Обратная транскрипция вируса гепатита с

[09-010]
HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]

1355 руб.

Молекулярно-генетическое исследование для определения генотипа вируса гепатита С.

Применяемый набор реагентов может быть использован для диагностики вируса гепатита С и наиболее распространенных на территории России генотипов HCV (1a, 1b, 2, 3a и 4) in vitro.

Синонимы русские

Вирус гепатита С (ВГС).

Синонимы английские

Hepatitis C Virus (HCV) Genotyping, HCV Subtype.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) способен поражать клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты). В основном инфекция передается через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже вероятно заражение половым путем.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остается невыявленным. У 60-85  % инфицированных развивается хроническая инфекция, которая увеличивает риск развития цирроза, печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы. За свое скрытое, но разрушительное действие инфекция получила неофициальное название «ласковый убийца».

ВГС обладает наибольшей вариабельностью среди всех возбудителей вирусных гепатитов и благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Геномы вируса значительно отличаются в разных странах мира и имеют различную чувствительность к препаратам интерферонов.

Существует 6 основных генотипов вируса гепатита С и около 500 субтипов. Наиболее распространен в мире генотип 1 (40-80  %). 1а тип часто выявляется в США, 1b характерен для Западной Европы и Южной Азии. Генотип 2 встречается с частотой 10-40  %. Генотип 3 распространен в Шотландии, Австралии, Индии и Пакистане. ВГС 4 типа характерен для Средней Азии и Северной Африки, генотип 5 – для Южной Африки, 6 – для некоторых стран Азии. В России преобладает генотип 1b, далее с убывающей частотой — 3, 1a, 2, в США – 1a/1b, 2b, и 3a.

Противовирусная терапия, направленная на подавление прогрессирования заболевания, в редких случаях может ускорить развитие осложнений со стороны печени. Это происходит при неправильной оценке клинических и лабораторных показателей. Генотипирование РНК вируса гепатита С позволяет спрогнозировать эффект от планируемой терапии.

Генотип 1 хуже поддается лечению, чем генотипы 2 и 3. Кроме того, биопсию печени важнее провести именно при генотипе 1. Повышенные дозы препаратов интерферона рекомендованы для пациентов с 1-м и 4-м генотипами. Курс терапии у таких пациентов должен быть продлен до 48 недель даже при отсутствии вируса в крови более 24 недель. В случае успешности лечения, которая подтверждается снижением вирусной нагрузки крови (

Генотипы 2 и 3 хорошо поддаются терапии в 80  % случаев, обычно это занимает 24 недели.

Лечение разрабатывается с учетом пола и возраста пациента, присутствующих у него симптомов, ранее проводимой терапии, структуры и функции печени, а также лабораторных показателей.

Для чего используется исследование?

• Чтобы определить необходимость лечения и спрогнозировать течение заболевания.
• Для планирования длительности противовирусной терапии и дозировки лекарств.
• Для прогнозирования эффективности лечения.
• Для принятия решения о биопсии печени.

Когда назначается исследование?

• При обнаружении РНК вируса гепатита С и планировании противовирусной терапии.

Что означают результаты?

Референсные значения: РНК HCV не обнаружена.

При обнаружении указывается генотип:

Что может влиять на результат?

• Генотип вируса гепатита С иногда не выявляется при концентрации вируса в крови менее 1,25*10^3 МЕ/мл.



Важные замечания

• Решение о длительности терапии, необходимой дозе препаратов и прекращении лечения может принять только лечащий врач на основании биохимических анализов функции печени, биопсии (при необходимости) и вирусной нагрузки.
• Существует вероятность повторного заражения вирусным гепатитом С другого генотипа из-за отсутствия перекрестного иммунного ответа и стойкого иммунитета.

Также рекомендуется

1. Anti-HCV, антитела, ИФА
2. Аnti-HCV, антитела
3. Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С
4. HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]
5. HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
6. Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
7. Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
8. Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
9. Фосфатаза щелочная общая
10. Альбумин в сыворотке
11. Билирубин общий
12. Холестерол общий
13. Тромбиновое время
14. Фибриноген
15. Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
16. Лейкоцитарная формула
17. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог.

