Молекулярно биологическое исследование крови на вирусный гепатит c hepatitis c virus

[40-094]
Вирусный гепатит С. Анализы для первичного выявления заболевания. Обследование контактных лиц

1460 руб.

Исследование проводится в целях первичного выявления вируса в организме и включает в себя определение в крови специфических маркеров инфицирования – суммарных антител (IgG, IgM) к вирусу гепатита С и вирусной РНК.

  • anti-HCV, антитела
  • HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]

Венозную кровь.

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека. Существует 6 генотипов ВГС, не исключена возможность инфицирования человека одновременно несколькими вирусами с различными генотипами. В 60-80 % случаев острая инфекция переходит в хроническую.

В лабораторной диагностике заболевания используют два основных подхода:

— серологические методы, основанные на обнаружении специфических антител к вирусу (anti-HCV);

— молекулярно-биологические методы, основанные на выявлении РНК вируса (реал-тайм ПЦР).

Выявление РНК вируса считается «золотым стандартом» в диагностике гепатита С и подтверждает положительный результат обнаружения антител (anti-HCV) к белкам вируса и свидетельствует о наличии и репликации (размножении) вируса в крови.

Современные молекулярно-биологические методы диагностики обладают высокой чувствительностью (98-99 %) и в сочетании с серологическими исследованиями позволяют правильно оценить стадию заболевания, принять решение о тактике лечения, включая выбор препаратов и сроки медикаментозной терапии.

  • Для диагностики вирусного гепатита С;
  • для дифференциальной диагностики гепатитов;
  • для выявления ранее перенесенного вирусного гепатита С.
  • При обследовании людей из группы риска по заражению вирусным гепатитом С;
  • при обнаружении антител к вирусу гепатита С для подтверждения диагноза;
  • при симптомах вирусного гепатита и повышении уровня печеночных трансаминаз;
  • если известно о перенесенном гепатите неуточненной этиологии;
  • при скрининговых обследованиях;
  • при сомнительных результатах серологического исследования;
  • если ребенок родился от инфицированной матери;
  • при гемодиализе;
  • до начала лечения и в конце терапии вирусного гепатита C, затем через 6 и 24 месяца наблюдения.

Что означают результаты?

Референсные значения

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

  • [07-009] anti-HCV, антитела
  • [09-011] HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]

1. Наличие антител (anti-HCV) не свидетельствует о продолжающейся репликации вируса, поскольку может являться признаком как текущей, так и перенесенной инфекции.

2. В ряде случаепри отсутствии антител не исключает инфекции — в ранний период острого гепатита C (ОГС) и при иммунодефицитах.

3. Необходимо учитывать, что у реципиентов, которым была перелита инфицированная кровь, могут обнаруживаться антитела (anti-HCV) донора; их наличие не обязательно свидетельствует о заражении HCV.

4. Одновременное обнаружение в крови РНК вируса и антител (anti-HCV) указывает на текущую острую инфекцию или обострение хронического гепатита С (ХГС). Дифференциальная диагностика острого гепатита С в большинстве таких случаев должна базироваться на наличии соответствующих данных эпидемиологического анамнеза за 1-4 месяца до момента обнаружения антител и увеличения печеночных ферментов.

5. Отсутствие РНК HCV при наличии антител (anti-HCV-позитивные образцы) в крови может являться признаком неустойчивой  виремии, перенесенного острого гепатита, а также ложноположительного результата лабораторного исследования.

Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита С

anti-HCV

РНК-HCV

Интерпретация результатов

+

Ранний период ОГС; ХГС на фоне иммуносупрессии; ложноположительный тест на РНК-HCV

+

+

Острый или хронический гепатит С

+

Элиминация вируса; острый гепатит С в период низкого уровня виремии

Отсутствие инфекции

Что может влиять на результат?

  • Присутствие ревматоидного фактора в крови может приводить к ложноположительным результатам при определении антител к HCV.
  • Присутствие в крови гепарина или высокий уровень криоглобулинов приводит к ложноотрицательным результатам при определении РНК вируса методом ПЦР.



Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, гепатолог, эпидемиолог, терапевт.

