Рнк вируса гепатита c кровь кач кровь с эдта
«Выявление генов вируса гепатита С (HVC) в крови пациента является вторым этапом лабораторной диагностики этой инфекционной патологии. Чтобы обнаружить возбудителя, который не имеет клеточной мембраны и, соответственно, поверхностных антигенов, используют метод полимеразной цепной реакции. С помощью этого метода определяют непосредственно молекулу, в которой закодирована вся его генетическая информация — РНК.
Содержание
Что это значит?
Анализ на РНК вируса гепатита С
РНК вируса гепатита С: метод ПЦР
РНК гепатита С: качественный анализ
РНК гепатита С: количественный анализ
Гепатит С: анализы и расшифровка
РНК — Рибонуклеиновая кислота, наряду с ДНК входит в состав клеток всех живых организмов. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет способность к ее мутациям.
Исследование на наличие генома HVC назначают обычно после того, как проводят общий, биохимический анализ крови и получают положительный ответ на антитела (anti-HVC).
Что это значит?
Исследование на антитела к HVC является скрининговым, то есть с его помощью можно обследовать большие контингенты населения (медиков, беременных, пациентов стационаров, доноров, инъекционных наркоманов, ВИЧ-инфицированных). Отрицательный результат лабораторного анализа anti-HVC говорит о том, что в крови обследуемого не обнаружено иммунной реакции на вирус. Отрицательный результат может быть получен в таких случаях:
Если человек никогда не заражался гепатитом С.
Если чувствительность лабораторной тест-системы оказалась ниже, чем концентрация anti-HVC.
Если инфицирование произошло менее 2 месяцев назад и anti-HVC в крови еще недостаточно для определения. При ложноотрицательном ответе по причине человеческого фактора.
Если же получен результат, что антитела к HVC у больного обнаружены, это значит, что вирус гепатита С находился в организме обследуемого на момент проведения исследования или был в крови некоторое время назад. При положительном результате на anti-HVC возникает необходимость проведения дополнительных лабораторных исследований, которые обнаружат генетический материал самого возбудителя, определят концентрацию его генов (вирусную нагрузку, виремию) и установят генотип.
Анализ на РНК вируса гепатита С
Геном HVC в лабораторных условиях можно обнаружить с помощью нескольких исследований:
- разветвленной ДНК (р-ДНК);
- транскрипционной амплификации (ТМА);
- полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Метод р-ДНК — недорогой и простой способ обнаружения вирусного генома у большого количества обследуемых людей. Его главным недостатком является низкая чувствительность: выявляет HVC только при его концентрации свыше 500 МЕ/мл.
Метод транскрипционной амплификации обнаруживает в сыворотке крови нуклеиновые кислоты вируса. Анализ имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл), но он еще недостаточно внедрен в повсеместную лабораторную практику.
Метод ПЦР в России является самым распространенным и доступным лабораторным обследованием с высокой чувствительностью (от 50-60 МЕ/мл).
Исследование ПЦР выполняется в любой клинической лаборатории, имеющей соответствующую аккредитацию. Очень важным нюансом этого метода диагностики, который влияет на результат анализа, является чувствительность используемой в лаборатории тест-системы. Например, чувствительность диагностикума 60 МЕ/мл, как в лабораториях «Инвитро», позволяет обнаруживать вирусную РНК спустя 3 месяца после заражения. При низкой чувствительности тест-системы гены возбудителя могут не обнаруживаться даже спустя 4 месяца после инфицирования.
РНК вируса гепатита С: метод ПЦР
Метод ПЦР имеет множество преимуществ перед другими лабораторными исследованиями для обнаружения генов HVC:
- высокая чувствительность. Метод позволяет определять генетический материал возбудителя даже при его минимальной концентрации в образце;
- большая специфичность. Выявляет гены вируса определенного генотипа среди множества ДНК и РНК других возбудителей, что позволяет проводить генотипирование возбудителя;
- быстрота проведения. Отсутствие длительного процесса культивирования возбудителя сокращает время получения результата до нескольких часов; универсальность анализа.
Универсальная процедура проведения исследования позволяет одновременно использовать один образец крови человека для обнаружения генетического материала разных возбудителей. Эти преимущества позволяют считать ПЦР «золотым стандартом» лабораторной диагностики вирусного гепатита С вместе с иммуноферментным анализом на anti-HVC.
ПЦР — это исследование, используемое для определения генов HVC в крови обследуемого человека. Исследование состоит из нескольких этапов:
- Отбора образца биоматериала.
- Многократного увеличения концентрации копий РНК в отобранном образце.
- Обнаружения генетического материала с помощью специальных тест-систем.
После забора венозной крови у пациента проводят искусственное инициирование процесса множественного реплицирования (амплификации, копирования) генов HVC.
Для этого определенным способом несколько раз изменяют температуру внутри пробирки с биоматериалом. Когда количество копий РНК в пробирке достигает необходимого значения, проводят обнаружение возбудителя с помощью специальных тест-диагностикумов.
