Расшифровка анализа крови на антитела гепатита с
Антитела к гепатиту С (АТ) – один из основных маркеров инфицирования. Лабораторное определение иммуноглобулинов (IgG и IgM) входит в протоколы обязательного обследования работников торговли, медицинских и детских образовательных учреждений, беременных женщин и т.д.
С учетом распространения HCV (по данным статистики, инфицировано порядка 200 млн. человек) очень важно наличие точных и доступных методов диагностики. Только так можно вовремя выявить не проявляющую себя болезнь и немедленно начать лечение, которое при использовании современных препаратов будет результативным практически у 100% пациентов.
Структуру возбудителя гепатита С (Ц) составляют различные протеины, которые проникая в организм провоцируют ответную реакцию иммунной системы. Эти патогенные белки, антигены, стимулируют иммунитет, и результатом подобного взаимодействия служит появление антител.
Пространственная структура АТ напоминает английскую букву «Y». Нижняя часть одинакова у всех без иммуноглобулинов, но верхняя строго специфична и может взаимодействовать только с определенным антигеном.
Исследование, позволяющее выявить наличие иммуноглобулинов к антигенам HCV в крови человека, называют ИФА (иммуноферментным анализом). Благодаря современным технологиям, проведение данного теста не представляет сложности и возможно в условиях практически любой лаборатории.
Более того, в аптеках появляется все больше экспресс-тестов, предназначенных для предварительной диагностики вирусного гепатита С (ВГС) в домашних условиях.
Но расшифровка результатов серологических исследований проводится с оглядкой на особенности функционирования иммунитета. При некоторых заболеваниях, на фоне приема ряда лекарственных препаратов АТ или не вырабатываются, или синтезируются в недостаточном для лабораторного выявления количестве.
И наоборот, избыток антител вследствие системной инфекции (например, туберкулеза) или появление нетипичных белковых соединений при беременности нередко приводит к ложноположительному результату.
Что значит антитела к HCV?
Антитела к вирусу гепатита С (АТ) – продуцируемые в крови белковые соединения в ответ на контакт организма с антигенами возбудителя инфекции. Соответственно, если при исследовании обнаружены специфические Ig (G или M), это значит (за редким исключением), что человек инфицирован.
Иногда больной не подозревает о своем диагнозе. По статистике, у 50–65% пациентов гепатит С диагностируется случайно при прохождении медицинского осмотра, постановке на учет при беременности и т.д.
Количественная полимеразная цепная реакция позволяет определить активность патологического процесса (вирусную нагрузку). ИФА не дает такой информации.
В ходе диагностики болезни, определение наличия антител проводят несколькими способами (в зависимости от показаний).
| Тип проводимого иммуноферментного анализа | Краткое описание |
| Определение суммарного титра антител (обычно обозначается Total) | Не предусматривает дифференцировки на подвиды иммуноглобулинов Положительный анализ говорит в пользу инфицирования и необходимости дальнейшего обследования человека |
| Антитела IgM | Результат необходим для дифференцирования острой инфекции от хронического течения болезни |
| Антитела IgG и авидность IgG | Исследование демонстрирует длительно протекающее инфицирование, а тест на авидность позволяет выяснить время инфицирования (менее или более 3–4 месяцев до проведения теста). В обязательном порядке проводится, если человек является носителем HCV |
| Антигены определенных неструктурных протеинов HCV и ядерного белка core | Анализ не входит в стандартный протокол обследования, но является более специфичным и часто проводится в комплексе с выявлением IgG |
Классы антител
В настоящее время известно о 5 классах антител, циркулирующих в крови человека либо вырабатываемых при инфицировании, аллергической реакции и других синдромах.
Их обозначают буквами латинского алфавита (указывается после аббревиатуры Ig):
- IgG – основной класс антител, присутствующих в организме, является маркером вторичного иммунного ответа на инфицирование;
- IgM – вырабатывается при контакте с ранее «неизвестным» антигеном;
- IgD – роль данного антитела в иммунной реакции организма окончательно не установлена;
- IgE – вырабатывается при контакте с аллергеном, в том числе с токсинами, выделяемыми паразитами;
- IgA – преимущественно встречается в слизистом эпителии ротовой полости, уретры, половых органов, респираторного и пищеварительного тракта.
Учитывая патогенез развития гепатита С, диагностическое значение имеет только два класса иммуноглобулинов М и G. Но при выявлении HCV-инфекции немалую роль играют и антитела к структурным белкам и ядерному протеину core.
