Серологический метод диагностики кишечной инфекции

Серологическая
метод диагностики (обнаружение
инфекционных антител в сыворотке
обследуемого) широко применяется при
лабораторном подтверждении диагноза
у больных кишечными ин­фекциями. С
этой целью чаще всего используется
реакция агглютинации с бактериальными
(РА) или эритроцитарными (РПГА)
диагностикумами.

Инфекционные антитела
в сыворотках больных кишечными инфекциями
появляются со 2-ч дня болезни. По мере
развития заболевания количество их
нарастает и может достигать титров
1/800-1/1600 и выше. В зависимости от характера
используе­мого диагностикума
(бактериальный или эритроцитарный) и
его природы (дизентерийный, холерный,
сальмонеллезный О-,Н или
Ви) исследуемая
сыворотка разводятся от 1/20-1/40 до 1/800
-1/1600.

Характерным признаком
инфекционных антител/позволяющим
отличить их от анамнестических и
поствакцинальных, является увеличение
их количества по мере развития
заболевания.. Чтобы проследить за
динамикой изменения количества антител
в ходе развития заболевания исследуют
парные сыворотки, т.е. сыворотки,
полученные от больного в разные сроки
болезни.

Реакция Видаля

Реакция Видаля
используется как метод серологической
диагностики брюшного тифа и паратифов.
Компоненты реакции: 1. Сыворотка
обследуемого 2. Физиологический раствор

3. Диагностикумы:
брюшнотифозный — О брюшнотифозный —
ОН паратифозный А — ОН паратифозный В
— ОН

Задание 1.
Поставить реакцию Видаля с сыворотками

больного, взятыми
на 8-й и 16-й день болезни.

Выполнение задания

Сыворотку разводят
физиологическим раствором в отношениях
1/50-1/I600
(объем 1 мл). Готовят 4таких ряда, В
пробирки каждого ряда вносят по 2-3 капли
одного из диагностикумов (брюшнотифозный
О, брюшнотифозный ОН, паратифозный А и
В), встряхивают и помешают в термостат
на 18-20 часов. Опыт сопровождается
контролем диагаостикума. На следующий
день учитывают результаты реакции и
оформляют в виде протокола.

РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ
С САЛЬМОНЕЛЛЕЗНЫМИ ДИАГНОСТИКУМАМИ

Используется как
метод серологической диагностики
сальмонеллезов. Наиболее частым
возбудителем сальмонеллезной инфекции
(до 80%) является сальмонелла мышиного
тифа (тифимуриум) Компонента реакции:
I;
Сыворотка обследуемого

2, Физиологический
раствор

3. Сальмонеллезный
диагностикум тифимуриум

Задание 2.
Поставить реакцию агглютинации с
сывороткой больного с подозрением на
сальмонеллезную инфекцию.

Выполнение задания

Сыворотку крови
разводят физиологическим раствором в
отношениях 1/50-1/800 (объем 1 мл). В каждую
пробирку вносят по две-три капли
диагностинума (тифимуриум). Встряхивают,
помещают в термостат на 18-20 часов. Опыт
сопровождается контролем диагностикума.
На следующий день учитывают резуль­тат
реакции и оформляют в виде протокола.

ДИЗЕНТЕРИЙНЫЙ
ВИДАЛЯ

Используется как
метод серологической диагностики
дизентерии. Чаще всего дизентерию
вызывают шигеллы Флекснера и
Зонне.
Компоненты реакции: I.
Сыворотка обследуемого

  1. Физиологический
    раствор

  1. Дизентерийные
    диагностикумы Флекснера и Зонне.

Задание 3.
Поставить реакцию агглютинации о
сывороткой больного с подозрением на
дизентерию

ВЫПОЛНЕНИЕ ЗАДАНИЯ

Сыворотку больного
разводят физиологическим раствором в
отношении 1/50 — 1/800 (объем I
мл). Готовят 2 таких ряда. Во все пробирки
каждого ряда вносят по 2-3 капли одного
из дизентерийных диагностикумов
(Зонне, Флекснера), встряхивают я помещают
в термостат. Контроль тот же что и в
реакции Видаля. Результат учитывают на
следующие сутки и оформляют в виде
протокола.