Также рекомендуется

  • Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С
  • HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
  • HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
  • HCV, РНК количественно, высокочувствительный метод [реал-тайм ПЦР]
  • [06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
  • [06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
  • [06-013] Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
  • [40-120] Билирубин и его фракции (общий, прямой и непрямой)
  • [06-045] Фосфатаза щелочная общая
  • [06-004] Альбумин в сыворотке
  • [03-011] Фибриноген
  • [40-483] Лабораторное обследование функции печени
  • [20-001] Фактор некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа)
  • [02-029] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Литература:

  1. Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. – М.: ООО «МИА», 2006. – 471-476 с.
  2. Вирусный гепатит С: современные возможности диагностики (клиническая лекция) / А. К. Дуда, В. А. Бойко, И. Н. Агафонкина, А. В. Яковлева // Актуальная инфектология. — 2015. — № 4. — С. 9-16. 

Источник

О возбудителе HCV-инфекции стало известно сравнительно недавно. До начала 1990-х годов точное выявление заболевания представляло собой серьезную проблему. Это обусловило широкое распространение вируса при гемотрансфузионных процедурах и трансплантации органов, длительное течение инфекции без адекватной терапии. Но сейчас диагностика гепатита С точна, анализы помогают прогнозировать эффективность терапии, а срок выполнения специфических исследований не превышает 3–5 дней. 

Читайте также:  Гепатит с какой хлеб можно

Анализ на гепатит С

Так почему масштабы распространения HCV некоторые специалисты сравнивают с эпидемией? В современном российском законодательстве предусмотрена регулярная проверка на гепатит С методом ИФА как у людей из группы риска, так и у работников, способных инфицировать других. Тем не менее, многие не проходят регулярной диспансеризации и не сдают даже стандартные клинические анализы, не говоря о специфических исследованиях.

Но HCV далеко не всегда сопровождается какими-либо клиническими проявлениями, более того, характерные симптомы заболевания отмечают только у четверти пациентов. Вирусная инфекция обычно протекает медленно, но репликация возбудителя патологии происходит постоянно. В результате наступает необратимая гибель гепатоцитов. На месте клеток, утративших свои функции, появляются участки соединительной ткани – своего рода шрамы. 

Таким образом развивается фиброз, который, если не предпринять лечебных мер, перерастает в цирроз печени – тяжелое заболевание, сопровождающееся нарушением работы всех внутренних органов. При диагностике на этой стадии можно избавиться от вируса. Однако изменения печеночной паренхимы остаются необратимыми. В некоторых случаях больным требуется срочная трансплантация печени, а лечение начинают после проведения операции. 

Поэтому чем раньше поставлен точный диагноз, тем скорее доктор начинает терапию. Таким образом репликацию вируса останавливают еще до развития тяжелых осложнений. Однако обычных клинических исследований недостаточно для выявления инфекции. Необходимо сдать более специфичные анализы, отличающиеся как по технике выполнения, так и по особенностям расшифровки результатов. 

Сделать ряд диагностических тестов можно самостоятельно, но интерпретировать полученные данные (особенно если они положительны либо сомнительны) должен только врач.

Как определить гепатит С?

Заподозрить наличие инфекции можно по некоторым клиническим признакам. К их числу относят:

  • постоянное чувство слабости;
  • астенический синдром;
  • непереносимость физических нагрузок (ранее привычных);
  • сонливость;
  • эмоциональная раздражительность;
  • расстройства пищеварения различной интенсивности (могут отсутствовать, иногда проявляются в виде отсутствия аппетита, тошноты).

Но подобные симптомы не могут достоверно выявить HCV, так как данные признаки не специфичны и указывают на множество других патологий или обычное переутомление.

Как определить гепатит С у взрослых и у детей:

  • по анализу крови на содержание определенных иммуноглобулинов (ИФА);
  • по результатам исследования, проведенного методом полимеразной цепной реакции;
  • по биохимическому анализу на содержание печеночных проб, билирубина.

Анализ крови

Недавно на фармацевтическом рынке появились диагностические наборы, позволяющие провести анализ на наличие гепатита С в домашних условиях. Подобные тест-системы менее чувствительны, чем исследования, проводимые в лаборатории. Но в целом, это быстрый и достаточно точный способ самодиагностики. 

Интерпретация результатов, особенно сомнительных, должна проводиться врачом. Положительный тест служит показанием для консультации доктора. 

Дополнительно необходима проверка показателей общеклинического теста крови и мочи. Перед началом лечения доктор оценивает состояние печени по данным неинвазивных исследований (УЗИ, эластометрия). При подозрении на тяжелые поражения ткани выполняют биопсию органа. 

Основные методы лабораторной диагностики

Учитывая длительное бессимптомное течение, результаты обычного анализа крови и мочи могут быть без каких-либо отклонений. Поэтому для выявления вируса гепатита Ц используют серологические (ИФА) и молекулярные (ПЦР) методы лабораторной диагностики. Для этого сдают кровь из вены в частной лаборатории либо поликлинике по месту жительства. Срок получения результатов – до 5 дней.

