При гепатите а вирусологические исследования

Âèðóñíûé ãåïàòèò À

Âèðóñíûé ãåïàòèò À èíôåêöèîííàÿ áîëåçíü ÷åëîâåêà, õàðàêòåðèçóþùàÿñÿ ïðåèìóùåñòâåííûì ïîðàæåíèåì ïå÷åíè è ïðîÿâëÿþùàÿñÿ êëèíè÷åñêè èíòîêñèêàöèåé è æåëòóõîé. Âèðóñ ãåïàòèòà À áûë îáíàðóæåí â 1973 ã. Ñ. Ôåéíñòîíîì [è äð.] ñ ïîìîùüþ ìåòîäà èììóííîé ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè è ïóòåì çàðàæåíèÿ îáåçüÿí øèìïàíçå è ìàðìîçåòîê. Ñóòü ìåòîäà èììóííîé ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè ñîñòîèò â òîì, ÷òî ê ôèëüòðàòó èñïðàæíåíèé áîëüíîãî ãåïàòèòîì À äîáàâëÿþò ñïåöèôè÷åñêèå àíòèòåëà (ñûâîðîòêó ðåêîíâàëåñöåíòà) è îñàäîê ïîäâåðãàþò ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè. Áëàãîäàðÿ âçàèìîäåéñòâèþ âèðóñîâ ñî ñïåöèôè÷åñêèìè àíòèòåëàìè îíè ïîäâåðãàþòñÿ ñïåöèôè÷åñêîé àãðåãàöèè. Èõ â ýòîì ñëó÷àå ëåã÷å îáíàðóæèòü, à àãðåãàöèÿ ïîä âëèÿíèåì àíòèòåë ïîäòâåðæäàåò ñïåöèôè÷íîñòü âîçáóäèòåëÿ. Îòêðûòèå Ñ. Ôåéíñòîíà áûëî ïîäòâåðæäåíî â îïûòàõ íà äîáðîâîëüöàõ.

Âèðóñ ãåïàòèòà À èìååò ñôåðè÷åñêóþ ôîðìó, äèàìåòð âèðèîíà 27 íì. Ãåíîì ïðåäñòàâëåí îäíîíèòåâîé ïîçèòèâíîé ÐÍÊ ñ ì. ì. 2,6 ÌÄ. Ñóïåðêàïñèä îòñóòñòâóåò. Òèï ñèììåòðèè êóáè÷åñêèé èêîñàýäð. Êàïñèä èìååò 32 êàïñîìåðà, îí îáðàçîâàí ÷åòûðüìÿ ïîëèïåïòèäàìè (VP1 VP4). Ïî ñâîèì ñâîéñòâàì âèðóñ ãåïàòèòà À îòíåñåí ê ðîäó Heparnovirus, ñåìåéñòâó Picornaviridae. Â àíòèãåííîì îòíîøåíèè âèðóñ ãåïàòèòà À (HAV hepatitis A virus) ÿâëÿåòñÿ îäíîðîäíûì. HAV õîðîøî ðàçìíîæàåòñÿ â îðãàíèçìå øèìïàíçå, ïàâèàíîâ, ãàìàäðèëîâ è èãðóíêîâûõ îáåçüÿí (ìàðìîçåòîê). Äëèòåëüíîå âðåìÿ âèðóñ íå óìåëè êóëüòèâèðîâàòü. Ëèøü â 1980-õ ãã. óäàëîñü ïîëó÷èòü êóëüòóðû êëåòîê, â êîòîðûõ HAV ðàçìíîæàåòñÿ. Âíà÷àëå äëÿ ýòèõ öåëåé èñïîëüçîâàëè ïåðåâèâàåìûå ëèíèè êëåòîê ïî÷êè ýìáðèîíà ìàêàêà-ðåçóñ (êóëüòóðà FRhK-4), à ñåé÷àñ ïåðåâèâàåìóþ ëèíèþ êëåòîê ïî÷åê çåëåíûõ ìàðòûøåê (êóëüòóðà 4647).

