Результаты пцр по гепатиту в

Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

• при возникновении признаков гепатита В у пациента;
• во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
• для уточнения эффективности терапии.

Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

Для ПЦР-анализа делается забор венозной крови

Метод ПЦР даёт возможность выявить ДНК возбудителя даже при минимальном его присутствии в отобранной пробе крови. Кроме того, анализ позволяет обнаружить антигены, которые уже выработались на вирус. Каждый из антигенов свидетельствует об определённой стадии болезни:

• HBsAg — вирус присутствует в данный момент.
• Анти-HBcor — возбудитель в настоящее время отсутствует, но имелся в прошлом.
• Анти-HBs — в крови имеются антитела к гепатиту B (как вариант — герпесу, ВИЧ, хламидиозу, микоплазмозу, кандидозу, туберкулёзу, клещевому энцефалиту и многим другим болезням).

Патология и её признаки

Гепатит B или HBV — это вирусная инфекция, поражающая клетки печени. Она опасна не только непосредственным воздействием на паренхиму органа, ослабляющим барьерную функцию и общий иммунитет. Возможны и более тяжёлые последствия, такие как цирроз печени и возникновение злокачественных новообразований.

HBV передаётся через кровь человека, инфицированного гепатитом, его экскременты, через контакты со слизистыми оболочками, особенно при половом акте, повреждениями кожи, через нестерильные шприцы при переливании крови или при полостных операциях. Возможно заражение новорожденного его больной матерью при прикосновении к трещинам на её сосках.

Для гепатита B характерны следующие симптомы:

Непривычная утомляемость

• нарастающая усталость при небольших нагрузках;
• непривычная утомляемость;
• тяжесть в области правого подреберья;
• пониженный аппетит, тошнота;
• желтушность кожных покровов, склер глаз;
• светлый кал;
• тёмная моча;
• болезненные ощущения в суставах.

Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

Показаниями к ПЦР являются:

• положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
• острый и хронический гепатит;
• микст-гепатиты;
• количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
• разработка тактики эффективной терапии.

Подготовка к анализу

Перед процедурой необходимо 15-20 минут полного покоя

Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

• полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
• воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
• 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
• прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
• детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

Как проходит исследование

В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

Амплификатор

Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

Расшифровка результатов

Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

• Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
• Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
• Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
• Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

Особенность полимеразной цепной реакции

В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

• конкретную вирусную нагрузку на печень;
• интенсивность прогрессирования заболевания;
• устойчивость к препаратам противовирусной группы;
• результативность лечения.

Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

• количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
• сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
• маркеров вирусной инфекции;
• результатов биопсии печени.

Общие цели ПЦР

Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

• обнаружить носители вируса;
• прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
• убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
• мониторить активность вируса на всех фазах развития;
• выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
• оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.

Преимущества метода

В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

1. Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
2. Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
3. Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
4. Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
5. Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
6. Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.

ПЦР на гепатит С – обязательный анализ при обследовании пациента с симптомами поражения печени. Исследование назначают для подтверждения диагноза и получения максимально полной информации о возбудителе болезни, активности вирусной инфекции. Результаты служат основанием для назначения противовирусной терапии, определения ее продолжительности и оценки эффективности.

Диагностика с применением методики полимеразной цепной реакции получила распространение сравнительно недавно. Исследования на эту тему велись с середины 1970-х годов. Но первые публикации относительно возможности использования ПЦР в практической медицине появились только в середине 1980-х гг. 

При объяснении, что такое ПЦР, врачи подчеркивают, что это самый надежный и достоверный анализ при гепатите С. Данный тест позволяет не только выявить частицы РНК вируса, но и установить его концентрацию (указывает на активность инфекционного процесса) и генотип. Полученные результаты играют ключевую роль для определения тактики и схемы дальнейшей терапии.

В чем состоит суть постановки реакции? При помощи определенных биологически активных веществ добиваются увеличения количество частиц РНК вируса в небольшом объеме крови. Впоследствии участки генома определяются разнообразными физико-химическими методами. 

