени чувствительности позволяет его использовать, как наиболее показательный при проведении диагностики гепатита А.

Источник

Что такое гепатит?

Гепатиты – это общее название воспалительных заболеваний печени. Причины возникновения гепатитов различны. Воспалительный процесс может возникнуть вследствие интоксикации (алкогольной или лекарственной), быть проявлением аутоиммунной патологии, лучевой болезни.

Проявления гепатитов обусловлены разрушением печеночных клеток и нарушением функции печени. Симптомы заболеваний и жалобы пациентов при всех гепатитах очень схожи. Установить причину гепатита и оценить нарушения функции печени помогают лабораторные методы исследований.

По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) наиболее частыми являются инфекционные (в подавляющем большинстве случаев, вирусные) гепатиты. Способностью поражать печень обладают многие вирусы. Например, при инфекционном мононуклеозе, вызываемом вирусом Эпштейна-Барр, печень может быть вовлечена в воспалительный процесс.

Второе врачебное мнение

Эксперты из ведущих российских и зарубежных медицинских
учреждений дадут свое заключение по результатам анализов 
и обследований, прокомментируют поставленный ранее диагноз
и назначенное лечение.

Узнать больше

Специфические вирусы гепатита (А, В, С, D, Е, ТТ) – это совершенно разные микроорганизмы, объединенные общим названием и способностью избирательно поражать печеночные клетки. Алгоритмы лабораторной диагностики вирусных гепатитов очень схожи. В основном применяются иммунологические (серологические) и ПЦР-методы.

Вирусный гепатит А

Вирусный гепатит А (болезнь Боткина) – болезнь «грязных рук». Заражение происходит фекально-оральным путем, при употреблении в пищу загрязненных продуктов питания (овощей, фруктов), воды через предметы обихода при близком бытовом контакте. Во многих случаях заболевание протекает в легкой форме, иногда вообще не имеет каких-либо клинических проявлений. После перенесенного заболевания формируется стойкий (часто пожизненный) иммунитет. Разработана вакцина против вируса гепатита А, но в национальный календарь иммунизации прививка против него не включена и проводится только по эпидемиологическим показаниям.

Реакция системы иммунитета, характеризующаяся синтезом специфических антител, подчиняется законам, общим для всех инфекционных заболеваний.

Первыми вырабатываются антитела класса «М-Ig M(иммуноглобулины класса М), которые могут быть обнаружены в сыворотке крови еще в инкубационном периоде, до появления первых симптомов заболевания. 

Ig M — маркёр острой инфекции. С течением времени антитела этого класса постепенно исчезают из сыворотки крови. 

Ig G (иммуноглобулины G) вырабатываются позднее. Наличие Ig G – лабораторный признак текущего или ранее перенесенного вирусного гепатита А. Они способны длительно циркулировать в русле крови, обеспечивая иммунитет против повторного инфицирования. Этот же класс антител является признаком успешной вакцинации против гепатита А.

Прямые методы диагностики (без опосредованного определения реакции иммунной системы) – ПЦР метод обнаружения генетического материала вируса в крови. В настоящее время полимеразная цепная реакция (ПЦР) является наиболее точным и чувствительным методом диагностики вирусных гепатитов. Обнаружение фрагментов нуклеиновых кислот (РНК) вируса гепатита А свидетельствует о процессе активного размножения вируса в клетках печени и соответствует острой фазе заболевания.

Для эпидемиологического обследования лиц, находившихся в контакте с инфицированным пациентом, может быть предложен метод экспресс-определения антигенов вируса А в кале.

Метод иммунохроматографии позволяет выявить присутствие специфических вирусных белков, наличие которых определяется по появлению цветной индикаторной полосы. Исследование высокочувствительное, быстрое и неинвазивное (без повреждения кожных покровов). Результат анализа, тем не менее, должен быть правильно интерпретирован. Вирус гепатита А массивно выделяется с калом только в инкубационном (скрытом) периоде, при появлении первых неспецифичных симптомов заболевания (в преджелтушном периоде) и в самые первые дни желтухи. В период разгара заболевания вирус гепатита А в кале не определяется, поэтому исследование становится неинформативным.

Вирусный гепатит В

Вирусный гепатит В имеет парентеральный путь передачи (через поврежденные слизистые и кожу, при контакте с кровью). Чаще всего гепатит В передается при половых контактах. Значима передача вируса через кровь при внутривенных инъекциях в среде наркозависимых, при повреждениях кожи (пирсинг, татуаж), переливании крови и компонентов крови. Возможно инфицирование плода во время беременности и родах, ребенка при грудном вскармливании от заболевшей матери.

Интерпретация лабораторных данных при диагностике вирусного гепатита В представляет определенные сложности. Прежде всего, необходимо внести ясность в терминологию. Антиген – это структурная молекула, часть вируса, способная вызвать реакцию иммунной системы. Антитела, иммуноглобулины – это специфические белки, синтезируемые системой иммунитета инфицированного человека в ответ на присутствие вируса.

