Общая схема микробиологической диагностики острых кишечных инфекций

К ОКИ относятся: эшерихиозы, вызываемые условно-патогенными и патогенными (энтеропатогенными, энтерогеморрагическими, энтероинвазивными и энтеротоксигенными) кишечными палочками, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллезы, дизентерия, кишечные клебсиеллезы и кишечные иерсиниозы.

Методы их микробиологической диагностики включают следующие принципы:

1. Микроскопический метод диагностики, как правило, не приемлем, так как патогенные и непатогенные энтеробактерии имеют общие морфологические характеристики.

2. Для диагностики применяют бактериологический и серологический методы. Выбор метода диагностики зависит от клинических проявлений, места локализации возбудителя и фазы патогенеза болезни

Бактериологическая диагностика.

1. Забор материала. Характер материала зависит от первичной или вторичной локализации микроба-возбудителя. Если материалом служат испражнения, что чаще всего бывает, то их берут до начала или после суточного перерыва в антибактериальной терапии. Материал лучше забирать ректальной трубкой, тампоном со стерильной пеленки или стерильной пергаментной бумаги, специальным устройством для забора фекалий (ни в коем случае не допуская его контакта с дезинфектантами). Если материалом служит кровь, то забирают 10,0 мл крови из вены локтевого сгиба.

2. Транспортировка материала осуществляется медицинским работником в системе “стекло, металл” в течение не более трех часов после его забора или в консерванте с сопровождающими документами.

3. Питательные среды, используемые для бактериологического исследования, можно подразделить на три группы:

А) среды обогащения, создающие условия преимущественного размножения выделяемого возбудителя и основанные либо на принципе наличия в среде факторов активации роста данного микроба, либо на принципе подавления роста сопутствующих микробов-антагонистов. Первой группе соответствует среда Рапопорт, второй – селенитовая, магниевая, Мюллера, с пенициллином и т. д.;

Б) средь/ дифференциально-диагностические – плотные питательные среды, содержащие дифференцирующий углевод – лактозу и индикатор. Кишечные палочки, разлагающие лактозу (лактозоположительные), растут в виде окрашенных колоний в зависимости от типа среды – в малиново-красный и розовый (среда Эндо, Плоскирева) или темно-синий (среда Левина) цвет. Клебсиеллы пневмонии разлагают лактозу в среде с индикатором бромтимоловым синим и образуют колонии желтого цвета, в то время как колонии лактозоотрицательных биоваров формируют колонии цвета среды. Сальмонеллы и шигеллы на средах Эндо, Левина, Плоскирева также не разлагают лактозу и дают бесцветные колонии;

В) среды накопления чистой культуры. Чаще применяется среда Олькеницкого (трехсахарный агар). Она состоит из столбика, скошенной части и включает лактозу, глюкозу и сахарозу, индикатор, реагенты для определения сероводорода и уреазы. Посев производят уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенной части. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза – на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды. При образовании газа – формируются пузырьки и разрывы в среде, при продукции сероводорода – наблюдается почернение по ходу укола, при продукции уреазы – изменение цвета среды на оранжевый.

4. Идентификация выделенных культур основана на определении:

Общего для семейства признака – грам – палочки;

Наличия капсулы (у клебсиелл);

Цвета колоний на чашечных средах;

Подвижности (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы неподвижны);

Биохимических свойств;

Антигенной структуры;

Чувствительности к антибактериальным препаратам;

Чувствительности к бактериофагам.

Антигенную  структуру определяют по предварительному установлению серогруппы, чаще с монорецепторными адсорбированными сыворотками, а затем серовара тоже с адсорбированными сыворотками.

Серологическая диагностика: начинается с получения сывороток от больных. В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации, гемагглютинации,  латекс-агглютинации или РСК. Диагноз основан на обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител в динамике болезни.

Источник

Характеристика семейства энтеробактерии

Семейство Enterobakteriaceae включает в себя многочисленных представителей, имеющих общее местообитание — кишечник. Энтеробактерии делят на:

1) патогенные (шигеллы, сальмонеллы, эшерихии, иерсинии и др.);

2) условно-патогенные (37 родов).

