Период серологического окна при гепатите в
Значение маркеров в диагностике вирусного гепатита B
Многие годы безуспешно боретесь с БОЛЯМИ в ПЕЧЕНИ?
Глава Института заболеваний печени: «Вы будете поражены, насколько просто можно вылечить печень просто принимая каждый день…
Читать далее »
Вирус гепатита B (HBV) — сложное образование с собственной ДНК и белковой оболочкой. Ему присуща высокая репликативность, способность мутировать, интегрироваться в геном человека.
Совокупность антигенов, антител, вирусных ДНК образует систему серологических (сывороточных) маркеров, выявление которых определяет фазу течения заболевания, помогает сделать его ретроспективный анализ и спрогнозировать исход, а также вести динамический контроль за развитием инфекции.
В организме вирус распадается на части, ядро проникает внутрь гепатоцитов, где начинает продуцировать новые ДНК и белки, из которых собираются целые вирионы.
В крови циркулируют ДНК HBV, части его оболочек — антигены. Через некоторое время формируется иммунный ответ организма по принципу «антиген — антитело».
Комплекс HBsAg — anti-HBsAg
Hepatitis B surface Antigen (австралийский антиген) впервые был идентифицирован у аборигенов Австралии, за что получил свое название. Представляет собой поверхностный антиген внешней белковой оболочки вируса гепатита B. Имеет несколько субтипов, условно обозначаемых кодами ayw, ayr, adw, adrq, adrq+ с некоторыми различиями структуры.
Именно HBsAg играет ключевую роль в развитии и течении заболевания, обеспечивает жизнестойкость вируса, его гепатотропность — внедрение внутрь клеток печени. Его наличие указывает на инфицирование гепатитом B, а на основе антител к нему строится иммунная защита.
Появляется HBsAg в крови уже с середины инкубационного периода, как правило, через 15–25 дней после заражения. С этого времени инфекция становится контагиозной, то есть может передавать от носителя окружающим.
ДНК вируса в гепатоцитах продуцирует столько HBsAg, что его количество превышает целые вирионы в сотни тысяч раз. Из некоторой части собирается оболочка новых вирусов, остальной белок поступает в кровь. Насыщенность им способна достигать 500 мкг/мл, что сопоставимо с собственным сывороточным белком организма.
Весь продромальный (преджелтушный) и желтушный период антиген циркулирует в крови, а к концу острой стадии заболевания, через 80–140 дней после первых проявлений болезни, постепенно сходит на нет и исчезает. Существование антигена дольше 180 дней указывает на формирование хронической формы гепатита.
Иммунный ответ — антитела к HBs (anti-HBsAg) — появлеются по прошествии некоторого времени после исчезновения антигена — от 1 до 6 месяцев, чаще через 2–4 месяца. Период между исчезновением антигена и появлением антител называется серологическим окном, замещение антигенов антителами — сероконверсией. Она является четким показателем окончания острого периода и начала выздоровления с формированием пожизненного иммунитета к вирусу.
Нарушение этого динамического сценария, отсутствие серологического окна, слишком быстрое появление антител к HBs является неблагоприятным признаком. Возникает опасность гипериммунной реакции, развития молниеносной формы болезни с тяжкими поражениями печени и других органов. Одновременное выявление маркеров в сыворотке после нескольких месяцев болезни свидетельствует о хронической форме гепатита.
Результат анализа крови на HBsAg не всегда бывает достоверен. Ложноотрицательные ответы возможны по следующим причинам:
- слишком короткий период между заражением и проведением обследования — менее 3-х недель;
- несовпадение субтипа антигена с типом диагностического иммунноферментного набора — белки антигена и антитела разные;
- вероятное заражение микст-инфекцией — ВИЧ, гепатитом C.
При подозрении на инфицирование гепатитом B и отрицательных результатах теста на антиген проводят обследование методом ПЦР на наличие вирусной ДНК, других маркеров вируса, повторяют анализ через некоторое время.
Бывает положительный результат теста на HBsAg у неболеющих гепатитом людей — так называемых здоровых вирусоносителей. Опасность передачи инфекции окружающим при этом сохраняется, несмотря на отсутствие клинических проявлений необходим медицинский контроль.
Иммунитет к гепатиту B
Антитела к HBsAg — единственные протективные иммунные элементы, полностью защищающие организм от повторного заражения гепатитом B.
