Результаты качественный рнк на гепатит с
Содержание
- Виды ПЦР
- Показания для анализа
- Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
- Расшифровка результатов ПЦР-исследования
- Преимущества ПЦР-анализа
- Недостатки ПЦР
- Цена ПЦР-анализа на гепатит С
ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.
Виды ПЦР
ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.
Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл. При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.
Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.
При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.
Рекомендуемые товары
Показания для анализа
Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:
- У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
- Проводятся скрининговые профилактические исследования.
- Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
- Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
- Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
- У пациента диагностирован цирроз.
- Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.
Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.
Пациент должен следовать следующим правилам:
- Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
- Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
- Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
- Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).
Расшифровка результатов ПЦР-исследования
Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.
Качественный анализ. Расшифровка
| Обнаружено | Пациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса. |
| Не обнаружено | Пациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности. |
Количественный анализ. Расшифровка
| Не обнаружено | Человек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности. |
| До 1,8*10^2 МЕ/мл | Концентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование. |
| До 8*10^5 МЕ/мл | Низкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении. |
| Больше 8*10^5 МЕ/мл | Высокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. |
| Больше 2,4*10^7 МЕ/мл | Поскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови. |
Генотипирование. Расшифровка
| Обнаружена РНК определенного генотипа | В биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3. |
| Обнаружена РНК вируса гепатита С | В биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования. |
| Не обнаружено | Человек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса. |
Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.
В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:
- Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
- Загрязнение образца крови.
- Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
- Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).
Преимущества ПЦР-анализа
Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.
Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).
Недостатки ПЦР
Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:
- В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
- Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
- Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.
Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.
Цена ПЦР-анализа на гепатит С
В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.
Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.
В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.
Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.
Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.
Источник
РНК гепатита С – это молекула, содержащая наследственную информацию вируса. Именно ее определяет анализ методом ПЦР (полимеразной цепной реакции). Это ключевой этап диагностики, подтверждающий инфицирование гепатитом. Также по строению РНК определяют генотип HCV. Эти данные нужны для выбора терапии, поскольку некоторые подтипы (3а, 3б) не поддаются традиционному лечению интерфероном. Для достоверного результата потребуется соблюдать правила подготовки к исследованию.
Что такое РНК вируса
РНК, или рибонуклеиновая кислота, – это уникальный генетический материал организма. У вирусных гепатитов С от конструкции РНК зависит устойчивость вируса к разным типам лечения и особенности протекания болезни. Появление в крови фрагментов вирусной РНК значит, что болезнь вступила в острую фазу.
У хронических больных в состоянии ремиссии кровь также содержит РНК гепатита С и антитела к ней, но в меньшем объеме, чем при обострениях. Тем не менее, этого количества вируса все равно достаточно для заражения здоровых людей.
Кому назначают диагностику
Обследование крови на РНК HCV нужно в таких случаях:
- При обнаружении антител или повышения печеночных ферментов у человека, считающегося здоровым. Анализы на разные виды гепатита проводят для выявления болезни или ее исключения из списка возможных причин разрушения клеток печени.
- Когда лечат уже обнаруженный гепатит для отслеживания эффективности терапии. Контроль за уровнем вирусной РНК в крови своевременно выявит резистентность (устойчивость) к принимаемым лекарствам.
- После выздоровления на протяжении года – чтобы вовремя заметить рецидив.
Техника проведения анализа
Методом ПЦР обнаруживают нуклеиновые элементы, входящие в состав белковой оболочки вируса. Полимеразная цепная реакция выявляет:
- присутствие фрагментов HCV в крови;
- уровень вирусной нагрузки – количество частиц в миллилитре крови;
- генотип гепатита.
Важно правильно подготовиться к забору крови из вены для полимеразной реакции, чтобы не было искажений в результате теста. Для этого:
- Не употреблять алкоголь, энергетики, жирную и жареную пищу в течение 3 дней до сдачи теста.
- Избегать физических и нервных нагрузок за 2-3 дня до анализа.
- Отказаться от приема лекарств, а если это невозможно – уведомить врача о принимаемых препаратах.
- Не сдавать анализ во время обострения хронических вирусных болезней, а также при ОРВИ.
- При беременности и во время менструации предупредить врача о своем состоянии, поскольку гормональные нарушения в этот период вызывают искажения результатов.
Расшифровка
Обработка крови состоит из трех этапов:
- Определение РНК вируса гепатита в крови (качественный анализ).
- Оценка вирусной нагрузки (количественный анализ). Применяется только при положительном результате первого (когда в материале обнаружено присутствие вируса).
- Генотипирование. Его проводят при первом обращении по подозрению на гепатит, а также при низкой эффективности терапии – чтобы выявить мутацию вируса.