.

Создание эритроцитарных
диагностикумов (Брюшнотифозных,
дизентерийных, холерных, сальмонеллезных)
позволило широко использовать для
серологической диагностики кишечных
инфек­ций реакцию пассивной
гемагглютинации (РПГА). Эта реакция
отличается высокой чувствительностью,
четкостью и демонстративностью
результатов, простотой выполнения. Для
ее постановки необходимы: сыворотка
обследуемого, физиологический раствор
и соответствующий поставленной задаче
эритроцитарный диагностикум.

Задание 4.
Поставить РПГА с целью серологической
диаг­ностики тифозного бактерионосительства

Выполнение задания

Сыворотку крови
бодьного разводят физиологическим
раст­вором 1/20-1/640
(объем 0,5 мл).
В каждое разведение вносят по две
капли эритроцитарного брюшнотифозного
Ви-диагностикума, Встряхивают и помещает
в термостат на 2-4 часа или оставляют
на.сутки при комнатной температуре.
Учитывают результат и оформляют
протокол.

Задание 5.
Поставить РПГА с целью серологической
диагностики дизентерии.

Выполнение задания

Сыворотку крови
больного разводят физиологическим
раствором 1/20-1/320 (объем 0,5 мл). Готовят
несколько таких

рядов. В разведении
каждого ряда вносят по 2-3 капли
эритроцитарного диагностикума (Зонне,
Флекснера, Бойда). Встряхи­вают и
помещают на 2-4 часа в термостат или
оставляют на сутки при комнатной
температуре. Учитывают результаты и
оформляют их в виде протокола.

Читайте также:  Кишечная инфекция код по мкб 10 у детей

Ситуационные
задачи

  1. Больной К. , 42 лет
    поступал в клинику инфекционных
    болезней с подозрением на тифо-паратифозное
    заболевание. Считает себя больным
    10 дней. Бактериологическое исследование
    крови дало отрицательный результат.
    Какие еще методы лаборатор­ной
    диагностики можно применись для
    обследования данного больного?

  2. У больной
    А., 18 лет, поступившей в клинику
    инфекционных болезней о подозрением
    на тифо-паратифозное заболевание
    зарегистрируем следующие результаты
    Видаля:

Диагностикумы

День болезни

6

11

Брюшнотифозный
О

1/150

1/100

Брюшнотифозный
ОН

1/100

1/400

Паратифозный
А

1/50

1/50

Паратифозный
В

1/50

1/50

Ваше мнение
относительно диагноза у данной больной?
Обоснуйте его.

3. Больной Р. , 47 лет
поступил в клинику инфекционных болезней
с жалобами на сильные головные боли,
высокую температуру, общее недомогание.
Больным себя считает 6 дней. Результаты
реакции Видаля следующие:

Диагностикумы

Разведения
сыворотки

Брюшнотифозный
О

1/100

Брюшнотифозный
ОН

1/200

Паратифозный
А

1/50

Паратифозный
В

1/50

Ваше мнение
относительно диагноза заболевания у
данного больного? Обоснуйте его.

4. Больной Д.
, 22 лет
обратился к врачу поликлиники с жалобамина общее
недомогание, высокую температуру,
головные боли. Был поставлен диагноз
ОРЗ (острое респираторное заболева­ние)
и выдан больничный лист. Черёз 10 дней
несмотря на проводимое лечение состояние
больного не улучшилось, врач направил
сыворотку больного на серологическое
исследование для исключения
тифо-паратифозного заболевания.
Результаты реакции Видаля следующие:

Диагностикумы

Разведения
сыворотки

Брюшнотифозный
О

1/50

Брюшнотифозный
ОН

1/50

Паратифозный
А

1/50

Паратифозный
В

1/100

Ваше мнение по
результату реакции?