ПЦР-диагностика бывает
- качественной (обнаруживает присутствие вируса),
- количественной (определяет концентрацию вирусных генов в единице объема)
- генотипической (устанавливает генотип возбудителя).
РНК гепатита С: качественный анализ
Задача качественного ПЦР — определение наличия HVC в представленном биоматериале. Это исследование проводится обычно для скрининговой диагностики заболевания или выявления носительства. Назначают его после того, как выявят anti-HVC методом ИФА.
Чтобы поставить диагноз гепатита С, достаточно обнаружить генетический материал HCV качественно, то есть без подсчета его концентрации в объеме крови. Результатом качественного ПЦР может быть: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено».
Точность метода соответствует 95%. При этом точность самих тест-диагностикумов достигает 100%, а 5% — это человеческий фактор, который всегда присутствует в лабораторных исследованиях. Чтобы избежать ложноотрицательного анализа, особенно у людей с низкой виремией, необходима высокая чувствительность применяемой в исследовании диагностической системы. Чувствительность тест-системы должна быть не меньшей, чем 60 МЕ/мл.
РНК гепатита С: количественный анализ
Количественный анализ назначают тогда, когда нужно знать уровень виремии в организме человека. Показаниями для проведения этого исследования являются:
- положительный результат качественного ПЦР при условии обнаружения антител к вирусу;
- установление стадии патологии;
- определение вирусной нагрузки при гепатитах;
- выбор комбинации противовирусных препаратов;
- мониторинг вирулогического ответа на проводимую противовирусную терапию;
- оценка вероятности перехода острого гепатита С в хронический.
Результат анализа выражается в МЕ/мл (международных единицах в 1 мл сыворотки) или в копиях/мл (количестве копий генов вируса в 1 мл сыворотки). Количественный ПЦР не имеет нормы: в норме ген HVC в крови человека обнаруживаться не должен. Полученные результаты обследования сравнивают с референсными значениями, установленными для той или иной степени вирусной нагрузки.
Так, показатели (в МЕ/мл):
- ниже 4×10*5 считаются низкой виремией;
- от 4×10*5 до 8×10*5 — средней;
- свыше 8×10*5 — высокой.
Чем больше копий вирусной РНК в крови, тем агрессивнее протекает заболевание и больше риск передачи вируса окружающим. Но уровень вирусной нагрузки — не единственный показатель, влияющий на тяжесть течения патологии и дальнейший прогноз для пациента: важен также генотип возбудителя.
Установление генотипа необходимо для назначения правильной схемы лечения. От него также зависит прогноз для здоровья и жизни пациента. Например, вирус 3 генотипа чаще приводит к фиброзу или циррозу печени, в сравнении с пациентами носителями 1 генотипа.
Гепатит С: анализы и расшифровка
РНК Диагноз гепатита С невозможно поставить только по результатам только качественного и/или количественного анализа ПЦР: определения HVC и уровня вирусной нагрузки недостаточно для назначения адекватной противовирусной терапии. Потенциального больного нужно обследовать комплексно (клинически, лабораторно, инструментально), чтобы иметь объективную картину патологии. Правильно назначить комплекс обследований для установления диагноза гепатита С, а затем грамотно расшифровать полученные результаты может только врач.
Источник
ПЦР анализ
Анализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.
Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.
Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.
Стоимость пцр
ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.
Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.
Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.
Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.
Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 106 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 105 МЕ/мл = 2.2* 106 копий/мл.
Важно знать, что не существует прямой связи между концентрацией вируса в крови и тяжестью гепатита С.
На что же влияет вирусная нагрузка?
Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.
Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?
Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *103 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*104 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*107 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.
Как часто нужно делать количественный тест?
Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.
Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».
Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).
Рис.2 Пример результатов количественного теста.
Источник
Современная лабораторная диагностика не стоит на месте. Еще не так давно для того, чтобы определить наличие инфекции в организме, врач мог ориентироваться только на данные серологической диагностики, то есть на определение антител (белков нашей иммунной системы) к бактериям и вирусам.
Такие методы имеют ряд недостатков:
- Являются косвенными, то есть анализ определяет не конкретную бактерию, а лишь реакцию организма на нее.
- Достаточно много перекрестных реакций с другими инфекциями — отсюда ряд ложных реакций.
- Остаются положительными у переболевших людей на всю жизнь. Следовательно, при повторном заражении сложно разделить старые и новые антитела.
- Длительный серонегативный период. То есть инфекция уже есть, а антител в крови еще нет или их мало, поэтому анализ показывает, что инфекции нет. При ВИЧ этот период может длиться до 6-12 месяцев.
- При хронических заболеваниях сложно определять прогрессирование процесса.