При подозрении на ложный результат потребуется повторно пройти обследование через 2 недели.
Качественный анализ
На оборудовании большинства лабораторий гепатит С будет выявлен, если количество частиц больше 50 МЕ/мл (международных единиц на миллилитр крови). Редкие диагностические аппараты способны выявить гепатит при уровне 10 МЕ/мл. При меньшем количестве частиц вируса будет получен ложноотрицательный результат (гепатита C не обнаружено).
Присутствие в крови антител с одновременным отрицательным результатом на тестирование по вирусу – причина пройти повторное обследование через 2 недели. Также можно обратиться в другую лабораторию с более современным оборудованием для диагностики.
Количественный анализ
По результатам количественного теста можно определить, насколько эффективно организм борется с гепатитом С. Этим тестом определяют прогресс болезни, а также действенность терапевтической программы. Уровень вируса в крови определяют в МЕ/мл. В зависимости от результатов пациента относят к одной из пяти групп:
- Здоров (вируса не обнаружено).
- Минимальный уровень вируса в крови (меньше 180 МЕ/мл. Условно здоров. Иногда может означать ложноположительный результат или скрытое носительство без болезни.
- Болен с низкой вирусной нагрузкой (менее 800 тыс. МЕ/мл)
- Болен с высокой вирусной нагрузкой (от 800 тыс. до 2.5 млн. МЕ/мл)
- Терминальная вирусная нагрузка (более 2,5 млн. МЕ/мл).
От регресса вирусной нагрузки зависит длительность терапии. При слишком медленном падении активности вируса (плохой эффективности терапии) лечение растягивается на полгода и более. Если вирус удастся уничтожить быстрей, срок лечения не превышает 3 месяцев.
Генотипирование
Существует 11 генотипов вируса с различными подтипами. Некоторые из них вводят больных в группу риска по онкологии и фиброзу сильней остальных, другие не поддаются стандартной терапии интерфероном. В идеале генотипирование нужно провести при первичном обнаружении гепатита. Но из-за ограниченности ресурсов к этому анализу прибегают только при отсутствии результатов терапии.
Если есть возможность сделать генотипирование платно, обязательно нужно ею воспользоваться. Этот анализ предотвратит потерю времени на терапию, которая может быть неэффективна при редком субтипе гепатита С.
Как часто нужно сдавать кровь на диагностику
Регулярное обследование на гепатит показано:
- Людям, которые входят в группу риска из-за профессии или вредных привычек. К первым относятся врачи, ко вторым – наркоманы и люди, практикующие беспорядочные половые связи без использования презервативов.
- Проходящим терапию – для отслеживания эффективности лечения.
- Излечившимся от гепатита с целью предотвращения рецидивов.
Кровь на профилактическое обследование у группы риска берут раз 3-6 месяцев. Во время лечения потребуется сдавать анализы чаще – раз в 4-6 недель. При сомнениях в эффективности оборудования той лаборатории, где проводятся анализы, лучше сдать тест в нескольких клиниках одновременно.
Источник
Гепатит С следует отнести к разряду коварных заболеваний, которые могут протекать бессимптомно, но угроза жизни пациента от этого не уменьшается. Для окружающих такой человек превращается в источник инфекции.
Чтобы добиться снижения темпов роста заболеваемости и улучшения здоровья людей, важно периодически контролировать состояние печени. Метод исследования крови на наличие РНК вируса гепатита С признан наиболее достоверным для диагностики и лечения заболевания.
Особенности вирусного гепатита С
Среди воспалительных заболеваний, поражающих печень, особую угрозу для жизни человека представляет гепатит С. Причиной заражения может стать нарушение правил стерильности во время процедуры переливания крови. Намного реже инфицирование происходит в результате полового контакта, а также во время родов, когда болеющая мать заражает новорожденного.
Коварство гепатита С в длительном отсутствии симптомов, которые могли бы помочь раньше начать лечение. Обычно признаки проявляются, когда болезнь переходит в самую тяжелую стадию, а цирроз или карциному уже сложно вылечить.
Течение гепатита С, наличие которого выявляют анализом на HCV, может быть острым или хроническим. Именно острая форма часто не сигнализирует явными симптомами, а обнаруживают патологию по результатам диагностики других заболеваний.
С переходом острого гепатита в стадию хронической патологии, возможны следующие варианты развития болезни:
- каждый пятый пациент выздоравливает после вовремя назначенного лечения;
- часть больных переходит в группу носителей вируса (неактивная форма хронического заболевания);
- у остальных заболевших прогресс хронической фазы подтверждают признаки поражения печени.
