Серологическая реакция на гепатит с

Серологические методы исследования

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела.

Метод обнаружения с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого .

В этом случае из двух компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является сыворотка крови, так как постановка реакции проводится с заведомо известными антигенами. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови антител, соответствующих применяемому антигену; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых.

Достоверные результаты получают при исследовании «парных» сывороток крови больного, взятой вначале заболевания (3-7 день) и через 10-12 дней. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и более повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.

С внедрением в практику лабораторий метода иммуноферментного анализа (ИФА) стало возможным определять в крови больных антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (JgM и JgG), что существенным образом повысило информативность серологических методов диагностики.

При первичном иммунном ответе, когда иммунная система человека взаимодействует с инфекционным агентом в первый раз, синтезируются преимущественно антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М (JgM). Лишь позднее, на 8-12-й день после попадания антигена в организм, в крови начинают накапливаться антитела иммуноглобулинов класса G (JgG). При иммунном ответе на инфекционные агенты вырабатываются также и антитела класса А (JgA), которые играют важную роль в защите от инфекционных агентов кожи и слизистых оболочек.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать. Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеинов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется.

Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, т. е. одной бактерии или вирусной частицы. Введение в реакцию дополнительного этапа — синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы — позволило тестировать РНК-вирусы, например вирус гепатита С.

ПЦР — это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в том числе и в материале, получаемом при биопсии;
возможна диагностика инфекционных болезней на самых разных стадиях заболевания;
возможность количественной оценки результатов исследований ( сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);
высокая чувствительность метода.

Исследования вирусов гепатита

В настоящее время выделяют следующие формы вирусных гепатитов: гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е, гепатит G и гепатит ТТ. Для диагностики каждой из перечисленных форм вирусных гепатитов используется определенный перечень маркеров.

Вирусный гепатит А

Гепатит А — острая энтеровирусная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита А (ВГА,HAV) — энтеровирус типа 72. Геном вируса представлен однонитчатой РНК. Вирус гепатита А содержит единственный антиген (HA-Ag). Удельный вес гепатита А в суммарной заболеваемости вирусными гепатитами составляет 70-80%. В структуре заболеваемости гепатитом А дети составляют до 80%, причем основная масса — дошкольники и школьники начальных классов.

ИФА и ПЦР исследования при гепатите А

Вирусный гепатит В

Гепатит В – вирусная антропонозная инфекция. Возбудитель вирус гепатита В (ВГВ, HBV) – относится к семейству гепаднавирусов, ДНК-содержащих вирусов, поражающих клетки печени. Вирионы ВГВ имеют наружную липопротеидную оболочку и нуклеокапсид, содержащий двунитчатую ДНК и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу.

поверхностный («австралийский») антиген, HBsAg, находящийся в составе липопротеидной оболочки ВГВ, является маркером ВГВ, указывая на инфицированность вирусом;
ядерный (core), HBcAg – обнаруживается в составе нуклеокапсида вирионов, свидетельствует об активной репродукции вируса;
HBeAg – входит в состав ядра ВГВ, указывая на активность вируса и, кроме того, на его высокую вирулентность и инфицированность;
HBxAg – расположен вблизи оболочки вириона, его роль в генезе инфекции изучается.

В диагностике вирусного гепатита В ведущее значение имеет определение комплекса маркеров гепатита. Свыше 5% населения планеты охвачено этой инфекцией, а частота безжелтушных форм ВГВ составляет, по данным разных авторов, от 60 до 82%.

ИФА и ПЦР исследования при диагностике вируса гепатита В

Вирус гепатита С, генотипы

Гепатит С (ВГС) – вирусное заболевание, наиболее часто протекающее в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушных и легких форм и склонное к хронизации процесса.

Возбудитель — вирус гепатита С – имеет сходство с флавовирусами, содержит РНК. На основе филогенетического анализа выделено 6 генотипов ВГС и более 80 субтипов.

Генотип 1 — наиболее распространенный генотип во всем мире (от 40 до 80%). Генотип 1а является доминирующим для США, а 1b преобладает в Западной Европе и Южной Азии.

Генотип 2 распространен во всем мире, однако встречается с меньшей частотой, чем генотип 1 (от 10 до 40%).

ВГС тип 3 характерен для Индии, Пакистана, Австралии и Шотландии. Генотип 4 распространен преимущественно в Средней Азии и Египте, генотип 5 – в Южной Африке, а генотип 6 – в Гонконге и Мокао.

Примерно 90% всех случаев посттрансфузионных гепатитов связано с ВГС. Среди доноров антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС) обнаруживают в 0,2-5% случаев.

У 40-75% пациентов регистрируется бессимптомная форма болезни, у 50-75% больных острым ВГС формируется хронический гепатит, у 20% из них развивается цирроз печени. Важная роль ВГС отводится и в этиологии гепатоклеточной карциномы.

