Тест системы вирусного гепатита в

Подтверждающий тест на HBsAg — маркёр инфицирования вирусом гепатита В, который проводится после получения положительного результата выявления HBsAg.

HBsAg — наиболее ранний маркёр гепатита В, появляющийся ещё в инкубационном периоде заболевания, до повышения уровня ферментов крови. Вирус гепатита В состоит из оболочки и нуклеокапсида. Оболочка содержит поверхностный белок — HBsAg, в нуклеокапсиде находятся «core» антиген (HBcAg) и антиген «e» (HBeAg), а также ферменты и ДНК вируса.

Гепатит В (HBV или ВГВ) — потенциально опасная для жизни инфекция, одно из самых распространённых в мире инфекционных заболеваний печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В (HBV).

Пути передачи HBV:

кровь и/или другие жидкости организма инфицированного человека;
через слизистые оболочки, повреждения кожного покрова;
при незащищённом половом контакте;
бытовой путь;
использование нестерильных шприцев;
переливание крови и пересадка донорских органов;
парентеральный путь (от матери к ребёнку). Мать, также, может заразить новорождённого через трещины на сосках.

Гепатит В может протекать как в лёгкой форме, которая длится несколько недель, так и в виде многолетней хронической инфекции.

Клиническая картина при гепатите В
Основные клинические проявления гепатита В: появление слабости, тошнота, снижение аппетита, быстрая утомляемость, лихорадка, желтушность кожных покровов, в лабораторных анализах — нарушения функции печени и специфические антигены вируса гепатита В. Во многих случаях заболевание протекает бессимптомно во время острой стадии инфекции. Острое заболевание может быстро приводить к летальному исходу, переходить в хроническую инфекцию или заканчиваться полным выздоровлением. После перенесенного ВГВ формируется стойкий иммунитет. Хронический вирусный гепатит В связан с развитием цирроза и рака печени.

HВsAg в сыворотке в норме отсутствует.

Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В (HBV).

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1–2 нед. инкубационного периода и в первые 2–3 нед клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Частота выявления HBsAg зависит от чувствительности используемого метода исследования. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBcAg IgM. Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при лёгких и средне-тяжёлых формах болезни. При тяжёлых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причём у 20% больных с тяжёлой формой и 30% со злокачественной, антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный прогностический признак; он определяется при злокачественных (фульминантных) формах гепатита В.

При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 мес. от начала острой инфекции. Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев. У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4–5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 мес от начала заболевания.

HBsAg может быть выявлен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркёры вирусного гепатита В — анти-HBcAg IgM, анти-НВс IgG, анти-HBeAg и изучают функцию печени. При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg. Если повторные исследования крови в течение более 3 мес. выявляют HBsAg, такого человека относят к хроническим носителям поверхностного антигена. Носительство HBsAg — довольно распространённое явление.

Обнаружение поверхностного антигена вируса гепатита В в крови дольше 6 месяцев после начала болезни свидетельствует о вероятности того, что гепатит В перешёл в хроническую форму. Возможно пожизненное носительство HBsAg.

Подтверждающий тест
Подтверждающий тест, как правило, проводят для подтверждения предварительно полученных сомнительных результатов при скрининговых обследованиях на HBsAg. Обычно для выявления HBsAg используются тест-сиcтемы, предназначенные для клинических и эпидемиологических исследований, а также массового скрининга на станциях переливания крови. В основе метода лежит принцип взаимодействия HBsAg с антителами, иммобилизованными на поверхности лунок планшета. Положительный результат должен быть подтвержден. В таких тест-системах для подтверждения положительных (сомнительных) результатов на HBsAg в сыворотке крови используется метод конкурентного ИФА, основанного на принципе нейтрализации HBsAg специфическими антителами. Минимальная концентрация HBsAg, выявляемая такой тест-системой — 0,05 МЕ/мл.

Показания
Основные показания к применению: подтверждение предварительных скрининговых данных при обследовании на HBsAg.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Ответ выдаётся в качественном формате: «положительно», «отрицательно», «сомнительно».

При подтверждении первичного положительного результата выдаётся ответ: HBsAg — «положительный», HBsAg (подтверждающий) — «положительный».

