Пцр рнк гепатита с чувствительность

Hepatitis C Virus (HCV) – гепатотропный вирус из семейства Флавивирусов, провоцирующий гепатит С. Аналитическая чувствительность тест-систем, которые используются для выявления HCV-инфекции, должна быть высокой. Чем она больше, тем выше шансы на обнаружение вируса при минимальной инфекционной нагрузке. Скрининг гепатита С включает два анализа – ИФА на anti-HCV и ПЦР на РНК HCV. В случае использования диагностических систем с низкой специфичностью вероятность получения ложноотрицательных результатов увеличивается.

Что значит аналитическая чувствительность

Аналитическая чувствительность (АЧ) – показатель, отражающий наименьшую концентрацию вещества (антител, ДНК или РНК возбудителя), определяемого тест-системой. Чем она выше, тем меньше риск получения ложных результатов анализа. При подозрении гепатита С выполняют 2 теста:

Иммуноферментный анализ (ИФА) – серологический тест, нацеленный на выявление антител к возбудителю инфекции. Они определяются в кровяном русле только через 1-1.5 месяца после заражения. В 15-30% случаев наличие специфических белков указывает на перенесенную болезнь.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С – молекулярно-биологический тест, при котором обнаруживают РНК вируса гепатита С. Если генетический материал выявляется, положительный результат ИФА подтверждается.

Аналитическая чувствительность – минимальный предел измерения тест-системы, выявляющей антитела к возбудителю или его генетический материал.

Если вирусная РНК гепатита С обнаруживается, выполняют дополнительные анализы:

Количественная ПЦР – определение вирусной нагрузки путем подсчета числа копий РНК возбудителя в 1 мл крови. От уровня виремии во многом зависит прогноз терапии и дозировка лекарств.

Генотипирование – определение штамма возбудителя. Существует несколько генотипов и субтипов вируса гепатита С (ВГС). В каждом конкретном случае используются определенные медикаменты, повышающие шансы на достижение устойчивого вирусологического ответа (УВО).

ПЦР отличается высокой специфичностью. Поэтому анализ на РНК ВГС (RNA HCV) является золотым стандартом в диагностике вирусного заболевания. Этим методом удается выявить единичные вирусы в плазме. Поэтому в рамках скринингового обследования его назначают даже при отрицательных результатах ИФА.

Как расшифровать цифры в бланке

Точность анализа напрямую зависят от чувствительности используемых аналитических систем:

Количественный ПЦР. В норме RNA HCV в крови отсутствует. Наличие в плазме даже нескольких копий вируса указывает на заражение HCV-инфекцией. Анализ обладает высокой чувствительностью – не ниже 15 МЕ/мл. Это значит, что вирус будет выявлен даже в случаях, если в 1 мл биоматериала будет до 60 копий ВГС. Тест-системы с чувствительностью от 10 МЕ/мл выявляют вирусное заболевание при меньших концентрациях вирионов в крови – от 40.
Качественный ПЦР. В норме антитела к ВГС не обнаруживаются. Отрицательный результат связан либо с отсутствием RNA HCV, либо с очень низкой концентрацией антител в плазме. Для качественного анализа рекомендуется использовать тест-системы с АЧ не ниже 500 МЕ/мл.

В нескольких зарубежных диагностических центрах проводилась сравнительная оценка чувствительности разных анализов. При выполнении ИФА она достигает 70%, а при количественной ПЦР – 99%.

Уровень вирусной нагрузки, который определяется в рамках количественной ПЦР (в МЕ/мл):

минимальная – до 180 000;
низкая – 400 000;
высокая – более 800 000.

В некоторых лабораториях используют внесистемные единицы измерения, а иногда данные записываются в количестве копий HCV. Чтобы пересчитать значения, учитывают, что 1 МЕ/мл соответствует 4 копиям вируса на 1 мл крови. Если в бланке указан результат 5.5*105 МЕ/мл, это означает, что в 1 мл биоматериала содержится 2.2*106 копий возбудителя гепатита С.