Все патогенные энтеробактерии могут вызывать у человека острые кишечные инфекции, условно-патогенные — гнойно-вос­палительные заболевания и пищевые токсикоинфекции.

Энтеробактерии— грамотрицательные палочки средней ве­личины с закругленными концами, располагающиеся беспорядоч­но. Одни из них подвижны за счет жгутиков, другие неподвижны. Являются факультативными анаэробами.

Они нетребовательны к питательным средам. На мясопептонном агаре образуют однотипные колонии средней величины, круглые, гладкие, выпуклые, блестящие, бесцветные. В мясопептонном бульоне рост дает равномерное помутнение.

Биохимические тесты общие для всего семейства. На основании этих тестов семейство энтеробактерии дифференцируют от других, сходных по морфологии.

Все энтеробактерии:

1) ферментируют глюкозу до кислоты или до кислоты и газа;

2) редуцируют нитраты в нитриты;

3) каталаза +, оксидаза -, OF-тест ++.

Антигены энтеробактерии состоят из:

1) О-антигена, который локализуется в клеточной стенке. По хи­мической природе это глюцидолипоидный комплекс;

2) К-антигена (это поверхностный, капсульный антиген);

3) Н-антигена (термолабильного, жгутикового); его имеют подвижные энтеробактерии;

4) пилифимбриального антигена; он есть у бактерий, имеющих ворсинки, пили, фимбрии.

Классификация энтеробактерии

Читайте также:  Антибиотики от кишечной инфекции отзывы

Классификация энтеробактерии основана на их биохимиче­ских свойствах. Согласно классификации Берджи семейство энтеробактерии делится на 40 родов, роды — на виды. В ряде случаев возможна внутривидовая дифференциация на:

1) ферментовары;

2) серогруппы и серовары;

3) фаговары;

4) колециновары.

Эта дифференциация необходима для эпидемиологического анализа, т. е. для установления источника и путей распростране­ния инфекции.

Кишечная инфекция— результат взаимодействия возбудителя с соответствующими структурами макроорганизма при необходимых условиях внешней среды. Этот процесс состоит из нескольких фаз:

1) адгезии;

2) инвазии;

3) колонизации;

4) продукции экзо- и энтеротоксинов. ,

Адгезия— обязательное условие возникновения любого инфек­ционного процесса. Разные энтеробактерии обладают тропизмом только к определенным эпителиальным клеткам, поэтому прикрепля­ются только на определенном уровне ЖКТ. Адгезия идет в два этапа:

1) неспецифическая адгезия (приближение);

2) специфическая адгезия (в результате лиганд-специфического взаимодействия соответствующих структур энтеробак­терий (ворсинок, фимбрий) и рецепторов плазмолеммы эпите­лиальных клеток).

Инвазия— проникновение бактерий в эпителиальные клетки с размножением или без него.

Инвазия, колонизация и продукция токсинов в разной степени выражены у разных энтеробактерий, поэтому патогенез и клини­ка кишечных инфекций существенно различаются.

Рис. Колонии кишечной палочки на питательной среде

Эшерихии

Род Escherihia включает в себя семь видов. Наибольшее значение имеет вид Е. coli, которые по патогенности делят на:

1) патогенные (диарейные);

2) условно-патогенные (входят в состав нормальной микро­
флоры кишечника).Они подвижны, капсул не образуют. Биохимические свойства:

1) ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа;

2) ферментируют лактат.
Антигенное строение:

1) по О-антигену делятся на серогруппы (более 160);

2) большинство имеют К-АГ и Н-АГ.

Заболевания, вызываемые эшерихиями, делят на две группы:

1) эндогенные колиинфекции; вызываются собственной ки­шечной палочкой, которая при снижении иммунологической реактивности вызывает гнойно-воспалительные заболевания;

2) экзогенные колиинфекции — эшерихиозы. Это типичные кишечные инфекции, вызываются только патогенными Е. coli, попавшими в организм извне. Основной источник — человек.
Патогенные Е. coll делят на четыре основных класса.

1. ЕТЕС — энтеротоксигенные эшерихии коли. Обладают тро­пизмом к эпителию тонкого кишечника. Попав в организм, они прикрепляются к рецепторам мембран энтероцитов. У них есть СФ-фактор колонизации, за счет которого они заселяют эпите­лиальные клетки тонкого кишечника. Внутрь клеток они не про­никают, и воспаление не развивается.