5. В детском саду №
196 зарегистрирована вспышка брюшного
тифа среди детей. Бактериологическое
обследование здоровых, а также персонала
не выявило брюшнотифозных бактерионосителей.
Какие еще методы лабораторного
исследования следует применить для
выявления носительства в данном
коллективе?

6. Больная З., 16 лет
поступила в клинику инфекционных
болезней на 7 день с начала заболевания
с жалобами на частый жидкий стул с
примесью слизи и крови, общую слабость,
повышенную температуру. До поступлений
в клинику в течение 5
дней принимала
левомицетин и фталазол. В клинике
постав­лен диагноз — острая дизентерия.
Какие методы лабораторной диагностики,
помимо бактериологического, Вы
порекомендуе­те применить для
подтверждения диагноза у данной
больной?

7. Три месяца назад
в одном из районов города была
зарегист­рирована вспышка пищевой
токсикоинфекции, в ходе которой
заболело 13 человек. При бактериологическом
исследовании материала от больных
выделить возбудителя не удалось. При
бактериологическом исследовании в
этот же период времени различных
образцов мяса из столовой (все
заболевшие связы­вают свое заболевание
с употреблением пищи в
этой столовой)
выделена культура сальмонелл мышиного
тифа. Можно ли доказать этиологическую
роль этого возбудителя при указанной
вспышке?

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ
ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ ПО БИОХИМИЧЕСКИМ ТЕСТАМ

Ситематичес-кие
группы

Escherichia

Salmonella

Klebsiella

Proteus

Pseudomanas

aeruginosa

Escherichiae

Shigella

Salmonella

Citrobacter

Klebsiella

Serratiae

Vulgaris

Mirabilis

Тест
или субстрат

Индол

+

+-

+-

+

Метилрот

+

+

+

+

+-

+

+

Фогес-проскауэр

+

+-

Цитрат
Симонса

+-

+

+

+

+-

+

+

H2S

+

+-

+

+

Уреаза

+-

+

+-

+

+

+-

Подвижность

+-

+

+

+

+

+

+

Желатин

+

+

+

+

Газ
на глюкозе

+

+

+

+

+-

+-

+

Лактоза

+

+-

+

Маннит

+

+-

+

+

+

+

Сахароза

+-

+-

+

+

+

+-

Фенилаланиндезаминаза

+

+

Лизиндекарбоксилаза

+-

+

+

+

Оксидаза

+

Ксилоза

+-

+

+-

+

+-

+-

+

+(89%)

Пигмент

+-

+-

+(89%)

Читайте также:  Пробиотики после кишечной инфекции

Условные обозначения:
+ наличие признака


отсутствие признака

+
— непостоянно

Соседние файлы в папке Лекции Швиденко

  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #

Источник

 Диагностическая значимость бактериологического и серологического методов при выявлении бактериальных кишечных инфекций / Diagnostic significance of bacteriological and serological methods for identifying bacterial intestinal infections

Бирюков В.В. / Byrukov V.V.

кандидат медицинских наук / candidate of medical sciences

Государственное бюджетное учреждение Рязанской области «Консультативно-диагностический центр» / State budgetary institution Ryazan region «The consulting and diagnostic center»

г. Рязань

соавторы: Пискарева О.В., Боброва Т.П. / Collaborators: Pyskareva O.V., Bobrova T.P.

Аннотация.Оцениваются результаты бактериологической и серологической лабораторной диагностики бактериальных кишечных инфекций и их значение для установления и подтверждения клинических диагнозов при диарейных заболеваниях. / Annotation. Evaluated the results of the serological laboratory diagnosis bacterial intestinal infections and their importance for the establishment and confirmation of the clinical diagnosis with diarrhoeal diseases.

Ключевыеслова:бактериологическая исерологическая диагностика, шигеллезы, сальмонеллезы, реакция гемагглютинации. / Keywords: serological diagnostics, shigelleza, salmonellosises, hemagglutination reaction.