Что дает анализ ПЦР

Из-за невысокой диагностической специфичности ИФА (anti-HCV NS IgG) иногда дает ложноотрицательные результаты. Такое происходит при сдаче анализа в период с 1 до 6 неделю после заражения. Концентрация антител к HCV находится за пределами чувствительности тест-системы, поэтому гепатит не диагностируется.

Генетический материал флавивируса выявляется в плазме уже через 7 дней после заражения. А благодаря высокой аналитической специфичности ПЦР инфекция обнаруживается, даже если в 1 мл крови циркулирует до 50 копий вирионов.

ПЦР-исследование назначается для:

раннего выявления HCV-инфекции;
дифференциальной диагностики гепатитов;
контроля результативности антивирусной терапии;
определения особенностей течения гепатита С.

Запоздалое лечение опасно хронизацией воспаления и осложнениями – жировым гепатозом, фиброзом, циррозом, раком печени.

Если ПЦР-анализ на гепатит С указывает на заражение, проводят соответствующее лечение. Для уничтожения ВГС применяют лекарства прямого противовирусного действия:

Ледипасвир;

Нарлапревир;

Гразопревир;

Даклатасвир;

Паритапревир;

Софосбувир.

В зависимости от генотипа и осложнений продолжительность курса варьируется от 8 до 24 недель. Во время антивирусной терапии больные сдают повторный тест на количество копий РНК вируса. Если их концентрация уменьшается, это свидетельствует о положительной динамике и высоких шансах на достижение УВО.

Аналитическая чувствительность – одна из основных характеристик тест-системы, которая отражает минимальную концентрацию выявляемых в биоматериале антител, ДНК или РНК возбудителя. Она приобретает особенное значение, когда требуется исключить наличие инфекционных агентов в организме. Чем выше чувствительность анализа, тем реже он дает ложные результаты.

Источник

РНК-вирус проникает в клетки печени и вызывает болезнь – гепатит С. Заболевание проходит в острой и хронической форме. Для него характерно протекание без видимых признаков. Такое течение объясняется высокой способностью вируса к мутации и появлению различных видов. Это помогает патогену приспосабливаться к организму хозяина и ускользать от иммунной защиты.

Исследования на ранних стадиях развития не дает результата. Качественный анализ ПЦР на гепатит С проводят, чтобы выявить патоген, и начать вовремя лечение.

Что такое качественный анализ на гепатит С?

Гепатит С – серьезное заболевание, при хроническом развитии которого возникает цирроз и рак печени. Ученые длительное время не могут разработать вакцину от болезни, несмотря на изучение особенностей строения HCV. Многообразие видов патогена слабо поддается изучению.

Только с помощью лабораторных исследований можно обнаружить поражение органа, и предупредить инфицирование окружающих. С этой целью проводят качественный анализ ПЦР на гепатит С.

Носитель в течение многих лет может быть инфицирован и не подозревать о болезни. Качественный анализ предполагает проведение в лаборатории полимеразной цепной реакции крови пациента на наличие РНК вируса. Диагностика проводится на сверхчувствительном медицинском оборудовании, которое помогает его обнаружить.

Что показывает качественный анализ?

Качественное обследование с помощью ПЦР обладает достоинствами перед другими методами:

даннй метод помогает выявить генетический материал патогена на ранних стадиях;
показывает вид возбудителя;
используется система тестов, нет необходимости высеивать материал в питательной среде;
обладает высокой скоростью диагностики возбудителя: результат анализа будет готов через 5 часов;
выявляет скрытую инфекцию.

Качественный анализ назначают при профилактическом осмотре, когда имеются показания на его проведение. Он проводится во время лечения, после выздоровления. С его помощью подтверждают наличие или отсутствие антител вируса гепатита С в крови.

ПЦР исследует:

количественное содержание генотипа HCV;
качественные характеристики вирусной РНК;
генотипирование.

Диагностику проводят повторно для подтверждения результата с более чувствительным реагентом.

