Реферат на тему лабораторная диагностика гепатитов с и в

Содержание

Введение
1. Эпидемиология вирусного гепатита C
2. Вирус гепатита С (hepatitis С virus, HCV)
3. Лабораторная диагностика вируса гепатита C
4. Скрининговая диагностика
5. Специфическая диагностика
6. Профилактика вирусного гепатита C
7. Проблемы и перспектива специфической профилактики гепатита C
Список использованных источников

Введение

Вирусный гепатит C (ВГС) — это широко распространенное инфекционное заболевание, вызываемое РНК-содержащим вирусом, с преимущественным поражением печени. Острое течение заболевания характеризуется преобладанием стертых и субклинических форм с большой вероятностью перехода в хроническое течение.

До недавних пор вирусный гепатит C обозначался как вирусный гепатит ни А и ни В с парентеральным механизмом передачи. Заболевание с невыявленным возбудителем составляла триаду наиболее распространенных вирусных гепатитов. Возбудитель впервые был идентифицирован М. Houghton и сотрудниками в 1989 г. Усилиями этой группы исследователей был синтезирован искусственный рекомбинантный антиген вируса и предложена диагностическая тест-система для прямого определения специфических антител методом ИФА.

Варианты заражения Гепатитом C:

• При переливании крови и ее компонентов.
• При нанесении татуировок и пирсинга. Использование плохо стерилизованных, а иногда и вовсе не обрабатываемых, инструментов.
• При посещении стоматолога, маникюрных кабинетов.
• При использовании общих игл для внутривенного введения наркотиков.
• При использовании общих с больным человеком зубных щеток, бритв, маникюрных ножниц.
• От матери ребенку во время рождения
• При половом контакте.
• Уколы инфицированными иглами.

1. Эпидемиология вирусного гепатита C

В настоящее время в разных странах мира вирусным гепатитом C поражено не менее 200 млн. человек.

Распространенность заболевания в популяции колеблется от 0,5-1% (Северная Европа) до 4-10% (Африка, Ближний Восток, Восточная Европа).

Вирусный гепатит C является одной из основных причин развития хронического диффузного поражения печени и гепатоцеллюлярной карциномой. Цирроз печени, развившийся в исходе вирусного гепатита C, представляет одно из наиболее частых показаний к трансплантации печени. Все это указывает на чрезвычайную значимость гепатита С для здравоохранения многих стран.

Заражение HCV в основном происходит парентеральным путем. Сюда относят инфицирование при переливании зараженной консервированной крови и ее продуктов (факторов свертывания, плазмы, альбуминов и др.), а также многократное использование инъекционных канюль. Повышают риск передачи HCV процедуры гемодиализа, парентеральные инъекции, нарушение целостности кожи при акупунктуре, нанесении татуировок и пирсинге.

Считается, что профессиональное заражение HCV в среде медицинских работников происходит реже, чем инфицирование вирусом гепатита В.

В результате введения обязательного тестирования всех переливаемых доз консервированной крови и ее продуктов удалось достичь уменьшения частоты посттрансфузионного гепатита С. Сохраняющийся минимальный риск заражения связан главным образом с наличием у донора острого периода инфекции, не диагностируемой с помощью скрининговых методов обнаружения антител к HCV.

Очень высока (70-90%) распространенность вирусным гепатитом C в популяции больных наркоманиями, что связано с нестерильным парентеральным введением наркотиков. Значимость этого пути распространения HCV-инфекции подтверждается частой выявляемостью признаков вирусного гепатита C даже при небольшой продолжительности употребления наркотиков.

Роль половых контактов в передаче вирусного гепатита C достаточно скромна; половым путем инфекция передается не более чем в 5% случаев, тогда как при вирусном гепатите B эта величина достигает 30%. Риск передачи вирусного гепатита C внутри семьи, члены которой не являются половыми партнерами, близок к нулю.

Вопрос вертикального заражения HCV (от инфицированной матери к плоду) изучен не до конца. Трансплацентарный путь заражения не имеет существенного значения (но риск заражения значительно повышается при ассоциации ВГС и ВИЧ-инфекции). Вместе с тем необходимо принимать во внимание, что возможность заражения значительно возрастает в родах, что обусловлено нарушением целостности слизистых родовых путей инфицированной матери.

