Рнк гепатит с аналитическая чувствительность

Hepatitis C Virus (HCV) – гепатотропный вирус из семейства Флавивирусов, провоцирующий гепатит С. Аналитическая чувствительность тест-систем, которые используются для выявления HCV-инфекции, должна быть высокой. Чем она больше, тем выше шансы на обнаружение вируса при минимальной инфекционной нагрузке. Скрининг гепатита С включает два анализа – ИФА на anti-HCV и ПЦР на РНК HCV. В случае использования диагностических систем с низкой специфичностью вероятность получения ложноотрицательных результатов увеличивается.

Что значит аналитическая чувствительность

Аналитическая чувствительность (АЧ) – показатель, отражающий наименьшую концентрацию вещества (антител, ДНК или РНК возбудителя), определяемого тест-системой. Чем она выше, тем меньше риск получения ложных результатов анализа. При подозрении гепатита С выполняют 2 теста:

Иммуноферментный анализ (ИФА) – серологический тест, нацеленный на выявление антител к возбудителю инфекции. Они определяются в кровяном русле только через 1-1.5 месяца после заражения. В 15-30% случаев наличие специфических белков указывает на перенесенную болезнь.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С – молекулярно-биологический тест, при котором обнаруживают РНК вируса гепатита С. Если генетический материал выявляется, положительный результат ИФА подтверждается.

Аналитическая чувствительность – минимальный предел измерения тест-системы, выявляющей антитела к возбудителю или его генетический материал.

Если вирусная РНК гепатита С обнаруживается, выполняют дополнительные анализы:

Количественная ПЦР – определение вирусной нагрузки путем подсчета числа копий РНК возбудителя в 1 мл крови. От уровня виремии во многом зависит прогноз терапии и дозировка лекарств.

Генотипирование – определение штамма возбудителя. Существует несколько генотипов и субтипов вируса гепатита С (ВГС). В каждом конкретном случае используются определенные медикаменты, повышающие шансы на достижение устойчивого вирусологического ответа (УВО).

ПЦР отличается высокой специфичностью. Поэтому анализ на РНК ВГС (RNA HCV) является золотым стандартом в диагностике вирусного заболевания. Этим методом удается выявить единичные вирусы в плазме. Поэтому в рамках скринингового обследования его назначают даже при отрицательных результатах ИФА.

Как расшифровать цифры в бланке

Точность анализа напрямую зависят от чувствительности используемых аналитических систем:

Количественный ПЦР. В норме RNA HCV в крови отсутствует. Наличие в плазме даже нескольких копий вируса указывает на заражение HCV-инфекцией. Анализ обладает высокой чувствительностью – не ниже 15 МЕ/мл. Это значит, что вирус будет выявлен даже в случаях, если в 1 мл биоматериала будет до 60 копий ВГС. Тест-системы с чувствительностью от 10 МЕ/мл выявляют вирусное заболевание при меньших концентрациях вирионов в крови – от 40.
Качественный ПЦР. В норме антитела к ВГС не обнаруживаются. Отрицательный результат связан либо с отсутствием RNA HCV, либо с очень низкой концентрацией антител в плазме. Для качественного анализа рекомендуется использовать тест-системы с АЧ не ниже 500 МЕ/мл.

В нескольких зарубежных диагностических центрах проводилась сравнительная оценка чувствительности разных анализов. При выполнении ИФА она достигает 70%, а при количественной ПЦР – 99%.

Уровень вирусной нагрузки, который определяется в рамках количественной ПЦР (в МЕ/мл):

минимальная – до 180 000;
низкая – 400 000;
высокая – более 800 000.

В некоторых лабораториях используют внесистемные единицы измерения, а иногда данные записываются в количестве копий HCV. Чтобы пересчитать значения, учитывают, что 1 МЕ/мл соответствует 4 копиям вируса на 1 мл крови. Если в бланке указан результат 5.5*105 МЕ/мл, это означает, что в 1 мл биоматериала содержится 2.2*106 копий возбудителя гепатита С.

Что дает анализ ПЦР

Из-за невысокой диагностической специфичности ИФА (anti-HCV NS IgG) иногда дает ложноотрицательные результаты. Такое происходит при сдаче анализа в период с 1 до 6 неделю после заражения. Концентрация антител к HCV находится за пределами чувствительности тест-системы, поэтому гепатит не диагностируется.