Постановка ПЦР осуществляется при помощи нескольких компонентов:

• Праймер. Это искусственно синтезированное соединение, в котором последовательность нуклеотидов полностью идентична конкретному участку РНК вируса, не подвергающегося мутациям и изменением в зависимости от генотипа. Определение РНК вируса гепатита С выполняется с использованием строго специфичного праймера.
• РНК-полимераза. Фермент, отличающийся устойчивостью и структурной стабильностью на фоне изменений температуры, необходимых для правильного протекания химической реакции. Обеспечивает построение цепочки РНК на одном из этапов ПЦР. 
• Смесь протеинов. Для построения дополнительных участков РНК необходим «строительный материал», для чего к биологическому образцу добавляют определенные соединения белковой структуры. 
• Буфер. Смесь, поддерживающая оптимальный уровень рН для обеспечения протекания полимеразной цепной реакции. 
• Образец биологического материала, предположительно содержащий образец РНК HCV (Hepatitis C Virus). 

При некоторых способах постановки ПЦР дополнительно используются РНК-зонды и другие внутренние контроли, используемые в качестве контрольных образцов при выявлении результатов. 

Сам процесс увеличения участков вирусной РНК при помощи матрицы именуют амплификацией. Реакция протекает в несколько этапов:

1. Денатурирование. Процесс «раскручивания» нитей РНК обеспечивается повышением температуры до определенного уровня. 
2. Отжиг. После снижения температуры до необходимых показателей происходит присоединение праймеров к РНК. Данная стадия возможна только при наличии в образце крови искомых вирусных частиц. 
3. Непосредственный синтез участков вирусной РНК с участием ферментов. 

Перечисленные циклы постановки ПЦР повторяются несколько десятков раз, что обеспечивает многократное увеличение количества участков РНК возбудителя гепатита С уровня, определяемого лабораторными способами. 

Перед проведением анализа образец забора крови соответствующим образом подготавливается. Содержащиеся РНК адсорбируются на буфере-носителе, затем смываются и используется для постановки полимеразной цепной реакции. 

Детекция результатов проводится либо методом электрофореза (горизонтального или вертикального), либо способом гибридизации. Способ расшифровки результатов реакции выбирается исходя из целей проведения исследования (просто выявление РНК, либо определение ее ориентировочного количества).

ПЦР – самый точный анализ крови на гепатит С

Перечень предлагаемых исследований на HCV включает несколько пунктов, отличающихся по стоимости, срокам готовности и способу выполнения. 

Если обратиться к протоколам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), порядок диагностики инфекции включает несколько последовательных этапов.

Для начала сдают:

• общий анализ крови и мочи;
• биохимия крови;
• исследование на содержание глюкозы (строго натощак);
• анализ на ВИЧ;
• флюорография;
• иммунограмма (при подозрении на наличие аутоиммунных патологий). 

При отклонении показателей биохимического анализа крови от физиологической нормы пациенту назначают тест, основанный на обнаружении специфических антител, вырабатываемых при контакте вируса с кровью (ИФА).

Но подобный анализ крови на гепатит С имеет существенный недостаток. Процесс синтеза антител зависит от функционирования и выработки иммунокомпетентных клеток. Индивидуальные особенности организма могут стать причиной как ложноотрицательного, так и ложноположительного ответа. 

Перед назначением теста ИФА врач рассказывает пациенту о возможной ошибке, что вызывает ответный вопрос: «Какой анализ крови показывает гепатит С с минимальным риском получения неверных результатов?» Для подтверждения или опровержения диагноза самым точным лабораторным тестом является проведение ПЦР методом real time. 

Дальнейшая тактика действий зависит от того, что покажет исследование. В случае подтверждения диагноза, пациенту сразу же назначают гепатопротекторы, предупреждают о важности правильного питания и здорового образа жизни. Но таргетная терапия невозможна без определения уровня вирусной нагрузки и генотипа гепатита С. 