Когда можно обнаружить HCV в крови?

Основные методы диагностики патологии можно разделить на две группы. Молекулярные исследования направлены на обнаружение частиц вируса. Помимо наличия РНК возбудителя гепатита С, такой анализ показывает его количественное содержание и точный генотип. Серологическое исследование (ИФА) «реагирует» на выработку иммуноглобулинов, синтезируемых при попадании вируса в кровь человека. 

Уровень РНК, достаточный для лабораторного определения, достигается через 10–16 дней после инфицирования (если проводить диагностику современными высокочувствительными технологиями). Количественно вирусную РНК можно определить позже, через 4–6 недель после заражения. Тогда же целесообразно проводить и генотипирование. Синтез антител начинается сразу же, при первом контакте вируса с кровью человека. Но лабораторным путем при помощи анализа ИФА их можно обнаружить только через 3–4 недели. 

Возможность выявления вируса на ранних стадиях зависит от индивидуальных особенностей больного – сроков выработки антител и активности процессов репликации вируса. 

Какие анализы сдают при подозрении на гепатит С:

  • биохимия крови, печеночные пробы (отклонения от нормы могут лишь косвенно указывать на наличие гепатита С);
  • ИФА;
  • ПЦР.

Грамотное поэтапное полное обследование способствует исключению неопределенных результатов, дает максимально точную картину здоровья пациента в целом и позволяет врачу назначить правильное лечение. 

ПЦР диагностика

Тест на ВГС

Исследование методом ПЦР – самый точный анализ для обнаружения гепатита С в организме. Сам принцип постановки полимеразной цепной реакции достаточно сложен. Для проведения необходим обработанный и соответствующим образом подготовленный образец биологического материала. К нему добавляют фермент, провоцирующий деление заданного участка РНК (при его наличии) в геометрической прогрессии. Впоследствии определение частиц вируса проводят при помощи различных физико-химических методов.

Читайте также:  Что влияет на результаты анализов крови на гепатит с

Основные отличия ПЦР-диагностики гепатита C от исследования путем иммуноферментного анализа приведены в таблице:

Молекулярный тест, проведенный по методике ПЦРИммуноферментный анализ
Мишени для исследования
РНК вируса в кровиАнтитела к гепатиту С (класса G и М)
Разновидности анализа и изучаемые критерии
Качественный анализ позволяет ответить на главный вопрос, здоров человек или боленAnti HCV Total определяет в крови общий титр всех антител к возбудителю гепатита С вне зависимости от класса
Количественное исследование оценивает вирусную нагрузкуОпределение иммуноглобулинов по классам: обнаруженные маркеры IgG свидетельствует о хронической инфекции, IgM – об острой
Генотипирование служит для выявления разновидности патологииАнтитела с белку core и неструктурным протеинам HCV – это развернутый анализ, назначается нечасто, служит для дифференциальной  диагностики инфекции с другими заболеваниями, прогнозирования особенностей течения и исхода
Сроки диагностики
до 3 дней3–5 дней
Сроки обнаружения (с момента инфицирования)
10–14 днейЧерез 3–4 недели
Вероятность получения ложных результатов и ошибочной расшифровки
Минимальна, ошибки могут быть связаны с неправильной подготовкой образцов либо нарушением правил постановки реакцииНеправильные результаты (ложноотрицательные или ложноположительные) могут быть следствием определенных заболеваний и состояний (например, беременности, аутоиммунных патологий, ВИЧ, системных инфекций и т.д.)

Качественное исследование

Качественный анализ, предназначенный для выявления патогенной РНК строго специфичен, поэтому используется для дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита С и для первичного определения наличия заболевания. Современные наборы реактивов, используемые для проведения исследования, характеризуются высокой чувствительностью. Достоверная диагностика возможна уже через 1,5–2 недели после инфицирования.

Диагностика гепатита С

Расшифровка анализа не отличается сложностью. Если частицы вируса обнаружены, человек болен либо произошла реконвалесценция болезни. Отрицательный результат свидетельствует в пользу отсутствия патологии или о диагностическом окне, когда человек заражен, но уровень РНК патогена слишком низок для лабораторного обнаружения. 

При помощи качественного анализа методом ПЦР возможна ранняя диагностика вирусной инфекции.