Длительность инкубационного периода вирусного гепатита С в зависимости от пути передачи колеблется от 2 до 26 недель и в среднем составляет 6-8 недель.

2. Вирус гепатита С (hepatitis С virus, HCV)

Принадлежит к семейству флавивирусов (Flaviviridae). Ко всем белкам вируса, включая гликопротеины оболочки, вырабатываются антитела, выявляемые в крови больных. Существование разных субтипов вируса определяется вариабельностью соотношения циркулирующих антител. Подобно другим флавивирусам, HCV при репликации образует иммунологически различающиеся антигенные варианты, которые обладают значительными возможностями адаптации и избегают иммунного надзора, что делает сложной разработку вакцины. Важной особенностью HCV является не только антигенная, но и генетическая неоднородность, обусловленная изменчивостью последовательности нуклеотидов с образованием различных генотипов и субтипов. Разные авторы выделяют от 4 до 30 генотипов HCV. Для клинической практики имеют значение 6 генотипов возбудителя вирусного гепатита C: 1a, 1b, 2а, 2b, 3а и 4. Отдельные генотипы HCV имеют различное географическое распространение. Для Японии и некоторых других стран Дальнего Востока характерны генотипы 1b (получивший название «японского генотипа»), 2а и 2b. В Северной Америке преобладает генотип 1а («американский»). В различных странах Европы преимущественно регистрируются генотипы 1 а и 1b. Для стран Ближнего Востока и Северной Африки характерен «египетский» генотип 4 (последняя разновидность HCV вызывает гепатит с неблагоприятным течением и переходом в хронические формы у 80-85% больных). Примечательно, что перекрестного иммунитета разные штаммы не дают.

По данным различных исследователей и по нашим наблюдениям, в России в последние годы главным образом выявлялся генотип 1b, обусловливающий относительно неблагоприятное течение вирусного гепатита C, высокое содержание HCV-PHK в сыворотке крови, низкую эффективность противовирусной терапии и высокую частоту осложнений. Вместе с тем, в настоящее время все чаще диагностируются разновидности 2а и 3а, что указывает на большую изменчивость HCV.

Генетическая неоднородность, большая изменчивость и внепеченочная репликация HCV в недоступных для иммунного надзора местах (лимфатические узлы, селезенка, моноциты) способствуют длительной персистенции вируса в организме, что является главной причиной высокой (50-80%) частоты перехода острого вирусного гепатита C в хронические формы. Механизмы неэффективной элиминации вируса изучены недостаточно; основное значение придается его изменчивости.

3. Лабораторная диагностика вируса гепатита C

Учитывая, что при HCV вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-HCV, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1). Таким образом, лабораторная диагностика HCV основывается на обнаружении серологических маркерв HCV: антител к HCV (анти- HCV, анти- HCV класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК- HCV методом ПЦР.

4. Скрининговая диагностика

С целью скрининговой диагностики HCV применяют определение так называемых общих антител к HCV (Anti-HCV), поскольку положительных результатов данного исследования ограничена – наличие общих антител к HCV позволяет лишь констатировать факт контакта пациента с вирусом гепатита С и не позволяет судить о давности процесса, а также о его прогрессировании или о завершенности (не может служить показателем выздоровления больного). Также не отмечается и корреляции с выраженностью клинического течения HCV-инфекции. Таким образом, обнаружение только общих антител к HCV дает основание для дальнейшего комплексного, в том числе специфического лабораторного обследования. (!) Общие антитела к вирусу гепатита С сохраняются в организме неограниченное время.

При положительном результате обследования пациента на антитела к HCV и отсутствии клинической картины гепатита необходимо направить пациента к инфекционисту. Для получения более полной характеристики следует провести дополнительное обследование: (1) биохимическое исследование крови (т. н. печеночные пробы – АЛТ, АСТ, ГГТП (g-глутамилтранспептидаза), холестерин, билирубин и т. д.); (2) раздельное определение антител к HCV; (3) исследование крови на РНК вируса (ПЦР) и при его обнаружении: определение генотипа и титра; (4) желательно также ультразвуковое исследование органов брюшной полости.

