Основной метод лабораторной диагностики бактериальных кишечных инфекций

Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Методы лабораторной диагностики инфекций делят на прямые (определение антигенов или нуклеиновых кислот возбудителя) и непрямые (определение антител к возбудителю).

Основные методы, используемые для лабораторной диагностики бактериальных инфекций, – это прямая микроскопия, культуральный метод, иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Материалом для исследования являются биологические жидкости организма – чаще кровь, моча, ликвор, слизь из зева или носа, вагинальный или шеечный соскоб, соскоб из уретры, реже синовиальная жидкость, слюна.

Прямая микроскопия (на стекле приготавливают мазок из материала и рассматривают его под микроскопом) предварительно позволяет быстро сориентироваться в этиологии патологического процесса.

Культуральный метод (посев материала на среды с последующей идентификацией возбудителя в подросших колониях) является одним из самых точных методов лабораторной диагностики, но для его выполнения требуется значительное время (несколько дней, для выделения туберкулезной палочки – недели). Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале, а также определение его антибиотикорезистентности.

При ИФА определяют находящиеся в биологической жидкости суммарные антитела и/или антигены бактерий путем связывания их со специфическими антигеном/антителом, сорбированными на твердой фазе и меченными ферментом, с последующим расщеплением хромогена и регистрацией результата. Выявляются как суммарные антитела, так и антитела различных классов (IgM, IgG, IgA). Возможно установление титра антител к возбудителю.

При проведении РИФ определяют антигены возбудителя путем связывания их со специфическим антителом, меченным флюоресцентным агентом с последующей детекцией свечения под микроскопом.

Из быстрых тестов для определения бактериальных возбудителей наиболее часто используют реакцию латекс-агглютинации.

ПЦР подразумевает определение нуклеиновых кислот (РНК или ДНК) возбудителя в биологических жидкостях. Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале и определение его генетических характеристик (например, антибиотикорезистентности).

Факторы, влияющие на результаты лабораторных анализов

На результат лабораторного анализа влияют многие факторы, связанные как непосредственно с качеством лабораторной диагностики (диагностическая чувствительность и специфичность метода и используемых тест-систем), так и с правильным выбором метода лабораторной диагностики (исходя из представлений о биологии возбудителя и течения инфекции) и с правильными забором, хранением и транспортировкой материала в лабораторию.

Ошибки лабораторной диагностики

Ошибки	Суть ошибки	Причины ошибки
«Врачебные»	Неверно выбранная диагностическая стратегия обследования больного или неправильная интерпретация результатов диагностики	Неверные представления о биологии исследуемого инфекционного агента или о возможности метода диагностики
«Лабораторные»	Получение ложноположительного или ложноотрицательного результата	Нарушение правил забора, хранения и транспортировки проб, или ошибки при исследовании непосредственно в лаборатории

Чувствительность – вероятность получения положительного результата теста у больных пациентов (истинно положительного результата). Рассчитывается как отношение количества людей с истинно положительной реакцией на этот тест при наличии у них какого-либо заболевания к общему числу больных этим заболеванием людей (имеющих и истинно положительные, и ложноотрицательные ответы).

Специфичность – вероятность получения отрицательного результата теста у здоровых пациентов (истинно отрицательного результата). Рассчитывается как отношение количества здоровых людей, у которых имеет место отрицательная реакция на тест к общему числу здоровых людей (имеющих и истинно отрицательные, и ложно положительные ответы).

Положительная предсказующая ценность – вероятность заболевания в процентах при положительном результате теста.

Отрицательная предсказующая ценность – вероятность отсутствия заболевания при отрицательном результате теста.

Интегральная оценка эффективности диагностики (диагностической чувствительности и специфичности) проводится по ROC-кривой (с вычислением AU ROC и 95% доверительных интервалов к ней).

Особое значение имеет осуществление правильного забора, хранения и транспортировки материала. Наиболее требовательным является культуральный метод – необходима быстрая доставка материала в лабораторию и обязательное сохранение жизнеспособности возбудителя. Для постановки ИФА, ПЦР возможно хранение замороженной плазмы крови. В фиксированном препарате можно проводить микроскопию, в т.ч. флюоресцентную (РИФ).