При не подтверждении положительного результата скринингового исследования выдаётся ответ — HbsAg — «отрицательный». Это означает вероятность каких-либо неспецифических влияний компонентов сыворотки крови обследуемого (например, присутствие лекарственных препаратов). В таком случае рекомендуется через некоторое время повторить исследование для исключения неспецифических влияний на результат теста.

Источник

Имуноферментные тест-системы Vitrotest

Вирус гепатита В (ВГВ) является оболочечным вирусом семейства Hepadnaviridae, содержащим ДНК. Этиология “сывороточного гепатита” (как его называли на протяжении многих лет) оставалась не идентифицированной до открытия так (…)
продолжить »

Vitrotest HBsAg TK016

Иммуноферментная тест-система «Vitrotest HBsAg» предназначена для выявления поверхностного антигена вируса гепатита B.

Выявление антител базируется на принципе одноэтапного «sandwich» варианта твердофазного иммуноферментного анализа.

Тест-система временно не производится

Вариант комплектации: 96-1Т (12хС8-1Т).
Твердая фаза: стрипированный ИФА-планшет с предварительно засорбированными в лунках моноклональными антителами к HBsAg.
Конъюгат – моноклональные антитела к HBsAg, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Хромоген – однокомпонентный ТМБ.
Объем сыворотки для анализа – 100 мкл.
Время проведения анализа – 2,5 часа.

Vitrotest HBsAg TK059

Тест-система временно не производится

Вариант комплектации: 192-1Т (24хС8-1Т).
Твердая фаза: стрипированный ИФА-планшет с предварительно засорбированными в лунках моноклональными антителами к HBsAg.
Конъюгат – моноклональные антитела к HBsAg, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Хромоген – однокомпонентный ТМБ.
Объем сыворотки для анализа – 100 мкл.
Время проведения анализа – 2,5 часа.

Vitrotest HBsAg-Confirmation TK017

Vitrotest HBsAg-Сonfirmation — Комплект реагентов для подтверждения наличия поверхностного антигена вируса гепатита B.

Комплект реагентов временно не производится

Нейтрализация HBsAg, присутствующего в сыворотке или плазме крови, при введении в анализ специфических к HBsAg моноклональных антител.

Vitrotest Anti-HBcore TK018

Иммуноферментная тест-система «Vitrotest Anti-HBcore» предназначена для выявления антител к коровому антигену вируса гепатита B

Выявление антител базируется на принципе конкурентного одноэтапного твердофазного иммуноферментного анализа.

Тест-система временно не производится

Вариант комплектации: 96-1Т (12хС8-1Т).
Твердая фаза: стрипированный ИФА-планшет с предварительно засорбированным в лунках рекомбинантным HBcore антигеном.
Конъюгат – смесь моноклональных антител к IgG, IgA, IgM человека, конъюгированных с пероксидазой хрена.
Хромоген – однокомпонентный ТМБ.
Объем сыворотки для анализа – 20 мкл.
Время проведения анализа – 2-2,5 часа.

Vitrotest HBcore-IgM TK019

Иммуноферментная тест-система «Vitrotest HBcore-IgM» предназначена для выявления антител класса IgM к коровому антигену вируса гепатита B.

Выявление антител базируется на принципе «IgM-захвата» твердофазного иммуноферментного анализа.

Тест-система временно не производится

Вариант комплектации: 96-1Т (12хС8-1Т).
Твердая фаза: стрипированный ИФА-планшет с предварительно засорбированными в лунках моноклональными антителами к IgM человека.
Конъюгат – рекомбинантный HBcore-антиген, конъюгированный с пероксидазой хрена.
Хромоген – однокомпонентный ТМБ.
Объем сыворотки для анализа – 5-10 мкл.
Время проведения анализа – 1,5-2 часа.

Vitrotest HBcore-IgG TK 050

Иммуноферментная тест-система «Vitrotest HBcore-IgG» предназначена для выявления антител к коровому антигену вируса гепатита B.

Тест-система временно не производится

Вариант комплектации: 96-1Т (12хС8-1Т).
Твердая фаза: стрипированный ИФА-планшет с предварительно засорбированным в лунках рекомбинантным HBcore антигеном.
Конъюгат – моноклональные антитела к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Хромоген – однокомпонентный ТМБ.
Объем сыворотки для анализа – 20 мкл.
Время проведения анализа – 2-2,5 часа.

Vitrotest Anti-HBs TK020

Иммуноферментная тест-система «Vitrotest Anti-HBs» предназначена для определения антител к поверхностному антигену вируса гепатита B.