Эти свойства анти-HBsAg заложены в основной принцип вакцинации. Прививка содержит рекомбинантный (искусственно выведенный) австралийский антиген, соединенный с гидроксидом алюминия. После внутримышечного введения вакцины антитела начинают вырабатываться через две недели, полноценный иммунитет должен сформироваться после троекратного прививания.
Протективный уровень анти-HBsAg — более 100 мМЕ/мл. Со временем, по прошествии 8–12 лет, концентрация анти-HBs может снижаться.
Возможен отрицательный или слабый иммунный ответ на введение вакцины, когда уровень антител не более 99 мМЕ/мл. Здесь играют роль несколько факторов:
- возраст менее 2 или более 60 лет;
- наличие длительно протекающих хронических инфекций;
- слабый общий иммунитет;
- недостаточная доза вакцины.
Эти ситуации, а также снижение необходимого протективного уровня антител, служат поводом для введения бустерной (дополнительной) дозы вакцины через год.
HBcoreAg — анти-HBcoreAg
Этот антиген концентрируется только в гепатоцитах, обнаруживается лишь при исследовании пункционного материала печени, а сформированные суммарные антитела к нему появляются почти с первых дней заболевания, когда клинических признаков болезни еще нет.
Выделяют два вида антител к HBcoreAg:
- иммуноглобулины IgM нарастают при острой фазе гепатита и в периоды обострений хронической формы, исчезая при ремиссии и после выздоровления. Общее время нахождения HBcore-IgM в крови от 6 до 12 месяцев. Этот маркер служит основным индикатором острого гепатита B;
- иммуноглобулины класса G (HBcore-IgG) обнаруживаются пожизненно у всех, кто когда-либо перенес гепатит B, но защитными свойствами не обладают.
Выявление этих антител помогает диагностировать заболевание в период действия серологического окна при отсутствии HBs-маркеров.
Положительные результаты обследования на HBcore-IgM и HBcore-IgG иногда могут быть недостоверны — иммуноглобулины класса М и G вырабатываются при некоторых заболеваниях опорно-двигательного аппарата.
HBeAg — анти-HBeAg
Антиген образуется путем трансформации части HBcoreAg и характерен для фазы активной репликации вируса в клетках печени. Кроме того, появление этого маркера сигнализирует о повышении заразности крови и выделений больного. При благоприятном течении острой формы гепатита концентрация HBeAg снижается через 20–40 дней после начала болезни с одновременным нарастанием антител (анти-HBeAg) до полного замещения ими антигенов.
Сероконверсия и особенно такие ее признаки, как быстрое увеличение концентрации антител — показатель близкого выздоровления, исключающего возможность хронизации. Наоборот, слабые показатели анти-HBeAg или их длительное отсутствие повышают опасность начала хронической интегративной формы гепатита — встраивания генома вируса в ДНК гепатоцитов.
При хронической форме заболевания наличие высокой концентрации HBeAg и копий ДНК вируса указывает на сохранение активной репликативности. Снижение титров антигена и уровня ДНК (<10^5 копий/мл) — признак интегративной формы.
При заражении штаммом «е-» или мутировании уже находящегося в организме вируса антиген HBeAg может не обнаруживаться, но антитела к нему есть, и сохраняется высокая репликативная активность — концентрация ДНК вируса >10^5 копий/мл.
После выздоровления анти-HBeAg остаются в крови еще от полугода до пяти лет.
Методы выявления маркеров гепатита B
Самыми результативными методами исследования крови на наличие серологических маркеров гепатита B являются анализы ИФА и ПЦР.
Иммунноферментный анализ крови — высокочувствительный информативный метод, позволяет выявить маркеры вирусного гепатита, практически воспроизводя реакцию «антиген — антитело» лабораторно. Очищенный образец сыворотки соединяют с реагентом, содержащим антитело или антиген. Образовавшийся иммунный комплекс окрашивается специальным веществом при проведении ферментных индикаций. Результат исследуется оптически.
Специфичность анализа позволяет получить точный результат даже при невысокой концентрации элемента в крови. ИФА, в отличие от других видов исследований, выявляет анти-HBcoreAg не в суммарном значении, а HBcore-IgM и HBcore-IgG отдельно, что повышает информативность.