Ðåçèñòåíòíîñòü. Âèðóñ îòíîñèòåëüíî óñòîé÷èâ ê âûñîêîé òåìïåðàòóðå, êèñëîòàì, æèðîðàñòâîðèòåëÿì (îòñóòñòâóþò ëèïèäû), äåçèíôèöèðóþùèì ñðåäñòâàì, õîðîøî ïåðåíîñèò íèçêóþ òåìïåðàòóðó. Âñå ýòî ñïîñîáñòâóåò äëèòåëüíîìó ñîõðàíåíèþ åãî âî âíåøíåé ñðåäå. Ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå îí âûæèâàåò íåñêîëüêî íåäåëü, ïðè 60 °C ÷àñòè÷íî óòðà÷èâàåò èíôåêöèîçíîñòü ÷åðåç 4 12 ÷, ïîëíîñòüþ ÷åðåç íåñêîëüêî ìèíóò ïðè 85 °C. Âûñîêîðåçèñòåíòåí ê õëîðó, áëàãîäàðÿ ÷åìó ñïîñîáåí ïðîíèêàòü â âîäîïðîâîäíóþ âîäó ÷åðåç áàðüåðû âîäîî÷èñòíûõ ñîîðóæåíèé.

Ýïèäåìèîëîãèÿ. Âèðóñ ãåïàòèòà À îáëàäàåò âûñîêîé ïàòîãåííîñòüþ äëÿ ÷åëîâåêà. Ïî çàêëþ÷åíèþ ÂÎÇ (1987 ã.), äëÿ âîçíèêíîâåíèÿ áîëåçíè äîñòàòî÷íî çàðàæåíèÿ âñåãî îäíèì âèðèîíîì. Îäíàêî ïðàêòè÷åñêàÿ çàðàæàþùàÿ äîçà, âåðîÿòíî, çíà÷èòåëüíî âûøå. Èñòî÷íèêîì èíôåêöèè ÿâëÿåòñÿ òîëüêî èíôèöèðîâàííûé ÷åëîâåê. Âèðóñ âûäåëÿåòñÿ â áîëüøîì êîëè÷åñòâå ñ èñïðàæíåíèÿìè çà 12 14 äíåé äî ïîÿâëåíèÿ æåëòóõè è â òå÷åíèå 3 íåä. æåëòóøíîãî ïåðèîäà. Ñóùåñòâåííûõ ðàçëè÷èé â âûäåëåíèè âîçáóäèòåëÿ ó áîëüíûõ æåëòóøíûìè, áåçæåëòóøíûìè è áåññèìïòîìíûìè ôîðìàìè ãåïàòèòà À íå âûÿâëåíî. Ñïîñîá çàðàæåíèÿ ôåêàëüíî-îðàëüíûé, ãëàâíûì îáðàçîì âîäíûé, à òàêæå áûòîâûì è ïèùåâûì ïóòåì. Ñïîñîá çàðàæåíèÿ ôåêàëüíîîðàëüíûé, ãëàâíûì îáðàçîì âîäíûé, à òàêæå áûòîâûì è ïèùåâûì ïóòåì. Îñíîâíîé (ïåðâè÷íûé) ïóòü ïåðåäà÷è âèðóñà âîäíûé. Âîçìîæíî òàêæå çàðàæåíèå âîçäóøíî-êàïåëüíûì ïóòåì. Âîñïðèèì÷èâîñòü íàñåëåíèÿ âñåîáùàÿ. Áîëåþò ïðåèìóùåñòâåííî äåòè â âîçðàñòå äî 14 ëåò. Áîëåçíü èìååò âûðàæåííóþ îñåííå-çèìíþþ ñåçîííîñòü.

Ïàòîãåíåç, êëèíèêà. Èíêóáàöèîííûé ïåðèîä âàðüèðóåò îò 15 äî 50 äíåé, ÷òî çàâèñèò îò âåëè÷èíû çàðàæàþùåé äîçû âèðóñà, íî â ñðåäíåì ñîñòàâëÿåò 28 30 äíåé. Ïîïàâ â îðãàíèçì, âèðóñ ãåïàòèòà À ðàçìíîæàåòñÿ â ðåãèîíàðíûõ ëèìôàòè÷åñêèõ óçëàõ, ïðîíèêàåò â êðîâü, à çàòåì â êëåòêè ïå÷åíè è âûçûâàåò îñòðûé äèôôóçíûé ãåïàòèò, êîòîðûé ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîðàæåíèåì ãåïàòîöèòîâ è ðåòèêóëîýíäîòåëèàëüíûõ ýëåìåíòîâ ïå÷åíè è ñíèæåíèåì åå äåçèíòîêñèêàöèîííîé è áàðüåðíîé ôóíêöèé. Ïîâðåæäåíèå ãåïàòîöèòîâ âîçíèêàåò íå çà ñ÷åò ïðÿìîãî äåéñòâèÿ âèðóñà, à â ðåçóëüòàòå èììóíîïàòîëîãè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ.