Они продуцируют экзоэнтеротоксин, синтез которого кодиру­ется плазмидой. Этот токсин состоит из:

1) ЛТ-термолабильной фракции;

2) СТ-термостабилыюй фракции.

Токсин обладает цитотоническим действием. В результате его воздействия нарушается процесс энтеросорбции, что ведет к раз­витию диарейного синдрома. Клинически заболевание протекает как легкая форма холеры.

2.Е1ЕС — энтероинвазивные эшерихии коли. Обладают тро­пизмом к эпителиальным клеткам толстого кишечника. Факторами их вирулентности являются наличие на поверхности клеточ­ной стенки белков наружной мембраны, способность к инвазии и внутриклеточному размножению. Размножение бактерий при­водит к гибели клетки. На месте погибших клеток образуются яз­вы и эрозия, окруженные воспалением.

3.ЕРЕС — энтеропатогенные эшерихии коли. Вызывают энте­роколиты у детей до года. Поражается эпителий тонкого кишеч­ника. Фактор вирулентности — способность к ограниченной ин­вазии.

4. ЕНЕС — энтерогеморрагические эшерихии коли. Обладаю тропизмом к эпителиальным клеткам толстого кишечника. Фактор вирулентности — продукция двух типов шигоподобных токсинов (SLT). Вызывают гемоколит.

Основной метод диагностики — бактериологическое исследование.

Необходимо определить:

1) принадлежность выделенной культуры Е. coli к патогенной серогруппе (реакции агглютинации и преципитации);

2) наличие токсина (с помощью иммуноферментного анализа
(ИФА)), если выделенная структура принадлежит к серогруппе ЕТЕС;

3) наличие белков наружной мембраны (ИФА), если выделенная структура принадлежит к серогруппе EIEC;

4) особое белковое вещество, общее для всей группы (ИФА), —у группы ЕРЕС;

5) наличие SLT (ИФА) — у ЕНЕС.
Специфической профилактики нет.

Лечение: антибиотики.

Рис. Электронная микроскопия кишечной палочки.

Шигеллы

Относятся к роду Shigella.

Являются возбудителями дизентерии. Морфология такая же. как и у других представителей семейства энтеробактерии. Неподвижны, капсул не образуют.

Хорошо растут на простых питательных средах. На среде Эндо образуют бесцветные колонии.

Род включает в себя четыре вида, различающихся по биохими­ческим свойствам (способности ферментировать маннит и лакто зу) и антигенному строению:

1) Sh. disenteriae; не ферментируют лактозу и маннит; по ан­тигенным свойствам внутри вида делятся на 12 сероваров. один из них — шигелла Григорьева—Шига — самый патоген­ный;

2) Sh. flexneri; ферментирует только маннит; по антигенным свойствам делится на 6 сероваров, которые делятся на подсеровары;

3) Sh. boydii; ферментирует только маннит; по антигенному, строению делится на 18 сероваров;

4) Sh. sonnei; ферментирует только лактозу; в антигенном от­ношении вид однороден, внутри вида выделяют ферментовары, фаговары, колециновары.

Шигеллы, минуя желудок и тонкий кишечник, попадают в толстый кишечник. Прикрепляются к рецепторам мембран колоноцитов и проникают внутрь с помощью белка наружной мемб­раны. Гибель клеток приводит к образованию эрозий и язв, окруженных перифокальным воспалением.

Читайте также:  Кишечной инфекцией в поезде

Факторы патогенности:

1) белки наружной мембраны (обеспечивают способность к инвазии и внутриклеточному размножению);

2) контактный гемолизин (способствует лизису мембран вакуолей клетки);

3) экзотоксин (обладает энтеротропным, цито- и нейротоксическим действием);

4) эндотоксин (оказывает на организм общетоксическое дей­ствие и предохраняет попавшие в организм шигеллы от дей­ствия защитных сил макроорганизма).