ПЦР (полимеразная цепная реакция) применяется для выявления частиц ДНК вируса, качественного анализа на их наличие и количественной вирусной нагрузки крови. Для ПЦР достаточно наличия одной молекулы ДНК в исследуемом образце. Может использоваться для выявления инфекции в инкубационном периоде — «видит» вирус со второй недели заражения. Высокая чувствительность ПЦР позволяет получить 100%-ную достоверную информацию для постановки диагноза. Для полноценного динамического контроля за ходом заболевания ПЦР-диагностику крови нужно проводить как минимум каждые три месяца.
Во всех случаях для исследования забирается венозная кровь после предварительной подготовки, включающей 12-часовое голодание, отказ от спиртного и медикаментов.
Серологический профиль
Полученные результаты анализов на серологические маркеры, грамотное прочтение их качественных и количественных характеристик помогает установить статус инфекции — наличие или отсутствие ее в организме, определить период и форму заболевания, спрогнозировать его дальнейшее развитие.
Расшифровка маркеров гепатита B
Обнаруженые антитела к гепатиту B — еще не повод предполагать, что человек болен. Вполне вероятно, заболевание давно миновало и оставило характерный признак или имеется иммунитет к инфекции.
Источник
- Порядок обследования
- Маркеры гепатита В
- Диагностика острого гепатита В
- Интерпретация маркеров острого гепатита В
- Интерпретация маркеров хронического гепатита В
- Алгоритм постановки диагноза
Для проведения диагностики больного с подозрением на вирусный гепатит В врачом должны быть проведены следующие действия:
- Первичное обследование: (анамнез, физикальное обследование)
- Лабораторное обследование (развернутый биохимический анализ крови, включая белковые фракции и протромбиновый индекс, общий анализ крови с определением количества тромбоцитов, маркеры вирусных гепатитов, HBV ДНК качественным и количественным методом ПЦР)
- Скрининг на ГЦК ( УЗИ, тест на альфа-фетопротеин)
Для диагностики HBV используют серологические маркеры инфекции. Самым ранним маркером, который появляется еще в инкубационном периоде, до повышения уровня печеночных ферментов, является HBsAg (поверхностный антиген вируса гепатита В или «австралийский антиген») — основной информационный маркер HBV.
При острой инфекции HBsAg обнаруживается в крови в продолжение 5-6 месяцев, после чего его концентрация снижается, что говорит о стадии разрешения. Если же HBsAg обнаруживается более 6 месяцев от первых проявлений болезни, то высока вероятность перехода гепатита В в хроническую форму. Наличие HBsAg говорит о присутствии HBV в организме человека, однако, в силу ряда причин, отрицательный тест не позволяет со 100%-й вероятностью говорить об отсутствии вируса в крови, поэтому доноров крови проверяют также на наличие анти-НВс.
Анти-НВс (HBсoreAb, antiHBcore) — суммарные антитела (иммуноглобулины класса М и G) к HBcAg, которые является своеобразным «маркером памяти» HBV. Определяются после появления HBsAg и HBeAg, и обнаруживается в крови длительное время после разрешения болезни.
Иммуноглобулины класса М к HBсoreAg (анти-НВс IgM, antiHBcore-IgM антитела класса М к ядерному антигену) обнаруживаются в острой фазе, еще до пика повышения АЛТ и клинических проявлений болезни и являются маркером активного процесса в печени. Эти антитела, как правило, циркулируют в крови в течение 6–12 месяцев, и исчезает после выздоровления. При хроническом течении болезни эти маркеры выявляют в фазе обострения.
Иммуноглобулины класса G к HBсoreAg (анти-НВс IgG, antiHBcore-IgG) появляются почти одновременно с antiHBcore IgМ и выявляются длительное время после перенесенного гепатита В (часто — пожизненно), указывая на перенесенную инфекцию.
HBeAg (ядерный «е»-антиген HBV) указывает на активное размножение вируса и является маркером инфекционности. При остром процессе выявляется уже в инкубационный период и при появлении первых симптомов гепатита В. Если HBeAg в острой фазе обнаруживаются более одного месяца, то велика вероятность перехода заболевания в хроническую форму. Выявление этого маркера всегда свидетельствует об активной репликации вируса и высокой инфекционности крови больного. При благополучном исходе болезни, HBeAg исчезает.
Ему на смену приходят анти-НВе (антитела к «е»-антигену, HBeAb, anti-HBе). Этот процесс называется сероконверсией HBeAg и является хорошим предиктором к благоприятному исходу. В начале сероконверсии оба маркера могут обнаруживаться одновременно. После перенесенного гепатита В антитела к «е»-антигену могут выявляться от нескольких месяцев до трех-пяти лет. Наличие анти-НВе совместно с HBV DNA в высокой концентрации (более 100000 копий в мл) говорит о мутации гена в ДНК вируса (мутантный штамм).
