Молекулярно биологическое исследование на вирус гепатита
Серологические методы исследования
В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела.
Метод обнаружения с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого .
В этом случае из двух компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является сыворотка крови, так как постановка реакции проводится с заведомо известными антигенами. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови антител, соответствующих применяемому антигену; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых.
Достоверные результаты получают при исследовании «парных» сывороток крови больного, взятой вначале заболевания (3-7 день) и через 10-12 дней. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и более повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.
С внедрением в практику лабораторий метода иммуноферментного анализа (ИФА) стало возможным определять в крови больных антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (JgM и JgG), что существенным образом повысило информативность серологических методов диагностики.
При первичном иммунном ответе, когда иммунная система человека взаимодействует с инфекционным агентом в первый раз, синтезируются преимущественно антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М (JgM). Лишь позднее, на 8-12-й день после попадания антигена в организм, в крови начинают накапливаться антитела иммуноглобулинов класса G (JgG). При иммунном ответе на инфекционные агенты вырабатываются также и антитела класса А (JgA), которые играют важную роль в защите от инфекционных агентов кожи и слизистых оболочек.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать. Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеинов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется.
Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, т. е. одной бактерии или вирусной частицы. Введение в реакцию дополнительного этапа — синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы — позволило тестировать РНК-вирусы, например вирус гепатита С.
ПЦР — это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.
- Преимущество ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний перед другими методами исследований заключается в следующем:
- возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в том числе и в материале, получаемом при биопсии;
- возможна диагностика инфекционных болезней на самых разных стадиях заболевания;
- возможность количественной оценки результатов исследований ( сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);
- высокая чувствительность метода.
Исследования вирусов гепатита
В настоящее время выделяют следующие формы вирусных гепатитов: гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е, гепатит G и гепатит ТТ. Для диагностики каждой из перечисленных форм вирусных гепатитов используется определенный перечень маркеров.
Вирусный гепатит А
Гепатит А — острая энтеровирусная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита А (ВГА,HAV) — энтеровирус типа 72. Геном вируса представлен однонитчатой РНК. Вирус гепатита А содержит единственный антиген (HA-Ag). Удельный вес гепатита А в суммарной заболеваемости вирусными гепатитами составляет 70-80%. В структуре заболеваемости гепатитом А дети составляют до 80%, причем основная масса — дошкольники и школьники начальных классов.
ИФА и ПЦР исследования при гепатите А
Вирусный гепатит В
Гепатит В – вирусная антропонозная инфекция. Возбудитель вирус гепатита В (ВГВ, HBV) – относится к семейству гепаднавирусов, ДНК-содержащих вирусов, поражающих клетки печени. Вирионы ВГВ имеют наружную липопротеидную оболочку и нуклеокапсид, содержащий двунитчатую ДНК и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу.
- В структуре ВГВ (HBV) выделяют следующие антигенные системы:
- поверхностный («австралийский») антиген, HBsAg, находящийся в составе липопротеидной оболочки ВГВ, является маркером ВГВ, указывая на инфицированность вирусом;
- ядерный (core), HBcAg – обнаруживается в составе нуклеокапсида вирионов, свидетельствует об активной репродукции вируса;
- HBeAg – входит в состав ядра ВГВ, указывая на активность вируса и, кроме того, на его высокую вирулентность и инфицированность;
- HBxAg – расположен вблизи оболочки вириона, его роль в генезе инфекции изучается.
В диагностике вирусного гепатита В ведущее значение имеет определение комплекса маркеров гепатита. Свыше 5% населения планеты охвачено этой инфекцией, а частота безжелтушных форм ВГВ составляет, по данным разных авторов, от 60 до 82%.
ИФА и ПЦР исследования при диагностике вируса гепатита В
Вирус гепатита С, генотипы
Гепатит С (ВГС) – вирусное заболевание, наиболее часто протекающее в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушных и легких форм и склонное к хронизации процесса.
Возбудитель — вирус гепатита С – имеет сходство с флавовирусами, содержит РНК. На основе филогенетического анализа выделено 6 генотипов ВГС и более 80 субтипов.
Генотип 1 — наиболее распространенный генотип во всем мире (от 40 до 80%). Генотип 1а является доминирующим для США, а 1b преобладает в Западной Европе и Южной Азии.
Генотип 2 распространен во всем мире, однако встречается с меньшей частотой, чем генотип 1 (от 10 до 40%).
ВГС тип 3 характерен для Индии, Пакистана, Австралии и Шотландии. Генотип 4 распространен преимущественно в Средней Азии и Египте, генотип 5 – в Южной Африке, а генотип 6 – в Гонконге и Мокао.
Примерно 90% всех случаев посттрансфузионных гепатитов связано с ВГС. Среди доноров антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС) обнаруживают в 0,2-5% случаев.