Показания к исследованию

Для проведения качественной ПЦР нужны предпосылки для ее назначения:

сексуальная связь с лицом, который инфицирован вирусом гепатита;
цирроз печени;
обязательное обследование перед оперативным вмешательством;
проведение вакцинации против вируса гепатита В;
плановое обследование работников медицинских учреждений, садов, школ.

Если у пациента видны явные признаки гепатита:

желтизна кожных покровов, белков глаз;
боль в правом подреберье;
усталость;
увеличение в размерах печени;
тошнота.

Вирус гепатита С проникает в клетки печени через кровеносные сосуды. Патоген может попасть при гемодиализе, при пользовании инфицированной иглой, при нанесении татуировки, в стоматологических и косметических кабинетах.

Возможна передача вируса новорожденному от инфицированной матери, если происходит травмирование кожи ребенка при родах. Качественный анализ выявляет вирус и указывает на второстепенные признаки: наличие в крови больного антител.

Расшифровка результатов

Врач-гепатолог или инфекционист проводит расшифровку результатов ПЦР и ИФА на гепатит С. Полученные данные подтверждаются комплексным обследованием:

биохимическим анализом;
УЗИ органа;
биопсией печеночных тканей.

Опираясь на полученные данные, врач подтверждает или отрицает гепатит С.

Стандартная чувствительность теста на ПЦР колеблется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ не дает результата, если она ниже указанного параметра.

Количественный анализ ПЦР показывает вирусную нагрузку: концентрацию патогена в человеческом организме (сколько фрагментов флававируса в 1 мл крови). Такой метод обследования назначают перед началом комплексной терапии и на 12 неделе заболевания. Он помогает:

Выявить степень болезни. Если концентрация вируса в крови пациента высокая, возможна передача инфекции другим лицам.
Назначить противовирусную терапию, выбрать нужный метод лечения.
Сделать прогноз выздоравления.

Важно определить генотип, так как патоген постоянно мутирует и приспосабливается к организму. Известно 11 типов, на территории РФ выявлены три: 1, 2, 3. Обследование покажет тип вирусной инфекции.

При расшифровке пишут:

РНК обнаружено;
РНК не обнаружено (болезнь не выявлена);
тип флававируса;
количественный состав (концентрацию в крови);
название теста.

РНК обнаружено

Если гепатит С обнаружен в биологическом материале пациента, врач назначает повторное исследование, чтобы исключить ошибку. Обследование биоматериала делают от 1 до 5 дней. Срок исполнения зависит от загруженности персонала.

Присутствие флававируса и антител к нему свидетельствует о продолжительном течении болезни, которая перешла в хроническую стадию. Ложные показания бывают у беременных женщин и у людей, имеющих другие инфекционные заболевания.

РНК не обнаружено

Качественный анализ не обнаружил гепатит С. Отрицательное значение означает, что в крови отсутствуют РНК вируса. Утомляемость и другие признаки возможно связаны с протеканием другой инфекции в организме и требуют дальнейшего изучения.

Что делать, если РНК вируса гепатита С обнаружено?

Если вирус обнаружен в крови, нельзя отчаиваться и впадать в панику. В 20 процентах болезнь излечивается самостоятельно. Антитела не всегда свидетельствует о том, что вы болеете гепатитом С. Случаются ошибки при лабораторных исследованиях. Доброкачественные и злокачественные опухоли, инфекционные очаги в организме, проведенная ранее вакцинация смазывают картину ПЦР.

Раннее обнаружение помогает вовремя остановить болезнь. Назначают противовирусную терапию. Препараты помогают вылечить хроническое заболевание в течение 3-6 месяцев.

Источник

«Выявление генов вируса гепатита С (HVC) в крови пациента является вторым этапом лабораторной диагностики этой инфекционной патологии. Чтобы обнаружить возбудителя, который не имеет клеточной мембраны и, соответственно, поверхностных антигенов, используют метод полимеразной цепной реакции. С помощью этого метода определяют непосредственно молекулу, в которой закодирована вся его генетическая информация — РНК.