Геном вируса гепатита С представлен одноцепочечной положительно заряженной РНК, которая кодирует 3 структурных и 5 неструктурных белков. К каждому из этих белков вырабатываются антитела, обнаруживаемые в крови больных гепатитом С.

Отличительной чертой ВГС является волнообразное течение заболевания, в котором разграничивают 3 фазы: острую, латентную и фазу реактивации.
Для острой фазы характерно повышение активности печеночных ферментов в сыворотке крови, уровня антител класса IgM и IgG к ВГС с нарастанием титров, а также РНК ВГС.

Латентная фаза характеризуется отсутствием клинических проявлений, наличием в крови антител класса IgG к ВГС в высоких титрах, отсутствием антител класса IgM и РНК ВГС либо их присутствием в низких концентрациях на фоне незначительного повышения активности печеночных ферментов в периоды обострения.
Для фазы реактивации характерно появление клинических признаков, повышение активности печеночных ферментов, наличие антител класса IgG (к нуклеокапсидному белку core и неструктурным белкам NS) в высоких титрах, присутствие РНК ВГС и нарастание титров антител класса IgM к ВГС в динамике.

ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита С, определение генотипа

Вирусный гепатит D

Гепатит D – вирусная инфекция, вследствие биологических особенностей вируса протекающая исключительно в виде ко- или суперифекции при гепатите В, характеризующаяся тяжелым течением,
часто неблагоприятным исходом.

Самостоятельно, без вируса В, вирус гепатита D не может попасть в организм человека

Возбудитель – вирус гепатита D (ВГD), по своим биологическим свойствам приближается к вироидам – обнаруженным молекулам нуклеиновых кислот. Печень человека – единственное место размножения (репликации) ВГD.

Известно существование двух вариантов инфекции: коинфекция (одновременное заражение ВГВ и ВГD) и суперинфекция (заражение HBsAg-позитивных пациентов). Сочетание ВГВ и ВГD сопровождается развитием более тяжелых форм патологического процесса, что определяется главным образом действием ВГD.

Летальность при суперинфекции достигает 15-20%. Инфицирование дельта-вирусом может вызывать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением, или формировать хроническое носительство ВГD.

При гепатите D могут отсутствовать в крови маркеры гепатита В – анти НВс и НВs-антиген – и наблюдается угнетение ДНК-полимеразной активности, так как ВГD ингибирует репликацию вируса гепатита В.

ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита D

Источник

Иногда у человека в анализе крови обнаруживается положительный результат на гепатит С. Это заболевание развивается бессимптомно, на первых стадиях никак не беспокоит пациента.

Такой анализ сдается при появлении тяжести в правом подреберье, желтушности кожи и склер, горечи во рту. Это исследование выполняют перед операциями, при беременности или желании сдать кровь в качестве донора.

Анализы на гепатит С

Для выявления гепатита С используют несколько лабораторных методов. К ним относятся:

Анти–HCV.
Это скрининговое иммуноферментное исследование (ИФА), которое выявляет антитела к этому вирусу. Данный анализ доступен, проводится во всех медицинских лабораториях.
РИБА.
Рекомбинантный иммуноблотинг. Применяется в случае положительного ИФА для подтверждения его специфичности. Это развернутое исследование, направленное на идентификацию обнаруженных антител.
ПЦР.
Полимеразная цепная реакция относится к наиболее информативным методам диагностики. С помощью такого обследования определяют наличие вируса, количество возбудителя. По его результатам судят, насколько эффективным было лечение. Динамика вирусной нагрузки позволяет судить об активности процесса.
Генотипирование.
Относится к разновидности полимеразной цепной реакции. Проводится при выявлении положительных результатов. После определения генотипа вируса назначается соответствующее лечение.

Рекомендуется сдавать кровь на маркеры гепатитов В и С каждые 6 месяцев медицинским работникам, военнослужащим и сотрудникам полиции.

Также обязательно такое исследование для пациентов, перенесших трансплантацию органов или находящихся на гемодиализе.

Результаты анализов

У человека может быть выявлен положительный, ложноположительный или отрицательный результат ИФА. Это свидетельствует о наличии или отсутствии в крови антител к вирусу гепатита С.

РИБА, генотипирование, ПЦР проводятся уже для верификации положительного диагноза.

Выявлен положительный гепатит С: что это значит?

