Му смешанная кишечная инфекция
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (Минсельхозпрод России) ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ 107139, Москва, Орликов пер., 1/11 Для телеграмм: Москва, 84 Мннроссельхозпрод Телекс: 417738 ЛЕН Телефон: 975-58-50 11.10.99 г. № 13-7-2/1759 | УТВЕРЖДАЮ Зам. руководителя Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ ____________ В.В. Селиверстов 11 октября 1999 г. |
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по бактериологической диагностике
смешанной кишечной инфекции
молодняка животных, вызываемой
патогенными энтеробактериями
1. Общие положения
1.1. Смешанная кишечная инфекция — остропротекающая инфекционная болезнь молодняка разных видов сельскохозяйственных животных, которая имеет полиэтиологическую природу и вызывается двумя-тремя и более видами патогенных энтеробактерий, относящимся к родам Escherichia, Citrobacter, Proteus, Morganella, Klebsiella, Salmonella. Помимо указанных микроорганизмов возбудителями болезни могут быть также бактерии других родов и семейств — Yersinia, Pseudomonas, Staphylococcus, Streptococcus, Clostridium и пр. Наряду с бактериальными агентами нередко (особенно на крупных фермах) болезнь обусловливают корона- и ротавирусы.
1.2. Болезнь возникает в первые дни и недели жизни животных и проявляется чаще в виде энзоотической вспышки, развитию которой способствуют различные факторы, связанные с несоблюдением технологических и ветеринарно-санитарных требований воспроизводства стада, а также нарушением режимов содержания и кормления молодняка.
1.3. Смешанная кишечная инфекция может протекать в кишечной (энтеритной) и септической формах. При кишечной форме возбудители болезни локализуются только в желудочно-кишечном тракте и брыжеечных лимфоузлах, регионарных поражённым участкам кишечника; при септической форме — в паренхиматозных органах, различных тканях, а также в кишечнике и брыжеечных лимфоузлах. Основными клиническими признаками болезни являются: потеря аппетита, понос, переходящий в профузный, нарастающая слабость, депрессия, учащенное дыхание и сердцебиение, обезвоживание организма (при затяжном течении); нередко наблюдается поражение центральной нервной системы (возбуждение, судороги), иногда пневмония, артриты; температура тела в пределах нормы, в отдельных случаях повышена на 0,5 — 1 °С, в предагональном состоянии она снижается ниже нормы.
1.4. Патологоанатомические изменения у погибших животных имеют картину катарального или катарально-геморрагического гастроэнтерита, на слизистой желудка, тонкого отдела кишечника и слепой кишки могут встречаться язвы, нередко отмечаются множественные точечные, полосчатые и пятнистые кровоизлияния на слизистой желудка, толстого и тонкого отделов кишечника, под капсулой селезенки, эпи- и эндокарде (клапанах); иногда отмечается очаговая катаральная пневмония и отек легких, дистрофия печени; регионарные брыжеечные лимфатические узлы как правило увеличены, отечны, на разрезе розового или красно-вишневого цвета; при вскрытии черепной коробки — гиперемия кровеносных сосудов и отек ткани головного мозга. Указанные изменения могут быть в отдельных или одновременно в нескольких органах.
1.5. Диагноз на смешанную кишечную инфекцию в хозяйствах устанавливают на основании совокупности эпизоотологических данных (возраст заболевших животных, массовость поражения, стационарность и др.), клинических признаков болезни, патологоанатомической картины и результатов бактериологического (при необходимости еще и вирусологического) исследования патологического материала от больных или погибших животных.
2. Отбор материала для исследования
2.1. Для посмертной бактериологической диагностики в лабораторию направляют 2 — 4 свежих трупа погибших или убитых с диагностической целью больных животных (желательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами). В случае невозможности доставки целого трупа посылают следующий патологический материал: голову, трубчатую кость, сердце, перевязанное лигатурой вблизи разреза сосудов и аорты, селезенку, долю печени с желчным пузырем, брыжеечные лимфатические узлы, регионарные воспаленному участку кишечника, а также пораженный отрезок тонкого отдела кишечника, перевязанный с двух концов лигатурой (в отдельной таре или полиэтиленовом пакете). Указанный патологический материал исследуют в день поступления его в лабораторию.
2.2. Для прижизненной бактериологической диагностики в лабораторию направляют фекалии больных диареей животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами. Пробы фекалий берут от 5 — 6 больных животных одной фермы в стерильные пробирки по 2 — 3 г непосредственно из прямой кишки с помощью прокипяченного резинового катетера. Пробирки вместе с сопроводительной запиской упаковывают в полиэтиленовый пакет или картонную коробку.