Генетический материал флавивируса выявляется в плазме уже через 7 дней после заражения. А благодаря высокой аналитической специфичности ПЦР инфекция обнаруживается, даже если в 1 мл крови циркулирует до 50 копий вирионов.

ПЦР-исследование назначается для:

раннего выявления HCV-инфекции;
дифференциальной диагностики гепатитов;
контроля результативности антивирусной терапии;
определения особенностей течения гепатита С.

Запоздалое лечение опасно хронизацией воспаления и осложнениями – жировым гепатозом, фиброзом, циррозом, раком печени.

Если ПЦР-анализ на гепатит С указывает на заражение, проводят соответствующее лечение. Для уничтожения ВГС применяют лекарства прямого противовирусного действия:

Ледипасвир;

Нарлапревир;

Гразопревир;

Даклатасвир;

Паритапревир;

Софосбувир.

В зависимости от генотипа и осложнений продолжительность курса варьируется от 8 до 24 недель. Во время антивирусной терапии больные сдают повторный тест на количество копий РНК вируса. Если их концентрация уменьшается, это свидетельствует о положительной динамике и высоких шансах на достижение УВО.

Аналитическая чувствительность – одна из основных характеристик тест-системы, которая отражает минимальную концентрацию выявляемых в биоматериале антител, ДНК или РНК возбудителя. Она приобретает особенное значение, когда требуется исключить наличие инфекционных агентов в организме. Чем выше чувствительность анализа, тем реже он дает ложные результаты.

Источник

ПЦР анализ

Анализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

ПЦР гепатита С

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 106 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 105 МЕ/мл = 2.2* 106 копий/мл.

Важно знать, что не существует прямой связи между концентрацией вируса в крови и тяжестью гепатита С.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *103 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*104 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*107 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста. количественный ПЦР

Источник

Гепатит С следует отнести к разряду коварных заболеваний, которые могут протекать бессимптомно, но угроза жизни пациента от этого не уменьшается. Для окружающих такой человек превращается в источник инфекции.

Чтобы добиться снижения темпов роста заболеваемости и улучшения здоровья людей, важно периодически контролировать состояние печени. Метод исследования крови на наличие РНК вируса гепатита С признан наиболее достоверным для диагностики и лечения заболевания.

РНК вируса гепатита С

Особенности вирусного гепатита С

Среди воспалительных заболеваний, поражающих печень, особую угрозу для жизни человека представляет гепатит С. Причиной заражения может стать нарушение правил стерильности во время процедуры переливания крови. Намного реже инфицирование происходит в результате полового контакта, а также во время родов, когда болеющая мать заражает новорожденного.

Коварство гепатита С в длительном отсутствии симптомов, которые могли бы помочь раньше начать лечение. Обычно признаки проявляются, когда болезнь переходит в самую тяжелую стадию, а цирроз или карциному уже сложно вылечить.

Течение гепатита С, наличие которого выявляют анализом на HCV, может быть острым или хроническим. Именно острая форма часто не сигнализирует явными симптомами, а обнаруживают патологию по результатам диагностики других заболеваний.

С переходом острого гепатита в стадию хронической патологии, возможны следующие варианты развития болезни:

каждый пятый пациент выздоравливает после вовремя назначенного лечения;
часть больных переходит в группу носителей вируса (неактивная форма хронического заболевания);
у остальных заболевших прогресс хронической фазы подтверждают признаки поражения печени.

РНК вирус гепатита С

Момент перехода острого этапа в хроническую форму зафиксировать сложно. Причина в постепенном нарастании симптомов медленного поражения печени с отсутствием признаков желтухи.

Проявления HCV часто маскируются под симптоматику других заболеваний: повышенная температура, утомляемость, отсутствие аппетита. Потеря веса сопутствует скрытому прогрессированию болезни на протяжении десятков лет.

Популяция вируса скрытно поражает клеточную структуру крови, страдает также печень. Обнаружить фрагменты РНК возбудителя удается только при помощи ПЦР тестирования образцов крови на гепатит С.

Диагностика заболевания

Основной способ инфицирования гепатитом – через кровь. Вирусные агенты, оказавшись в здоровой клетке, вместе с кровотоком достигают печени, где активно размножаются.