Если во время первичного исследования ИФА выявляется положительный анализ на гепатит С, имеет значение вид обнаруженных антител (Ig). Эти вещества появляются при попадании вируса в организм человека. Их обнаружение определяет стадию и степень заболевания. Выделяют 2 вида иммуноглобулинов:

Ig М.
Обнаружение таких белков указывает на острую фазу болезни, недавнее заражение и сильное поражение гепатоцитов. При проведении ИФА в динамике наблюдается нарастание титра антител. У пациента проявляется характерная клиническая симптоматика: желтуха, тяжесть в правом подреберье, немотивированная усталость, изменение цвета мочи и фекалий.
Ig G.
Свидетельствуют о хроническом, вялотекущем или латентном течении гепатита. Никаких проявлений заболевания в этот период не наблюдается. Человек чувствует себя хорошо. Такой положительный результат выявляется при подготовке больных к хирургическим вмешательствам, скрининге беременных или при случайном обследовании.

Если антитела к гепатиту с положительные, это означает, что в организме есть специфические антигены. Следовательно, у больного уже присутствовал этот вирус.

Отрицательный

Получение такого ответа свидетельствует о том, что антитела или вирус гепатит С не обнаружен либо концентрация вируса ниже допустимого предела чувствительности, определяемого данным методом.

Отрицательный анализ, полученный после лечения противовирусными препаратами, говорит о том, что лечение было назначено правильно. Пациент выздоровел.

Отрицательный результат бывает получен при генотипировании. В этом случае на бланке анализа указывается «не типируется». Такое встречается редко и означает, что генотип вируса не может быть определен или не соответствует ни одному из имеющихся. Врачи рекомендуют такое исследование переделать.

Ложноположительный

Причиной ложноположительных результатов являются:

Онкологические процессы в организме.
Беременность или период лактации у женщин.
Аутоиммунные заболевания соединительной ткани.
Туберкулез.

Нельзя сдавать кровь во время острых респираторных вирусных инфекций, сразу после еды. Это тоже приводит к получению ложных положительных обследований.

Причины ошибочных анализов

Иногда бывает так, что при взятии крови на гепатит C обнаруживается положительный результат. При последующей пересдаче, исследовании другими способами выясняется, что первый анализ выполнен ошибочно.

Такое бывает в случае:

Не соблюдении условий транспортировки или хранения образцов крови.
В результате использования просроченных или несертифицированных реактивов.

При случайной ошибке или халатности лаборанта.
При воздействии горячей или холодной температуры.

Для опровержения или подтверждения полученных положительных результатов, необходимо пересдать их, желательно в другой лаборатории. Параллельно с этим рекомендуется выполнить биохимический анализ крови УЗИ или МРТ брюшной полости

Анти-HCV положительный, а ПЦР отрицательный

Этот результат обследования свидетельствует о том, что у пациента обнаружены антитела к вирусу, но при повторной сдаче крови с помощью полимеразной цепной реакции этот вирус не определяется.

Такое встречается в нескольких случаях:

При неправильном заборе крови либо некачественном выполнения самого анализа.
Если такое выявлено при беременности, то назначается повторное ПЦР. Если она положительна, то диагноз гепатита C подтверждается.
Подобное наблюдается у больных, перенесших ранее это заболевания. Активная вирусная нагрузка отсутствует, но циркулируют уже имеющиеся антитела.

Если при повторной сдаче обнаружено отсутствие антител, то через 3 месяца рекомендуется это исследование повторить.

Что делать при положительном анализе?

Если у пациента выявлен положительный результат, то для многих это является шокирующим известием. В такой ситуации рекомендуется повторно пересдать ПЦР, ИФА. Затем необходимо сделать следующее:

Обратиться к гепатологу, терапевту или инфекционисту.
Сдать клинический анализ крови и мочи, биохимию ( трансаминазы, белок, билирубин прямой, непрямой, гамма – глутамилтрансфераза).
Сделать УЗИ печени, МРТ брюшной полости.
Выполнить фиброэластометрию печени для определения степени фиброза.
Обязательно сделать прививку от гепатита В.

Диагноз гепатита C совсем не является приговором. Он успешно лечится. В зависимости от генотипа применяют 24-х или 48-и недельный курс терапии. После проведенного лечения ИФА всегда положительное, а при проведении ПЦР будет наблюдаться снижение или полное отсутствие вирусов в крови.

Источник

Лабораторные методики являются важным диагностическим способом в клинике инфекционных болезней. Серодиагностика гепатита C, B и A происходит по идентичным принципам. Метод определяет наличие у пациента конкретного вида возбудителя путем поиска специфических антигенов или комплексов антиген-антитело. Результаты этой диагностики помогают подобрать схему лечения.

Серологическая реакция на гепатит с

Суть серодиагностики

Метод заключается путем поиска в крови характерных для вирусных гепатитов антигенов. Последние являются микрочастицами, имеющими индивидуальную конфигурацию и присущими каждому возбудителю. Реже выполняют определение в плазме крови антител к определенным антигенам. Реакция называется связыванием комплемента. Антитела выступают в качестве факторов иммунитета. Их продуцируют клетки лимфоциты. Для определения антител к тому или иному вирусу гепатита используются стандартные антигены.