Различают три клинические формы дизентерии, которые отли­чаются по возбудителям, эпидемиологии и частично по клинике:

1) дизентерия Григорьева—Шига. Возбудитель — Sh. disente­riae, серовар — шигелла Григорьева—Шига. Пути переда­чи — алиментарный, контактно-бытовой. Особенности клини­ки: протекает тяжело, характерен жидкий стул с кровью,
симптомы поражения ЦНС, может быть бактериемия;

2) дизентерия Флекснера. Возбудители — Sh. flexneri и Sh. boy­dii. Путь передачи водный. Особенности клиники: протекает как типичная дизентерия различной степени тяжести;

3) дизентерия Sonnei. Путь передачи пищевой. Особенности клиники: могут быть симптомы пищевой токсикоинфекции, рвота.

Диагностика:

1) бактериологическое исследование;

2) иммуноиндикация (ИФА);

3) серодиагностика (имеет ретроспективное значение).
Специфическая профилактика: дизентерийный бактериофаг

(применяется в очагах инфекции).

Этиотропная терапия: в среднетяжелой и тяжелой степени за­болевания назначаются антибиотики (те, которые выводятся ки­шечником) с учетом чувствительности возбудителя.

Сальмонеллы

Род Salmonella включает в себя более 2500 сероваров.

Морфология сходна с другими представителями семейства. Бактерии подвижны, спор и капсул не образуют.

Хорошо растут на простых питательных средах. Образуют не­большие прозрачные колонии.

Биохимические свойства:

1) ферментируют углеводы до кислоты и газа;

2) лактозу не разлагают;

3) дезаминируют и декарбоксилируют некоторые аминокис­лоты.

По биохимическим различиям род делится на шесть групп. Антигенная структура:

1) О-антиген. По его строению сальмонеллы делятся на 65 серогрупп;

2) Н-антиген. По его строению внутри серогруппы сальмонеллы делятся на серовары.

У человека сальмонеллы могут вызывать две группы заболе­ваний:

1) антропоонозные — брюшной тиф и паратиф А и В; возбуди­тели: S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi В;

2) зооантропоонозные — сальмонеллезы; возбудители: S. typhimurium, S. haifa, S. anatum, S. panama, S. infantis.
Брюшной тиф и паратиф А и В объединены в одну группу тифопаратифозных заболеваний — из-за общего возбудителя, клиники, патогенеза. Источник инфекции — больной (или бакте­рионоситель).

Заболевание включает в себя пять фаз (патогенез).

1. Фаза внедрения возбудителя в организм, прикрепления его к рецепторам мембран энтероцитов и проникновения внутрь кле­ток (соответствует инкубационному периоду болезни).

2. Фаза первичной локализации: сальмонеллы проникают в лимфатический аппарат тонкого кишечника, сенсибилизируют его, размножаются в макрофагах; это сопровождается гибелью микроорганизмов и выделением эндотоксина, который попадает в кровь и вызывает эндотоксинемию (соответствует продромальному периоду).

3. Фаза бактериемии: возбудитель прорывает лимфатический барьер и попадает в кровь, распространяясь по всем паренхима­тозным органам (начало болезни).

4. Фаза вторичной локализации: в паренхиматозных органах возникают брюшнотифозные гранулемы (разгар болезни).

5. Фаза выделительно-аллергическая: повторный контакт воз­будителя с первично-сенсибилизированным лимфатическим аппа­ратом тонкого кишечника; образуются язвы на слизистой обо­лочке.

Исход болезни может быть различным:

1) выздоровление;

2) формирование носительства;

3) летальный.

Диагностика тифо-паратифозных заболеваний:

1) в фазу бактериемии — кровь на гемокультуру (РПГА),
если есть сыпь — соскоб с розеол;

2) в фазу реконвалесценции — бактериологическое исследо­вание фекалий, мочи, желчи;

3) для выявления носительства — серологическое исследование.
Этиотропная терапия: антибиотики с учетом чувствительности возбудителя.

Специфическая профилактика: убитая брюшнотифозная вак­цина.

Вторая группа заболеваний — сальмонеллезы — характеризу­ется многообразием клинических проявлений. Источники инфек­ции — больные животные, инфицированные продукты питания. Путь заражения алиментарный. Чаще всего сальмонеллез проте­кает как пищевая токсикоинфекция. При этом сальмонеллы пора­жают энтероциты тонкого кишечника и фиксируются в его лим­фатическом аппарате. При прорыве лимфатического барьера развивается бактериемия, происходит разнос возбудителя по раз­личным органам, регистрируются внекишечные формы сальмонеллеза.