Такое исследование назначается не всем пациентам, но данный анализ часто необходим для определения прогноза терапии (особенно при решении вопроса для назначения схемы лечения).
| Anti-core | Является основным маркером заражения, но учитывается только при первичной диагностике, так как повышенные титры сохраняются и после результативного лечения |
| Anti-NS3 | Вырабатывается при остром течении инфекции (иногда доктора сразу не начинают терапию, давая иммунной системе самостоятельно справиться с инфекцией) |
| Anti-NS4 | Титры этого Ig коррелируют с тяжестью поражения печени |
| Anti-NS5 | Предиктор перехода патологии в хроническую стадию |
Когда возможно выявление антител гепатита С
Знание сроков, когда появляются те или иные иммуноглобулины, позволяет максимально точно провести диагностику и свести к минимуму риск ложноотрицательных результатов.
Так, выявление антител гепатита С целесообразно проводить с учетом следующих данных:
| Класс антител | Сроки появления в кровотоке |
| Недифференцированный Anti-HCV | До 2 месяцев после попадания HCV в кровь (за счет выработки IgM) |
| IgM | Сроки появления индивидуальны, в среднем – до полутора месяцев |
| Anti-NS3 | Обнаруживаются и циркулируют в крови практически одновременно с IgM |
| Anti-NS5 | Вырабатываются через 4–6 месяцев при постепенном затухании острого процесса и переходе болезни в хроническую вялотекущую стадию |
| IgG | Вырабатываются при хронической форме заболевания, через 6–8 месяцев после заражения |
| Anti-NS4 | Антитела обычно появляются на стадии поражения печени, обычно 10–11 месяцев, иногда – год, после инфицирования |
Точные сроки появления антител (вне зависимости от класса и включая АТ к структурным и неструктурным протеинам вируса) назвать практически невозможно, все зависит от интенсивности иммунного ответа. Поэтому, если не обнаруживается маркер Anti-HCV Total, но риск инфицирования велик. Рекомендовано повторное проведение теста через 14–21 день.
И наоборот, если антитела гепатита С есть, а ПЦР отрицательный, необходимо определить причину подобного результата. Но в любом случае человек остается под медицинским наблюдением. Направления на сдачу крови выдаются раз в 2–4 месяца до получения однозначного результата.
Лабораторные исследования ПЦР и ИФА
В настоящее время специалисты с уверенностью говорят, ВГС вполне излечим, но при условии своевременной диагностики. Процесс обследования пациента проходит в несколько стадий. Таким образом врач получает максимально полную картину о состоянии пациента.
Показаниями к проведению анализа методом ИФА (Anti-HCV Total) служат:
- регулярное ежегодное обследование (по требованиям законодательства);
- комплексная диагностика женщин при беременности;
- сомнительные результаты печеночных проб;
- типичные для ВГС клинические проявления;
- предполагаемое заражение, например, при использовании общих медицинских инструментов или половом акте с инфицированным;
- постоянное проживание с больным;
- наличие ВИЧ и других иммунодефицитных состояний.
Позитивный результат анализа на АТ является показанием для проведения других диагностических тестов. Назначаются:
- тест на авидность антител (для определения ориентировочных сроков инфицирования);
- дифференцированный анализ ИФА (отдельное выявление Ig различных классов).
Но иногда данными исследованиями пренебрегают и сразу назначают ПЦР. Суть данного анализа состоит в определении РНК возбудителя инфекции.
Полимеразная цепная реакция – наиболее точный маркер ВГС и делится на несколько типов:
- качественная, необходима только с целью выявления РНК;
- количественная;
- генотипирование, проводится после подтверждения диагноза для установления разновидности вируса.
Другие анализы и инструментальные исследования назначают по усмотрению доктора.
Выявление антигенов
Обнаружение антигенов к HCV не входит в протокол обязательных диагностических исследований. Анализы проводят при положительных тестах ИФА для прогнозирования дальнейшего развития инфекции. В некоторых случаях терапию не начинают, дожидаясь возможного самоизлечения (вероятно у трети больных без приема каких-либо препаратов).
Выявление Anti-NS5 как предиктора перехода в хроническую форму служит показанием для начала лечения. Превышение показателей anti-NS4 – возможный признак тяжелой печеночной энцефалопатии. Это также служит показанием к соответствующей терапии: назначению сильнодействующих схем лечения, соответствующих гепатопротекторов, обязательном соблюдении строгой диеты и т.д.