У 40-75% пациентов регистрируется бессимптомная форма болезни, у 50-75% больных острым ВГС формируется хронический гепатит, у 20% из них развивается цирроз печени. Важная роль ВГС отводится и в этиологии гепатоклеточной карциномы.
Геном вируса гепатита С представлен одноцепочечной положительно заряженной РНК, которая кодирует 3 структурных и 5 неструктурных белков. К каждому из этих белков вырабатываются антитела, обнаруживаемые в крови больных гепатитом С.
Отличительной чертой ВГС является волнообразное течение заболевания, в котором разграничивают 3 фазы: острую, латентную и фазу реактивации.
Для острой фазы характерно повышение активности печеночных ферментов в сыворотке крови, уровня антител класса IgM и IgG к ВГС с нарастанием титров, а также РНК ВГС.
Латентная фаза характеризуется отсутствием клинических проявлений, наличием в крови антител класса IgG к ВГС в высоких титрах, отсутствием антител класса IgM и РНК ВГС либо их присутствием в низких концентрациях на фоне незначительного повышения активности печеночных ферментов в периоды обострения.
Для фазы реактивации характерно появление клинических признаков, повышение активности печеночных ферментов, наличие антител класса IgG (к нуклеокапсидному белку core и неструктурным белкам NS) в высоких титрах, присутствие РНК ВГС и нарастание титров антител класса IgM к ВГС в динамике.
ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита С, определение генотипа
Вирусный гепатит D
Гепатит D – вирусная инфекция, вследствие биологических особенностей вируса протекающая исключительно в виде ко- или суперифекции при гепатите В, характеризующаяся тяжелым течением,
часто неблагоприятным исходом.
Самостоятельно, без вируса В, вирус гепатита D не может попасть в организм человека
Возбудитель – вирус гепатита D (ВГD), по своим биологическим свойствам приближается к вироидам – обнаруженным молекулам нуклеиновых кислот. Печень человека – единственное место размножения (репликации) ВГD.
Известно существование двух вариантов инфекции: коинфекция (одновременное заражение ВГВ и ВГD) и суперинфекция (заражение HBsAg-позитивных пациентов). Сочетание ВГВ и ВГD сопровождается развитием более тяжелых форм патологического процесса, что определяется главным образом действием ВГD.
Летальность при суперинфекции достигает 15-20%. Инфицирование дельта-вирусом может вызывать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением, или формировать хроническое носительство ВГD.
При гепатите D могут отсутствовать в крови маркеры гепатита В – анти НВс и НВs-антиген – и наблюдается угнетение ДНК-полимеразной активности, так как ВГD ингибирует репликацию вируса гепатита В.
ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита D
Источник
Молекулярно-биологические исследования
Молекулярная биология – наука о механизмах хранения, воспроизведения, передачи и реализации генетической информации, структуре и функциях нерегулярных биополимеров (нуклеиновых кислот и белков).
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из основных молекулярно-биологических методов, используемых в клинико-лабораторной диагностике.
Материал для исследования
Любая биологическая жидкость и ткань организма, полученные из места предполагаемой локализации инфекционного процесса, то есть места наибольшей концентрации вируса или микроорганизма.
- Цельная кровь
- Пунктаты плевральной, спинномозговой, синовиальной жидкости
- Мокрота
- Соскоб или мазок из урогенитального тракта и др.
ПЦР относится к прямым методам диагностики, выявляющим непосредственную причину патологического процесса.
В исследуемом материале выявляется уникальный, характерный для данного возбудителя фрагмент ДНК. ПЦР помогает обнаружить возбудителей инфекций даже в тех случаях, когда другими видами анализов (бактериологическими, иммунологическими, микроскопическими) это не представляется возможным.
Применение ПЦР очень эффективно в отношении не только острых, но и вялотекущих, скрытых инфекций.
Для диагностики каких заболеваний применяют ПЦР?
- Инфекционных
- Наследственных
- Онкологических
- Иммунных
ПЦР-диагностика у онкологических больных
Онкологические больные относятся к группе высокого риска по развитию инфекционных осложнений.
Ранняя диагностика скрытых инфекций является критическим моментом, определяющим эффективность лечения и прогноз жизни.
Какие факторы предрасполагают онкобольных к инфекции?
- Нейтропения
- Нарушения клеточного и гуморального иммунитета
- Повреждение анатомических барьеров, в основном слизистых оболочек и кожи
- Опухолевая обструкция
- Различные инвазивные манипуляции и др.
Наиболее частые возбудители вирусных инфекций у онкологических больных:
- вирусы герпеса (вирус простого герпеса, вирус Varicella-Zoster, цитомегаловирус и др.)
- банальные респираторные вирусы (респираторный синтициальный вирус, вирусы гриппа А и В, вирусы парагриппа и др.).
ПЦР-диагностика инфекций, передающихся половым путем
Вирус папилломы человека (ВПЧ, НРV) один из наиболее распространенных возбудителей инфекций, передающихся половым путем (ИППП).
