Отбор воды на гепатит а

МУК 4.2.2357-08

Дата введения 2008-08-01

1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ
Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН
(О.Е.Иванова, Т.П.Еремеева, С.Г.Дроздов, М.И.Михайлов, О.Ю.Байкова,
О.В.Юрашко); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека (Г.Ф.Лазикова, Е.Б.Ежлова);
ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора
(Т.В.Воронцова, А.А.Ясинский, О.П.Чернявская) с учетом замечаний и
предложений ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в г.Москве,
Ставропольском, Хабаровском краях, Омской, Свердловской областях;
Санкт-Петербургского НИИЭМ им.Пастера.

2. Рекомендованы к
утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе
по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
(от 3 апреля 2008 г. протокол N 1).

3. УТВЕРЖДЕНЫ
Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека, Главным государственным
санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 4 мая 2008
г.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1.
Область применения

1.1. Настоящие
методические указания предназначены для специалистов органов и
учреждений государственного санитарно-эпидемиологического надзора
при реализации национального плана действий по поддержанию
свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации.

1.2. В методических
указаниях определены требования к организации сбора, упаковки,
хранения, транспортирования и проведения лабораторных исследований
материалов из объектов окружающей среды, выполняемых в целях
выявления циркуляции полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов,
а также для установления причин, факторов передачи инфекции при
повышенной заболеваемости или при эпидемических вспышках
заболеваний энтеровирусной этиологии.

1.3. Методические
указания также могут быть использованы специалистами организаций,
эксплуатирующих системы централизованного хозяйственно-бытового
водоснабжения, системы канализования, в рамках осуществления
производственного контроля.

2.
Общие положения

2.1. Вирусологические
исследования материалов из объектов окружающей среды (далее — ООС)
на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы (далее — ПОЛИО/НПЭВ)
являются одним из важнейших элементов системы эпидемиологического
надзора за полиомиелитом и острыми вялыми параличами (далее —
ПОЛИО/ОВП), другими энтеровирусными инфекциями, осуществляемого в
рамках реализации национального плана действий по поддержанию
свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации.

2.2. Все процедуры по
сбору, транспортированию, подготовке к исследованию и лабораторному
исследованию материалов из ООС на полиовирусы, другие (неполио)
энтеровирусы осуществляется в строгом соответствии с требованиями
нормативных и методических документов (прилож.1).

2.3. Выполнение
требований методических указаний направлено на совершенствование
эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными
инфекциями.

3.
Организация вирусологических исследований материалов из объектов
окружающей среды на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

3.1. Вирусологические
исследования материалов из объектов окружающей среды на
полиовирусы, другие НПЭВ проводят вирусологические лаборатории ФГУЗ
«Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации,
вирусологические лаборатории региональных центров
эпидемиологического надзора за полиомиелитом и острыми вялыми
параличами (в г.Москве, Хабаровском, Ставропольском краях,
Свердловской, Омской областях, Санкт-Петербургском НИИЭМ им.Пастера
(далее — РЦ), Приволжском и Дальневосточном региональных центрах по
изучению энтеровирусных инфекций (Нижегородский, Хабаровский
НИИЭМ), Национальном центре по лабораторной диагностике
полиомиелита (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им.
М.П.Чумакова РАМН) (далее — НЦ).

3.2. Указанные учреждения
проводят отбор проб из ООС, подготовку их к исследованию,
лабораторное исследование.

3.3. При выделении
полиовирусов изоляты направляются для идентификации и внутритиповой
дифференциации (далее — ВТД) в НЦ.

3.4. При выделении НПЭВ,
следует выполнить их идентификацию (определение серотипа). НПЭВ с
неустановленным серотипом следует отправить в РЦ или НЦ.

3.5. Вирусологическая
лаборатория, которая не проводила идентификацию выделенного агента,
проявившего цитопатический эффект (далее — ЦПЭ) на культуре клеток,
должна отправить изолят в РЦ для исключения присутствия
полиовируса.

3.6. При обнаружении в
исследуемом образце РНК энтеровирусов методом обратной транскрипции
и полимеразной цепной реакции (далее — ОТ-ПЦР) следует провести
идентификацию вируса.

3.7. Результаты
исследования материалов из ООС передаются в учреждения, направившие
их.

4.
Показания к проведению вирусологических исследований материалов из
объектов окружающей среды на полиовирусы, другие (неполио)
энтеровирусы

4.1. Планирование
организации вирусологических исследований.

Вирусологические
исследования материалов из ООС на полиовирусы, НПЭВ проводят в
плановом порядке, внепланово и в рамках производственного
контроля.

Плановые вирусологические
исследования материалов из ООС осуществляют в течение определенного
времени для получения информации о циркуляции полиовирусов, НПЭВ
среди населения, если предполагается, что эффективность
эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП недостаточна (или
требуются дополнительные данные) и группа населения, в отношении
которой предпринимается надзор, обладает одной из нижеперечисленных
или несколькими особенностями:

недостаточный охват иммунизацией;

наличие сведений о недавней (или возможной)
циркуляции в обследуемой группе населения дикого или
вакцинородственного полиовируса;

существование риска заноса дикого
полиовируса из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран
(территорий).