Введение. Сальмонеллезы и шигеллезы встречаются в большинстве регионов мира и занимают значительное место среди всего этиологического спектра диарейных заболеваний, что обусловлено способностью шигелл и сальмонелл длительно сохраняться во внешней среде, полирезистентностью к антибактериальным препаратам и высокой генетической пластичностью микроорганизмов. Заболеваемость в Российской Федерации острыми кишечными инфекциями продолжает оставаться высокой, нанося значительный экономический ущерб.

Цель. Оценка лабораторно-диагностического значения бактериологического и серологического подтверждения дизентерии и сальмонеллеза в постановке клинического диагноза. Наряду с бактериологическим обследованием на патогенные энтеробактерии серологические исследования у пациентов с диарейными заболеваниями играют значительную роль в постановке диагноза шигеллезов и сальмонеллезов, при этом обеспечивают быструю постановку диагноза в связи с минимальными  сроками проведения реакции в течение двух часов. Недостаточная изученность и незначительное количество работ, посвященных серодиагностике бактериальных кишечных инфекций, по сравнению с бактериологическим методом, обусловили выполнение данной работы.

Материалы и методы. Согласно действующим нормативным документам, диагностика диарейных инфекций базируется на клинических и лабораторных данных, включающих и реакции иммунитета. Бактериологический метод, как классический метод выделения чистой культуры патогенного микроба из биоматериала больного человека на дифференциально-диагностических питательных средах, широко используется во всех бактериологических лабораториях, и применялся нами в для лабораторной диагностики острых кишечных инфекций по назначению клиницистов.

Серологический метод исследования на ряду с бактериологическим широко применяется в практике. Серологические реакции протекают в две фазы: первая – специфическое соединение между детерминантной группой антигена и соответствующим активным центром антитела и вторая – неспецефическая фаза или видимая с образованием комплекса антиген+антитело. Выбор той или иной реакции иммунитета для диагностики инфекционных болезней зависит от ряда условий: характера болезни и периода заболевания, антигенности возбудителя, степени чувствительности реакции, а также возможности постановки ее в условиях соответствующей лаборатории. Серодиагностика проводилась на основе реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с эритроцитарными дизентерийными диагностикумами Зонне, Флекснер, сальмонеллезным О-антигенным комплексным диагностикумом (1,2,3,4,6,7,8,9,10,12), ООО «Био-диагностика», г. Москва (микрометод).

На бактериологические и серологические исследования поступали пробы кала и крови в ГБУ РО «Консультативно-диагностический центр» из 18 лечебно-профилактических учреждений города Рязани.

Результаты. Результаты РПГА учитывались как положительные  -при титрах от 1:200 и выше, анализу подвергались все результаты, в том числе, где не отмечалось нарастание (или падение) титров специфических антител в динамике или пациенты обследовались однократно. Результаты серологических исследований  за четыре года (2013-2016гг.) отражены в таблице №1.

Таблица №1

Результаты РПГА на дизентерию и сальмонеллез по г. Рязани

Годы

Обследовано больных

лиц/анализов

Из них положительных

лиц(%)/анализов(%)

Из положительных анализов

На дизентерию

анализов / %

На сальмонеллез

анализов / %

абс. % / абс. %

2013

1576/4622

132(8,4%)/157(3,4%)

28/17,8%

129/82,2%

2014

1719/5089

126(7,3%)/152(2,99%)

17/11,2%

135/88,8%

2015

1513/4642

52(3,4%)/61(1,31%)

2/3,2%

59/96,8%

2016

1111/3891

65(5,85%)/83(2,1%)

19/22,9%

64/77,1%

Читайте также:  Ротовирусная кишечная инфекция доктор комаровский

Положительные результаты бактериологических исследований при диагностике ОКИ учитывались —  все выделенные культуры шигелл и сальмонелл, идентифицированные до вида и биовара. Результаты бактериологических исследований  за четыре года (2013-2016гг.) отражены в таблице № 2.