При невозможности быстрой доставки проб фекалий в лабораторию (через 3 — 4 часа после взятия) их консервируют стерильным 30 %-ным глицериновым раствором в соотношении 1:2 (см. приложение).
2.3. Пробы фекалий и содержимого тонкого отдела кишечника (в количестве не более 0,5 г) разводят в 10 см3 стерильного 0,85 %-ного раствора хлорида натрия, тщательно размешивают и затем выдерживают 10 — 15 минут при комнатной температуре для осаждения крупных частиц. Надосадочную жидкость используют для посева на питательные среды не позднее 1 — 2 часов после приготовления взвесей. При исследовании консервированных фекалий, их тщательно размешивают, после чего разводят физиологическим раствором в 5 — 10 раз.
3. Выделение культур энтеробактерий, изучение их морфологических, культуральных и ферментативных свойств
3.1. Патологический материал (за исключением содержимого тонкого отдела кишечника и фекалий) засевают в пробирки с МПБ и на плотные дифференциально-диагностические среды в чашках: Эндо (или Левина) и среду Плоскирева (или висмут-сульфит агар). Содержимое тонкого отдела кишечника и фекалий засевают только на указанные выше плотные среды в чашках. Кроме того для выделения из фекалий сальмонелл неразведенные пробы фекалий засевают еще в одну из сред обогащения (селенитовый бульон, магниевую, Мюллера или др.) в соотношении 1:5.
3.1.1. Посев материала в МПБ проводят пастеровской пипеткой. Посевы на плотные среды в чашках из внутренних органов и тканей, указанных в п. 2.3, делают путем отпечатков разрезанной поверхностью кусочка органа из предварительно профламбированного участка на подсушенную питательную среду или вносят материал пастеровской пипеткой на поверхность среды, а затем равномерно растирают его стеклянным шпателем.
3.1.2. Содержимое тонкого отдела кишечника, взятое путем соскоба с пораженного участка слизистой оболочки, суспендируют в 10 см3 стерильного 0,85 %-ного раствора хлорида натрия, затем засевают суспензию бактериологической петлей на подсушенные в термостате плотные дифференциально-диагностические среды в чашках широким частым штрихом по всей поверхности среды. Аналогичным образом проводят посев разведенных фекалий.
3.2. Пробирки с посевами в МПБ из внутренних органов и тканей инкубируют при температуре 37 — 38 °С в течение 18 — 24 часов. При наличии в МПБ помутнения среды культуру микроскопируют и в случае обнаружения мелких грамотрицательных палочек пересевают ее на агар Эндо (или Левина) и среду Плоскирева (или висмут-сульфит агар) в чашках, которые помещают в термостат (37 — 38 °С ) на 18 — 24 часа.
Пересев культур, полученных в МПБ, на плотные селективные среды проводят в том случае, если отсутствует рост колоний на этих средах в первичных посевах из соответствующих органов и тканей.
3.3. Чашки с посевами на агаре Эндо (или Левина) из внутренних органов, тканей или фекалий инкубируют при температуре 37 — 38 ° С в течение 18 — 24 часов. После просмотра культур пересевают колонии лактозоположительных бактерий (круглые, средних размеров S-формы, красно-малинового цвета на агаре Эндо и темно-фиолетового цвета на агаре Левина с наличием или отсутствием металлического блеска) в чашки с МПА и средой Минка в соответствии с рекомендациями, изложенными в действующих «Методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных».
При наличии на агаре Эндо (или Левина) роящегося налета, характерного для протея, пересевают его на скошенный МПА (культуры из двух-трех внутренних органов, тканей или фекалий). Чашки и пробирки с посевами инкубируют 18 — 20 часов при той же температуре.
3.4. Чашки с первичными посевами на агаре Плоскирева инкубируют при температуре 37 — 38 °С в течение 24 — 36 часов. После просмотра культур пересевают мелкие круглые колонии S-формы полупрозрачные, сероватого цвета с голубым оттенком в пробирки со скошенным МПА (по 1 — 2 колонии с культур из двух-трех внутренних органов, тканей или фекалий, каждую колонию в отдельную пробирку), которые помещают в термостат на 18 — 24 часа.