Содержание
Что это значит?
Анализ на РНК вируса гепатита С
РНК вируса гепатита С: метод ПЦР
РНК гепатита С: качественный анализ
РНК гепатита С: количественный анализ
Гепатит С: анализы и расшифровка

РНК – Рибонуклеиновая кислота, наряду с ДНК входит в состав клеток всех живых организмов. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет способность к ее мутациям.

Исследование на наличие генома HVC назначают обычно после того, как проводят общий, биохимический анализ крови и получают положительный ответ на антитела (anti-HVC).

Что это значит?

Исследование на антитела к HVC является скрининговым, то есть с его помощью можно обследовать большие контингенты населения (медиков, беременных, пациентов стационаров, доноров, инъекционных наркоманов, ВИЧ-инфицированных). Отрицательный результат лабораторного анализа anti-HVC говорит о том, что в крови обследуемого не обнаружено иммунной реакции на вирус. Отрицательный результат может быть получен в таких случаях:

Если человек никогда не заражался гепатитом С.

Если чувствительность лабораторной тест-системы оказалась ниже, чем концентрация anti-HVC.

Если инфицирование произошло менее 2 месяцев назад и anti-HVC в крови еще недостаточно для определения. При ложноотрицательном ответе по причине человеческого фактора.

Если же получен результат, что антитела к HVC у больного обнаружены, это значит, что вирус гепатита С находился в организме обследуемого на момент проведения исследования или был в крови некоторое время назад. При положительном результате на anti-HVC возникает необходимость проведения дополнительных лабораторных исследований, которые обнаружат генетический материал самого возбудителя, определят концентрацию его генов (вирусную нагрузку, виремию) и установят генотип.

Анализ на РНК вируса гепатита С

Геном HVC в лабораторных условиях можно обнаружить с помощью нескольких исследований:

разветвленной ДНК (р-ДНК);
транскрипционной амплификации (ТМА);
полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Метод р-ДНК — недорогой и простой способ обнаружения вирусного генома у большого количества обследуемых людей. Его главным недостатком является низкая чувствительность: выявляет HVC только при его концентрации свыше 500 МЕ/мл.

Метод транскрипционной амплификации обнаруживает в сыворотке крови нуклеиновые кислоты вируса. Анализ имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл), но он еще недостаточно внедрен в повсеместную лабораторную практику.

Метод ПЦР в России является самым распространенным и доступным лабораторным обследованием с высокой чувствительностью (от 50-60 МЕ/мл).

Исследование ПЦР выполняется в любой клинической лаборатории, имеющей соответствующую аккредитацию. Очень важным нюансом этого метода диагностики, который влияет на результат анализа, является чувствительность используемой в лаборатории тест-системы. Например, чувствительность диагностикума 60 МЕ/мл, как в лабораториях «Инвитро», позволяет обнаруживать вирусную РНК спустя 3 месяца после заражения. При низкой чувствительности тест-системы гены возбудителя могут не обнаруживаться даже спустя 4 месяца после инфицирования.

РНК вируса гепатита С: метод ПЦР

Метод ПЦР имеет множество преимуществ перед другими лабораторными исследованиями для обнаружения генов HVC:

высокая чувствительность. Метод позволяет определять генетический материал возбудителя даже при его минимальной концентрации в образце;
большая специфичность. Выявляет гены вируса определенного генотипа среди множества ДНК и РНК других возбудителей, что позволяет проводить генотипирование возбудителя;
быстрота проведения. Отсутствие длительного процесса культивирования возбудителя сокращает время получения результата до нескольких часов; универсальность анализа.

Универсальная процедура проведения исследования позволяет одновременно использовать один образец крови человека для обнаружения генетического материала разных возбудителей. Эти преимущества позволяют считать ПЦР «золотым стандартом» лабораторной диагностики вирусного гепатита С вместе с иммуноферментным анализом на anti-HVC.