Плановые исследования
осуществляются в рамках эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП,
энтеровирусными инфекциями, с научными целями.

Внеплановые
вирусологические исследования материалов из ООС проводятся в случае
непредвиденных изменений санитарно-эпидемиологической ситуации на
определенной территории. Ими могут быть:

установленный факт заноса дикого
полиовируса или циркуляция вакцинородственного полиовируса;

подъем заболеваемости населения
энтеровирусными инфекциями;

возникновение эпидемической вспышки
энтеровирусной инфекции;

авария или нарушения в системах
водоснабжения или канализации, в результате которых может произойти
интенсивное биологическое загрязнение поверхностных и подземных
водоисточников, а также питьевой воды.

Для проведения плановых и
внеплановых исследований на полиовирусы, НПЭВ составляется план
проведения этих исследований, который должен включать:

продолжительность и сроки отбора проб из
ООС;

характеристику группы населения, в
отношении которой предпринимается исследование (численность
населения, сведения об иммунизации против полиомиелита);

распределение ответственности за сбор,
обработку, исследование проб из ООС;

наличие нормативных и методических
документов, материального обеспечения для проведения исследований,
протоколов проведения исследований;

наличие обученного персонала и контроля
качественного проведения исследований;

определение порядка отчетности о
результатах исследования;

определение возможностей для своевременной
пересылки выделенных штаммов вирусов (или РНК-позитивных
материалов) для дальнейшего изучения в установленном порядке.

Исследования материалов
ООС в рамках производственного контроля проводится постоянно с
целью санитарно-вирусологической оценки производственных
(технологических) процессов.

4.2. Объекты
вирусологических исследований, места отбора, продолжительность
исследований.

При проведении плановых
исследований объектами исследований являются сточные воды,
происходящие от той группы населения, в отношении которой
предпринимается надзор. Места отбора проб выбираются вместе с
представителями инженерной службы. В соответствии с целями
исследования исследуют неочищенные сточные воды, при этом следует
исключить стоки, которые могут быть загрязнены производственными
отходами.

Большой объем сточных
вод, поступающих на очистные сооружения или в канализационный
коллектор, может снизить чувствительность обследования вследствие
фактора разбавления. Поэтому в больших городах можно разбить
обследуемое население на группы и обследовать небольшие фрагменты
этих групп.

При проведении плановых
исследований в соответствии с целями исследования также могут быть
обследованы:

сточные воды на этапах очистки и
обеззараживания;

вода поверхностных водоемов, которые
используются для целей рекреации, в качестве источников
хозяйственно-питьевого водоснабжения;

вода плавательных бассейнов;

питьевая вода на различных этапах
водоподготовки.

Продолжительность
плановых исследований обычно составляет не менее 1 года,
оптимальным сроком следует считать 3 года. Кратность сбора — 4
пробы в месяц, но не менее 2 проб.

При проведении
внеплановых исследований продолжительность исследования может быть
более короткой, но кратность сбора проб должна быть увеличена, а
выбор обследуемой группы населения — максимально точный.

Если исследования сточных
вод обусловлены известной или подозреваемой реинтродукцией дикого
полиовируса или появлением случаев полиомиелита, вызванных
вакцинородственным полиовирусом (или случайной его детекцией),
продолжительность исследования должна быть не менее 1 года,
кратность отбора проб — не менее 4 раз в месяц, а выбор целевой
группы — максимально «прицельный».

Исследования в рамках
производственного контроля проводятся в соответствии с рабочей
программой и нормативными документами.

При планировании и
организации любых исследований следует руководствоваться
нормативными и методическими документами (прилож.1).

5.
Правила сбора, маркировки, хранения и транспортирования материалов
для исследования

Существуют два принципа
отбора проб материалов из ООС для исследований на полиовирусы,
НПЭВ:

одномоментный, при котором отбирают
определенный объем воды в определенное время, или, что
предпочтительнее, серию проб определенного объема отбирают в
разное, заранее намеченное время, чтобы затем составить смешанную
пробу. Пробы, отобранные одномоментным способом подвергают
последующему концентрированию с использованием фильтрующих мембран,
ионообменных смол, с помощью метода двухфазного разделения
(прилож.2);

«адсорбционный», при котором в ток воды на
определенное время помещают адсорбирующий материал, а затем
проводят элюцию вирусных частиц с адсорбента (метод Риордана,
концентрирование на макропористом стекле) (прилож.3).

Сотрудник, производящий
отбор проб сточной воды, должен быть иммунизирован против
полиомиелита. Если по техническим соображениям отбор проб выполняет
сотрудник инженерно-технических служб, он также должен быть
иммунизирован против полиомиелита.