Накопление вирионов в зараженных гепатоцитах приводит к разрушению печеночных клеток. Процесс стимулирует выработку антител, которые вступают в борьбу с неповрежденными гепатоцитами, утяжеляя последствия болезни.

Диагностика гепатита С

Самым надежным способом, позволяющим обнаружить в крови следы вируса, специалисты называют ПЦР анализ. Суть революционного метода полимеразной цепной реакции состоит в обнаружении цепочек вирусных РНК при создании определенной среды, куда помещают взятую на анализ пробу крови. Этапы диагностического процесса:

После получения отобранного биоматериала в нем тиражируют множество копий РНК, принадлежащих вирусу гепатита С.
Использованием многофункциональных тестовых систем с нагреванием и очисткой раствора добиваются необходимого количества копий.
При помощи тестовой диагностики определяют концентрацию в анализируемом образце сформировавшихся генов.

Под аббревиатурой РНК подразумевают рибонуклеиновую кислоту. Важная макромолекула вместе с ДНК присутствует в составе клеток любого живого организма. Молекула РНК, хранящая генетический код вируса гепатита С, склонна мутировать.

В процессе нескольких этапов диагностики происходит трансформация нуклеотидных цепочек с формированием РНК вируса гепатита С, если порция крови пациента содержала фрагменты возбудителя.

ПЦР диагностика гепатита С

Безоговорочная достоверность ПЦР тестирования объясняется высоким уровнем чувствительности полимеразной реакции, обладающей следующими преимуществами:

Для обнаружения HCV достаточно одного генома вируса на весь объем биоптата;
Высокая способность к генотипированию для выявления определенного возбудителя;
Возможность за одно тестирование обнаружить РНК различных типов вирусов.

Проведение лабораторного анализа вооружает специалиста информацией о наличии либо отсутствии РНК вируса в пробе крови. Благодаря тестированию можно определить концентрацию РНК различных типов вирусных частиц.

Показания для ПЦР-диагностики

ПЦР-диагностика показана пациентам:

при подозрении на воспаление печени без проявления симптомов патологии;
для проведения скрининга во время профилактических мероприятий;
в ходе обследования людей после контакта с инфицированным человеком;
при хроническом гепатите для оценки активности размножающегося вируса;
для выяснения степени эффективности проведенной терапии.

Показания для ПЦР-диагностики

Сдавать анализ на выявление вирусного РНК обязательно должны пациенты, болеющие циррозом. Диагностика ПЦР показана людям, имеющим инфицированных гепатитом С родственников или половых партнеров.

В группу риска также водят дети, рожденные от матерей, имеющих печеночную патологию. Анализ необходим при хронических болезнях печени неустановленной природы.

Разновидности тестирования и расшифровка результатов

Хроническую стадию заболевания печени сопровождают признаки фиброза с разрастанием соединительных тканей, что со временем нарушает структуру органа. Если вовремя начать лечение, повышается вероятность обратимости фиброза. Именно для выбора адекватной терапии важен учет результатов диагностики HCV, выполняемой поэтапно:

Сначала методом качественного тестирования пытаются обнаружить следы вируса.
Результаты количественного теста уточняют концентрацию в пробе вирусной РНК.
Методом генотипирования устанавливают, к какому генотипу принадлежит возбудитель.

Ряд медиков считает диагностику на РНК вирусного гепатита обязательной для большинства пациентов, даже не имеющих характерных для патологии симптомов. Появление определенных жалоб уже свидетельствует о запущенном процессе с поражением печени циррозом, некрозом, онкологией.

В домашних условиях можно самостоятельно выполнить несложную диагностику гепатита, пользуясь экспресс-тестом ИФА. Тестовый комплект позволяет определить наличие антител к РНК вируса всего за 15 минут по капле крови. При выявлении антител потребуется дальнейшее обследование.