В том случае, если пересев проводят на комбинированную среду (Олькеницкого, Клиглера), то каждую колонию пересевают в одну пробирку с этой средой и в одну пробирку со скошенным МПА.
3.5. Суточные культуры бактерий на скошенном МПА или комбинированной среде, выделенные из внутренних органов, тканей или фекалий, микроскопируют (окраска по Граму) и при наличии в мазках однородных мелких грамотрицательных палочек, не образующих спор и капсул (бактерии вида Klebsiella pneumoniae образуют капсулу), используют для изучения ферментативных, патогенных, антигенных свойств, а также (при необходимости) определения подвижности в полужидком МПА. Для выявления у культур клебсиелл капсулы окраску мазков проводят по методу Гинса (тушью).
3.6. Ферментативные свойства изучают у 2 — 6 агаровых (в порядке исключения у бульонных) культур бактерий, выделенных из одного патологического материала, на наборе сред с углеводами и индикатором Андреде или полужидких средах с индикатором ВР, куда входят среды с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом, мальтозой, а также на средах с мочевиной, сернокислым железом (определение сероводорода), агаре Симонса, в бульоне Хоттингера или МПБ (определение индола), мясопептонной желатине, среде с фенилаланином.
При использовании комбинированной среды Олькеницкого или Клиглера учитывают изменения, вызываемые представителями разных родов энтеробактерий в этой среде, после чего данную культуру изучают по другим необходимым биохимическим тестам.
Засеянные пробирки инкубируют при температуре 37 — 38 °С.
Предварительные результаты изучения ферментативных свойств культур учитывают через 24 часа, окончательные результаты — через 48 часов. Изучение ферментативных свойств культур энтеробактерий можно проводить также с помощью тест-системы для биохимической идентификации энтеробактерий. Родовую и видовую принадлежность культур устанавливают по показателям таблицы.
Следует учитывать, что у бактерий рода Proteus встречаются нероящиеся штаммы, образующие при росте на плотных питательных средах мелкие круглые колонии S-формы сероватого цвета. Важными признаками родовой идентификации таких штаммов является их способность дезаминировать фенилаланин и разжижать желатин.
При наличии у культур отклонений от основных показателей таблицы используют дополнительные тесты: реакции с метилротом и Фогес-Проскауэра, наличия образования оксидазы, определение подвижности и др.
СХЕМА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО
МАТЕРИАЛА НА СМЕШАННУЮ КИШЕЧНУЮ ИНФЕКЦИЮ
4. Серологическая идентификация культур бактерий
4.1. Серологическую идентификацию культур эшерихий и сальмонелл проводят в соответствии с действующими «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных» и «Методическими указаниями по лабораторной диагностике сальмонеллезов человека и животных, обнаружению сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». Культуры названных бактерий относят к возбудителям болезни на основании показателей, указанных в этих методических указаниях.
Источник
Одной из характерных особенностей современных кишечных инфекций у детей является сочетанная бактериальная или бактериально-вирусная их природа.
В подгруппе смешанных кишечных инфекций наблюдалось 777 больных первых двух лет жизни, из них дети первого года составили 85,7% , в том числе до 6 месяцев 67,5% от общего числа наблюдений.
Диагноз смешанной кишечной инфекции ставился на основании одновременного выделения в трех посевах двух возбудителей и более и нарастания (в динамике болезни) у детей титра специфических агглютининов к бактериальным антигенам — шигеллам, сальмонеллам, эшерихиям.
Сравнение возрастного состава больных с моноинфекциями и смешанными инфекциями показало явное преобладание детей первого года жизни, в том числе в возрасте до 6 месяцев — при смешанных инфекциях.
Оценка соотношения по тяжести форм заболевания суммарно и в группах с моно- и смешанными инфекциями показывает преобладание тяжелых форм (68,7%).
В общей сумме микстинфекций сочетание сальмонеллеза с дизентерией наблюдалось у 38,96% больных, во всех случаях было сочетание шигелл Флекснера и сальмонеллы тифимуриум группы В. Сочетание дизентерии с эшерихиозом было у 27,3% больных.
Эшерихиоз во всех случаях был связан с ЭПКП О111, В 7,8% случаев сочетались 3 возбудителя — дизентерия + сальмонеллез + колиинфекции. Остальные 25,97% больных приблизительно в равном количественном соотношении были представлены сочетанием шигелл Флекснера и Зонне, сальмонелл тифимуриум группы В и эшерихий.