5. Иерсинии

Род Yersinia содержит семь видов, из которых патогенными для человека являются Y. pestis (возбудитель чумы), Y. pseudotuber-culesis (возбудитель псевдотуберкулеза), Y. enterocolitica — воз­будитель острых кишечных инфекций, кишечного иерсиниоза.

Y. enterocolitica — это грамотрицательные подвижные палоч­ки, не образующие спор и капсул. Культивируются на простых питательных средах при температуре 20—26 °С.

Ситауционные Задачи:

1. У 2-х летнего ребенка высокая температура, понос, резко выраженная интоксикация. Как надо провести бактериологическое исследование для постановки диагноза?

2. При проведении бактериологического исследования испражнений больного с клиническим диагнозом — колиэнтерит, на чашках со средой Эндо выросли колонии красного цвета типичные для кишечной палочки. Как решить вопрос патогенные это кишечные палочки или нет?

3. Выздоравливающий больной (10-й день заболевания), перенес заболевание, выразившееся в появлении болей в животе, рвоте, поносе, высокой температуре, появившихся через 4 часа после приема пищи. Клинический диагноз — пищевая токсикоинфекция, пищевой сальмонеллез. Как подтвердить клинический диагноз?

Читайте также:  Запрещенными продуктами в остром периоде кишечных инфекций являются

Источник

Вопросы
для самоподготовки:

1.
Энтеропатогенные ки­шечные
палочки. Диагностика колиэнтеритов.

2.
Сальмонеллы — возбудители брюшного
тифа и паратифов, их свойства Патогенез
брюшного
тифа. Микробиологическая диагностика
брюшного тифа и пара­тифов.
Лечение и профилактика.

3.
Сальмонеллы — возбудители гастроэнтероколитов.
Микробиологиче­ская
диагностика гастроэнтероколитов.

4.
Шигеллы. Свойства и классификация
возбудителей дизентерии. Микро­биологическая
диагностика дизентерии.

5.

Холерный вибрион и его свойства. Патогенез
и клиника холеры. Этапы микробиологичекой
диагностики холеры.

6.
Характеристика возбудителей ботулизма.
Микробиологическая диагности­ка
ботулизма.

Теоретический материал для самоподготовки

Вопрос 1. Эшерихии (род Escherichia)

Типовой
вид — E.coli, имеет наибольшее значение в
медицине. Заболевания, вызываемые
E.coli, называются эшерихиозами.

Морфологические
признаки:
E.coli
— мелкие палочки с закругленными концами,
грамотрицательные, спор не образуют,
перитрихи. Некоторые штаммы имеют
микрокапсулу.

Общая схема микробиологической диагностики острых кишечных инфекцийОбщая схема микробиологической диагностики острых кишечных инфекций

Чистая
культура E.coli.
Колонии кишечной палочки
на среде Эндо.

Окраска
по Граму.

Культуральные
признаки:
E.coli
– факультутативный анаэроб, хорошо
растет на простых питательных средах,
давая на жидких – помутнение, на плотных
– выпуклые колонии серого цвета S-
или R-типа.
Элективной средой является среда Эндо,
на которой E.coli
образует красные
колонии с металлическим блеском.

Антигенная
структура:
E.coli
имеет:


соматический О-антиген (имеет более 170
вариантов), который определяет серогруппу,


поверхностный К-антиген, который по
чувствительности к температуре
подразделяется на А, В и L-
фракции (чаще преобладает В-фракция),
К-антиген имеет более 100 вариантов,


Н-антиген имеет более 50 вариантов,
определяет серовар.

Штаммы
E.coli, отличающиеся по антигенам (антигенной
формуле), называются сероварами
(серотипами). Например, штамм О55:К5:H21
относится к серогруппе О55.

Биохимические
признаки.
Наиболее
важным признаком E.coli является ее
способность ферментировать лактозу.
Дифференциально-диагностические
признаки E.coli:


ферментация глюкозы с образованием
кислоты и газа,

продукция
индола и неспособность образовывать
сероводород.