Ошибки на этапе забора, хранения и транспортировки материала

наименование ошибки	причина ошибки	следствие ошибки	способы предотвращения
загрязнение пробы на стадии забора материала	использование при заборе пробы инструментария, пробирок, перчаток и других материалов, загрязненных посторонней НК	ложноположительный результат	использование одноразового инструментария и материалов; повышение образовательного уровня медперсонала
загрязнение пробы примесями, ингибирующими ПЦР	проба содержит примеси ингибиторов ПЦР (гемоглобин, гепарин и другие)	ложноотрицательный результат	использование одноразового инструментария и материалов; соблюдение правил забора материала
забор материала выполнен неадекватно	несоблюдение правил забора материала (например, вместо соскоба клеток собрана поверхностная слизь)	ложноотрицательный результат	соблюдение правил забора материала (например, использование специальных щеточек-зондов)
разрушение НК при транспортировке и хранении пробы	несоблюдение правил транспортировки и хранения проб	ложноотрицательный результат	соблюдение правил транспортировки и хранения проб

Достоинства и недостатки различных методов лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Каждый из используемых методов лабораторной диагностики обладает определенными достоинствами и недостатками, и занимает свою нишу в диагностическом процессе. Зачастую для диагностики требуется комбинированное использование нескольких лабораторных методов.

Микроскопия	ИФА	РИФ	Культу-ральный	ПЦР
Что определяет метод	непосредственно возбудителя (прямой)	антитела или антигены (непрямой)	антигены (прямой)	непосредственно возбудителя (прямой)	нуклеиновую кислоту (прямой)
Сложность проведения метода	простой	сложный	сложный	сложный	сложный
Быстрота получения результата	быстро	относительно быстро	относительно быстро	медленно	относительно быстро
Чувствительность	низкая	высокая	удовлетворительная	высокая	очень высокая
Специфичность	низкая	удовлетворительная	низкая	очень высокая	очень высокая
Субъективность интерпретации результатов	субъективный	объективная	очень субъективная	чаще субъективная	объективная

Источник

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

На заметку

Слово «Прион» предложено в 1982 году американским врачом, профессором неврологии и биохимии Университета Калифорнии в Сан-Франциско Стенли Прузинером. Это особый класс возбудителей, состоящих их белка. Вызывают такие болезни, как болезнь Крейтцфельда — Якоба, куру, фатальная семейная бессонница.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический

. Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический

. Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический

. Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический

. Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

Диагностика вирусных инфекций

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование

. Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование

для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы

. Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.

Справка

Вирусные включения представляют собой выявляемые с помощью микроскопа образования в клетках, которые возникли при внедрении в организм вируса.

Методы диагностики протозойных инфекций

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический

. Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный

. Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический

. Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический

. Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Диагностика грибковых инфекций

Грибковые инфекции распространены не так широко, как вирусные или бактериальные потому, что они поражают в основном людей с ослабленным иммунитетом. Обычно при словах «грибковая инфекция» люди думают о заболеваниях кожи и ногтей, но сфера деятельности микозов шире: они могут поражать практически любые ткани. Самые распространенные грибковые поражения – это кандидоз, или молочница, микозы стоп, аспергиллез. При диагностике грибковых инфекций чаще всего используются следующие лабораторные методы:

Микроскопическое исследование

. Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный

. Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический

. Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот

. Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.

Источник

Vibrio cholerae: Холерный вибрион под электронным микроскопом

Итоговая государственная аттестация (ИГА)

Смотрите также тесты для фельдшеров по инфекционным болезням

Также у нас есть тесты и по другим предметам (терапия, основы сестринского дела, медицина катастроф, хирургия)

