Вирус гепатит с кач рнк

«Выявление генов вируса гепатита С (HVC) в крови пациента является вторым этапом лабораторной диагностики этой инфекционной патологии. Чтобы обнаружить возбудителя, который не имеет клеточной мембраны и, соответственно, поверхностных антигенов, используют метод полимеразной цепной реакции. С помощью этого метода определяют непосредственно молекулу, в которой закодирована вся его генетическая информация — РНК.

Содержание
Что это значит?
Анализ на РНК вируса гепатита С
РНК вируса гепатита С: метод ПЦР
РНК гепатита С: качественный анализ
РНК гепатита С: количественный анализ
Гепатит С: анализы и расшифровка

                                                                                                          РНК — Рибонуклеиновая кислота, наряду с ДНК входит в состав клеток всех живых организмов. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет способность к ее мутациям.

Исследование на наличие генома HVC назначают обычно после того, как проводят общий, биохимический анализ крови и получают положительный ответ на антитела (anti-HVC).

Что это значит?

Исследование на антитела к HVC является скрининговым, то есть с его помощью можно обследовать большие контингенты населения (медиков, беременных, пациентов стационаров, доноров, инъекционных наркоманов, ВИЧ-инфицированных). Отрицательный результат лабораторного анализа anti-HVC говорит о том, что в крови обследуемого не обнаружено иммунной реакции на вирус. Отрицательный результат может быть получен в таких случаях:

Если человек никогда не заражался гепатитом С.

Если чувствительность лабораторной тест-системы оказалась ниже, чем концентрация anti-HVC.

Если инфицирование произошло менее 2 месяцев назад и anti-HVC в крови еще недостаточно для определения. При ложноотрицательном ответе по причине человеческого фактора.

Если же получен результат, что антитела к HVC у больного обнаружены, это значит, что вирус гепатита С находился в организме обследуемого на момент проведения исследования или был в крови некоторое время назад. При положительном результате на anti-HVC возникает необходимость проведения дополнительных лабораторных исследований, которые обнаружат генетический материал самого возбудителя, определят концентрацию его генов (вирусную нагрузку, виремию) и установят генотип.

Анализ на РНК вируса гепатита С

Геном HVC в лабораторных условиях можно обнаружить с помощью нескольких исследований:

• разветвленной ДНК (р-ДНК);
• транскрипционной амплификации (ТМА);
• полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Метод р-ДНК — недорогой и простой способ обнаружения вирусного генома у большого количества обследуемых людей. Его главным недостатком является низкая чувствительность: выявляет HVC только при его концентрации свыше 500 МЕ/мл.

Метод транскрипционной амплификации обнаруживает в сыворотке крови нуклеиновые кислоты вируса. Анализ имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл), но он еще недостаточно внедрен в повсеместную лабораторную практику.

Метод ПЦР в России является самым распространенным и доступным лабораторным обследованием с высокой чувствительностью (от 50-60 МЕ/мл).

Исследование ПЦР выполняется в любой клинической лаборатории, имеющей соответствующую аккредитацию. Очень важным нюансом этого метода диагностики, который влияет на результат анализа, является чувствительность используемой в лаборатории тест-системы. Например, чувствительность диагностикума 60 МЕ/мл, как в лабораториях «Инвитро», позволяет обнаруживать вирусную РНК спустя 3 месяца после заражения. При низкой чувствительности тест-системы гены возбудителя могут не обнаруживаться даже спустя 4 месяца после инфицирования.

РНК вируса гепатита С: метод ПЦР

Метод ПЦР имеет множество преимуществ перед другими лабораторными исследованиями для обнаружения генов HVC:

• высокая чувствительность. Метод позволяет определять генетический материал возбудителя даже при его минимальной концентрации в образце;
• большая специфичность. Выявляет гены вируса определенного генотипа среди множества ДНК и РНК других возбудителей, что позволяет проводить генотипирование возбудителя;
• быстрота проведения. Отсутствие длительного процесса культивирования возбудителя сокращает время получения результата до нескольких часов; универсальность анализа.