Носительство
По мере изучения строения вируса и особенностей развития болезни употребление термина «носительство HCV» является достаточно спорным. Иногда так именуют бессимптомное течение гепатита С на фоне позитивного результата Anti-HCV и минимальной вирусной нагрузки.
Но в соответствии с последними рекомендациями ВОЗ, при наличии критериев ВГС либо маркеров хронизации патологического процесса необходимо начинать соответствующее лечение.
Если антитела остаются после лечения
На этапе терапии критерием ее эффективности является только результаты количественной и качественной ПЦР. Дело в том, что антитела класса G (IgG) вырабатываются на фоне хронической формы HCV и долгое время остаются в крови и, соответственно, определяются методом ИФА и после лечения гепатита С. Как правило, они исчезают через 3–5 лет после окончания терапии, но иногда их выявляют и на протяжении всей жизни.
После проведенного терапевтического курса единственным критерием выздоровления служит отрицательный результат качественной ПЦР (она более чувствительна по сравнению с количественной методикой определения).
Суммарные антитела к вирусу гепатита С
Суммарное определение иммуноглобулинов проводят на первой стадии диагностики. В норме результат отрицательный.
Но вероятность ошибочного позитивного результата возникает:
- при вынашивании ребенка (выделяются специфические протеины, которые ошибочно распознаются тест-системами как Анти HCV);
- при системных инфекциях, когда существенно повышается уровень иммуноглобулинов всех классов;
- при перенесенном ранее гепатите С в острой форме, после чего в крови надолго сохраняются IgG.
Если АТ к гепатиту С обнаружены у ребенка, это далеко не всегда является критерием инфицирования. Специфические Ig могут появляться сразу после рождения и сохраняться на протяжении 1– 3 лет (потом отмечают их исчезновение) при наличии IgG или IgM у матери во время беременности вследствие активной инфекции либо перенесенного заболевания.
Риск внутриутробной передачи вируса невелик. Современные технологии родоразрешения практически на 100% защищают младенца от заражения. Но ребенок с положительным ИФА (при условии отрицательной ПЦР) должен оставаться под наблюдением врача до получения отрицательных результатов анализов.
Исследование на суммарные антитела к вирусу гепатита С может быть ложноотрицательным при:
- аутоиммунных заболеваниях (в том числе аутоиммунном гепатите);
- ВИЧ/СПИД;
- различных иммунодефицитных состояниях на фоне нарушения системы кроветворения, приема некоторых лекарственных препаратов (иммунодепрессантов, цитостатиков, противоопухолевых средств, больших доз кортикостероидов и т.д.).
Поэтому перед назначением анализов врач тщательно собирает анамнез пациента, обязательным является исследование на ВИЧ. Эта информация поможет избежать ненужных обследований и способствует правильной расшифровке результатов диагностических тестов.
Расшифровка анализа крови
Практически во всех бланках лабораторных исследований на антитела к вирусу гепатита С приведены референсные результаты (норма для здорового человека). При определении конкретного вида иммуноглобулинов указываются их количественные значения (титр), что свидетельствует о тяжести течения вирусной инфекции.
Примерная расшифровка данных ИФА приведена в таблице.
| Метод проведения анализа | Вероятная трактовка при положительном результате |
| Anti-HCV Total, Anti-HCV core |
|
| IgM HCV | Острая форма инфекции |
| IgG |
|
| Anti-NS3 | Острое течение вируса, недавнее инфицирование |
| Anti-NS4 | Длительное течение гепатита С, высока вероятность необратимых изменений печеночной ткани |
| Anti-NS5 | Начальные стадии хронической формы гепатита С, наличие РНК вируса в высоких концентрациях |
Но только доктор сможет точно объяснить, что значит, когда антитела к гепатиту С обнаружены или пропали после предшествующего анализа методом ИФА.
Диагноз HCV ставится только на основании нескольких анализов, включая ПЦР с определением значимых уровней вирусной нагрузки. Самостоятельная интерпретация результатов, а тем более начало терапии может закончиться резистентностью вируса и тяжелыми необратимыми последствиями.
Уже после пройденного курса терапии пациента обычно интересуются, остаются ли антитела после лечения гепатита С. Когда исчезают специфические иммуноглобулины, зависит от активности иммунной системы, вирусной нагрузки, длительности течения заболевания.