Для решения этих вопросов была разработана полимеразно-цепная реакция или ПЦР, которая определяет наличие ДНК или РНК возбудителя инфекционного заболевания непосредственно в органах, тканях и биологических жидкостях организма. То есть проще говоря ПЦР крови выявляет непосредственно инфекционного агента, а не реакцию на него нашей иммунной системы.
Кроме того, ПЦР крови может определять количество бактерий, вирусов или грибов в исследуемом материале, в т.ч. в 1 миллилитре крови.
Преимущества анализа крови ПЦР
- Позволяет определять наличие инфекции на ранних сроках с момента заражения, т.к. минуется длительный период выработки антител. Возможно определение ВИЧ и вирусов гепатитов со 2-3 недели после инфицирования.
- При хронических заболеваниях, используя количественный метод ПЦР крови, определяется степень прогрессирования заболевания (вирусная нагрузка при ВИЧ и гепатитах).
Цены на ПЦР крови
МОЛЕКУЛЯРНАЯ (ДНК/РНК) ДИАГНОСТИКА МЕТОДОМ ПЦР (кровь) | |||||
---|---|---|---|---|---|
ПЦР на Гепатит А (12.07) | |||||
12.7.A1.202 | РНК вируса гепатита А (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 5 | 900 |
12.21.D1.202 | Одновременное определение ДНК вируса гепатита В, РНК вируса гепатита С, ДНК ВИЧ (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 8 | 7000 |
ПЦР на Гепатит В (12.08) | |||||
12.8.A1.202 | ДНК вируса гепатита B (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
12.8.A2.202 | ДНК вируса гепатита B (кровь), количественно | кровь с ЭДТА | кол. | 5 | 3500 |
ПЦР на Гепатит С (12.09) | |||||
12.9.A1.202 | РНК вируса гепатита C (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
12.9.A2.202 | РНК вируса гепатита C (кровь), количественно | кровь с ЭДТА | кол. | 5 | 3500 |
12.9.A3.202 | РНК вируса гепатита C (кровь), генотипирование кровь с ЭДТА генотип 5 2500 | ||||
ПЦР на Гепатит D (12.10) | |||||
12.10.A1.202 | РНК вируса гепатита D (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 7 | 900 |
12.10.A2.202 | РНК вируса гепатита D (кровь), полуколичественно | кровь с ЭДТА | п.кол. | 7 | 1100 |
Гепатит G (12.11) | |||||
12.11.A1.202 | РНК вируса гепатита G (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 7 | 900 |
12.11.A2.202 | РНК вируса гепатита G (кровь), полуколичественно | кровь с ЭДТА | п.кол. | 7 | 1100 |
Вирус ТТ (12.12) | |||||
12.12.A1.202 | ДНК вируса гепатита TT (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 7 | 900 |
12.12.A2.202 | ДНК вируса гепатита TT (кровь), полуколичественно кровь с ЭДТА | п.кол. | 7 | 1100 | |
ВИЧ (12.18) | |||||
12.18.A1.202 | ДНК ВИЧ (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 5 | 5000 |
12.18.A2.202 | РНК ВИЧ (кровь), количественно | кровь с ЭДТА | кол. | 5 | 11200 |
Вирус простого герпеса (12.14) | |||||
12.14.A1.202 | ДНК Herpes simplex virus I, II типа (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 750 |
Вирус герпеса VI (12.15) | |||||
12.15.A1.202 | ДНК Herpes simplex virus VI типа (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 750 |
Цитомегаловирус (12.13) | |||||
12.13.A1.202 | ДНК Cytomegalovirus (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
12.13.A2.202 | ДНК Cytomegalovirus (кровь), количественно | кровь с ЭДТА | кол. | 3 | 1100 |
Токсоплазма (12.05) | |||||
12.5.A1.202 | ДНК Toxoplasma gondii (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
Вирус Эпштейн-Барра (12.16) | |||||
12.16.A1.202 | ДНК Epstein-Barr virus (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 750 |
12.16.A2.202 | ДНК Epstein-Barr virus (кровь), количественный | кровь с ЭДТА | кол. | 3 | 900 |
Вирус Варицелла-Зостер (12.17) | |||||
12.17.A1.202 | ДНК Varicella-Zoster virus (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
Листерии (12.04) | |||||
12.4.A1.202 | ДНК Listeria monocytogenes (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
Гемофилы (12.01) | |||||
12.1.A1.202 | ДНК Haemophilus species (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 7 | 900 |
Стрептококки (12.02) | |||||
12.2.A1.202 | ДНК Streptococcus pyogenes (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
Микобактерии (12.06) | |||||
12.6.A1.202 | ДНК Mycobacterium tuberculosis (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 3 | 900 |
Бруцеллы (12.03) | |||||
12.3.A1.202 | ДНК Brucella speсies (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 7 | 900 |
Энтеровирус (12.19) | |||||
12.19.A1.202 | РНК Enterovirus (кровь) | кровь с ЭДТА | кач. | 8 | 750 |
Источник