Момент перехода острого этапа в хроническую форму зафиксировать сложно. Причина в постепенном нарастании симптомов медленного поражения печени с отсутствием признаков желтухи.
Проявления HCV часто маскируются под симптоматику других заболеваний: повышенная температура, утомляемость, отсутствие аппетита. Потеря веса сопутствует скрытому прогрессированию болезни на протяжении десятков лет.
Популяция вируса скрытно поражает клеточную структуру крови, страдает также печень. Обнаружить фрагменты РНК возбудителя удается только при помощи ПЦР тестирования образцов крови на гепатит С.
Диагностика заболевания
Основной способ инфицирования гепатитом – через кровь. Вирусные агенты, оказавшись в здоровой клетке, вместе с кровотоком достигают печени, где активно размножаются.
Накопление вирионов в зараженных гепатоцитах приводит к разрушению печеночных клеток. Процесс стимулирует выработку антител, которые вступают в борьбу с неповрежденными гепатоцитами, утяжеляя последствия болезни.
Самым надежным способом, позволяющим обнаружить в крови следы вируса, специалисты называют ПЦР анализ. Суть революционного метода полимеразной цепной реакции состоит в обнаружении цепочек вирусных РНК при создании определенной среды, куда помещают взятую на анализ пробу крови. Этапы диагностического процесса:
- После получения отобранного биоматериала в нем тиражируют множество копий РНК, принадлежащих вирусу гепатита С.
- Использованием многофункциональных тестовых систем с нагреванием и очисткой раствора добиваются необходимого количества копий.
- При помощи тестовой диагностики определяют концентрацию в анализируемом образце сформировавшихся генов.
Под аббревиатурой РНК подразумевают рибонуклеиновую кислоту. Важная макромолекула вместе с ДНК присутствует в составе клеток любого живого организма. Молекула РНК, хранящая генетический код вируса гепатита С, склонна мутировать.
В процессе нескольких этапов диагностики происходит трансформация нуклеотидных цепочек с формированием РНК вируса гепатита С, если порция крови пациента содержала фрагменты возбудителя.
Безоговорочная достоверность ПЦР тестирования объясняется высоким уровнем чувствительности полимеразной реакции, обладающей следующими преимуществами:
- Для обнаружения HCV достаточно одного генома вируса на весь объем биоптата;
- Высокая способность к генотипированию для выявления определенного возбудителя;
- Возможность за одно тестирование обнаружить РНК различных типов вирусов.
Проведение лабораторного анализа вооружает специалиста информацией о наличии либо отсутствии РНК вируса в пробе крови. Благодаря тестированию можно определить концентрацию РНК различных типов вирусных частиц.
Показания для ПЦР-диагностики
ПЦР-диагностика показана пациентам:
- при подозрении на воспаление печени без проявления симптомов патологии;
- для проведения скрининга во время профилактических мероприятий;
- в ходе обследования людей после контакта с инфицированным человеком;
- при хроническом гепатите для оценки активности размножающегося вируса;
- для выяснения степени эффективности проведенной терапии.
Сдавать анализ на выявление вирусного РНК обязательно должны пациенты, болеющие циррозом. Диагностика ПЦР показана людям, имеющим инфицированных гепатитом С родственников или половых партнеров.
В группу риска также водят дети, рожденные от матерей, имеющих печеночную патологию. Анализ необходим при хронических болезнях печени неустановленной природы.
Разновидности тестирования и расшифровка результатов
Хроническую стадию заболевания печени сопровождают признаки фиброза с разрастанием соединительных тканей, что со временем нарушает структуру органа. Если вовремя начать лечение, повышается вероятность обратимости фиброза. Именно для выбора адекватной терапии важен учет результатов диагностики HCV, выполняемой поэтапно:
- Сначала методом качественного тестирования пытаются обнаружить следы вируса.
- Результаты количественного теста уточняют концентрацию в пробе вирусной РНК.
- Методом генотипирования устанавливают, к какому генотипу принадлежит возбудитель.
Ряд медиков считает диагностику на РНК вирусного гепатита обязательной для большинства пациентов, даже не имеющих характерных для патологии симптомов. Появление определенных жалоб уже свидетельствует о запущенном процессе с поражением печени циррозом, некрозом, онкологией.
В домашних условиях можно самостоятельно выполнить несложную диагностику гепатита, пользуясь экспресс-тестом ИФА. Тестовый комплект позволяет определить наличие антител к РНК вируса всего за 15 минут по капле крови. При выявлении антител потребуется дальнейшее обследование.