Отбор проб производят
только в защитной одежде — халате, закрытой обуви, резиновых
перчатках. Для отбора проб воды одномоментным способом используют
предназначенную для этих целей стерильную одноразовую посуду или
стерильные емкости многократного применения, изготовленные из
материалов, не оказывающих инактивирующего действия на вирусы.
Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками или,
что более предпочтительно, навинчивающимися крышками. Крышки должны
надежно предохранять содержимое емкости от протечек. При отборе
проб адсорбционным методом пакет с адсорбентом помещают в плотный
пластиковый мешок, не допускающий протечек.

Немедленно после отбора
поверхность емкости, в которую была отобрана проба, протирают
дезинфектантом, маркируют, помещают в термоконтейнеры/термосы,
обеспечивающие температурный режим 4-8 °С и доставляют в
лабораторию. Пробу сопровождают актом отбора проб с указанием места
отбора, даты и времени отбора.

После доставки проб в
лабораторию термоконтейнер (термос) распаковывают в отведенной для
этого зоне, соблюдая правила биологической безопасности. В зоне,
где происходит распаковка, должны иметься емкость для мусора,
тампоны, смоченные 70%-м раствором этилового спирта, биологическое
защитное укрытие (далее — БЗУ) 2 класса защиты (или рабочий стол с
покрытием, которое легко подвергается обработке лабораторными
дезинфектантами).

Распаковка и регистрация
материалов осуществляется двумя сотрудниками — один регистрирует
поступившие материалы в рабочем журнале, другой открывает упаковку,
проверяет целость емкостей с материалом, отсутствие протечек,
полноту сопроводительных документов. В этот момент фиксируется
состояние присланных проб — отсутствие протечек, соблюдение
температурного режима, полнота документации.

Каждой пробе присваивают
идентификационный номер, под которым она регистрируется в
лабораторном журнале. Далее этим номером помечают все емкости
(центрифужные пробирки, флаконы/пробирки с культурой клеток и пр.),
относящиеся к данной пробе в процессе ее исследования и хранения в
данной лаборатории.

Обработку проб следует
начать незамедлительно после доставки в лабораторию. Если обработка
будет начата в течение 48 ч, пробы можно поместить в холодильник
(0-8 °С). Если исследование будет начато позже, пробы, отобранные
одномоментным методом, хранят при температуре -20 °С. Пробы,
собранные адсорбционным методом, рекомендуется подготовить для
исследования в течение 48 ч. В любом случае следует помнить, что
исследование ООС предпринимается для получения оперативной
информации и последующего оперативного реагирования, поэтому пробы
не должны накапливаться в лаборатории для ретроспективного
исследования.

Все процедуры во время
получения, распаковки и регистрации проб осуществляют в защитной
одежде и резиновых перчатках.

6.
Обработка проб из объектов окружающей среды в лаборатории

При обработке проб могут
образовываться аэрозоли. Поэтому все работы по подготовке проб воды
для исследования проводятся в БЗУ 2-го класса защиты. Для
исключения перекрестной контаминации проб все манипуляции по
подготовке к исследованию не следует совмещать с работой с
материалами, полученными от случаев ПОЛИО/ОВП. Оптимально работа с
пробами из ООС и с материалами, полученными от случаев ПОЛИО/ОВП,
должна выполняться в разных помещениях и разными группами
персонала.

Пробы из ООС готовят для
исследования в зависимости от вида в соответствии с нормативными и
методическими документами (прилож.1).

При обработке
одномоментно отобранных проб применяют концентрирование с помощью
двухфазного разделения. При обработке проб, отобранных методом
адсорбции на макропористом стекле (далее — МПС), проводят
ступенчатую элюцию.

6.1. Обработка
одномоментных проб и концентрирование вирусов методом двухфазного
разделения.

До начала
концентрирования пробу (1,0 л) делят на две части (по 500,0 мл) —
одну часть подвергают концентрированию, другую хранят при -20 °С
для возможного повторного исследования.

Объем осветленной сточной
воды смешивают с выбранными объемами двух полимеров — декстрана и
полиэтиленгликоля. Гомогенную смесь этих ингредиентов, полученную
путем энергичного встряхивания, оставляют на ночь при 4 °С в
делительной воронке. Это позволяет полимерам разделиться и
сформировать в воронке два отчетливых слоя (две фазы). Энтеровирусы
накапливаются в меньшем нижнем слое или на границе двух фаз
(интерфаза). Нижний слой и интерфазу собирают капельным способом.
Осадок после первоначального центрифугирования вносят в этот
концентрат, взвесь обрабатывают хлороформом и проверяют наличие в
ней вируса. Таким образом проба концентрируется в 50-100 раз.

6.2. Обработка проб,
полученных методом адсорбции.

Выполняют ступенчатую
элюцию вирусов, адсорбированных на МПС, помещенном в пакетики для
сбора проб. МПС переносят в стеклянную колонку и медленно
пропускают через колонку буферные растворы, собирая три элюата
(фракции). Каждую фракцию обрабатывают хлороформом так, как это
делается при обработке фекалий.

7.
Порядок проведения лабораторных исследований

7.1. Выделение и
идентификация вирусов.

7.1.1. Клеточные линии,
рекомендуемые для выделения полиовирусов, других (неполио)
энтеровирусов. Основные принципы работы.