Íàèáîëåå òèïè÷íîé êàðòèíîé ãåïàòèòà À ÿâëÿåòñÿ îñòðàÿ æåëòóøíàÿ öèêëè÷åñêàÿ ôîðìà: èíêóáàöèîííûé ïåðèîä, ïðîäðîìàëüíûé (ïðåäæåëòóøíûé), æåëòóøíûé ïåðèîä è ðåêîíâàëåñöåíöèÿ. Îäíàêî â î÷àãàõ èíôåêöèè âûÿâëÿåòñÿ áîëüøîå êîëè÷åñòâî áîëüíûõ ñ áåçæåëòóøíûìè è áåññèìïòîìíûìè ôîðìàìè èíôåêöèè, ÷èñëî êîòîðûõ çíà÷èòåëüíî ïðåîáëàäàåò íàä æåëòóøíûìè («ôåíîìåí àéñáåðãà»).

Ïîñòèíôåêöèîííûé èììóíèòåò ïðî÷íûé è äëèòåëüíûé, îáóñëîâëåí âèðóñíåéòðàëèçóþùèìè àíòèòåëàìè è êëåòêàìè èììóííîé ïàìÿòè.

Ìåòîäû ìèêðîáèîëîãè÷åñêîé äèàãíîñòèêè. Äëÿ äèàãíîñòèêè ãåïàòèòà À (êðîìå çàðàæåíèÿ æèâîòíûõ øèìïàíçå, ìàðìîçåò, ïàâèàíîâ, êîòîðûõ ó íàñ íåò) ïðåäëîæåíû ðàçëè÷íûå èììóíîëîãè÷åñêèå ìåòîäû: ÐÑÊ, èììóíîôëóîðåñöåíòíûé ìåòîä, ãåìàããëþòèíàöèÿ èììóííîãî ïðèëèïàíèÿ (êîìïëåêñ âèðóñíûé àíòèãåí + àíòèòåëî â ïðèñóòñòâèè êîìïëåìåíòà àäñîðáèðóåòñÿ íà ýðèòðîöèòàõ è âûçûâàåò èõ ñêëåèâàíèå). Îäíàêî âîçìîæíîñòè ïðèìåíåíèÿ ýòèõ ìåòîäîâ îãðàíè÷åíû èç-çà îòñóòñòâèÿ ñïåöèôè÷åñêèõ âèðóñíûõ àíòèãåíîâ, à ðåàêöèÿ èììóíîôëóîðåñöåíöèè òðåáóåò áèîïòàòîâ ïå÷åíè, ÷òî íåæåëàòåëüíî. Íàäåæíûì è ñïåöèôè÷åñêèì ÿâëÿåòñÿ ìåòîä èììóííîé ýëåêòðîííîé ìèêðîñêîïèè, îäíàêî îí î÷åíü òðóäîåìêèé. Ïîýòîìó ïîêà åäèíñòâåííîé ïðèåìëåìîé èììóíîëîãè÷åñêîé ðåàêöèåé ÿâëÿåòñÿ ìåòîä èììóíîñîðáåíòíîãî àíàëèçà òâåðäîé ôàçû â âèäå ÈÔÌ èëè ÐÈÌ, îñîáåííî â ìîäèôèêàöèè «çàõâàòà» èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà M. Â íàøåé ñòðàíå äëÿ ýòîé öåëè ïðåäëîæåíà òåñò-ñèñòåìà «ÄÈÀÃÍ-À-ÃÅÏ». Ïðèíöèï ðàáîòû ýòîé òåñò-ñèñòåìû ñëåäóþùèé. Íà ñòåíêàõ ïîëèñòèðîëîâûõ ëóíî÷åê ñîðáèðóþòñÿ âíà÷àëå àíòèòåëà ê èììóíîãëîáóëèíàì êëàññà Ì (àíòèèììóíîãëîáóëèíû Ì), çàòåì äîáàâëÿåòñÿ èññëåäóåìàÿ ñûâîðîòêà áîëüíîãî. Åñëè â íåé åñòü àíòèòåëà êëàññà IgM, îíè áóäóò ñâÿçûâàòüñÿ àíòè-àíòèòåëàìè Ì, çàòåì äîáàâëÿåòñÿ ñïåöèôè÷åñêèé âèðóñíûé àíòèãåí (âèðóñ ãåïàòèòà À), êîòîðûé ïîëó÷àþò ïóòåì âûðàùèâàíèÿ â êóëüòóðå êëåòîê. Ñèñòåìà ïðîìûâàåòñÿ, è ê íåé äîáàâëÿþòñÿ ïðîòèâîâèðóñíûå àíòèòåëà, ìå÷åííûå ïåðîêñèäàçîé õðåíà. Åñëè ïðîèçîøëî âçàèìîäåéñòâèå âñåõ ÷åòûðåõ êîìïîíåíòîâ ñèñòåìû, âîçíèêàåò ÷åòûðåõñëîéíûé «ñýíäâè÷»:

1) àíòèèììóíîãëîáóëèíû Ì, 2) èììóíîãëîáóëèíû Ì (ïðîòèâ âèðóñà ãåïàòèòà À â èññëåäóåìîé ñûâîðîòêå áîëüíîãî), 3) âèðóñíûé àíòèãåí, 4) àíòèâèðóñíûå àíòèòåëà, ìå÷åííûå ôåðìåíòîì.

Äëÿ îáíàðóæåíèÿ ýòîãî êîìïëåêñà â ëóíî÷êè äîáàâëÿþò ñóáñòðàò äëÿ ôåðìåíòà. Ïîä âëèÿíèåì ôåðìåíòà îí ðàçðóøàåòñÿ, è îáðàçóåòñÿ îêðàøåííûé ïðîäóêò. Èíòåíñèâíîñòü îêðàñêè ìîæíî èçìåðèòü êîëè÷åñòâåííî ñ ïîìîùüþ ñïåêòðîôîòîìåòðà èëè ôîòîêîëîðèìåòðà.

При гепатите а вирусологические исследования

Ïðåèìóùåñòâî ìåòîäà «çàõâàòà» IgM ñîñòîèò â òîì, ÷òî àíòèòåëà ýòîãî êëàññà èììóíîãëîáóëèíîâ ïîÿâëÿþòñÿ ïðè ïåðâè÷íîì èììóííîì îòâåòå è ñâèäåòåëüñòâóþò îá àêòèâíîé ñòàäèè èíôåêöèè, îíè èñ÷åçàþò ïîñëå ïåðåíåñåííîãî çàáîëåâàíèÿ. Ïðîòèâîâèðóñíûå àíòèòåëà, îòíîñÿùèåñÿ ê êëàññó IgG, íàïðîòèâ, äëèòåëüíîå âðåìÿ ñîõðàíÿþòñÿ ïîñëå ïåðåíåñåííîãî çàáîëåâàíèÿ, îáåñïå÷èâàÿ ïðèîáðåòåííûé èììóíèòåò. Äëÿ îáíàðóæåíèÿ âèðóñà ãåïàòèòà À ïðåäëîæåí ìåòîä ÄÍÊ-çîíäà: èñïîëüçóþò â êà÷åñòâå çîíäà ÄÍÊ êîìïëåìåíòàðíóþ âÐÍÊ.

Ñïåöèôè÷åñêàÿ ïðîôèëàêòèêà. Ðàíåå øèðîêî ïðèìåíÿâøàÿñÿ ñåðîïðîôèëàêòèêà ãåïàòèòà À ñ ïîìîùüþ ãàììà-ãëîáóëèíà ñåáÿ íå îïðàâäàëà, ïîýòîìó îñíîâíîé óïîð áûë ñäåëàí íà ïðîâåäåíèå âàêöèíîïðîôèëàêòèêè. Ñ ýòîé öåëüþ ðàçðàáàòûâàþòñÿ è óæå èñïîëüçóþòñÿ ðàçëè÷íûå âàðèàíòû âàêöèí. Â Ðîññèè ýôôåêòèâíàÿ âàêöèíà ïðîòèâ ãåïàòèòà A áûëà ïîëó÷åíà åùå â 1995 ã., è ñåé÷àñ îíà óñïåøíî ïðèìåíÿåòñÿ.

Ëå÷åíèå. Â ñâÿçè ñ òåì ÷òî ïðè âèðóñíûõ ãåïàòèòàõ íàðóøåíà ïðîäóêöèÿ èíòåðôåðîíîâ, äëÿ ëå÷åíèÿ ãåïàòèòîâ, â òîì ÷èñëå ãåïàòèòà A, ïðèìåíÿþò èíòåðôåðîí è èíäóêòîð åãî ýíäîãåííîãî ñèíòåçà àìèêñèí.

Источник

Серологические методы исследования

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела.

Метод обнаружения с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого .

В этом случае из двух компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является сыворотка крови, так как постановка реакции проводится с заведомо известными антигенами. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови антител, соответствующих применяемому антигену; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых.

Достоверные результаты получают при исследовании «парных» сывороток крови больного, взятой вначале заболевания (3-7 день) и через 10-12 дней. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и более повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.

