Сколько дне пцр на гепатит в
Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.
При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.
Виды ПЦР на вирусный гепатит В
Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.
Качественный ПЦР и его трактовка
Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:
- отрицательный результат — вируса нет;
- положительный результат — вирус обнаружен.
Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.
В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.
Количественный ПЦР
Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:
- Перед назначением лечения.
- Для оценки эффективности терапии.
- Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
- Для определения стадии, на которой находится заболевание.
Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:
1 МЕ/мл = 5 копий/мл
Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.
Трактовка количественного ПЦР
При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:
- < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
- от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
- 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
- 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.
Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:
- Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
- Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
- Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
- Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
- Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.
Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:
- ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
- ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
- ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.
Подготовка к обследованию
Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:
- Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
- Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
- Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.
Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.
Подводя итоги
На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.
Источник
Гепатит – тяжелая воспалительная патология гепатоцитов (клеток печени) и печеночной ткани, имеющая инфекционное, аутоиммунное или токсическое происхождение. Опасность болезни заключается в высокой контагиозности, и сложной эрадикации (полной ликвидации).
Для постановки точного диагноза используются результаты анализа крови на гепатит, исследования мочи и кала, аппаратного обследования (УЗИ, МРТ, КТ). К наиболее распространенным относятся гепатиты вирусной этиологии А, В, С и развивающиеся на их фоне типы Е, D.
| Тип вирусного гепатита | Способ заражения | |
| HАV (болезнь Боткина) и HЕV | фекально-оральный | |
| сывороточный HBV | гемотрансмиссивный (через кровь), вертикальный (от матери к плоду) | |
| посттрансфузионный HCV и H D V | гемотрансмиссивный, половой | |
Вирусные гепатиты протекают в острой или хронической форме. Острое течение с проявлением яркой симптоматики характерно для типа А, В. Гепатит С в большинстве случаев протекает латентно, выраженные симптомы проявляются не сразу. Тип В может иметь как острую, так и хроническую форму. Профилактическая прививка предусмотрена только против гепатита В, вакцинация типов А и С не проводится.
Инфицирование гепатитом – одна из тяжелейших печеночных патологий, угрожающая развитием онкологических новообразований в печени и перерождением в неизлечимый цирроз. При несвоевременной врачебной помощи имеет высокую вероятность летального исхода.
Диагностика гепатитов
Расширенная лабораторная диагностика вирусного поражения печени включает следующие анализы крови:
- ОКА (общий клинический анализ);
- биохимия;
- коагулограмма (анализ на свертываемость);
- ИФА (иммуноферментный анализ);
- ПЦР (полимеразная цепная реакция).
Дополнительно проводится исследование мочи и кала. При подтвержденной печеночной патологии типа В и С, назначается анализ на реакцию Вассермана (сифилис) и вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).
Показания к назначению
Лабораторная микроскопия на гепатит проводится:
- при предполагаемом диагнозе, согласно симптоматическим жалобам пациента (тошнота и рвота, болевой синдром в правом подреберье, потемнение мочи и обесцвечивание кала, желтушность кожи и другие);
- в случае серьезных отклонений от референсных значений показателей печеночных ферментов в проведенной ранее биохимии крови;
- при хронических печеночных патологиях (рак и цирроз);
- женщинам в перинатальный период и детям, рожденным от инфицированных мамочек.
Сдать анализ необходимо в случае обнаружения гепатита в ближайшем окружении пациента. Плановое обследование на наличие инфекции проходят работники медицинских учреждений, находящиеся в непосредственном контакте с больными гепатитом или с образцами биожидкости (крови, мочи).
Направление на анализы выписывает терапевт, инфекционист либо врач, занимающийся болезнями гепатобилиарной системы – гепатолог. Для экономии времени проверить состояние печени можно самостоятельно на возмездной основе в клинико-диагностических центрах Москвы и других крупных городов.
Сколько дней делают анализ, зависит от оснащения лаборатории и функциональной загруженности медперсонала. Результаты общеклинического и биохимического исследования обычно готовы на следующий день. Специальные анализы (ИФА, ПЦР) изготавливаются в течение 3–7 дней (в отдельных случаях – до двух недель).