Тест-система временно не производится

Вариант комплектации: 96-1Т (12хС8-1Т).
Твердая фаза: стрипированный ИФА-планшет с предварительно засорбированным в лунках очищенным поверхностным антигеном вируса гепатита В.
Конъюгат – смесь рекомбинантных белков – аналогов HBsAg субтипов ad и ay, конъюгированных с пероксидазой хрена.
Хромоген – однокомпонентный ТМБ.
Объем сыворотки для анализа – 50 мкл.
Время проведения анализа – 1,5-2 часа.

Vitrotest Calibrators Anti-HBs TK021

Vitrotest Calibrators Anti-HBs — Комплект калибраторов для количественного определения антител к поверхностному антигену вируса гепатита B.

Комплект калибраторов временно не производится

Состав набора — 5 калибраторов с различными концентрациями иммуноглобулинов, специфических к HBsAg: 0 мМЕ/мл, 10 мМЕ/мл, 50 мМЕ/мл, 100 мМЕ/мл, 200 мМЕ/мл.

С помощью калибровочного графика определяют концентрацию (мМЕ/мл) специфических антител в исследуемых образцах, которая соответствует значению полученной ОП.

Источник

Метод исследования: ИХЛА

Вирусный гепатит В — инфекционное заболевание с парентеральным механизмом передачи возбудителя — ДНК-содержащего вируса гепатита В, относящегося к семейству Hepadnaviridae. Источник инфекции — больной вирусным гепатитом В или носитель. Инкубационный период — 30-90 дней. Острый гепатит В характеризуется развитием гепатита с желтухой или без нее, заканчивающегося в большинстве случаев выздоровлением или переходящего в хронический гепатит В. Хронический гепатит В — поражение печени вирусом гепатита В, продолжающееся более 6 месяцев.

Тест для определения поверхностного антигена HBsAg (австралийского антигена) — скрининговый тест для выявления гепатита В. Исследование рекомендовано лицам, имеющим повышенный риск заражения парентеральными вирусными гепатитами: реципиенты крови и ее компонентов, органов и тканей; беременные; медицинский персонал; пациенты перед плановыми хирургическими вмешательствами; контактные лица, потребители инъекционных наркотиков и др.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Пациенты с признаками ОГ;
Беременные, доноры, реципиенты крови и ее компонентов, медицинский персонал;
Контактные в очагах ГВ (острых и хронических форм и носительства вируса);
Лица перед проведением вакцинопрофилактики гепатита В (одновременно с исследованием на наличие anti-HBs).

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения
HBsAg (качественное определение поверхностного антигена вируса гепатита B)	Не обнаружено

HBsAg определяется в крови в среднем с 4-6-й недели от момента инфицирования. Выявление в течение более 6 месяцев свидетельствует о формировании хронической инфекции. HBsAg не выявляется при латентных формах гепатита В. Для уточнения фазы хронического гепатита В проводится определение других маркеров инфекции (ДНК ВГВ , HBeAg, анти-HBeAg).

Исчезновение HBsAg после перенесенного острого гепатита В свидетельствует о выздоровлении.

Результаты лабораторных исследований при различных вариантах инфекции, вызванной ВГВ*
Маркер	О Г В	Перене- сенный ГВ	Иммунитет после вакци- нации	Фаза иммунной толерант-ности	ХГВ, HBeAg-позитив-ный	ХГВ, HBeAg-негативный	Носи-тельство ВГВ	Латентная ВГВ-инфекция
HBsAg	+	—	—	+	+	+	+	—
anti-Bs	—	+	+	—	—	—	—	—
anti-Bc IgG	-/+	+	—	+	+	+	+	+/-
anti-Bc IgM	+	—	—	—	—	—	—	—
HBeAg	+/-	—	—	+	+	—	—	—
anti-Be	-/+	+	—	—	—	+	+	—
ДНК ВГВ	+	—	—	+++	++	+	+/-	+/-

* Клинические рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации и Российского общества по изучению печени по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом В, 2014.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

Источник

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Тест системы вирусного гепатита в

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

отрицательный результат — вируса нет;
положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

Перед назначением лечения.
Для оценки эффективности терапии.
Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Тест системы вирусного гепатита в

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

< 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Тест системы вирусного гепатита в

Подводя итоги

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

Источник