С внедрением в практику лабораторий метода иммуноферментного анализа (ИФА) стало возможным определять в крови больных антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (JgM и JgG), что существенным образом повысило информативность серологических методов диагностики.

При первичном иммунном ответе, когда иммунная система человека взаимодействует с инфекционным агентом в первый раз, синтезируются преимущественно антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М (JgM). Лишь позднее, на 8-12-й день после попадания антигена в организм, в крови начинают накапливаться антитела иммуноглобулинов класса G (JgG). При иммунном ответе на инфекционные агенты вырабатываются также и антитела класса А (JgA), которые играют важную роль в защите от инфекционных агентов кожи и слизистых оболочек.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать. Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеинов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется.

Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, т. е. одной бактерии или вирусной частицы. Введение в реакцию дополнительного этапа — синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы — позволило тестировать РНК-вирусы, например вирус гепатита С.

ПЦР — это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в том числе и в материале, получаемом при биопсии;
возможна диагностика инфекционных болезней на самых разных стадиях заболевания;
возможность количественной оценки результатов исследований ( сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);
высокая чувствительность метода.

Исследования вирусов гепатита

В настоящее время выделяют следующие формы вирусных гепатитов: гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е, гепатит G и гепатит ТТ. Для диагностики каждой из перечисленных форм вирусных гепатитов используется определенный перечень маркеров.

Вирусный гепатит А

Гепатит А — острая энтеровирусная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита А (ВГА,HAV) — энтеровирус типа 72. Геном вируса представлен однонитчатой РНК. Вирус гепатита А содержит единственный антиген (HA-Ag). Удельный вес гепатита А в суммарной заболеваемости вирусными гепатитами составляет 70-80%. В структуре заболеваемости гепатитом А дети составляют до 80%, причем основная масса — дошкольники и школьники начальных классов.

ИФА и ПЦР исследования при гепатите А

Вирусный гепатит В

Гепатит В – вирусная антропонозная инфекция. Возбудитель вирус гепатита В (ВГВ, HBV) – относится к семейству гепаднавирусов, ДНК-содержащих вирусов, поражающих клетки печени. Вирионы ВГВ имеют наружную липопротеидную оболочку и нуклеокапсид, содержащий двунитчатую ДНК и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу.

поверхностный («австралийский») антиген, HBsAg, находящийся в составе липопротеидной оболочки ВГВ, является маркером ВГВ, указывая на инфицированность вирусом;
ядерный (core), HBcAg – обнаруживается в составе нуклеокапсида вирионов, свидетельствует об активной репродукции вируса;
HBeAg – входит в состав ядра ВГВ, указывая на активность вируса и, кроме того, на его высокую вирулентность и инфицированность;
HBxAg – расположен вблизи оболочки вириона, его роль в генезе инфекции изучается.

В диагностике вирусного гепатита В ведущее значение имеет определение комплекса маркеров гепатита. Свыше 5% населения планеты охвачено этой инфекцией, а частота безжелтушных форм ВГВ составляет, по данным разных авторов, от 60 до 82%.

ИФА и ПЦР исследования при диагностике вируса гепатита В

Вирус гепатита С, генотипы

Гепатит С (ВГС) – вирусное заболевание, наиболее часто протекающее в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушных и легких форм и склонное к хронизации процесса.

Возбудитель — вирус гепатита С – имеет сходство с флавовирусами, содержит РНК. На основе филогенетического анализа выделено 6 генотипов ВГС и более 80 субтипов.

Генотип 1 — наиболее распространенный генотип во всем мире (от 40 до 80%). Генотип 1а является доминирующим для США, а 1b преобладает в Западной Европе и Южной Азии.

Генотип 2 распространен во всем мире, однако встречается с меньшей частотой, чем генотип 1 (от 10 до 40%).

ВГС тип 3 характерен для Индии, Пакистана, Австралии и Шотландии. Генотип 4 распространен преимущественно в Средней Азии и Египте, генотип 5 – в Южной Африке, а генотип 6 – в Гонконге и Мокао.

Примерно 90% всех случаев посттрансфузионных гепатитов связано с ВГС. Среди доноров антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС) обнаруживают в 0,2-5% случаев.

У 40-75% пациентов регистрируется бессимптомная форма болезни, у 50-75% больных острым ВГС формируется хронический гепатит, у 20% из них развивается цирроз печени. Важная роль ВГС отводится и в этиологии гепатоклеточной карциномы.