ПЦР — это исследование, используемое для определения генов HVC в крови обследуемого человека. Исследование состоит из нескольких этапов:

Отбора образца биоматериала.
Многократного увеличения концентрации копий РНК в отобранном образце.
Обнаружения генетического материала с помощью специальных тест-систем.

После забора венозной крови у пациента проводят искусственное инициирование процесса множественного реплицирования (амплификации, копирования) генов HVC.

Для этого определенным способом несколько раз изменяют температуру внутри пробирки с биоматериалом. Когда количество копий РНК в пробирке достигает необходимого значения, проводят обнаружение возбудителя с помощью специальных тест-диагностикумов.

ПЦР-диагностика бывает

качественной (обнаруживает присутствие вируса),
количественной (определяет концентрацию вирусных генов в единице объема)
генотипической (устанавливает генотип возбудителя).

РНК гепатита С: качественный анализ

Задача качественного ПЦР — определение наличия HVC в представленном биоматериале. Это исследование проводится обычно для скрининговой диагностики заболевания или выявления носительства. Назначают его после того, как выявят anti-HVC методом ИФА.

Чтобы поставить диагноз гепатита С, достаточно обнаружить генетический материал HCV качественно, то есть без подсчета его концентрации в объеме крови. Результатом качественного ПЦР может быть: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено».

syringe needle with droplet of blood in front of a finger and on blue bacjground

Точность метода соответствует 95%. При этом точность самих тест-диагностикумов достигает 100%, а 5% — это человеческий фактор, который всегда присутствует в лабораторных исследованиях. Чтобы избежать ложноотрицательного анализа, особенно у людей с низкой виремией, необходима высокая чувствительность применяемой в исследовании диагностической системы. Чувствительность тест-системы должна быть не меньшей, чем 60 МЕ/мл.

РНК гепатита С: количественный анализ

Количественный анализ назначают тогда, когда нужно знать уровень виремии в организме человека. Показаниями для проведения этого исследования являются:

положительный результат качественного ПЦР при условии обнаружения антител к вирусу;
установление стадии патологии;
определение вирусной нагрузки при гепатитах;
выбор комбинации противовирусных препаратов;
мониторинг вирулогического ответа на проводимую противовирусную терапию;
оценка вероятности перехода острого гепатита С в хронический.

Результат анализа выражается в МЕ/мл (международных единицах в 1 мл сыворотки) или в копиях/мл (количестве копий генов вируса в 1 мл сыворотки). Количественный ПЦР не имеет нормы: в норме ген HVC в крови человека обнаруживаться не должен. Полученные результаты обследования сравнивают с референсными значениями, установленными для той или иной степени вирусной нагрузки.

Так, показатели (в МЕ/мл):

ниже 4×10*5 считаются низкой виремией;
от 4×10*5 до 8×10*5 — средней;
свыше 8×10*5 — высокой.

Чем больше копий вирусной РНК в крови, тем агрессивнее протекает заболевание и больше риск передачи вируса окружающим. Но уровень вирусной нагрузки — не единственный показатель, влияющий на тяжесть течения патологии и дальнейший прогноз для пациента: важен также генотип возбудителя.

Установление генотипа необходимо для назначения правильной схемы лечения. От него также зависит прогноз для здоровья и жизни пациента. Например, вирус 3 генотипа чаще приводит к фиброзу или циррозу печени, в сравнении с пациентами носителями 1 генотипа.

Гепатит С: анализы и расшифровка

РНК Диагноз гепатита С невозможно поставить только по результатам только качественного и/или количественного анализа ПЦР: определения HVC и уровня вирусной нагрузки недостаточно для назначения адекватной противовирусной терапии. Потенциального больного нужно обследовать комплексно (клинически, лабораторно, инструментально), чтобы иметь объективную картину патологии. Правильно назначить комплекс обследований для установления диагноза гепатита С, а затем грамотно расшифровать полученные результаты может только врач.

Источник