Количественный анализ

Исследование проводится после подтверждения диагноза гепатита С по качественной ПЦР. По анализу определяют показатель вирусной нагрузки. Этот параметр определяет активность патологического процесса. В зависимости от результата количественного анализа выделяют несколько уровней вирусной нагрузки (представлено в таблице).

Уровень вирусной нагрузки (измеряется в МЕ/мл)Расшифровка
Ниже 3ˑ104Низкая виремия
3ˑ104–8ˑ105Средняя виремия
Сверх 8ˑ105Высокий уровень виремии

Чем выше параметр вирусной нагрузки (ВН), тем активнее происходит репликация вируса, хуже прогноз и выше вероятность необратимых изменений структуры тканей печени. Как правило, высокая виремия сопровождается достаточно характерными клиническими проявлениями инфекции. Обнаружение низкой ВН, особенно на фоне острой фазы заболевания является предиктором самостоятельного выздоровления. В таком случае начало терапии откладывают на 7–14 дней, после чего исследование повторяют. 

Генотипирование

Данный анализ проводят только в том случае, если в крови обнаружена вирусная РНК и установлено ее количественное содержание. Генотипирование – единственное исследование, которое определит разновидность возбудителя гепатита С. Только так можно правильно назначить курс терапии и установить продолжительность их применения. 

Экспресс-тестирование в домашних условиях

В настоящее время диагностика вирусной инфекции возможна дома, при этом человеку не нужны какие-либо специальные медицинские навыки. Экспресс-тест на гепатит С «работает» по принципу иммуноферментного анализа, то есть набор позволяет определить наличие антител к HCV в образце биологического материала. Большинство тест-систем предназначены для проверки крови. Но появились наборы, позволяющие выяснить, есть ли иммуноглобулины к гепатиту С в слюне.

Как проводят анализ на гепатит С

Относительно достоверности экспресс-тестов было проведено несколько клинических исследований. Установлено, что подобные наборы – не самый точный способ диагностики инфекции, многое зависит от правильности забора биологического материала, соблюдения других правил выполнения анализа. Однако проведение такого теста дает возможность самостоятельно определить инфицирование, не посещая доктора и лабораторию. 

Цена одной тест-системы, позволяющей проверить наличие вируса, колеблется в пределах 800–2000 рублей в зависимости от производителя и способа выполнения анализа. Исследование выполняют следующим образом. На тест-полосу наносят образец биологического материала (слюна либо кровь) и ждут отведенное время. Появление одной контрольной полоски свидетельствует об отрицательном результате, две линии – о возможном инфицировании.

Подготовка к сдаче анализов

При подготовке к проведению обследования необходимо соблюдать такие правила:

  • исключить токсическое влияние алкоголя на печень (отказаться от употребления спиртного за 5–7 дней до сдачи анализов);
  • соблюдать диету с ограничением жирных, жареных, копченых блюд (стол №5) за неделю до проведения обследования;
  • сдавать кровь строго натощак (прием пищи запрещен за 12–14 часов до забора крови);
  • не курить за 8 часов до исследования.

Существует несколько способов проведения диагностики. Можно сдать кровь в частной лаборатории, где не требуется направлений от врача. Необходимые тесты выполняют по полису страхования, но перед этим придется получить направления у участкового терапевта или инфекциониста. 

Читайте также:  Противопоказания для лечения гепатита с интерфероном

Изменение показателей крови

Нередко пациенты интересуются, покажет ли общий анализ крови гепатит С, ведь общеклинические исследования сдаются регулярно при вирусных заболеваниях и других, более распространенных инфекциях. Но изменения картины крови возникают далеко не всегда. Кроме того, подобные нарушения неспецифичны и не позволяют провести точную диагностику заболевания.

Приблизительно в 20–30% случаев возникают следующие изменения:

  • снижение общего уровня лейкоцитов за счет лимфоцитов;
  • уменьшение содержания гемоглобина;
  • изменение уровня тромбоцитов за счет нарушений свертывающей системы крови;
  • повышение параметров скорости оседания эритроцитов.

Еще одним способом, как обнаружить вирусное поражение печени, служат показатели биохимического исследования крови.

О возможном инфицировании свидетельствует повышение концентрации:

  • билирубина;
  • АЛТ;
  • АСТ;
  • креатинина;
  • альбумина. 

Нарушения функциональной активности печени проходят по мере приема противовирусных препаратов. 

Диагноз гепатита С не ставят на основании результатов печеночных проб и стандартного клинического исследования крови.