Геном вируса гепатита С представлен одноцепочечной положительно заряженной РНК, которая кодирует 3 структурных и 5 неструктурных белков. К каждому из этих белков вырабатываются антитела, обнаруживаемые в крови больных гепатитом С.

Отличительной чертой ВГС является волнообразное течение заболевания, в котором разграничивают 3 фазы: острую, латентную и фазу реактивации.
Для острой фазы характерно повышение активности печеночных ферментов в сыворотке крови, уровня антител класса IgM и IgG к ВГС с нарастанием титров, а также РНК ВГС.

Латентная фаза характеризуется отсутствием клинических проявлений, наличием в крови антител класса IgG к ВГС в высоких титрах, отсутствием антител класса IgM и РНК ВГС либо их присутствием в низких концентрациях на фоне незначительного повышения активности печеночных ферментов в периоды обострения.
Для фазы реактивации характерно появление клинических признаков, повышение активности печеночных ферментов, наличие антител класса IgG (к нуклеокапсидному белку core и неструктурным белкам NS) в высоких титрах, присутствие РНК ВГС и нарастание титров антител класса IgM к ВГС в динамике.

ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита С, определение генотипа

Вирусный гепатит D

Гепатит D – вирусная инфекция, вследствие биологических особенностей вируса протекающая исключительно в виде ко- или суперифекции при гепатите В, характеризующаяся тяжелым течением,
часто неблагоприятным исходом.

Самостоятельно, без вируса В, вирус гепатита D не может попасть в организм человека

Возбудитель – вирус гепатита D (ВГD), по своим биологическим свойствам приближается к вироидам – обнаруженным молекулам нуклеиновых кислот. Печень человека – единственное место размножения (репликации) ВГD.

Известно существование двух вариантов инфекции: коинфекция (одновременное заражение ВГВ и ВГD) и суперинфекция (заражение HBsAg-позитивных пациентов). Сочетание ВГВ и ВГD сопровождается развитием более тяжелых форм патологического процесса, что определяется главным образом действием ВГD.

Летальность при суперинфекции достигает 15-20%. Инфицирование дельта-вирусом может вызывать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением, или формировать хроническое носительство ВГD.

При гепатите D могут отсутствовать в крови маркеры гепатита В – анти НВс и НВs-антиген – и наблюдается угнетение ДНК-полимеразной активности, так как ВГD ингибирует репликацию вируса гепатита В.

ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита D

Источник

Скачать реферат [7,4 Кб] Информация о работе

Лекция по микробиологии.

Гепатиты.

Гепатиты — это воспалительные поражения печени,
вызванные различными этиологическими факторами. Гепатиты могут быть
неинфекционные. Неиефекционные можно подразделить на лекарственные (при
использовании некоторых антибиотиков) и токсические (при употреблении алкоголя,
ядовитых шляпочных грибов).

Инфекционные гепатиты могут быть вызваны различными
группами микроорганизмов — простейшими (токсоплазмы), бактериями (лептоспиры,
иерсинии), вирусами (вирус Эпштейна-Бара, цитомегаловирус). К возбудителям
вирусных гепатитов относятся также вирусы гепатита А,В,С,Д.Е,F. Эти 6
специфических возбудителей, которые составляют основной удельный вес в
инфекционной патологии печени. Поскольку у вирусов гепатита А,В,С,Д,Е,F
единственной мишенью в организме являются гепатоциты, поэтому данные
возбудители относятся к первичным возбудителям вирусных гепатитов. Вирусные
гепатиты не различаются кардинально по клиническим картинам. Есть 3 формы
поражения печени : 1. Бессимптомная 2. Безжелтушная — с симптомами ОРЗ или
поражения ЖКТ (диарея, тошнота) 3. Желтушная форма. Бессимптомная,
безжелтушная, желтушная формы составляют по1/3 по количеству случаев
заболевания .

до недавнего времени гепатиты А и В дифференцировали
точно, все остальные относили к гепатитам ни А ни В, но сейчас лабораторно
можно дифференцировать гепатиты до уровня F.

Вирусные гепатиты делятся в зависимости от
преобладающего механизма распространения на 2 группы : гепатиты
распространяющиеся фекально-оральным путем (гепатиты А и Е), гепатиты В,С,Д,F
передаются парентеральным путем или гемоконтактным.

ГЕПАТИТ А. Название вируса гепатита А — НАV. Вирус
гепатита А относят к семейству пикарновирусов, к 72 серотипу рода
энтеровирусов. В настоящее время предпочитают относить вирус гепатита А к так
называемым гепарновирусам.