Задача начального этапа исследования – подтвердить наличие в тестируемом объеме генетических фрагментов HCV, если анализ крови показал наличие у пациента антител, готовых атаковать вирус гепатита С. Интерпретация результатов качественной диагностики имеет две позиции, с их особенностями важно ознакомиться:
- «РНК обнаружено». Положительный вариант результата указывает, что биологическая жидкость содержит фрагменты РНК возбудителя гепатита. Интерпретация показателя является подтверждением факта инфицирования: вирус размножается в крови носителя, печень подвергается разрушению.
- «РНК не обнаружено». При отрицательном варианте результата сохраняется вероятность малой концентрации вирусной РНК даже при явном отсутствии ее фрагментов. Тест не сможет выявить ничтожную концентрацию вирионов при недавнем заражении либо предшествовавшей противовирусной терапии.
Обнаружения РНК возбудителя по методике качественного тестирования, обеспечивающего 95% точности, достаточно для подтверждения гепатита С. Достоверность качественного этапа анализа ПЦР обеспечивает система с определенным порогом чувствительности (до 500 МЕ/мл).
При низкой виремии (концентрация вируса) потребуется помощь диагностической системы с показателем минимум 50 МЕ/мл. По результатам следующей части анализа определяют концентрацию вирионов в объеме исследуемого биоматериала.
Норма количественного этапа исследования
Следующая ступень тестирования биологического материала заключается в определении количественного состава популяции возбудителя. Тестирование вирусной нагрузки на единицу фиксированного объема крови способствует выяснению степени виремии, а также тяжести заболевания.
Таблица расшифровки числовых обозначений (норма) инфицирования по тесту HCV
| Спектр вирусной нагрузки, измеряемый в МЕ/мл | Интерпретация показателей, полученных методом полимеразной цепной реакции |
| Следы РНК вируса гепатита не обнаружены | Нулевой показатель признают нормой, а человека – здоровым |
| Значение 180 | РНК отсутствует или концентрация вируса ниже порогового диапазона |
| Меньше 800 тысяч | Обнаружена низкая степень виремии |
| Больше 800 тысяч | Обнаружена виремия высокого уровня |
| Значение выше 25 млн. | Виремия превышает допустимый диапазон измерений |
Если результаты качественного анализа с отсутствием следов РНК вируса гепатита подтверждаются количественно на следующем этапе тестирования, то человека действительно можно считать здоровым. В крови полностью отсутствует вирус опасной патологии.
Показатель количественной диагностики, не превышающий 400 тысяч МЕ/мл, указывает на минимальную концентрацию РНК опасного вируса, но не на отсутствие патологии. Нагрузку, превышающую значение 800 тысяч, считают высокой. Но среди медиков нет единого мнения в вопросе жестких рамок, ограничивающих минимальную и максимальную виремию.
Понятие генотипирования вируса HCV
Даже людям, не сталкивавшимся с гепатитом С, необходимо знать, что возбудитель смертельно опасного заболевания имеет несколько генотипов. Благодаря прогрессивным методикам исследований удалось обнаружить 11 генотипов вируса гепатита С, но наиболее распространенных всего 6 видов.
Каждому типу генома, имеющему определенные характеристики, дали буквенное наименование и присвоили статус квазивирусов.
Из-за постоянных мутаций, обеспечивающих способность вируса к выживанию в окружающей среде, иммунная система человека не успевает быстро распознать очередного мутанта, чтобы вырабатывать к нему антитела. Это объясняет высокую опасность заболеть гепатитом С, а вакцинация против печеночной патологии сегодня только на стадии разработки.
Жители Европы и Америки подвержены опасности инфицирования 1 и 2 генотипом HCV. Геном 3, имеющий два субтипа (3а и 3в), медики называют самым распространенным на планете. Жителям азиатских стран угрожает 4 и 6 тип генома возбудителя инфекционной болезни.
Особенности анализа на гепатит
Современные методики лечения новейшими препаратами позволяют не только вылечить патологию, но также избавить организм от вируса. Для этого необходимо установить его генотип и уровень концентрации в организме пациента.
Тест-системы некоторых лабораторий не оснащены соответствующими реагентами. Отсутствие возможности детерминирования субтипов генома приводит к выдаче результатов о невозможности типирования РНК.
В этом случае необходимо подтверждение диагноза методами дополнительных исследований с использованием основных маркеров гепатита. Обнаружение в крови человека иммуноглобулинов М и G сигнализирует о развитии в организме процесса, не характерного для здорового состояния.
Обозначенную ситуацию можно назвать первичным диагнозом, предупреждающим о необходимости комплексного обследования для получения объективной картины развивающегося процесса.
© 2018 – 2019, MedPechen.ru. Все права защищены.
Источник