Тест на вирусный гепатит

Задача начального этапа исследования – подтвердить наличие в тестируемом объеме генетических фрагментов HCV, если анализ крови показал наличие у пациента антител, готовых атаковать вирус гепатита С. Интерпретация результатов качественной диагностики имеет две позиции, с их особенностями важно ознакомиться:

«РНК обнаружено». Положительный вариант результата указывает, что биологическая жидкость содержит фрагменты РНК возбудителя гепатита. Интерпретация показателя является подтверждением факта инфицирования: вирус размножается в крови носителя, печень подвергается разрушению.
«РНК не обнаружено». При отрицательном варианте результата сохраняется вероятность малой концентрации вирусной РНК даже при явном отсутствии ее фрагментов. Тест не сможет выявить ничтожную концентрацию вирионов при недавнем заражении либо предшествовавшей противовирусной терапии.

Обнаружения РНК возбудителя по методике качественного тестирования, обеспечивающего 95% точности, достаточно для подтверждения гепатита С. Достоверность качественного этапа анализа ПЦР обеспечивает система с определенным порогом чувствительности (до 500 МЕ/мл).

При низкой виремии (концентрация вируса) потребуется помощь диагностической системы с показателем минимум 50 МЕ/мл. По результатам следующей части анализа определяют концентрацию вирионов в объеме исследуемого биоматериала.

Норма количественного этапа исследования

Следующая ступень тестирования биологического материала заключается в определении количественного состава популяции возбудителя. Тестирование вирусной нагрузки на единицу фиксированного объема крови способствует выяснению степени виремии, а также тяжести заболевания.

Таблица расшифровки числовых обозначений (норма) инфицирования по тесту HCV

Спектр вирусной нагрузки, измеряемый в МЕ/мл	Интерпретация показателей, полученных методом полимеразной цепной реакции
Следы РНК вируса гепатита не обнаружены	Нулевой показатель признают нормой, а человека – здоровым
Значение 180	РНК отсутствует или концентрация вируса ниже порогового диапазона
Меньше 800 тысяч	Обнаружена низкая степень виремии
Больше 800 тысяч	Обнаружена виремия высокого уровня
Значение выше 25 млн.	Виремия превышает допустимый диапазон измерений

Если результаты качественного анализа с отсутствием следов РНК вируса гепатита подтверждаются количественно на следующем этапе тестирования, то человека действительно можно считать здоровым. В крови полностью отсутствует вирус опасной патологии.

Показатель количественной диагностики, не превышающий 400 тысяч МЕ/мл, указывает на минимальную концентрацию РНК опасного вируса, но не на отсутствие патологии. Нагрузку, превышающую значение 800 тысяч, считают высокой. Но среди медиков нет единого мнения в вопросе жестких рамок, ограничивающих минимальную и максимальную виремию.

Понятие генотипирования вируса HCV

Даже людям, не сталкивавшимся с гепатитом С, необходимо знать, что возбудитель смертельно опасного заболевания имеет несколько генотипов. Благодаря прогрессивным методикам исследований удалось обнаружить 11 генотипов вируса гепатита С, но наиболее распространенных всего 6 видов.

Каждому типу генома, имеющему определенные характеристики, дали буквенное наименование и присвоили статус квазивирусов.

Генотипы гепатита С

Из-за постоянных мутаций, обеспечивающих способность вируса к выживанию в окружающей среде, иммунная система человека не успевает быстро распознать очередного мутанта, чтобы вырабатывать к нему антитела. Это объясняет высокую опасность заболеть гепатитом С, а вакцинация против печеночной патологии сегодня только на стадии разработки.

Жители Европы и Америки подвержены опасности инфицирования 1 и 2 генотипом HCV. Геном 3, имеющий два субтипа (3а и 3в), медики называют самым распространенным на планете. Жителям азиатских стран угрожает 4 и 6 тип генома возбудителя инфекционной болезни.

Особенности анализа на гепатит

Современные методики лечения новейшими препаратами позволяют не только вылечить патологию, но также избавить организм от вируса. Для этого необходимо установить его генотип и уровень концентрации в организме пациента.

Тест-системы некоторых лабораторий не оснащены соответствующими реагентами. Отсутствие возможности детерминирования субтипов генома приводит к выдаче результатов о невозможности типирования РНК.

В этом случае необходимо подтверждение диагноза методами дополнительных исследований с использованием основных маркеров гепатита. Обнаружение в крови человека иммуноглобулинов М и G сигнализирует о развитии в организме процесса, не характерного для здорового состояния.

Обозначенную ситуацию можно назвать первичным диагнозом, предупреждающим о необходимости комплексного обследования для получения объективной картины развивающегося процесса.

Источник