Вирус гепатита А мелкий, диаметр 27-32 нм, РНК-овый.
Вирус является простым, имеет кубический тип симметрии (икосаэдр), РНК (+)
нитевая, одноцепочечная. В состав капсида входит 4 белка. Вирус гепатита А
имеет только 1 серотип, что облегчает диагностику и дает возможность создать
вакцину. Вирус устойчив во внешней среде — может сохраняться в продуктах
питания, в воде, в почве — 1 год, устойчив к растворителям, к рН от 3 до 9,
поэтому он без ущерба проходит через желудок и 12-перстную кишку. Вирус
погибает под действием стандартных стерилизующих агентов и факторов
(автоклавирование, воздушная стерилизация) и кроме того дезинфекция кипячением
в течении 30 мин убивает вирус .

Культивирование. Вирус гепатита А с трудом культивируется в культурах клеток первично
трипсинизированных клеток без ЦПД (цитопатического действия) поэтому метод
культивирования вируса в культурах клеток не используется для диагностики в
связи со сложностью культивирования. В качестве модели для выделения вируса
используют 2 вида животных — шимпанзе и …..

Эпидемиология.
Вирусные гепатиты А широко распространены во всех странах. Механизм передачи —
фекально-оральный. Источником инфекции является больной, вирус выделяется с
испражнениями. Больше всего выделяется вируса в конце инкубационного периода
(до появления клинических симптомов). Крупные вспышки наблюдаются при водном
пути передачи (“военная желтуха”) и при употреблении различных моллюсков,
которые фильтруют органические остатки в воде. Гепатит является самой
распространенной после ОРЗ инфекцией, встречается в России в 90-100 случаев на
100000 населения.

Патогенез. Место
первичного размножения не установлено. Может происходить в лимфоидных узлах
кишки, в слизистой кишки, предполагают что вирус попадает в печень с током
крови или лимфы, либо по желчным путям. Инкубационный период длительный 15-45
дней, начинается остро, с симптомов ОРЗ. Затем гепатоциты разрушаются
иммунокомпетентными клетками (Т-киллерами, NK-клетками). Иммунитет — стойкий гуморальный
типоспецифический.

Диагностика. Включает
в себя серодиагностику — определение иммуноглобулинов класса М в ИФА, поиск
вирусных антигенов в крови с помощью ИФА, используют ДНК-зонды,
иммуно-электронную микроскопию (ИЭМ) — можно увидеть вирус (дорогие методы).
При подозрении на гепатит А ставят биохимические тесты, определяя активность
ферментов АлАТ, АсАТ, количество билирубина.

Профилактика. Для
неспецифической профилактика парентерально вводят иммуноглобулин. Для
специфической профилактики — инактивированная убитая вакцина из вируса
гепатита А. Иммунизации подвергаются дети в организованных детских
коллективах, медперсонал, армейский контингент, ассенизаторы контактирующие со
сточными водами.

ГЕПАТИТ Е.

Вирус гепатита Е (HEV) сходен с вирусом гепатита А.
Таксонамическая принадлежность неизвестна. Вирус мелкий 26-32 нм, сферический
простой имеет однонитчатую РНК. Не культивируют ни в чем.

Эпидемиология. Вирус
вызывает антропонозные вирусные гепатиты. Механизм распространения также
фекально-оральный, путь передачи преимущественно водный, иногда контактный.
Встречается во всем мире — зарегистрировано несколько эпидемий и спорадических
случаев. Несмотря на то что диагностика разработана сравнительно недавно
известно что от 10 до 50% всех вирусных гепатитов вызывается именно HEV.

КЛИНИКА.
Инкубационный период от 22 до 60 дней. Инфекция протекает остро во всех тех же
клинических формах что и гепатит А, но при гепатите Е чаще наблюдается
злокачественные смертельные формы и очень высока смертность у беременных женщин
заболевших гепатитом Е.

Патогенез. Такой
же —т.е цитопатическое действие и аутоиммунная реакция.

Специфическая профилактика не разработана.

Диагностика — применяется иммуно-электронная
микроскопия, можно определить в сыворотке антигены с помощью иммуно-ферментного
анализа. На практике HEV определяют методом исключения.

ГЕПАТИТ В. Вирус гепатита В (HBV) относится в
семейству Hepadnaviridae сферической формы среднего размера 42-45 нм, сложный.
В центре вириона находится ДНК двухспиральная, двунитчатая, имеет однонитчатый
участок внутри, внутри имеется также ДНК полимераза которая позволяет очень
быстро включить синтез ДНК. Нуклеокапсид образует так называемый антиген
сердцевины Нвс Аg. Существует также Hbе Ag также входит в состав белковой
оболочки нуклеокапсида. Это антиген инфекционности.