Анти-HBs (HBsАb, anti-HBs) — протективные антитела к поверхностному антигену. Приходят на смену HBsAg и указывают на выздоровление и образование иммунитета к вирусу. Эти антитела могут появиться через длительное время (три-четыре месяца) после исчезновения HBsАg, называемое периодом «серологического окна». В некоторых случаях при хронической инфекции анти-HBs и HBsАg обнаруживаются одновременно. Протективные свойства анти-HBs означают иммунитет к HBV и используются при проведении вакцинации от гепатита В. Достаточной концентрацией протективных антител считается уровень 10 МЕ/мл.
Диагностика острого гепатита В
Диагноз острой ВГВ-инфекции основывается на наличии поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и IgM-антител к ядерному антигену гепатита В (Анти-НВс) в сыворотке крови. На начальном этапе пациенты могут также быть положительным на «e»-антиген (HBeAg), при этом могут быть обнаружены высокие уровни HBV ДНК. У больных с самоизлечением вырабатываются антитела к HBsAg (анти-HBs), однако возможен период «серологического окна», когда и анти-HBs и HBsAg не обнаруживаются, при этом Анти-НВс являются единственным обнаруженным маркером. Если через 6 месяцев после инфицирования HBsAg присутствует в плазме крови, то ставится диагноз «хронический гепатит В».
Рис.1 Динамика серологических маркеров при остром гепатите В
Таблица 1 Интерпретация маркеров острого гепатита В
| HBsAg | HBeAg | антиНВc IgM | антиНВc | сумм антиНВе | антиНВs | HBV ДНК | Трактовка результата |
| + | + | + | + | — | — | + | Острый гепатит В. Дикий штамм |
| + | — | + | + | — | — | + | Острый гепатит В. Мутантный штамм |
| + | — | + /- | + | + | — | — /+ | Разрешившийся острый гепатит В. Сероконверсия. |
Таблица 2 Интерпретация маркеров хронического гепатита В
| HBsAg | HBeAg | антиНВc IgM | антиНВc | сумм антиНВе | антиНВs | HBV ДНК | Трактовка результата |
| + | + | + /- | + | — /+ | — | + | Хронический активный гепатит В |
| + /- | — /+ | — /+ | + | + /- | — | — /+ | Хронический интегративный гепатит В |
| + | — | — | + | — | — /+ | — | «Здоровое» носительство |
| — | — | — | + | — /+ | + | — | Перенесенный вирусный гепатит В |
| — | — | — | + | -/+ | — | — | Интерпретация неясна, имеется четыре варианта: 1.Перенесенный вирусный гепатит В с отсутствием имунного ответа 2.Ложно-положительный результат анти-HBc 3.Латентная хроническая инфекция 4.Разрешение острой инфекции |
| — | — | — | — | — | + | — | Состояние после иммунизации |
Алгоритм постановки диагноза
Источник
Гепатит В – острое или хроническое заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита В (HBV), протекающее в различных клинических вариантах: от бессимптомных форм до злокачественных (цирроз печени, гепатоцеллюлярная карцинома). На долю ГВ приходится около 15% всех регистрируемых в РФ острых гепатитов и не менее 50% хронических.
Схематично строение вирусной частицы гепатита В можно изобразить так:
Рис.1. Структура вируса гепатита В.
Вирусные частицы гепатита В размером 42 — 45 нм (частицы Дейна) имеют достаточно сложное строение и включают ДНК, ДНК — полимеразу и антигены: поверхностный (HBs Ag ), сердцевинный — ядерный или коровский (HBc Ag или cor Ag), антиген инфекционности (HBe Ag, выявляемый в крови при активной репликации HBV-инфекции.
Белок внешней оболочки ВГВ является его поверхностным антигеном – HBsAg. HBsAg – это основной маркёр ГВ. При остром гепатите HBsAg может быть выявлен в крови обследуемых уже в инкубационный период в первые 4–6 недель от начала клинического периода. Присутствие HBsAg более 6 мес рассматривается как фактор перехода болезни в хроническую стадию.
Следует отметить, что только часть HBsAg, образующегося при размножении вируса, используется для построения новых вирусных частиц, основное же его количество поступает в кровь инфицированных лиц, где и определяется HBsAg- антиген.