Как правило, доктора говорят о нескольких годах после терапии, иногда повышенные титры IgG сохраняются на протяжении всей оставшейся жизни. Но положительный результат качественной и/или количественной ПЦР уже после пройденного лечения свидетельствует либо о повторном инфицировании, либо о возобновлении патологического процесса.
Кто относится к группе риска
С появлением доступных схем терапии, гепатит С перестал быть приговором. Но эффективность и прогноз лечения напрямую связан с тем, на каком этапе обнаружена патология.
Поэтому при наличии повышенного риска заражения рекомендуют сдавать кровь методом ИФА 1–2 раза в год:
- работникам в сфере медицины, причем речь идет не об администраторах, а медсестрах, врачах, работниках донорских служб, которые постоянно контактируют с кровью и другими биологическими жидкостями;
- трудящимся в сфере услуг (особенно, выполняющих маникюр и педикюр) из-за высокого риска заражения при использовании острых инструментов;
- пациентам с иммунодефицитными состояниями (особенно ВИЧ), аутоиммунными заболеваниями, онкологических больных;
- людям с тяжелыми болезнями, вынужденным по состоянию здоровья проходить частые инвазивные медицинские процедуры (гемодиализ, диагностические манипуляции, переливание крови и ее элементов, трансплантацию органов);
- парам, предпочитающим гомосексуальные отношения (особенно при отсутствии постоянного полового партнера).
Риск заражения существенно повышен у людей, ведущих асоциальный образ жизни.
Источник
Антитела к NS и core гепатита С – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются к структурным и неструктурным белкам вируса. Антигены вируса и антитела к нему обнаруживаются в рамках серологического исследования, которое называется иммуноферментным анализом (ИФА). Его выполняют при подозрении на гепатит С, во время противовирусной терапии и после нее. Снижение уровня антител (anti-HCV) отдельных классов указывает на полное уничтожение возбудителя инфекции.
Структурные и неструктурные белки гепатовируса
HCV – вирус рода Hepacivirus из семейства Flaviviridae, провоцирующий инфекционное воспаление печени. Когда антиген (чужеродное вещество) проникает в организм, возникает иммунный ответ, который характеризуется выработкой антител. При заражении гепатитом С специфические иммуноглобулины синтезируются к разным частям вируса:
- Ядро – содержит структурный белок core. При инфицировании он встраивается в геном клеток печени. В результате они превращаются в фабрику по производству дочерних вирионов. В 1 зараженной клетке ежедневно синтезируется от 30 до 50 вирусов.
- Оболочка – нуклеотидные протеины типа Е1 и Е2. Участвуют во взаимодействии возбудителя с иммунными клетками крови. Они помогают вирусу гепатита С (ВГС) защищаться от Т-лимфоцитов, гранулоцитов, фагоцитов и других клеток, борющихся с антигенами.
- Фрагменты генома – неструктурные белки типа NS2, NS3, NS4, NS5. Выполняют регуляторные функции, участвуют в репликации, то есть образовании копий вируса.
Структурные и неструктурные белки ВГС – антигены, к которым иммунная система вырабатывает антитела. Поэтому анализ на anti-HCV назначается всем людям с подозрением на гепатит С.
В рамках иммуноферментного анализа определяют только три неструктурных белка – NS3, NS4 и NS5. В действительности их больше и каждый выполняет определенные функции. Одни участвуют в расщеплении ферментов и белков, а другие – в сборке скопированного генетического материала. Учеными обнаружено 11 неструктурных белков, но функции некоторых из них до сих пор неизвестны.
Как проводят анализ на антигены и антитела к вирусу гепатита
Анализ на антитела к ВГС (anti HCV) – молекулярно-биологическое исследование, направленное на выявление иммуноглобулинов к гепатиту С. В его основе лежит реакция антиген-антитело, при которой формируются устойчивые комплексы из белков возбудителя и плазмы крови.
Чтобы обнаружить anti-HCV, во время анализа используют специальные ферменты. Они выполняют функцию меток, позволяющих регистрировать соответствующие сигналы. Главное преимущество серологического анализа – высокая специфичность. Полученные результаты дают информацию о:
- типе возбудителя;
- стадии заболевания;
- форме гепатита (острый или хронический).
Для анализа берут венозную кровь из локтевой вены. Подготовка к исследованию не занимает много времени. Пациентам рекомендуют выполнять процедуру натощак в утренние часы, не курить за полчаса до сдачи крови.