Hbs Ag (австралийский антиген) изучен подробно. Он
связан с суперкапсидом. Этот антиген является маркером перенесенной инфекции.
Вирус культивируют на шимпанзе, которые являются хорошей экспериментальной
моделью для отработки средств терапии, профилактики.

Вирус очень устойчив — выдерживает обработку 3%
хлорамином, 1% формалином, убить его дезинфектантами практически невозможно.

Эпидемиология. Во
всем мире 2 миллиарда инфецированных, в том числе 350 млн носителей Hbs Ag . в
России 3 млн носителей. Заболевание более тяжелое чем гепатит А часто
хронизируется, превращаясь в хронические циррозы, карциномы, нередко
заканчивается летально. Заболевание является антропонозом. Протекает в любых
формах.

Механизм передачи гематогенный, при бытовом контакте очень
редко, через плаценту , молоко — от матери у ребенку, половым путем,
искусственным путем при медицинских манипуляциях.

Заболевание очень контагиозно (достаточно 10-6 — 10-7
мл крови, чтобы вызвать заболевание).

Патогенез. Инкубационный
период в среднем 60-90 дней. Заболевание может протекать во всех формах:
бессимптомной, безжелтушной, и желтушной. Острое заболевание может переходить в
хроническую форму , выздоровление наблюдается в 90% случаев, примерно в 10%
становятся хроническими носителями — к ним относятся больные хронически
активным гепатитом, персистирующим гепатитом и бессимптомным. Около 1%
составляют кульминантные, т.е злокачественно протекающие формы.

Возбудитель гепатита В проникает парентерально в
кровь, из крови в гепатоциты. Взаимодействие вируса с гепатоцитом происходит в
несколько стадий: 1. Интеграция — вирус интегрирует в гепатоциты, встраивается
в состав ДНК гепатоцитов 2. Репликация — вирус интегрированный может
реплицироваться, поэтому каждый носитель в принципе может выделять в
биологические жидкости вирус.

Профилактика.
Неспецифическая — сводится к правильной стерилизации медицинских инструментов,
применение одноразовых шприцев. Донорская кровь должна быть исследована на Hbs
Ag и на антитела к гепатиту В.

Специфическая — представлена 2мя типами вакцин: 1.
Плазменная субъединичная вакцина. Это вакцина от носителей Hbs Ag у которого
берут плазму, концентрируют, стерилизуют. Используется редко. 2.
Генноинжинерная вакцина (дрожжевая) получают путем пересадки гена, отвечающего
за продукцию Hbs Ag в клетке дрожжей. С помощью этой вакцины иммунизируют детей
родившихся от матерей страдающих гепатитом В, лицам подвергающимся частым
парентеральным вмешательствам, медработникам.

Диагностика.
Заключается в обнаружении Hbs Hbc Hbe Ag c помощью иммуноферментного анализа и
в обнаружении антител — антиНвс и антиНве иммуноглобулины.

Гепатит Д. Неизвестно таксономическое положение вируса
HDV. Известно что HDV представляет собой дефектную вирусную частицу, размером
30-35 нм. Она представляет собой однонитчатую РНК, окруженную белком. Для того
чтобы эта частица была инфекционноспособной она должна быть окружена
суперкапсидом Hbs Ag вируса гепатита В, т.е вирус функционирует только
совместно с вирусом гепатита В. HDV (или дельта вирус ) повсеместно
распространен, но он сопровождает гепатит В, составляя около 2% гепатита В. То
есть дельта инфекция является коинфекцией ил суперинфекцией, которая протекает
более тяжело, с хронизацией процесса.

Диагностика. Возможна
по антигенам и антителам с помощью ИФА.

ГЕПАТИТ С. Вирус гепатита С относится к Flaviridae
это сложный РНКовый вирус размером 80 нм, распространен повсеместно. Передается
также как HВV, но особенностью является то что он чаще передается
посттрансфузионно (50% посттрансфузионных гепатитов относятся к гепатиту С).

Клиника. Такая
же как и у гепатита В.

Диагностика. Сводится
к определению антител.

Из всех видов гепатитов, только гепатит А дает
устойчивый иммунитет, так что можно переболеть несколькими гепатитами (А+В,В+Д
и даже А+В+Д, а потом С).

Лечение гепатитов
очень дорогое — стоимость лечения одного больного гепатитом В стоит 4 млн,
гепатита А 2 млн.

Скачать полную версию реферата [7,4 Кб] Информация о работе

Источник