Таблица №2

Результаты бактериологических исследований на дизентерию и сальмонеллез по г. Рязани

Годы

Обследовано больных

лиц/анализов

Из них положительных

лиц(%)/анализов(%)

Из положительных анализов

На дизентерию

анализов / %

На дизентерию

анализов / %

абс. % / абс. %

2013

9478/18956

98(1,03%)/143(0,75%)

3/2,1%

140/97,9%

2014

9853/19706

71(0,72%)/99(0,5%)

3/3,03%

96/96,97%

2015

8012/16024

50(0,62%)/72(0,45%)

-/0%

72/100%

2016

7046/14092

53(0,75%)/69(0,49%)

3/4,35%

66/95,65%

Видовой состав возбудителей сальмонеллезов на протяжении четырех лет был стабилен. Лидирующее место принадлежало сальмонеллам группы D (Salmonella enteritidis): в 2013 году — 69,2%, в 2014 году – 71,0%, в 2015 году – 53,4%, в 2016 году – 88,0%. Среди единичных культур шигелл выделялись как шигеллы Зонне, так и шигеллы Флекснера относительно в равных количествах.

Анализируя данные таблицы №1 можно отметить, что антитела в сыворотке крови пациентов к шигеллам  и сальмонеллам были обнаружены у 2-3% всех обследованных. За 4 года отмечается постепенное снижение положительных серологических исследований от  3,4% в 2013году до 2,1% в 2016 году, что отражает общую тенденцию снижения заболеваемости бактериальными кишечными инфекциями. Это подтверждается и данными таблицы №2, где выявляется снижение высеваемости от  0,75% в 2013году до 0,49% в 2016 году.

Однако при окончательной постановке диагноза, в отличие от бактериологического метода, при котором выделение определенного вида шигелл или сальмонелл имеет абсолютное значение среди лабораторных методов исследований, положительные серологические результаты РПГА имеют лишь вспомогательное значение. Диагностическое подтверждение имеет только исследование парных сывороток с нарастанием титра в 2-4 раза и выше с интервалом в 7-10 дней. Специфические антитела можно выявить, начиная с 5-го дня заболевания, через 2 недели количество антител в крови  достигает максимума, а через месяц начинает снижаться. Однако в практике не все больные обследуются двукратно, а интервал между парными сыворотками составляет чаще всего 4-6 дней, что не позволяет обнаружить максимальное количество антител. Кроме того в ряде случаев наблюдается так называемая групповая неспецифическая агглютинация. Это обусловлено особенностью антигенной структуры бактерий. Микробная клетка, помимо так называемых специфических антигенов, характерных для данного вида, может содержать и групповые антигены, которые имеются и у других видов бактерий. Следовательно, при иммунизации человека каким-либо видом бактерий или в процессе болезни наряду с антителами к соответствующему виду могут вырабатываться антитела, как правило, и к родственным видам бактерий. Обычно в лечебной практике результаты РПГА без нарастания титров антител не учитываются при постановке диагноза группы бактериальных кишечных инфекций. Ложноположительные результаты РПГА, в немалой степени, увеличиваются с ростом  числа лиц с иммунодефицитными состояниями в человеческой популяции. Наличие в сыворотке крови небольшого титра специфических антител без нарастания в динамике может говорить о том, что человек здоров, но в прошлом перенес заболевание. К сожалению, перенесенный в прошлом сальмонеллез и шигеллез  не исключает повторного заражения. Оно возможно по причине существования разных видов этих бактерий

Выводы. Анализируя данные таблиц (№№1 и 2), можно сделать вывод, что в целом положительные серологические результаты составляют больший процент по сравнению с бактериологическим подтверждением при диагностике диарейных инфекций. Однако определяющим фактором при окончательной постановке диагноза шигеллеза и сальмонеллеза в диагностике бактериальных кишечных инфекций остается выделение чистой культуры патогена.

Литература:

1. Бухарин О.В.Персистенция патогенных бактерий. – М., 1999

2. Котова А.Л., Белозеров Е.С. Сальмонеллезы. – Алма-Ата, 1992

3. Покровский В.И., Черкасский Б.Л. Сальмонеллезы. — М., 1995

4. Кондрашева Е.А., Островский А.Ю., ред. ИНВИТРО диагностика Лабораторная диагностика. М.: Медиздат; 2009

Источник