Ошибочный анализ пцр гепатита с

Специфические лабораторные методы применяются для диагностики гепатита С. К ним относятся иммунохимические, молекулярно-биологические анализы распознавания РНК-содержащего вируса (ВГС).

Интерпретация полученных данных зависит от:

1. Чувствительности применяемого метода. Это способ определения минимального компонента в величине разведения — антител, антигенов, нуклеиновых кислот. Выражается в количественных единицах — титрах.
2. Специфичности конкретного метода, способного выявить ВГС и антитела к нему

Цель работника лаборатории заключается в разграничении ложноположительных анализов на гепатит С и обнаружение вируса и антител к нему.

Анализы на гепатит С

Постановка диагноза HСV-инфекции происходит с помощью вирусологических (ПЦР) и серологических тестов (ИФА).Симптоматика острой фазы заболевания практически отсутствует, но уже в первые 7-14 дней после инфицирования диагностировать этот период гепатита С можно при обнаружении РНК методом ПЦР.

Применение ИФА в этой стадии не результативно, так как антитела вырабатываются через несколько недель. Изобретение тестовых систем 3 поколения способствует определению IgM в ранние сроки. Метод используют в лабораториях, но он не отвечает целям полной диагностики и оценки эффективности лечения.

ИФА

Метод иммуноферментного анализа разработан в трех вариантах: иммуноферментный, радиоиммунный, флюороиммунный. Востребован твердофазный ИФА. В постановке реакции он прост, высокочувствителен и относительно не дорог.

В зависимости от агента, который определяют – антиген или антитело, ИФА представляет разную ценность в диагностике. Верные результаты получаются при выявлении вирусных антигенов. Это также не является критерием постановки диагноза, так как часть антигенов расположена только в печеночной ткани и в крови обнаружить их не возможно. Поэтому нужно применять ИФА с определением сразу двух видов вирусных антигенов.

При обнаружении антител к ВГС нельзя говорить о присутствии вируса. Выявлены случаи когда анализ ИФА оказывается ложноположительным у обследуемого. Это указывает на иммунологическую память ранее присутствующего вируса в организме.

В проведенных исследованиях 957 проб с положительным ИФА потребовались другие арбитражные методы — ПЦР. В итоге у 36,6% РНК не обнаружилось, что свидетельствует о получении ложноположительного ответа.

Разработанные за последнее десятилетие новые тестовые системы способны одновременно определять антитела и антигены к вирусу гепатита С.

ПЦР

Этот метод детекции — полимеразная цепная реакция, создан для обнаружения вирусной РНК в образце сыворотки крови. Исследование заключается в многоцикловом процессе, который состоит из переходящих друг в друга этапов.

С помощью применения обратной транскриптазы (фермента) образуются молекулы ДНК вируса гепатита С. Итоговый результат — выделение вирусной рибонуклеиновой кислоты. Количественный вариант ПЦР используют для определения концентрации РНК. Исследуется количество копий в 1 мл. Выражается в логарифмических выражениях (log10).

Для прогнозирования эффективности лечения важным является выяснение принадлежности гепатита С к генотипу. В проведении генотипирования используют типоспецифические праймеры, в методах основанных на методике ПЦР.

Чувствительным методом определения нуклеиновых кислот считается «ПЦР в реальном времени». С помощью этого метода получают результат в ходе реакции даже при малом количестве нуклеиновых кислот. Полученные показатели с высокой точностью определяют уровень вирусной нагрузки.

Может ли анализ на гепатит С быть ошибочным?

На сегодня по-прежнему остается шанс получения ложноположительного результата на наличие анти-ВГС. При определенных обстоятельствах искаженные данные получаются при проведении ИФА и ПЦР.

Доля ошибочных ложноположительных результатов составляет 10-20%.

Для уточнения нахождения вируса в крови обследуемого человека применяют метод обнаружения РНК совместно с другими чувствительными методами. Однако получение отрицательного ответа не свидетельствует о ложноположительном ответе. В случаях полного выздоровления пациентов (10-15%) в крови возможно присутствие анти-ВГС.