Читайте также:  Прививка от гепатита грудничку реакция

HBsAg (поверхностный, австралийский антиген) – основной маркёр вирусного гепатита В, используется, в том числе, и для проведения массовых, скрининговых исследований. Выявляется в сыворотке крови в течение последних одной-двух недель инкубационного периода (до появления первых признаков заболевания!) Диагноз не может быть выставлен только на основании обнаружения HBsAg; при обнаружении поверхностного антигена обязательно должны быть выполнены подтверждающие тесты. У большинства пациентов HBsAg исчезает в течение 3 месяцев после выздоровления.

Anti-HBsAg – антитела к поверхностному антигену «s» (HBsAg). При заболевании обнаруживаются в сыворотке крови через 1-3 месяца после исчезновения HBsAg. Чаще всего этот маркёр используется для оценки успешности вакцинации против вируса гепатита В.

Anti-HBсAg – антитела к внутреннему (сердцевинному) антигену вируса гепатита В (HBсAg).

Первыми в остром периоде заболевания, еще до желтухи, появляются иммуноглобулины класса «М» — Anti-HBсAg Ig M. Они циркулируют в крови несколько месяцев, через 3-5 месяцев количество Ig M падает. Обнаружение аnti-HBсAg Ig M является наиболее важным подтверждением наличия у пациента острого вирусного гепатита В.

Иммуноглобулины класса «G» (Anti-HBсAg Ig G) к сердцевинному антигену вируса гепатита В появляются еще в остром периоде и определяются в высоком титре от нескольких месяцев до года. Обнаружение антител этого класса не дает возможности различить острую, хроническую или перенесенную в прошлом инфекцию.

HBеAg – маркёр активного размножения вируса гепатита В. Может быть обнаружен в сыворотке крови практически одновременно с поверхностным (HBsAg) антигеном. Наличие HBеAg свидетельствует о высокой инфекционности (заразности) крови.

Anti-HBеAg – антитела к антигену «е» вируса гепатита В. Определение в сыворотке крови аnti-HBеAg чаще всего указывает на прекращение размножения вируса.

При классическом варианте острого вирусного гепатита В, в конце инкубационного периода, в преджелтушном и в начале желтушного периода в сыворотке крови определяются HBsAg, HBеAg и аnti-HBсAg IgM. Несколько позднее появляются аnti-HBеAg и аnti-HBсAg IgG. После выздоровления о перенесенном заболевании свидетельствуют аnti-HBsAg, аnti-HBеAg и аnti-HBсAg IgG.

Важную диагностическую информацию предоставляют результаты исследования крови в полимеразной цепной реакции. Обнаружение ДНК вируса гепатита В в крови свидетельствует об активном размножении вируса. ПЦР-исследования могут быть выполнены в формате «качественно» и «количественно». Аналитическая чувствительность ПЦР «качественно» значительно превышает чувствительность ПЦР «количественно». Эту особенность диагностических тестов необходимо учитывать при интерпретации полученных результатов. Более чувствительная качественная ПЦР методика (результат: «обнаружено» или «не обнаружено») применяется с целью обнаружения вируса. Количественное ПЦР-исследование выполняется для оценки вирусной нагрузки (определяется количество копий ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови). По результатам количественного ПЦР-исследования судят об активности течения гепатита и эффективности проводимого лечения.

Вирусный гепатит С

Вирусный гепатит С также имеет парентеральный путь передачи (через поврежденные слизистые и кожу, при контакте с кровью). По сравнению с вирусом гепатита В, передается при половых контактах значительно реже. Инфицирование вирусом гепатита С очень часто приводит к развитию хронического гепатита.

Основной маркёр вирусного гепатита С — обнаружение в сыворотке крови пациента суммарных антител к антигенам вируса –anti-HCV (total). Это исследование проводится при скрининговых обследованиях населения (при устройстве на работу, госпитализации, ведении беременности и т.д.). При обнаружении суммарных антител к вирусу гепатита С обязательно должны быть проведены подтверждающие исследования. Положительный результат («anti-HCV суммарные обнаружены») не позволяет различить острый и хронический гепатит С, а также определить стадию течения заболевания (обострение, ремиссия (стихание), выздоровление). Суммарные антитела к вирусу гепатита С могут НЕ определяться в течение 1-2 месяцев после инфицирования пациента («серологическое окно»).

Аnti-HCV Ig M – лабораторный признак острого гепатита С. Результаты исследования также могут быть положительными и при обострении хронического процесса.

Обнаружение генетического материала вируса гепатита С (РНК) в крови пациента методом ПЦР также выполняется в качественной и количественной методиках. Кроме того, в полимеразной цепной реакции может быть исследован генотип вируса гепатита С. В настоящее время определяются 5 разных типов вируса гепатита С, различающиеся генетически. Сведения о генотипе вируса необходимы для выбора схемы лечения пациента.

Лабораторная диагностика всех вирусных гепатитов, несмотря на отличия путей передачи (А и Е – фекально-оральный, В, С, Д – парентеральный) и особенности течения инфекционного процесса (острый, склонный к хронизации), основана на общих принципах. Это выявление антител к вирусу и ПЦР-обнаружение фрагментов нуклеиновых кислот (ДНК или РНК) вируса в крови.

Сведения, полученные в результате лабораторных исследований, должны быть тщательным образом проанализированы врачом-специалистом.

Диагноз вирусного гепатита не может быть установлен или исключен только на основании лабораторных данных!

Источник