Одномоментное заражение перечисленными выше возбудителями установлено у 340 больных, последовательное у 437 в различные сроки нахождения в стационаре, что обуславливалось внутрибольничным инфицированием этих детей.
Микстинфекция у 50,6% больных возникала на фоне сопутствующих заболеваний (гипотрофия, рахит, экссудативный диатез).
Легкие формы отмечались только у детей старше года. В этиологии заболевания чаще встречалось сочетание шигеллы Флекснера с сальмонеллой тифимуриум группы В. Клинически заболевание характеризовалось кратковременной дисфункцией, частотой стула до 3-х раз в сутки, эмоциональный тонус не страдал, существенных нарушений водно-электролитного обмена не отмечалось. Изменения в копрограмме выражались наличием нейтрального жира, жирных кислот в большом количестве, единичных лейкоцитов.
Общий анализ крови существенно не изменялся — число лейкоцитов в среднем 8х109/л , СОЭ — 7 мм/час.
Однако, несмотря на легкость клинических проявлений, санация наступала поздно, на 2 -3 неделе заболевания, в то время как при моноинфекциях, вызванных аналогичными возбудителями, сроки санации в 85% отмечались в первые 5 -7 дней.
Среднетяжелые формы микстинфекций характеризовались многообразием клинических проявлений (табл. 7).
Таблица 7
Характеристика основных симптомов при различных степенях тяжести смешанной кишечной инфекции у детей
Длительность дисфункции кишечника была равна 23±4,4 дня, что превышает таковую у больных с моноинфекциями (Р < 0,001).
Симптомы интоксикации были выражены умеренно, но отмечались в 85,7% , что также превышает аналогичный показатель при моноинфекциях. Санация организма наступала медленно, пребывание в стационаре составило 27,1±2,1 дня. Дисбактериоз развивался в 28,6% .
Тяжелая форма микстинфекции развивалась преимущественно у детей первого полугодия жизни (50%), реже — у детей от 6 месяцев до 1 года (29%), среди детей старше года она отмечена только в 3% случаев.
Преобладали больные с сочетанием сальмонеллеза и дизентерии, у 7,8% больных выявлено 3 ассоцианта.
У всех больных заболевание начиналось остро, с повышения температуры до фебрильных цифр (71,7%), появления частого стула до 10-20 раз в сутки (табл. 7). Средняя продолжительность изменений стула составила 27,6±3,2 дня против 12,2±3,2 дня при дизентерии и 17,6± 2,3дня при сальмонеллезе. Симптомы интоксикации были выражены резко, но частота их не превышала таковую при моноинфекциях. Дегидратация наблюдалась достоверно чаще, чем при дизентерии и сальмонеллезе.
Изменения в копрограмме характеризовались в основном наличием слизи, лейкоцитов в большом количестве — 58,2% , реже — примеси крови (11,6%). Бактериовыделение было многократным и длительным более 30 дней в 52,8% . У большинства детей наблюдались изменения в моче (белок, лейкоциты, эритроциты). Дисбактериоз кишечника развивался у 52,8% больных, а среднее пребывание в стационаре составило 35,6±4,3 дня. Гепатомегалия отмечалась у 41,5% , а спленомегалия у 20,7% детей.
Таким образом, клинически смешанные инфекции протекали в основном в среднетяжелой и тяжелой формах с выраженной длительной дисфункцией кишечника и продолжительным бактериовыделением.
Сравнение статистических данных, полученных в результате изучения клинико-лабораторных показателей при моно- и микстсальмонеллезе, позволили отметить существование различия.
Степень выраженности симптомов интоксикации больше и в 4 -5 раз чаще встречалась при микстсальмонеллезе, чем при моноинфекции. Анализ клинических симптомов, связанных с поражением желудочно-кишечного тракта, при ассоциации сальмонелл с шигеллами показал, что синдром колита у детей встречался в 5 — 8 раз чаще, чем при моносальмонеллезе, отмечался гастроэнтерит, протекавший в виде тяжелой формы.
В оценке степени тяжести сальмонеллеза имеются противоречивые взгляды, и ряд исследователей отмечают эволюцию в сторону более легкого течения.
Описывая клинику сальмонеллеза, мы считаем, что чем моложе ребенок, тем тяжелее у него протекает сальмонеллез, тем чаще у него смешанная кишечная инфекция.
Клинической особенностью сальмонеллеза у детей при одновременном высеве сальмонелл и шигелл являлась выраженность нейротоксикоза и колитического синдрома.