Некоторые лекарственные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В. Поэтому для исключения осложнений, дополнительно назначают анализы на HBsAg. HCV лечат только после получения отрицательного результата исследования. 

Виды: качественный, количественный и генотипирование

При первичной диагностике гепатита С серологическим методом определяется титр вырабатываемых антител. Такой результат приблизительно показывает активность патологического процесса. Но максимально точную информацию доктор может получить только после изучения данных ПЦР.

В настоящее время практически во всех лабораториях анализ выполняют ультрачувствительным методом. Таким образом диагностика HCV возможно уже через 10–14 дней после заражения, реже – спустя 2,5–3 недели. В зависимости от целей, преследуемых в ходе исследования, доктор назначает конкретный тип теста.

Существуют следующие разновидности ПЦР:

1. Качественный. При назначении диагностических тестов, у пациентов возникает вопрос, что показывает подобный метод исследования. Качественный анализ способом ПЦР – высокочувствительный тест, определяющий наличие РНК вируса в крови в минимальной концентрации. Обычно подобная разновидность полимеразной цепной реакции ставится по технологии обратной транскрипции. Это один из немногих способов ПЦР, в ходе которого в качестве мишени можно использовать РНК. 
2. Количественный. Количественный анализ на гепатит С позволяет определить точный уровень РНК HCV в крови. Проведение исследования возможно только одним способом – методом real-time. В ходе подготовки материала к постановке ПЦР в образец добавляют краситель. После каждого цикла амплификации проводится автоматизированное количественное исследование в режиме реального времени. Нередко методику проводят в сочетании с обратной транскрипцией. Таким образом возможно качественное определение малого количества копий РНК вируса. Устанавливать уровень РНК HCV количественно имеет смысл, если получен положительный результат качественной ПЦР. 
3. Генотипирование. Анализ сдается проводится на конечной стадии диагностического процесса. Принцип исследования построен на разнице в последовательности нуклеотидов, что отличает один генотип вируса гепатита С от другого. Обычно анализ делают методом мультипраймерной (мультиплексной) ПЦР. 

При подозрении на носительство вируса, необходимо выполнить качественную ПЦР. Если результат отрицательный, человек скорее всего здоров. Но для полного исключения заражения рекомендуют повторить исследование через 7–10 дней. Если же РНК вируса обнаружена, проводят дальнейшие тесты (количественный и генотипирование). 

Показания к проведению лабораторного теста

Основным показанием к сдаче крови на гепатит С методом полимеразной цепной реакции является положительный результат иммуноферментного анализа (вне зависимости от разновидности: Total, дифференцированный тест на IgG и IgM).

Кроме того, провериться нужно:

• в период беременности (тест делают дважды – в первом триместре и за 7–10 недель до родов);
• при работе, связанной с повышенным риском инфицирования (медсестры, лаборанты, работники донорских центров, косметологи и т.д.);
• при беспорядочных половых связях и незащищенном контакте с малознакомым человеком;
• на фоне ВИЧ, онкологических заболеваний, приема определенных медикаментозных средств и т.д.;
• пациентам, зависимым от внутривенных наркотиков;
• при постоянном проведении инвазивных диагностических или лечебных процедур;
• при проведенном до 1992 года переливании крови (ранее не существовало достоверных способов проверки донорского биологического материала на наличие вируса).
• при соприкосновении открытой раны с чужой кровью, нестерилизованным медицинским инструментарием. 

Рост заболеваемости растет с каждым годом. Поэтому для раннего выявления инфекции лабораторные тесты на HCV рекомендуют сдавать один раз в год.

Где сдать анализ

При обращении в поликлинику, пациент имеет право на бесплатные анализы. Но сначала сдают тест ИФА. И только при положительном либо сомнительном результате показано исследование методом ПЦР. Поэтому провести срочную диагностику можно обратившись в платную лабораторию, где сдать кровь на ПЦР можно в удобное для пациента время. Одновременно рекомендуют сразу проверить показатели печеночных ферментов, стандартные клинические параметры крови. 