Общеклиническое исследование и коагулограмма
ОКА при вирусной инфекции печени не имеет диагностической ценности в отношении вируса, но дает представление об изменениях в организме, вызванных вирусной инвазией (проникновение в организм). Общий анализ крови покажет характерные отклонениями от нормативных значений:
- лейкопения, иначе снижение числа белых клеток крови (лейкоцитов);
- анемия (пониженный гемоглобин);
- тромбоцитопения или сниженный показатель тромбоцитов, отражающих качество свертываемости крови;
- увеличение скорости оседания эритроцитов (красных кровяных телец), иначе СОЭ.
- лимфоцитоз (повышение количества лимфоцитов – кровяных клеток, отвечающих за сопротивляемость организма инфекциям).
Нормы общего анализа крови
Для исследования производится забор капиллярной крови (из пальца). Специальная подготовка к процедуре не предусмотрена. Общий анализ крови при гепатите оценивается в комплексе с коагулограммой.
Коагулограмма
Неспособность гепатоцитов выполнять свои функции вследствие поражения вирусом становится причиной плохой свертываемости крови. Основные параметры коагулограммы при гепатите:
- увеличение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ);
- повышение протромбинового индекса (ПТИ);
- снижение показателей печеночного белка протромбина.
Кровь для коагулограммы сдается из вены.
Биохимическое исследование
Результаты биохимии крови при патологических нарушениях печени всегда будут неудовлетворительными. При инфицировании значения основных исследуемых параметров изменяются в сторону увеличения либо уменьшения, что позволяет врачу подозревать гепатит и направить пациента на дальнейшее обследование. Биохимический анализ крови при гепатите С и В отражает определенные отклонения от нормы.
Билирубин
Основной желчный пигмент – билирубин – отвечает в организме за гемоглобиновый обмен. Вместе с белками плазмы (альбуминами), он попадает в печень, где трансформируется на прямой и связанный пигмент. Вирус разрушается клеточные мембраны печени, поэтому при норме билирубина от 5 до 20 мкмоль/л гепатит повышает его значения в несколько раз.
Показатели билирубина в зависимости от стадии развития болезни
| Слабая активность вируса (появление признаков желтухи) | Легкая форма болезни | Среднетяжелая степень | Тяжелая степень |
| 21–30 мкмоль/л | до 85 мкмоль/л | 86–169 мкмоль/л | свыше 170 мкмоль/л |
АЛТ, АСТ, ЩФ
Аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ) и щелочная фосфатаза (ЩФ) представляют собой печеночные ферменты, которые активно выходят в кровь при повреждениях гепатоцитов и ткани печени. Референсными значениями являются: АЛТ и АСТ для мужчин – до 45 ед/л, для женщин – до 31 ед/л, ЩТ – до 150 ед/л.
При остром гепатите показатели увеличиваются в десятки раз. Хронический гепатит С может не проявляться яркими клиническими признаками, у 1/5 больных печеночные ферменты незначительно превышают норму.
Белковые фракции
Белок в крови представлен альбумином (продукт внутрисекреторной деятельности гепатоцитов) и гаммаглобулинами. Альбумин отвечает за стабильность коллоидно-осмотического давления, доставку и распределение гормонов, органических соединений, кислот, витаминов и минералов.
Гаммаглобулины – это антитела (иммуноглобулины IgA, IgM, IgG, IgE), обеспечивающее защиту организма от вирусов и инфекций иного характера. Усредненная норма альбумина в крови составляет от 40 гр. /л до 50 гр. /л. В случае заражения гепатитом, производство снижается.
При этом анализ показывает нормальные значения для общего белка. Это обусловлено значительным увеличением числа иммуноглобулинов, старающихся ликвидировать вирус. Биохимический анализ не дает представления о типе вируса и его активности, но по совокупности отклонений показателей можно предположительно диагностировать HАV, HBV, HCV. Для биохимии используется венозная кровь.
Специальные исследования вируса
После инвазии гепаднавирус с кровью попадает в печень, где заражает гепатоциты, изменяет их ДНК-структуру и блокирует функции. Внешняя оболочка вируса имеет белковую основу, защищающую его РНК. Клетки оболочки являются антигенами – чужеродными агентами, представляющими угрозу для организма.
В ответ на их проникновение иммунная система начинает активное производство Ig (иммуноглобулинов) – клеток-антител, ликвидирующих постороннее вторжение. Каждый иммуноглобулин предназначен для выявления и устранения определенного антигена. В ходе специальных анализов изучаются антигены, антитела и РНК вируса.