Клинической иллюстрацией может явиться следующий случай:
Больной И., 3 мес. Заболел остро, появились беспокойство, слабость, срыгивание, затем повторная рвота, судороги. Температура повысилась до 39,8°С. Стул жидкий, 8 раз, зловонный, зеленый со слизью и прожилками крови, появился в конце первых суток болезни. В посеве кала до начала лечения выделены Salm. typhim urium группы В и Sh. flexneri 2а.
Госпитализирован в первый день болезни. Несмотря на своевременность и интенсивность лечения, состояние больного оставалось тяжелым в течение 5 суток. Ребенок оставался адинамичным, сохранялись лихорадка, рвота. Судороги не повторялись. Живот оставался вздутым; урчание, болезненность по ходу кишечника при пальпации. Печень +3 см, селезенка +2 см, сохранялся гемоколит, на 5-й день заболевания температура снизилась до субфебрильных цифр и нормализовалась на 12-й день заболевания.
Сочетанное выделение сальмонелл и шигелл было 2 раза в первые дни болезни. Полностью бактериовыделение прекратилось через 1,5 мес. В данном случае у больного симптомы интоксикации превалировали над кишечным синдромом, хотя и колитический синдром был выражен достаточно четко.
В качестве примера тяжелого течения гастроэнтероколита сальмонелезно-эшерихиозной этиологии может служить следующий случай.
Больная Р., 5 мес. Заболела остро. Через несколько часов после употребления молока появились многократная рвота, частый жидкий стул с примесью непереваренной пищи; температура оставалась нормальной. Госпитализирована на 4-й день заболевания в тяжелом состоянии с потерей веса до 8%. Беспокойна. Выражена жажда. Температура 39°С. Лицо осунувшееся, глаза, большой родничок запавшие. Кожа сухая. Тургор тканей снижен. Слизистые полости рта сухие, яркие, язык обложен белым налетом. Тоны сердца глухие, пульс ритмичный, слабого наполнения.
Живот вздут, болезненный при пальпации. Стул 9 — 11 раз в сутки, жидкий, обильный, с хлопьями слизи.
В посеве кала дважды выделена Salm. typhim urium гр. В и многократно ЭПКП-055. Серологические исследования в динамике показали нарастание титра антител к обоим возбудителям.
Под влиянием лечения симптомы интоксикации исчезли на 3-й неделе заболевания, к этому же времени нормализовался водно-электролитный обмен, больная прибавила в весе. Стул оформился к концу 4-й недели, бактериовыделение прекратилось к концу второго месяца. Заболевание осложнилось пневмонией.
Приведенный случай заболевания свидетельствует о том, что в патогенезе микстсальмонеллеза у детей раннего возраста имеет место нарушение водно-электролитного обмена, которое вместе с сопутствующими заболеваниями приводит к затяжному течению заболевания.
Для иллюстрации тяжелой формы смешанной кишечной инфекции эшерихиозно-шигеллезной этиологии представляется следующий случай.
Больной Р., 6 мес., поступил в стационар на 2-й день болезни с диагнозом дизентерия клинически.
Заболел остро. Повысилась температура до 38°С, стал вялым, рвота обильная после приема пищи и воды, стул до 10 раз, жидкий, водянистый, со слизью. На второй день заболевания отмечались кратковременные судороги клонико-тонического характера. Доставлен в стационар в тяжелом состоянии. Температура 39°С, повторная рвота, стул 14 раз, жидкий со слизью и прожилками крови. Большой родничок запавший, тургор тканей сохранен. Пульс до 140 удовлетворительного наполнения, ритмичный. Одышка до 50 в минуту, периоральный цианоз. В легких жесткое дыхание, хрипов нет. Живот вздут, мягкий. Печень, селезенка не пальпируются. Мочится редко, малыми порциями. В крови умеренный лейкоцитоз с нейтро-фильным сдвигом, ускоренная СОЭ. Изменения КЩР носили характер респираторно-метаболического ацидоза. Гематокрит повышен. При нормальных показателях натрия в сыворотке крови содержание калия снижено. В посевах кала при поступлении обнаружены ЭПКП-Ои1 и Sh. flexneri 1в.
На фоне лечения температура нормализовалась на 3 неделе, стул на 16 день заболевания. Общая длительность заболевания 35 дней.
Представленные данные дают основание относиться к смешанной кишечной инфекции, как к серьезной проблеме, которая требует определенного подхода в вопросах диагностики и соответствующего комплексного лечения.
Continue Reading
Источник