5. Специфическая диагностика

Специфическая лабораторная диагностика HCV-инфекции основана на:

1. обнаружении специфических антител к основным антигенам вируса
2. определении РНК вируса, его количества и генотипа.

1. ОБНАРУЖЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ОСНОВНЫМ АНТИГЕНАМ ВИРУСА

Антитела класса IgG к вирусу гепатита С (анти-HCV IgG) свидетельствуют о возможной инфицированности HCV или перенесенной инфекции (определяются в скрининговых исследованиях). В свою очередь антитела класса IgG к ядерным белкам HCV (анти-HCV core IgG) свидетельствуют об инфицированности HCV или перенесенной инфекции.

Антитела класса IgM к HCV, определяемые иммуноферментным методом, позволяют говорить не только об инфицировании HCV, но с определенной долей достоверности об острой фазе инфекции или обострении хронического гепатита, несмотря на отсутствие симптомов болезни и гиперферментемии АЛТ, АСТ.

Следует отметить, что к настоящему времени разработаны четыре поколения тест-систем для выявления анти- HCV в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. Иммуноферментные тест-системы третьего поколения для определения антител к HCV, где в качестве связывающего антигена на твердой фазе используются иммунореактивные синтетические пептиды, являются достаточно чувствительными и информативными, а их широкое использование повысило процент выявления лиц, инфицированных HCV.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РНК ВИРУСА

Вирусная РНК выявляется в цитоплазме большинства гепатоцитов печени уже на первой-второй неделе заражения. В последующем количество вирусных частиц периодически может увеличиваться, но это не всегда коррелирует с наличием РНК в сыворотке крови или со степенью воспалительных изменений в печени. Максимально виремия наблюдается в начале острого периода болезни. Антитела появляются спустя 6–12 недель от начала развития гепатита. Прежде всего выявляются антитела к структурным (связанным с ядерным белком) протеинам, а затем – к неструктурным белкам – NS3, NS4 и NS5 регионов геномa.

Определение рибонуклеиновой кислоты HCV (или HCV-RNA) проводится с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции), которая позволяет с высокой степенью точности показать присутствие или отсутствие вирусной РНК в крови. Метод ПЦР позволяет определить вирусный генотип и его подтип, а также количество РНК (титр или количество генокопий в мл).

Определение генотипа HCV и его титра (т.н. полуколичественное исследование) в крови пациента используется как для диагностики HCV-инфекции, так и для дополнительной оценки активности вирусного процесса и для контроля эффективности комплексного, в том числе противовирусного лечения. Интерпретация полученных результатов ПЦР оценивается следующим образом: 1 + (1:1) и 2 + (1:10) – вирусная РНК определяется в низком титре, уровень виремии низкий, 3 + (1:100) – средний уровень виремии и наконец 4 + (1:1000) и 5 + (1:10000) – высокий уровень виремии.

Следует указать на то, что недостатком этого метода является его (!) технологическая сложность и достаточно высокие в настоящее время экономические затраты, что не позволяет широко внедрить его в массовое лабораторное обследование.

6. Профилактика вирусного гепатита C

В отличии от гепатита А и гепатита В специфическая профилактика гепатита С в настоящее время отсутствует. Поэтому одним из средств борьбы остается соблюдение мер предосторожности и элементарной гигиены:

1. Серьезный контроль за применением шприцев, бор-устройств и других инструментов в медицинских учреждениях и салонах красоты. После каждого посетителя многоразовое оборудование должно тщательно дезинфицироваться. Одноразовый же инструмент к повторному использованию не допускается.
2. Наркомания – особый диагноз. Употреблять наркотики категорически не рекомендуется. Однако если вы все же это делаете, то каждую инъекцию следует производить новым шприцем.
3. Избегайте незащищенных половых актов с малознакомыми людьми. Наиболее высока вероятность инфицирования во время анального секса, намного меньше – при оральном половом акте.
4. Если с вами случилась ситуация, при которой в вашу кровь мог попасть вирус гепатита С, незамедлительно сдайте анализы, так как лечение на ранних стадиях поможет справиться с болезнью с наименьшими негативными последствиями для вашего организма.
5. Не применяйте чужие бритвенные станки, зубные щетки и другие предметы, где может оказаться зараженная кровь.