Дисциплина: инфекционные болезни с эпидемиологией
№ 1
* 1 -один правильный ответ
Лечебной антитоксической сывороткой является
1) противобруцеллезная
2) противоботулиническая
3) противосибиреязвенная
4) противоэнцефалитная
! 2
№ 2
* 1 -один правильный ответ
Основной метод лабораторной диагностики, позволяющий установить возбудителя в материале больного
1) бактериологический
2) cерологический
3) аллергологический.
4) кожно — аллергический
! 1
№ 3
* 1 -один правильный ответ
Инфекционного больного госпитализируют
1) транспортом больницы
2) скорой помощью
3) машиной эпидемиологического бюро города
4) городским транспортом
! 3
№ 4
* 1 -один правильный ответ
Основной механизм заражения при кишечных инфекциях
1) воздушно — капельный
2) фекально — оральный.
3) парентеральный
4) воздушно — пылевой
! 2
№ 5
* 1 -один правильный ответ
Для создания пассивного иммунитета вводят
1) антибиотики
2) вакцины
3) сыворотки
4) анатоксины
! 2
№ 6
* 1 -один правильный ответ
В инфекционной практике для дезинфекции чаще применяются
1) спирты
2) кислоты
3) хлорсодержащие препараты
4) синтетические моющие средства
! 3
№ 7
* 1 -один правильный ответ
При диагностике кишечных инфекций чаще исследуют
1) кровь
2) мочу
3) кал
4) желчь
! 3
№ 8
* 1 -один правильный ответ
В очаге инфекции в присутствии больного проводится дезинфекция
1) профилактическая
2) специфическая
3) текущая
4) заключительная
! 3
№ 9
* 1 -один правильный ответ
При любой инфекции необходимо прежде всего обработать
1) посуду больного
2) одежду больного
3) выделения больного
4) постельное белье
! 3
№ 10
* 1 -один правильный ответ
Для постановки серологической реакции берется
1) кал
2) моча
3) кровь
4) мокрота
! 3
№ 11
* 1 -один правильный ответ
При надавливании пальцем не исчезает
1) розеола
2) геморрагия
3) папула
4) пустула
! 2
№ 12
* 1 -один правильный ответ
Антибиотики не оказывают действие на
1) бактерии
2) вирусы
3) грибы
! 2
№ 13
* 1 -один правильный ответ
Возбудитель, относящийся к группе анаэробных микробов:
1) сальмонелла
2) столбнячная бактерия
3) шигелла
4) стрептококки
! 2
№ 14
* 1 -один правильный ответ
Типичное осложнение при брюшном тифе
1) пневмония
2) перфорация язвы кишечника
3) паротит
4) менингит
! 2
№ 15
* 1 -один правильный ответ
При бактериальной дизентерии кал имеет вид
1) «болотной тины»
2) «ректального плевка»
3) «горохового пюре
4) „малинового желе“
! 2
№ 16
* 1 -один правильный ответ
Летне — осенний подъем заболеваемости имеет
1) дизентерия
2) грипп
3) бруцеллез
4) менингококковая инфекция
! 1
№ 17
* 1 -один правильный ответ
Боли в животе при дизентерии
1) постоянные, ноющего характера
2) появляются только после акта дефекации
3)cхваткообразные, усиливаются перед актом дефекации
4) острые — „кинжальные“
! 3
№ 18
* 1 -один правильный ответ
Лечебная масляная клизма применяется для лечения
1) ботулизма
2) хронической дизентерии
3) сальмонеллеза
4) холеры
! 2
№ 19
* 1 -один правильный ответ
Основной симптом дизентерии
1) стул со слизью и кровью
2) головная боль
3) лихорадка
4) постоянные боли в животе
! 1
№ 20
* 1 -один правильный ответ
При холере кал имеет вид
1)» рисового отвара»
2) «ректального плевка»
3)«малинового желе „
4) “болотной тины»
! 1
№ 21
* 1 -один правильный ответ
В лечении холеры на первый план выходит борьба с
1) интоксикацией
2) обезвоживанием
3) гипертермией
4) гипотермией
! 2
№ 22
* 1 -один правильный ответ
Основной принцип при лечении больных холерой
1) восполнение дефицита воды и солей и этиотропное лечение
2) дезинтоксикация
3) этиотропное лечени
4) спазмалитики
! 1
№ 23
* 1 -один правильный ответ
Основной метод лабораторного исследования при холере
1) бактериологический
2) серологический
3) биологический
4) кожно — аллергическая проба
! 1
№ 24
* 1 -один правильный ответ
При холере солевые растворы, используемые для регидратации
1) подогревают до температуры тела
2) подогревают до 40-42 С
3) комнатной температуры
4) температурный режим не имеет значения
! 1
№ 25
* 1 -один правильный ответ
Перед выпиской больных холерой необходимо провести
1) трехкратное исследование кала и однократное исследование желчи
2) однократное исследование кала и однократное исследование желчи
3) двукратное исследование кала