Вернуться к оглавлению

Показания к проведению

Методика показана пациентам с такой клинической симптоматикой:

Пожелтение кожных покровов. Появляется при накоплении в дерме пигмента билирубина. Его высокая концентрация наблюдается при воспалении печеночной ткани.
Болезненные ощущения и тяжесть в правом подреберье. Увеличенная печень растягивает капсулу, провоцируя возникновение характерных признаков.
Повышение температуры до субфебрильных цифр, в сочетании с симптомами.
Мелкоточечная сыпь на кожных покровах. Она наблюдается при дефиците факторов свертывания крови вследствие печеночной недостаточности.
Слабость, недомогание, вялость и расстройство мышления.

Вернуться к оглавлению

О чем свидетельствует метод?

Серологическая реакция на гепатит с Диагностика возможна только в лабортории.

Серологический способ диагностики выявляет антигены того или иного вида вируса гепатита. Происходит это с помощью стандартных антител. Банки этих молекул хранятся в лабораториях. Антитела получают из иммунных клеток — B-лимфоцитов, а точнее, их фракции — плазмоцитов. Другой способ — выявление в крови комплексов антиген-антитело путем реакции связывания комплемента. Результат бывает ложноположительным по причине наличия у пациента ревматоидного фактора. Этот патологический белок повышается при системной красной волчанке, ювенильном артрите, анкилозирующем спондилоартрите и подагре. Больным с перечисленными сопутствующими недугами следует делать повторную сверку для достоверного результата анализа.

Вернуться к оглавлению

Как проводится метод?

Серология на вирус гепатита A проводятся с помощью ИЭМ — иммуноэлектронной микроскопии. Реже применяют РСК — реакцию связывания комплемента. Как альтернативный метод, используется РИА с мечеными Anti и Ag. Новинкой лабораторной диагностики является РЭМА — реакция энзим-антител. Серологическая диагностика на гепатит В включает реакции РИА, РЭМА и РПГ, при которой происходит преципитация в геле. Реже используется РИГА с непрямой гемагглютинацией. При ней с диагностической целью применяют эритроциты, нагруженные HBsAg.

Только для серологической диагностики гепатита C выполняют иммуноферментный анализ (ИФА).

Вернуться к оглавлению

Результаты при разных формах гепатита

Итогом серологических исследований при различных подтипах вируса является поиск маркеров. Присутствие иммуноглобулина M (IgM) всегда дает сведения о наличии острой фазы заболевания у пациента, а IgG — о хроническом течении патологии, или о перенесении ее в стертой форме. Ниже представлены показатели при различных видах гепатитной инфекции:

Форма гепатита	Искомые маркеры	Краткое описание
A	anti-НАV IgM	Антитела к вирусу, получаемые в острую фазу заболевания
A	anti-НАV IgG	Антитела к вирусу, получаемые в хроническую фазу заболевания
B	HBcAg	Внутренний антиген B
	HBsAg	Внешний (оболочечный или капсидный) антиген B
	HBeAg	Сердцевинный антиген B
C	анти-HCV	Антитела к вирусу C

Вернуться к оглавлению

Вирусный подтип A

Серологическая реакция на гепатит с Данный вид гепатита можно вылечить придерживаясь диеты.

При нем ищут anti-HAV IgM и IgG. Выполняется диагностический поиск путем реакции связывания комплемента. В результате получают иммуноглобулины острой и хронической фазы, свойственные этому подвиду. Заболевание не требует введения противовирусных препаратов. Оно лечится симптоматически и с помощью диеты. Если пациент не припоминает у себя в прошлом болезни Боткина, это не значит, что он ею не болел. Обнаружение в крови anti-HAV IgG подтвердит, что недуг протекал в стертой форме.

Вернуться к оглавлению

Вирусный подтип B

При гепатите этого вида диагностический поиск направлен на обнаружение HBcAg, HBsAg и HBeAg. Здесь применяется уже больше реакций. Одной из них является поиск ферментативных антител. Также используют преципитацию (осаждение) в гелеобразных субстанциях. Выявляют маркеры острой и хронической фаз. Параллельно определяют маркеры сателитного гепатита D. Качественная оценка анализа подтверждает наличие маркеров в крови. Количественно же результаты оценивают по принципу обратной связи: чем выше уровень обнаруженного антигена, тем легче протекает воспаление печени, и наоборот.

Вернуться к оглавлению

Вирусный подтип C

При заражении этим видом у пациента ищут анти-HCV. С целью этого диагностического поиска применяют иммуноферментный анализ. Он заключается в использовании ферментативных веществ для определения у человека антигена к вирусу гепатита C. Поскольку это заболевание чаще протекает в хронической форме, другие анализы не требуются. Поэтому для диагностики патологии хватает недели.

Источник