HBc антиген — сердцевинный антиген, выявляемый только в ядрах клеток печени — гепатоцитов, но отсутствующий в крови. Большое диагностическое значение имеет определение в крови антител к нему класса М — антиHBc-IgM. Эти антитела при остром гепатите выявляются раньше, чем антитела к другим вирусным антигенам. АнтиHBc -IgM выявляют у 100% больных острым гепатитом В. Анти HBc суммарные (М+G ) антитела могут быть единственным маркером вируса гепатита В в фазу “окна”, когда в крови не удается выявить ни HBs- антиген, ни антитела к нему. Именно поэтому их определяют на станциях переливания крови при тестировании донорской крови и плазмы.
HBeAg представляет собой измененный HBсоrеAg. HBcoreAg и HBeAg обладают структурным родством и имеют общие эпитопы — центры связывания.
Это четвертый маркер активной репликации вируса наряду с ДНК, HBs Ag и антиHBc –IgM.
HBe Ag — антиген инфекционности, циркулирует только при наличии HBs антигена. Длительность циркуляции HBe антигена — важный прогностический признак. Его выявление через два месяца с начала заболевания — признак вероятного развития хронического гепатита. В большинстве случаев происходит смена (сероконверсия) HBe Ag на антиHBe — антитела, что является маркером завершенной репликации вируса гепатита В и прогностически благоприятным признаком. На ранней стадии сероконверсии оба эти маркёра могут обнаруживаться одновременно.
Исчезновение HBeAg и быстрое нарастание титра анти-HBе у больного практически исключает угрозу хронизации ГВ. Отсутствие такой динамики и выявление монотонно низких концентраций анти-НВе, наоборот, может свидетельствовать о развитии хронического ГВ с невысокой активностью (HBeAg-негативный хронический ГВ).
анти-HBs определяют для оценки течения инфекционного процесса и благоприятности его исхода. Факт появления анти-HBs рассматривается как надежный критерий развития постинфекционного иммунитета, т.е. выздоровления после гепатита В. Хотя при хроническом гепатите В HBsAg и анти-HBs могут иногда обнаруживаются одновременно.
Период, в который отсутствуют и HBsAg, и анти-HBs, называется фазой серологического «окна». Сроки появления анти-HBs зависят от особенностей иммунологического статуса больного. Продолжительность фазы «окна» чаще составляет 3–4 мес. с колебаниями до года.
Анти-HBs могут сохраняться пожизненно. Анти-HBs обладают протективными (защитными) свойствами. Этот факт лежит в основе вакцинопрофилактики. В настоящее время в качестве вакцины против ГВ, в основном, применяют препараты рекомбинантного HBsAg. Эффективность иммунизации оценивают по концентрации антител к HBsAg у вакцинированных лиц. Согласно данным ВОЗ, общепринятым критерием успешной вакцинации считается концентрация антител, превышающая 10 мМЕ/мл.
Важное диагностическое значение для определения прогноза и тактики лечения больных гепатитом В имеет выделение двух качественно различных фаз развития HBV — репликативной и интегративной.
При репликативной фазе (т.е. массовом размножении вируса) наблюдается репликация ДНК HBV и всех белков, а соответственно, и антигены копируются в большом количестве. Характерно выявление ДНК HBV, HBe Ag и (или) анти — HBc — IgM, HBs Ag
При интегративной фазе развития (т.е. когда вирусные частицы не подвергаются дальнейшей репликации) геном HBV встраивается в геном гепатоцита. Основную роль играет фрагмент, несущий ген, кодирующий HBs антиген Поэтому при этой фазе идет преимущественное образование HBs Ag и антител к коровскому белку и анти- HBe Ag.
Рис. 2. Динамика серологических маркёров при остром гепатите В.
Серологический диагноз | HBsAg | Анти-HBs | анти-НВсоrе | HBеAg | Анти-HBе | |
HBcore- | HBcore- | |||||
Острый гепатит В | +/– | –/+ | + | + | +/– | –/+ |
Хронический интегративный ГВ | + | – | – | + | – | + |
Хронический репликативный ГВ | + | – | +/– | + | +/– | –/+ |
Иммунитет после вакцинации | – | + | – | – | – | – |
Иммунитет после перенесенного ГВ | – | + | – | + | – | +/– |
Необходимо воздержаться от приема пищи в течение 2-3 часов.
Источник