Литература

• Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000 – Т.1.: 600-690.
• Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006 – 471-476 с.
• Germer J., Mandrekar J., and others. Hepatitis C Virus Genotypes in Clinical Specimens Tested at a National Reference Testing Laboratory in the United States. J Clin Microbiol. 2011 August; 49(8): 3040–3043. PMCID: PMC3147781.
• Kuzin S., Samokhvalov E., Zabotina E, and others. Hepatitis virus genotype structure in patients with chronic hepatitis C. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 2011 May-Jun;(3):33-8. PMID:21809642.
• Mahaney K, Tedeschi V, Maertens G, et al, “Genotypic Analysis of Hepatitis C Virus in American Patients,”Hepatology, 1994, 20(6):1405-11. PubMed 7982639.
• Paintsil E, Verevochkin SV, and others Hepatitis C virus infection among drug injectors in St Petersburg, Russia: social and molecular epidemiology of an endemic infection.Addiction. 2009 Nov;104(11):1881-90. Epub 2009 Aug 27. PMID:19712125.

Исследование для выявления вируса гепатита G (HGV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (РНК) вируса в образце крови.

Синонимы русские

Вирус гепатита G.

Синонимы английские

Hepatitis G Virus, RNA, Blood, HGV/GBV-C, GB virus C.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита G принадлежит к семейству Flaviviridae. Он был впервые описан в 1995 году. Несмотря на его активное изучение, данные о роли вируса в развитии заболеваний печени противоречивы. Это связано с тем, что HGV обычно обнаруживают в сочетании с другими вирусными гепатитами.

Существует 7 генотипов и множество субтипов вируса, распространенных в разных странах. РНК вирусов С и G идентичны на 27  %. Вирус неустойчив в окружающей среде и быстро погибает при кипячении.

Гепатит передается через кровь (татуирование, пирсинг, наркомания, переливание крови, гемодиализ), во время родов, а также половым путем. HGV нередко обнаруживают одновременно с вирусами гепатитов А, В и чаще всего с гепатитом С (около 20  % случаев). Его выявляют у пациентов с хроническим гепатитом, циррозом печени и гепатоцеллюлярной карциномой, но доказательств участия вируса в развитии этих патологий пока нет.

В некоторых научных исследованиях HGV рассматривается как «помощник» вируса гепатита С, ответственный за фульминантные (fulminantis, от лат. fulmen, fulminis – «молния» – молниеносные, внезапно и быстро развивающиеся) формы гепатита С. Существует мнение, что неэффективность лечения гепатита С обусловлена такими парными инфекциями (микст-гепатиты) и устойчивостью HGV к действию интерферона.

HGV чаще протекает в виде хронической инфекции или вирусоносительства.

РНК вируса можно обнаружить с первого дня и через 4-40 недель после инфицирования. Вирус не постоянно находится в кровотоке, и определить генетический материал HGV иногда можно только при повторных анализах.

При выздоровлении в крови появляются анти-Е2-антитела – антитела к оболочечному антигену вируса гепатита G. Но их определение в практической медицине не используется.

Основным методом выявления вируса гепатита G является ПЦР.

Для чего используется исследование?

• Для дифференциальной диагностики гепатитов.
• Для исследования микст-гепатитов.
• Для выявления носителей вирусного гепатита G.

Когда назначается исследование?

• При обследовании людей из группы риска (пациентов на гемодиализе, больных гемофилией, наркоманов и лиц, контактирующих с ними).
• При обнаружении вирусного гепатита С.
• При обследовании пациентов с гепатитами неясного происхождения.

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

Причины положительного результата

• Вирусный гепатит G.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие вируса гепатита G в крови исследуемого.



Важные замечания

Вирус гепатита G может быть обнаружен в крови и при этом отсутствовать в ткани печени. Это связано со склонностью вируса поражать больше клетки периферической крови, чем гепатоциты.

Также рекомендуется

• HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]
• HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
• HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
• HBV, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• HDV, РНК [ПЦР]
• HIV 1, 2 Ag/Ab Combo (определение антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена p24)
• Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
• Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
• Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
• Фосфатаза щелочная общая
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Лейкоцитарная формула

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог.

Литература

• Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006 – 328-329 с.
• Bhattarai N, Stapleton JT. GB virus C: the good boy virus? Trends Microbiol. 2012 Feb 8. PMID: 22325031
• Feng Y, Zhao W, Feng Y, Dai J and others. A novel genotype of GB virus C: its identification and predominance among injecting drug users in Yunnan, China. PLoS One. 2011;6(10):e21151. Epub 2011 Oct 6. PMID:21998624
• Giret MT, Kallas EG. GBV-C: State of the Art and Future Prospects. Curr HIV/AIDS Rep. 2012 Mar;9(1):26-33. PMID:22246585
• Silva SA, Rodrigues CL, Campos AF, Levi JE. Evaluation of GBV-C / HVG viremia in HIV-infected women. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2012 Feb;54(1):31-5. PMID:22370751
• Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000 – Т.1.: 667-669 с.