Лабораторная микроскопия крови на вирус гепатита базируется на иммуноферментном анализе (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Данные способы диагностики используются для обнаружения большинства существующих инфекций, которые проникают в системный кровоток. В ходе исследований определяется факт наличия вируса и его разновидность. Забор крови для спецанализов производится из вены.
Условия сдачи анализов крови из вены
На первоначально интересующий пациентов вопрос, нужно ли сдавать кровь из вены натощак или нет, ответ всегда утвердительный. Любая еда способна изменить состав и текстуру крови, сделать ее мутной. В этом случае результат анализа будет искажен.
Для получения объективных данных пациенту необходима несложная предварительная подготовка:
- за неделю прервать прием любых медицинских препаратов;
- за 2–3 суток устранить из рациона жирную пищу, фастфуд, исключить алкогольные напитки;
- соблюдать режим голодания перед процедурой, минимум 8 часов;
- за час отказаться от никотина.
Рекомендуется ограничить спортивные и иные физические нагрузки накануне процедуры.
ИФА
Иммуноферментный анализ основан на оценке иммунного комплекса «антиген-антитело». На первичном этапе анализа очищенный антиген помещается на исследовательскую поверхность и к нему добавляется сыворотка крови. Иммуноглобулины связываются с антигеном и определяют его принадлежность. Если агент не признается антителами, как «родной», они захватывают его в кольцо, пытаясь уничтожить.
Таким образом, формируется иммунный комплекс. Иммуноглобулины исполняют роль маркеров, по которым оценивается тип вируса. Далее проводится ферментативная реакция – делается «подсадка» определенного фермента к комплексу и оценивается изменение окраски посредством колориметра (анализатора ИФА). Степень окрашивания соответствует концентрации антител.
Выявление HАV
Тип гепатита А выявляется по маркерам анти-HAV IgM и анти-HAV IgG. Расшифровка анализа определяет наличие или отсутствие вируса и иммунитет к инфекции. Оценкой является «–» (отрицательно) и «+» (положительно).
| анти-HAV IgM «–» анти-HAV IgG «–« | анти-HAV IgM «+» анти-HAV IgG «+« | анти-HAV IgM «–» анти-HAV IgG «+« |
| отсутствие | присутствие | иммунитет |
В случае перенесенного заболевания у человека формируется стойкий иммунитет, обеспечивающий защиту от повторного инфицирования.
ИФА на HВV
Гепатит В определяется основным маркером HbsAg, реагирующим на поверхностный антиген HBV, и дополнительным антигенам и антителам, по которым устанавливается острое или латентное течение болезни либо интегративная форма (переход в хроническую стадию) либо бессимптомно перенесенная инфекция. Маркеры гепатита В:
- HBcAg (ядерный антиген);
- HBcAb IgM (антитела к ядерному антигену);
- HBeAb (антитела к антигену «е») – указывает на перенесенное заболевание;
- HBV-DNA (ДНК вируса).
При сомнительных результатах проводится повторное исследование, при котором дополнительно анализируется HBcAb
Расшифровка анализа включает два варианта:
- HbsAG «–» (отрицательный) – отсутствие инфицирования;
- HbsAG «+» (положительный) – наличие маркера вируса в организме.
Таблица результатов дает полное представление о динамике течения заболевания
| HBsAg | HBcAg | HBeAb | HBcAb IgM | HBV-DNA | |
| Острая форма | + | + | — | + | + |
| Хроническая | + в активной форме, — в интегративной | возможны оба варианта (+ и-) | + в активной форме, — в интегративной | возможны оба варианта (+ и-) | + |
| Инфекция в анамнезе | — | + | — | — | — |
| Носительство | + | + | — | — | — |
| Остаточные явления после вакцинации | — | — | — | — | — |
Вакцинация против HBV не является обязательной. Решение о проведении профилактической прививки каждый принимает самостоятельно.