В данной ситуации, в отсутствии вакцины против вируса гепатита С, в качестве современного и эффективного метода борьбы с хроническим гепатитом С, может выступать только противовирусная терапия, которая поможет больному человеку справиться с прогрессированием заболевания, а также уменьшить риск заражения окружающих его людей.

Как в нашей стране, так и в мире для лечения больных хроническим гепатитом С используются специальные противовирусные препараты. Сегодня для лечения таких больных используется противовирусный препарат: интерферон-альфа, (в том числе его пролонгированная форма) и рибавирин.

Выбор препаратов, их дозы и длительность лечения могут быть осуществлены только высококвалифицированными специалистами и проводиться такая терапия может и должна в условиях специализированных клиник, имеющих опыт проведения противовирусной терапии.

7. Проблемы и перспектива специфической профилактики гепатита C

В настоящее время разработка вакцины от гепатита С сопряжена с трудностями. Несколько вакцин находятся в стадии разработки.

Большинство вакцин работают посредством индукции выработки антител, которые нацелены на наружные поверхности вирусов. Однако вирусы гепатита С разных штаммов сильно отличаются друг от друга и быстро мутируют, что осложняет создание эффективной вакцины. Подробная структура E2 envelope glycoprotein, который считается ключевым белком вируса и используется им для вторжения в клетки печени, была выяснена учёными The Scripps Research Institute (TSRI) в ноябре 2013 года. Это открытие, как ожидается, проложит путь к разработке вакцины против ВГС, которая будет стимулировать антительный ответ с нейтрализующим воздействие на широкий спектр штаммов вируса. Другая стратегия, которая отличается от обычных вакцин, заключается в стимуляции Т-клеточного иммунного ответа, используя аденовирусные векторы, которые содержат в себе большие части генома вируса гепатита С, чтобы индуцировать Т-клеточный иммунный ответ против этого вируса.

Большая часть работы над Т-клеточной вакцины была проведена против конкретного генотипа. Существует не менее шести различных генотипов вируса. Первая одобренная вакцина, скорее всего, будет нацелена на генотипы 1a и 1b, на долю которых приходится более 60 % хронической ВГС-инфекции во всём мире. Скорее всего после первой лицензированной вакцины будут рассмотрены следующие по распространённости генотипы.

Специфические вакцины

Одна из попыток создания вакцины связана с модификацией ядерного антигена гепатита B (HBcAg) таким образом, чтобы он подходил для защиты от гепатита С. В СМИ сообщалось об исследовании 2006 года, в котором 60 пациентов получали четыре различные дозы экспериментальной вакцины. Все стали производить антитела, а исследователи сделали вывод, что эти антитела защищают их от вируса. Тем не менее, в 2008 году вакцины всё ещё проходили испытания. Некоторые кандидаты в 2011 году проходили фазы I и II клинических испытаний.

В 2014 году исследователи из Южной Австралии сообщали об успеха в лечении гепатита С с использованием нового типа внутрикожной ДНК-вакцины. Инъекции проводились непосредственно в кожу, которая имеет больше белых кровяных клеток, чем мышечные ткани, индуцирует воспаление в месте инъекции и привлекает все больше белых кровяных клеток. Эта вакцина была разработана для лечения пациентов с гепатитом С, но исследователи предполагают, что она может использоваться в качестве профилактической вакцины против гепатита С и ВИЧ в течение ближайших пяти лет.

Исследования вакцин

Развитие лошадиной вакцины от гепатита С, скорее всего, будет приближать нас к созданию вакцины против гепатита С для людей. Учёные только обнаружили ВГС-подобные вирусы у лошадей, грызунов и летучих мышей. Ближайший родственный вирус напоминающей человеческий ВГС, обнаружен у лошадей, в то время как вирусы грызунов и летучих мышей являются менее родственными человеческому ВГС. Секвенирование генома ВГС-подобного вируса лошадей позволит сравнить этот вирус с ВГС человека и других животных, и это поможет учёным узнать больше об отношениях между разными вирусами. Эффективная вакцина для лошадей, скорее всего, приведёт к разработке вакцины для людей. Учёные могут изучать ответ