Получение ложноположительного результата зависит от естественных причин:

• появление мутантных штаммов;
• репродукции антител и антигенов возбудителя.

Причины ложноположительного анализа

Ошибочный анализ регистрируется в виде ложнонегативных и ложнопозитивных результатов.

Ложноположительный ответ получается при:

• смешении исследуемого образца с предыдущим через лабораторное оборудование или аэрозоли;
• соединение между пробами при работе с реакционной смесью.

Ложноотрицательные ответы определения РНК получаются при:

• нарушениях правил перевозки клинических образцов;
• несоблюдении теплового режима образцов крови;
• распад РНК при подготовке к пробе;
• поэтапное прохождение ПЦР нарушает гепарин и высокий уровень криоглобулинов;
• присутствие в сыворотке белковых, химических субстанций.

Распространенные причины ошибок анализов связаны с:

• иммунодефицитными состояниями;
• онкологией;
• аутоиммунными заболеваниями (синдром Рейно, полинейропатия, узелковый периартериит и другие);
• поражениями системы крови (тромбоцитопения, гемолитическая анемия);
• глистными инвазиями;
• сифилисом.

Человеческий фактор

Ошибка в анализе возможна с учетом действия работников, участвующих в процессе, с процедурного кабинета и до клинической лаборатории.

Человеческий фактор возможен при:

• нарушении нумерации пробирок в момент забора крови;
• указании ошибочного ответа;
• неправильных действиях лаборанта в ходе подготовки образца;
• проведении пробы в условиях повышенной комнатной температуры;
• неопытности молодого специалиста;
• изготовлении некачественных диагностических препаратов.

Моментом, который способен искажать данные исследований является алкоголь. Это своеобразный антидепрессант, который воздействует на диагностику гепатита С. У пьющих людей с хронической формой выявляться HCV РНК при отсутствии антител и наоборот.

Ложноположительный результат у беременных

Установленный гепатит С ложноположительный у беременной женщины может быть связан с физиологическими изменениями происходящими в организме в период вынашивания плода:

• выработку характерных гестационному периоду белков;
• полную перестройку гормональной системы;
• повышение концентрации противовоспалительных цитокининов;
• изменение биохимических показателей;
• присоединение инфекций бактериального и вирусного генеза.

Инфекционные заболевания

Инфекционные заболевания протекают с выделением антител (защитные факторы крови) в ответ на антигены (болезнетворные возбудители). Работа иммунитета человека заключается в выработке иммуноглобулинов в ответ на проникновение чужеродных агентов.

Одновременное выделение иммуноглобулинов при инфекционном процессе в сочетании с гепатитом С искажает результаты анализов ИФА, что ведет к возрастанию количества ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Инфекции, которые приводят к ошибке:

• токсоплазмоз;
• цитомегаловирус;
• передающиеся половым путем (уреаплазма, микоплазма, трихомоноз).

Лабораторная диагностика гепатита С при коинфекции с ВИЧ затруднена. Ложноотрицательный ИФА по выявлению анти-ВГС связан с формированием иммунодефицита у человека. Поэтому всегда проводится исследование РНК методом ПЦР.

Как избежать ложноположительного результата?

Ошибочный диагноз гепатита сводят к минимуму благодаря:

• качественному обучению лабораторных работников и прохождению курсов повышения квалификации;
• проведению этапов ПЦР в изолированных зонах;
• применению автоматических пипеток для каждого этапа реакции;
• проведение дополнительных анализов для уточнения.

Исключить ложноположительный результат возможно при проведении дополнительных (supplemental) тестов. Это препараты, созданные специально для определения антител к конкретным белкам, кодированных разными зонами вирусной РНК.

Внедрение новых методик лабораторного исследования вирусного гепатита С обеспечивает раннюю диагностику заболевания и сводит к минимуму появление ложных результатов. Это мера способствует своевременно начатому лечению, которое заканчивается выздоровлением.

( 1 оценка, среднее 5 из 5 )