Определение HCV
Посттрансфузионный гепатит С – наиболее тяжелая разновидность печеночной инфекции. Имеет одиннадцать генотипов вируса. Инкубационный период может варьироваться от 2–3 недель до 6 месяцев. При латентном течении легко переходит в хроническую форму, чрезвычайно сложно поддающуюся лечению. Основные маркеры гепатита типа С, определяемые в ходе ИФА, и их значение:
| Анти-HCV IgG | Анти-HCV core IgM | HCV-RNA |
| хроническая форма длительной продолжительности | активное распространение вируса | обнаружение вируса |
Распространенность генотипов гепаднавируса: 1a – Австралия, Америка. 1b и 2a – Европа, Азия. 2b – Северная Европа, США. 2c – Южная и Западная Европа. 3a – Австралия, Азия, Европа. 4a, 4c, 5a –Африка. 6a, 7a, 7b, 8a, 8b, 9a – Азия, 10a, 11a – Индонезия.
При подозрении на гепатит С в лабораторной практике часто проводится параллельное тестирование HCV и HBV
ПЦР
Выявить сложный вирус и определить его генную структуру помогает методика полимеразной цепной реакции ПЦР. Гепатит и другие вирусы определяются посредством многократного копирования фрагмента ДНК (амплификации) в реакторе (амплификаторе). Кровь помещается в реактор, где обрабатывается термически до расщепления РНК и ДНК.
Далее к биожидкости добавляются молекулы специальных веществ, которые выделяют нужные участки РНК и связываются с ними. С каждым новым присоединением вещества к молекуле РНК достраивается копия генетической структуры вируса. Положительный результат означает наличие инфекции, число копий указывает на количественный состав гепаднавируса.
Ценность анализа ПЦР на гепатит заключается в возможности генотипирования – выявления генотипа. Это позволяет подобрать максимально эффективный препарат, поскольку разные генотипы имеют различную резистентность (восприимчивость) к лекарствам.
Количественная оценка ПЦР
| Нижняя граница нормы | Средний результат | Высокая концентрация |
| 600.000 ме/мл | 600.000–700.000 ме/мл | от 800.000 ме/мл |
Справка! Не рекомендуется совмещать в один день сдачу крови на анализ с процедурами аппаратной диагностики (МРТ, КТ, рентген).
Дополнительный анализ мочи
Анализ мочи при гепатите менее информативен, чем микроскопия крови, но по его отдельным показателям несложно предположить наличие патологических процессов в печени. При неудовлетворительных результатах, полученных даже не для специального выявления печеночных проблем, врач направит пациента на расширенную лабораторную диагностику.
В рамках комплексного обследования на гепатит анализ урины выполняет вспомогательную функцию. В моче наблюдается появление элементов, которые в норме должны отсутствовать:
- белок (протеинурия);
- эритроцитарные, восковидные, эпителиальные белковые цилиндры в осадке урины (цилиндрурия)
- билирубин (билирубинурия);
- кровь (гематурия).
При заболеваниях печени значительно завышены показатели уробилиногена (уробилиногенурия).
Экспресс-анализ
Качественная диагностика печеночных патологий возможна только в условиях лаборатории. Для самостоятельного определения инфекции разработан специальный экспресс- анализ по тестовым полоскам (или кассетам). С его помощью можно подтвердить или опровергнуть наличие вируса, но нельзя определить его разновидность и количественную концентрацию антигена.
Биоматериал (кровь или слюну) помещают на участок стрипа (тест-полоски), пропитанный реагентами. Результат оценивается по двум зонам (контрольной и тестовой):
- линии в обеих зонах – инфицирование:
- линия в зоне контроля – инфекции нет;
- полное отсутствие линий – бракованный тест.
Экспресс-тест не гарантирует 100% точность показателей, поэтому его результат нуждается в дополнительной лабораторной проверке
Итоги
Гепатит является тяжелым заболеванием печени, характеризующимся высокой контагиозностью вирусов. Самыми распространенными типами вирусной инфекции являются А, В, С. Диагностика инфекционного поражения печени проводится посредством лабораторной микроскопии крови, включающей следующие анализы:
- общий клинический (ОКА);
- биохимический;
- коагулограмма (анализ на свертываемость);
- иммуноферментный (ИФА);
- полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Сдавать кровь на исследования можно по направлению от врача либо самостоятельно в платных клинико-диагностических центрах. Экспресс-тест, продающийся в аптеках, не является надежным способом определения инфекции и требует дополнительной проверки. Расшифровкой полученных результатов занимается только доктор (терапевт, гепатолог, инфекционист). Во избежание серьезных последствий для здоровья, самодиагностикой заниматься не следует.
Источник