Известно более 80 типов ВПЧ:
- неонкогенные (не вызывающие рак);
- онкогенные: высокого и низкого канцерогенного риска.
Разные типы ВПЧ могут вызывать различные заболевания, например: обыкновенные бородавки, плоские бородавки, генитальные (кондиломы), ларингеальные папилломы и др.
Папилломатоз, вызванный онкогенными типами ВПЧ, может при прогрессировании привести к злокачественному перерождению тканей — дисплазии шейки матки, раку шейки матки.
В России рак шейки матки занимает первое место среди причин онкологической смертности у женщин моложе 45 лет!
Длительность инкубационного периода при ВПЧ-инфекции зависит от типа ВПЧ и других сопутствующих факторов (снижение иммунитета на фоне частых ОРВИ, стресса, недостаточного питания, вредных привычек, воспалительных заболеваний), может продолжаться месяцы и годы.
Нередко человек является носителем сразу нескольких типов ВПЧ.
Всемирная организация здравоохранения рекомендует повторять скрининговое обследование на ВПЧ при отрицательном результате каждые 3-5 лет!
Сроки выполнения исследования
Результат выдается на следующий день после забора материала.
Преимущества ПЦР-диагностики
Исследование не требует от пациента специальной подготовки
ПЦР – диагностика особенно эффективна при выявлении трудно культивируемых (уреаплазмы, микобактерии и др.) и некультивируемых (вирусы, хламидии и др.) форм микроорганизмов, с которыми часто приходится иметь дело при латентных и хронических инфекциях.
Наши преимущества
- Собственный отдел ПЦР-диагностики;
- В отделении лабораторной диагностики НМИЦ онкологии им. Н. Н. Петрова отдел ПЦР-диагностики территориально расположен на базе бактериологической лаборатории, что позволяет объединить усилия диагностического поиска и сократить сроки идентификации возбудителя инфекционного процесса.
- Материал для ПЦР можно сдать в КДЦ, который расположен в центре города рядом с метро.
- Удобный график работы Центра – ежедневно, в том числе и в дни государственных праздников, по будням с 9.00 до 20.00, по выходным до 18.00.
- Забор материала проводят опытные и квалифицированные специалисты.
Цены на молекулярно-биологические исследования
Исследование иммунного статуса: 1 параметр | 1500 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования на Chlamydia trachomatis / Trichomonas vaginalis | 500 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования на Micoplasma hominis / Micoplasma genitalium | 500 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования на Mobiluncus mulieris / Mobiluncus curtisii | 500 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования на Trichomonas vaginalis / Neisseria gonorrhoeae | 500 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования на N.meningitidis/H.influenza/S.pneumonie в ликворе | 800 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования на ВГВ/ВГС/ВИЧ ПЦР | 1 800 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования на ИППП-12 | 2 400 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования ОРВИ-с | 1 000 р |
Комплекс молекулярно-биологического исследования Септоскрин | 900 р |
Молекулярно-биологическое исследование крови на вирусный гепатит B (Hepatitis B virus) | 500 р |
Молекулярно-биологическое исследование крови на вирусный гепатит С (Hepatitis С virus) | 650 р |
Молекулярно-биологическое исследование на Candida albicans / Fungi | 300 р |
Молекулярно-биологическое исследование на Helicobacter pylori | 900 р |
Молекулярно-биологическое исследование на MBTC | 300 р |
Молекулярно-биологическое исследование на Toxoplasma gondii | 400 р |
Молекулярно-биологическое исследование на Treponema pallidum | 300 р |
Молекулярно-биологическое исследование на VZV | 400 р |
Молекулярно-биологическое исследование на ВГЧ-6 | 300 р |
Молекулярно-биологическое исследование на ВГЧ-8 | 300 р |
Молекулярно-биологическое исследование на вирус гриппа A/H1N1 | 600 р |
Молекулярно-биологическое исследование на вирусы гриппа A/B | 500 р |
Молекулярно-биологическое исследование на вирусы парагриппа 1,2,3,4. | 500 р |
Молекулярно-биологическое исследование на ВПГ-1,2 (количественный) | 350 р |
Молекулярно-биологическое исследование на ВПЧ высокого канцерогенного риска (скрининг) | 700 р |
Молекулярно-биологическое исследование на ВПЧ высокого канцерогенного риска, генотип (количественный) | 1100 р |
Молекулярно-биологическое исследование на ВЭБ (количественный) | 300 р |
Молекулярно-биологическое исследование на ЦМВ (количественный) | 300 р |
Молекулярно-биологическое исследование плазмы крови на РНК вирус иммунодефицита человека ВИЧ (Human immunodeficiency virus HIV) | 650 р |
Молекулярно-биологическое исследование на P.jirovecii | 500 р |
Консультативно-диагностический центр (КДЦ)
Нас легко найти по следующим адресам:
Источник