Как выявить ВГС

Как выявить осложнения

Для получения полной картины состояния пациента необходимо проведение дополнительных инструментальных исследований. Это связано с длительным бессимптомным течением патологии. Нередко о наличии болезни пациент узнает на стадии фиброза, а при неблагоприятном прогнозе – на этапе цирроза либо злокачественной малигнизации гепатоцитов. 

От состояния печени во многом зависит тактика терапии. При декомпенсированных формах цирроза прием таргетных противовирусных препаратов дополняется рибавирином, либо продолжительность лечения увеличивают до 24 недель.

Биопсия печени

Процедура проводится для определения стадии и степени цирроза, а также подтверждения злокачественного перерождения клеток (предварительно опухоль обнаруживают при помощи ультразвукового исследования). Пункцию выполняют в условиях стационара под местной анестезией. 

Под контролем УЗИ специалист делает прокол и вводит в паренхиму печени специальную иглу с системой захвата, позволяющей взять образец биологического материала. Кусочек ткани помещают в специальную среду, при необходимости добавляют краситель и исследуют под микроскопом. 

Противопоказанием к проведению процедуры служит паразитарное поражение печени и тяжелые нарушения системы свертывания. Кроме того, возможность выполнения манипуляции напрямую зависит от согласия самого пациента. Для принятия взвешенного решения врач должен подробно объяснить, для чего необходимы результаты биопсии, каковы риски при проведении процедуры. 

УЗИ

Ультразвуковое исследование сочетает в себе высокую информативность, безболезненность и безопасность. В течение 15–20 минут доктор может получить подробные данные о размерах и структуре печени и других органов брюшной полости.

Как правило, УЗИ, проведенное на фоне гепатита С, демонстрирует:

  • нарушения кровоснабжения органа;
  • изменения, связанные с оттоком и секрецией желчи;
  • наличие уплотнений, очагов воспаления, некроза, в тяжелых случаях возможно обнаружение новообразований;
  • увеличение размеров печени.

По итогам УЗИ доктор поймет масштабы поражения печени, однако точная диагностика гепатита С возможна только по результатам анализа крови. 

Эластометрия

Сама техника выполнения обследования напоминает ультразвуковую диагностику. Эластометрия – неинвазивное безболезненное исследование, предназначенное для оценки плотности паренхимы печени. Таким образом доктор может определить стадию и тяжесть фиброза, при котором нормальная ткань органа замещается соединительной. Без соответствующей терапии и таргетного противовирусного лечения развивается цирроз печени.

Положительный тест на ВГС

КТ, МРТ

Подобные методики информативны при диагностике цирроза и наличия злокачественных новообразований. Томограмма имеет ряд противопоказаний. Но подобное исследование гораздо информативнее УЗИ и эластометрии, позволяет в полной мере оценить состояние печени.

Самодиагностика

Самостоятельная диагностика вируса без проведения должных исследований и их грамотной расшифровки невозможна. Человек может предположить наличие инфекции по ряду симптомов, например, повышенной утомляемости, постоянной слабости, сочетающихся с расстройствами пищеварения. К группе риска относят людей, часто подвергающихся инвазивным медицинским или эстетическим процедурам, пренебрегающими барьерными методами защиты при случайных половых контактах. 

Наиболее простой способ самостоятельной диагностики – проведение экспресс-теста либо сдача анализов в платной лаборатории. Однако при наличии характерной для вирусного поражения печени лучше пройти комплексное обследование под контролем врача. 

Обследование беременных

Обследование на гепатит С при беременности является обязательным и выполняется дважды: при первой консультации у гинеколога и постановке на учет, а затем в середине последнего триместра. Доктор назначает анализы, выполняемые по методики ИФА. Но основная проблема заключается в получении ложноположительных результатов. После зачатия в организме женщины начинается выработка протеинов, близких по структуре к антителам к гепатиту С. 

Поэтому позитивный ИФА при беременности не всегда является признаком инфицирования и требует подтверждения методом ПЦР. Также в период вынашивания ребенка возможно обследование органов брюшной полости при помощи УЗИ, иногда проводится эластометрия. Но при подтверждении диагноза лечение может навредить плоду. Поэтому назначают поддерживающие здоровье женщины медикаменты, а основную терапию начинают после родов. 

Заключение

Лечение гепатита С вполне реально как на острой, так и на хронической фазе. Но одно из условий успешной терапии – своевременная диагностика, когда еще возможно восстановление функциональной активности печени. Поэтому специалисты рекомендуют самостоятельно либо по направлению от врача сдавать соответствующие тесты, а при позитивном результате незамедлительно обращаться за медицинской помощью.

Источник