Как правило, изучение крови методом ПЦР доступно практически в любой лаборатории. Если пункт забора крови не оснащен должным оборудованием, биологический материал транспортируют для проведения исследования с соблюдением температурного режима и других условий. Проведение ПЦР в поликлинике возможно только после других обследований, результаты которых косвенно укажут на наличие гепатита С.

Как правильно сдавать кровь

Перед тем, как сдавать кровь на обнаружения возможного вируса, следует соблюсти ряд правил подготовки к анализу.

Основные аспекты указаны в памятке:

1. За 5–7 дней отказаться от потребления жирной, жареной пищи, алкоголя. В целом, доктора рекомендуют придерживаться правил питания по диете №5.
2. За 12–14 часов до проведения исследования не есть. Пить можно только воду.
3. Сдать кровь лучше в первой половине дня.
4. До процедуры не курить.

Также следует предупредить доктора о принимаемых лекарственных препаратах, возможных проблемах со здоровьем, хронических заболеваниях. 

Забор крови выполняется из вены. После окончания процедуры место прокола медсестра заклеивает стерильным пластырем, предупреждает о необходимости согнуть руку и держать ее в таком положении 10–15 минут. В противном случае высока вероятность появления болезненной гематомы. 

Сколько по времени делается исследование?

Сколько делается анализ, зависит от лаборатории. Средний срок выполнения колеблется в пределах 1–3 дней. Некоторые клиники предоставляют платную услугу быстрой постановки ПЦР, однако время проведения ограничивается возможностями медицинской аппаратуры. 

В поликлинике результаты могут передаваться врачу в течение 7–10 дней. Это связывают с большим наплывом пациентов. При этом биологический материал хранится в соответствии со всеми требованиями. 

Расшифровка результатов

Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.

Но нередко возникает ситуация, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Расшифровать такие результаты анализов может только врач.

Однако подобные данные возможны в следующих случаях:

• беременность;
• перенесенный в острой форме гепатит С;
• пройденный курс лечения от HCV;
• наличие инфекций, повышающих вероятность ложноположительного результата ИФА.

Только полимеразная цепная реакция показывает точное наличие вирусной инфекции в организме. На фоне отрицательной ПЦР положительный ИФА в большинстве случаев говорит о том, что человек не инфицирован. Но врачу следует точно установить причину ложноположительного результата.

Качественный анализ

Анализ ПЦР качественный на гепатит С подтверждает присутствие возбудителя заболевания в крови. Если РНК вируса не обнаружена, человек здоров. Но при подозрении на инфицирование рекомендуют повторно пройти исследование. Положительный результат свидетельствует об инфицировании. Но этот анализ не позволяет дифференцировать хронический гепатит С от острого, и не может показать, насколько активен патологический процесс. 

Количественный тест

Количественный анализ методом ПЦР проводится после подтверждения диагноза и его расшифровка важна для определения тактики лечения. В зависимости от концентрации частиц возбудителя гепатита С выделяют несколько степеней вирусной нагрузки: средняя, высокая и низкая. Чем больше показатель, тем тяжелее протекает инфекция и сложнее терапия. В норме вирусная РНК отсутствует в крови.

Генотипирование

Многие лаборатории проводят генотипирование в комплексе с количественной ПЦР, что позволяет сэкономить. Подобное исследование делают только один раз, перед началом лечения. Обычно выполняют анализ на один из четырех наиболее распространенных генотипов (1, 2, 3 или 4). Одновременно определяют и подтип HCV. Генотипирование на 5 и 6 подвид гепатита С возможно не в каждой лаборатории. 

Плюсы ПЦР диагностики

Диагностика методом ПЦР получила широкое распространение благодаря:

• высокой точности (при условии использования тест-систем последнего поколения);
• простоте забора биоматериала;
• быстроте получения результатов (максимум 5 дней).

Но основное преимущество состоит в широких диагностических возможностях исследования. Анализ позволяет не только выявить вирус, но и точно определить его концентрацию в организме и установить генотип инфекции. Кроме того, количественное ис?