4) двухкратное исследование кала и однократное исследование желчи
! 1
№ 26
* 1 -один правильный ответ
Симптом третьей степени обезвоживания
1) повышение температуры тела
2) полиурия
3) кожная складка расправляется быстро
4) олигурия
! 4
№ 27
* 1 -один правильный ответ
Возбудитель холеры относится к группе
1) вирусов
2) простейших
3) бактерий
4) грибов
! 3
№ 28
* 1 -один правильный ответ
При пищевой токсикоинфекции рвота
1) не приносит облегчения
2) приносит облегчение
3) возникает при резком вставании больного
4) не связана с приемом пищи
! 2
№ 29
* 1 -один правильный ответ
Донор должен обязательно обследоваться на
1) дизентерия
2) сибирскую язву
3) вирусный гепатит «В»
4) малярию
! 3
№ 30
* 1 -один правильный ответ
Способ лечения легкой формы сальмонеллеза
1) промывание желудка + обильное питье
2) ампициллин внутримышечно
3) витамины
4) парентеральное введение солевых растворов
! 1
№ 31
* 1 -один правильный ответ
При ботулизме больной погибает от
1) пневмонии
2) миокардита
3) паралича дыхания
4) почечной недостаточности
! 3
№ 32
* 1 -один правильный ответ
Первая медицинская помощь при ботулизме
1) промывание желудка + cифонная клизма
2) борьба с гипертермией
3) искусственная вентиляция легких
4) левомицетин
! 1
№ 33
* 1 -один правильный ответ
Срок диспансеризации после вирусного гепатита «В»
1) один год
2) шесть месяцев
3) три месяца
4) один месяц
! 1
№ 34
* 1 -один правильный ответ
Для профилактики вирусного гепатита «А» контактным необходимо
1) введение антибиотиков
2) введение гамма- глобулина, наблюдение 35 дней
3) наблюдение 35 дней
4) введение вакцины
! 2
№ 35
* 1 -один правильный ответ
Базисное лечение больных вирусным гепатитом «А»
1) постельный режим и диета
2) антибиотики
3) гормоны
4) введение гамма — глобулина
! 1
№ 36
* 1 -один правильный ответ
Основной признак печеночной комы
1) полная утрата сознания и отсутствие рефлексов
2) температура 39 град. С
3) возбуждение
4) судороги
! 1
№ 37
* 1 -один правильный ответ
Гепатит «А» и «В» объединяют
1) способ заражения
2) меры профилактики
3) поражения печени
4) поражение селезенки
! 3
№ 38
* 1 -один правильный ответ
Профилактика вирусного гепатита «В»
1) мытье овощей и фруктов
2) применение только одноразовых шприцов
3) употребление кипяченой воды
4) дезинфекция выделений
! 2
№ 39
* 1 -один правильный ответ
Для лечения осложнений при гриппе используют
1) антибиотики
2) ремантадин
3) витамины
4) кортикостероиды
! 1
№ 40
* 1 -один правильный ответ
Тактика мед. персонала при эпидемии гриппа в школе
1) работа в обычном режиме
2) выступление по школьному радио с беседой на тему: «Грипп, пути передачи, клиника и профилактика.»
3) контроль пищеблок.
4) кварцевание помещений
! 2
№ 41
* 1 -один правильный ответ
Симптом, характерный для гриппа
1) лимфаденит
2) высокая лихорадка
3) обильные выделения из носа
4) боль в горле
! 2
№ 42
* 1 -один правильный ответ
Осложнение, чаще всего развивающееся после гриппа
1) пневмония
2) менингит
3) артрит
4) отит
! 1
№ 43
* 1 -один правильный ответ
Для гриппа характерна температура (в град. С)
1) 35,5
2) 36,8
3) 38,0
4) 39,0-40,0
! 4
№ 44
* 1 -один правильный ответ
Меры специфической профилактики гриппа
1) изоляция больных
2) введение противогриппозной вакцины
3) ношение четырехслойной маски
4) кварцевание помещений
! 2
№ 45
* 1 -один правильный ответ
Катаральный симптом при гриппе появляется на
1) 1 сутки болезни
2) 2-3 сутки болезни
3) 5-6 день болезни
4)7-8 день болезни
! 2
№ 46
* 1 -один правильный ответ
Специфическое лечение гриппа
1) противогриппозный гамма-глобулин
2) антибиотики
3) ацетилсалициловая кислота
4) сульфаниламидные препараты
! 1
№ 47
* 1 -один правильный ответ
Срок забора смывов из носоглотки при гриппе
1) 1-3 день болезни
2) 4-5день болезни
3) 5-7 день болезни
4) 8-10 день болезни
! 1
№ 48
* 1 -один правильный ответ
Длительность лихорадки при гриппе
1) 2-4 дня
2) 5-6 дней
3) 7 дней
4) 12 дней
! 1
№ 49
* 1 -один правильный ответ
Симптом гриппа
1) температура 38,0-39,0 град. С
2) головная боль в затылочной области
3) боль в животе
4) влажный кашель
! 1
№ 50
* 1 -один правильный ответ
Основной симптом менингита
1) ригидность мышц затылка, симптом Кернига
2) парез конечностей
3) везикулезная сыпь
4) геморрагическая сыпь
! 1

Источник