По
антигенным и токсигенным свойствам
возбудителей разделяют на условно-патогенные
и патогенные кишечные палочки:


условно-патогенные
кишечные палочки

— комменсалы (представители нормальной
микрофлоры кишки), возбудители
оппортунистических инфекций (парентеральных
эшерихиозов) в виде сепсиса, перитонита,
цистита т.д.; —


патогенные,
или диареегенные кишечные палочки

— вызывают энтеральные эшерихиозы
(гастроэнтериты, колиты и др.).

Заболевания,
вызываемые диареегенными Escherichia coli:

1.
Энтеротоксигенные кишечные палочки
(ЭТКП
)
факторы
патогенности: пили, факторы колонизации
(
CF),
термолабильный (
LT
= аналог холерного токсина) и термостабильный
(
ST)
токсины.

Поражается тонкая кишка . Заболевания
— диарея путешественников, холероподобная
диарея у детей и взрослых.

2.
Энтероинвазивные кишечные палочки
(ЭИКП
)

факторы
патогенности

:
факторы инвазии — поверхностные белки
,
кодируемые большой плазмидой, определяющие
ивазию ЭИКП в клетки эпителия толстой
кишки с последующим разрушением
эпителия. Вызывают дизентериеподобное
заболевание (стул с небольшой примесью
крови).

3.
Энтеропатогенные кишечные палочки
(ЭПКП)
,
разрушающие микроворсинки и повреждающие
апикальную часть эпителия тонкой кишки.
Факторы
патогенности —
белок-адгезин
наружной мембраны
,
кодируемый плазмидой, и белок
наружной мембраны интимин
,
кодируемый хромосомным геном. Вызывают
диарею у детей 1 года жизни.

4.
Энтерогеморрагические кишечные палочки
(ЭГКП
,
например, E. coli О157:Н7) с преобладанием
геморрагического фактора, вызывающего
гемолитический уремический синдром.
Поражается толстая кишка . Факторы
патогенности: пили, шигаподобные токсины
(SLT
I,SLT II; веротоксины), разрушающие эндотелий
мелких кровеносных сосудов; белок
наружной мембраны интимин,

кодируемый хромосомным геном. Вызывают
геморрагический колит(диарея с примесью
крови); гемолитико-уремический синдром.

5.
Энтероаггрегирующие кишечные палочки
(ЭАГКП
)
с персистенцией, вызывают тяжелое
обезвоживание детей. Аггрегируют на
культуре клеток Нер-2. Поражается тонкая
кишка . Механизм поражения:
плазмидоопосредованное аггрегативное
прикрепление, предупреждающее абсорбцию
жидкости . Вызывают диарею у детей.

Микробиологическая
диагностика
.

Основной
метод — бактериологический. Материал
засевают на среду Эндо. Выбирают не
менее 10 колоний красного цвета с
металлическим блеском и ставят реакцию
агглютинации на стекле с О-сыворотками.
Определяют вид чистой культуры
(грамотрицательные палочки,
оксидазоотрицательные, ферментирующие
глюкозу и лактозу до кислоты и газа,
образующие индол, не образующие H2
S) и принадлежность к серогруппе, что
позволяет отличить условно-патогенные
кишечные палочки от диареегенных.
Внутривидовая идентификация, имеющая
эпидемиологическое значение, заключается
в определении серовара с помощью
диагностических адсорбированных
иммунных сывороток.

Лечение.

Для
лечения применяют антибиотики
тетрациклинового ряда, цефалоспорины
последних поколений, фторхинолон,
хлорамфеникол, для предупреждения
развития грибков в ЖКТ параллельно
назначают антимикотики, например,
нистатин; при непереносимости антибиотиков
или детям до года назначают коли-протейный
бактериофаг. Для восстановления
нормальной микрофлоры ЖКТ после
применения антибиотиков или одновременно
с ними рекомендуется назначать эубиотики:
бифидумбактерин, лактобактерин,
колибактерин и др.

Профилактика.

Специфической
профилактики нет. В экстренных случаях
всем контактировавшим с больным назначают
коли-протейный бактериофаг и эубиотики:
бифидумбактерин, лактобактерин,
колибактерин и др.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #

Источник