Возбудитель — вирус гепатита С (HCV) — отнесен к семейству Flaviviridae, род Hepacаvirus. Вирион мелкий (30—38 нм в диаметре), РНК-содержащий, имеет суперкапсид, чувствителен к хлороформу. Вирус гепатита С отличается высокой склонностью к мутациям. «Зрелые» HCV-белки —три структурных (они включаются в состав вириона) и четыре неструктурных (не входят в состав вириона, участвуя на этапе внутриклеточной репликации вируса).

Геном представлен одноцепочечной плюс-РНК. На 5′-конце РНК расположен терминальный участок, который имеет почти одинаковую последовательность нуклеотидов у всех штаммов вируса (более 90% гомологии). Этот фрагмент высоко консервативен, что делает его универсальной мишенью для выявления HCV-PHK в полимеразной цепной реакции. Относительным постоянством нуклеотидного состава отличаются С- и NS3-yчастки генома. Это определяет использование кодируемых ими антигенов при изготовлении диагностических тест-систем для иммуноферментного анализа.

Эпидемиология и клиника. Источником инфекции является только человек. Распространение вируса происходит трансфузионно при переливании крови и ее препаратов или инструментальным путем в результате занесения зараженной вирусом крови в организм здоровых

людей, а также от матери плоду. Восприимчивость населения к HCV очень высокая. Вирус выделяется от больных в течение одной или нескольких недель до появления признаков болезни и до 10 нед. после начала болезни. Инкубационный период по сравнению с гепатитом В короче примерно на один месяц и составляет в среднем 6-8 нед. Клиническая картина сходна с таковой при гепатите В, однако заболевание протекает легче и характеризуется относительно быстрым выздоровлением, нередко оно протекает без желтухи; последняя наблюдается примерно у 25% больных.

Несмотря на относительно благоприятное течение, около 50% всех форм инфекции приводят к формированию хронического гепатита, а около 20% хронических поражений печени заканчивается циррозом и раком. Наряду с вирусом гепатита В, вирус гепатита С является одной из главных причин рака печени.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: кровь, биоптаты печени. HCV-инфекция сопровождается длительной вирусемией но вирус гепатита С может быть обнаружен в крови только по РНК, так как уровень вирионных частиц и вирусных антигенов ниже порога чувствительности современных иммунохимических реакций. Поэтому главным диагностическим критерием являются антитела, содержание которых в крови достаточно хорошо коррелирует с персистенцией вируса в гепатоцитах и вирусемией. «Золотым стандартом» служит обнаружение вирусспецифических РНК — последовательностей, амплифицированных после

обратной транскрипции при помощи ПЦР.

Антитела(АНТИ-HCV)

Диагностические тесты прошли трехэтапную эволюцию. В системах двух первых поколений антигенами служили рекомбинантные HCV-пептиды; в тестах 3-го поколения часть из них заменена на синтетические пептиды и их эпитопные фрагменты. Скрининговые тесты. Системы ИФА-3, сконструированные на основе сердцевинного

(С22) и неструктурных (NS3-NS5) пептидов, отличаются повышенной чувствительностью, специфичностью и выявляют антитела на более ранних этапах инфекции. Скринирование донорской крови при помощи ИФА-3 практически исключает передачу вируса гепатита С

реципиентам.

Подтверждающие тесты. Для подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С в образцах сыворотки с первично положительным результатом ИФА проводится постановка иммуноблоттинга с использованием рекомбинантных антигенов или синтетических пептидов.

Результат считается положительным при выявлении антител к двум и более антигенам. Антитела к вирусу гепатита С впервые могут быть обнаружены через 10-14 дней после начала заболевания. В первую очередь определяются атитела класса М к структурному белку С .

HCV-PHK

Поскольку геном ВГС представлен одноцепочечной РНК, то на начальном этапе анализа с помощью реакции обратной транскрипции (ОТ) получают комплементарную ДНК (кДНК), которая в дальнейшем служит матрицей в ПЦР. Вирусная РНК определяется в сыворотке крови больных гепатитом С через 1-2 недели после заражения. Наличие в крови вирусной РНК служит маркером репликации вируса.