Для чего назначается анализ на anti-HCV:
- первичная диагностика HCV-инфекции;
- дифференциальная диагностика гепатитов;
- выявление ранее перенесенного заболевания.
В случае раннего заражения (период до 4 недель) возрастает риск ложноотрицательного результата анализа. Поэтому даже при отсутствии в крови иммуноглобулинов дополнительно выполняется ПЦР на гепатит С. Если РНК возбудителя обнаруживается, диагноз подтверждают.
Анализ на anti-HCV выполняется при:
- обследовании лиц из группы риска (хирургов, прооперированных пациентов, реципиентов крови);
- признаках инфекционного поражения печени;
- повышенном содержании печеночных ферментов;
- планировании беременности;
- мониторинге эффективности антивирусной терапии.
Сразу после забора крови лаборант подписывает образец и отправляет его в лабораторию для анализа. На исследование уходит не более 2-3 рабочих дней.
Расшифровка результатов
Если в крови обнаруживают иммуноглобулины к ВГС, это еще не свидетельствует о заражении. По статистике, до 30% пациентов излечиваются самостоятельно. Все они даже не догадываются, что переболели опасным заболеванием, исходом которого нередко становится фиброз, цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.
Виды антител, которые выявляются при иммуноферментном анализе:
- Anti-HCV core IgM – иммуноглобулины, которые синтезируются к ядру возбудителя. Они начинают циркулировать в крови раньше других антител. При хронической форме гепатита их концентрация сильно уменьшается.
- Anti-HCV NS – антитела, синтезированные к неструктурным белкам ВГС. Если при анализе выявляются anti-NS3, это свидетельствует об острой форме гепатита. Белковые комплексы anti-NS4 и anti-NS5 обнаруживаются преимущественно при переходе гепатита в вялотекущую форму.
- Anti-HCV total – суммарные антитела, которые возникают к возбудителю. Если они выявляются во время анализа, это значит, что человек либо заражен гепатитом, либо перенес инфекцию.
Во время диагностики вирусной болезни учитываются результаты качественной ПЦР. При выявлении HCV RNA, то есть РНК возбудителя, диагноз подтверждается.
Пример иммуноферментного анализа с расшифровкой данных
| Данные анализа | Интерпретация данных |
| HCV IgG core 16.40 (положительно) | В плазме присутствуют высокие титры IgG (NS) и IgG (RNA). РНК предстоит выявить, так как велика вероятность заражения гепатитом |
| anti-HCV IgG NS3 14.20 (положительно) | |
| anti-HCV IgG NS4 16.40 (положительно) | |
| anti-HCV IgG NS5 0.34 (отрицательно) | |
| anti-HCV IgG NS3 0.08 (отрицательно) | Если core положительно, а NS –отрицательно, результат считается сомнительным. Для подтверждения диагноза прибегают к дополнительному анализу – реал-тайм ПЦР |
| anti-HCV IgG NS4 8.30 (положительно) | |
| anti-HCV IgG NS5 0.07 (отрицательно) | |
| anti-HCV IgG core 0.15 (отрицательно) |
Во время иммуноферментного анализа обязательно определяют позитивность пробы на структурный белок ВГС – КП (core-Ag). Коэффициент позитивности применяется для оценки уровня иммуноглобулинов в крови. В мировой практике он измеряется в МЕ/мл. Результаты анализа считаются положительными, если этот коэффициент превышает 1. Иными словами, чем выше КП, тем больше содержание иммуноглобулинов в образце.
Если данные иммуноферментного анализа указывают на инфицирование, выполняют ПЦ.
После подтверждения диагноза проводят дополнительные инструментально-лабораторные исследования, посредством которых определяются:
- структурные изменения – фиброз, цирроз печени, печеночно-клеточный рак;
- вирусная нагрузка – концентрация РНК возбудителя в 1 мл крови;
- активность воспаления – стадия гепатита С;
- генотип ВГС – тип и подтип возбудителя.
С учетом результатов анализов составляют схему противовирусной терапии. При курсовом приеме ингибиторов неструктурных белков ВГС – Софосбувира, Нарлапревира, Ледипасвира Омбитасвира, Даклатасвира – выздоровления достигают 96-100% пациентов. Поэтому если вы подозреваете гепатит, запишитесь на прием к врачу.
Источник