Универсальная процедура проведения исследования позволяет одновременно использовать один образец крови человека для обнаружения генетического материала разных возбудителей. Эти преимущества позволяют считать ПЦР «золотым стандартом» лабораторной диагностики вирусного гепатита С вместе с иммуноферментным анализом на anti-HVC.

ПЦР — это исследование, используемое для определения генов HVC в крови обследуемого человека. Исследование состоит из нескольких этапов:

• Отбора образца биоматериала.
• Многократного увеличения концентрации копий РНК в отобранном образце.
• Обнаружения генетического материала с помощью специальных тест-систем.

После забора венозной крови у пациента проводят искусственное инициирование процесса множественного реплицирования (амплификации, копирования) генов HVC.

Для этого определенным способом несколько раз изменяют температуру внутри пробирки с биоматериалом. Когда количество копий РНК в пробирке достигает необходимого значения, проводят обнаружение возбудителя с помощью специальных тест-диагностикумов.

ПЦР-диагностика бывает

• качественной (обнаруживает присутствие вируса),
• количественной (определяет концентрацию вирусных генов в единице объема)
• генотипической (устанавливает генотип возбудителя).

РНК гепатита С: качественный анализ

Задача качественного ПЦР — определение наличия HVC в представленном биоматериале. Это исследование проводится обычно для скрининговой диагностики заболевания или выявления носительства. Назначают его после того, как выявят anti-HVC методом ИФА.

Чтобы поставить диагноз гепатита С, достаточно обнаружить генетический материал HCV качественно, то есть без подсчета его концентрации в объеме крови. Результатом качественного ПЦР может быть: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено».

Точность метода соответствует 95%. При этом точность самих тест-диагностикумов достигает 100%, а 5% — это человеческий фактор, который всегда присутствует в лабораторных исследованиях. Чтобы избежать ложноотрицательного анализа, особенно у людей с низкой виремией, необходима высокая чувствительность применяемой в исследовании диагностической системы. Чувствительность тест-системы должна быть не меньшей, чем 60 МЕ/мл.

РНК гепатита С: количественный анализ

Количественный анализ назначают тогда, когда нужно знать уровень виремии в организме человека. Показаниями для проведения этого исследования являются:

• положительный результат качественного ПЦР при условии обнаружения антител к вирусу;
• установление стадии патологии;
• определение вирусной нагрузки при гепатитах;
• выбор комбинации противовирусных препаратов;
• мониторинг вирулогического ответа на проводимую противовирусную терапию;
• оценка вероятности перехода острого гепатита С в хронический.

Результат анализа выражается в МЕ/мл (международных единицах в 1 мл сыворотки) или в копиях/мл (количестве копий генов вируса в 1 мл сыворотки). Количественный ПЦР не имеет нормы: в норме ген HVC в крови человека обнаруживаться не должен. Полученные результаты обследования сравнивают с референсными значениями, установленными для той или иной степени вирусной нагрузки.

Так, показатели (в МЕ/мл):

• ниже 4×10*5 считаются низкой виремией;
• от 4×10*5 до 8×10*5 — средней;
• свыше 8×10*5 — высокой.

Чем больше копий вирусной РНК в крови, тем агрессивнее протекает заболевание и больше риск передачи вируса окружающим. Но уровень вирусной нагрузки — не единственный показатель, влияющий на тяжесть течения патологии и дальнейший прогноз для пациента: важен также генотип возбудителя.

Установление генотипа необходимо для назначения правильной схемы лечения. От него также зависит прогноз для здоровья и жизни пациента. Например, вирус 3 генотипа чаще приводит к фиброзу или циррозу печени, в сравнении с пациентами носителями 1 генотипа.

Гепатит С: анализы и расшифровка

РНК Диагноз гепатита С невозможно поставить только по результатам только качественного и/или количественного анализа ПЦР: определения HVC и уровня вирусной нагрузки недостаточно для назначения адекватной противовирусной терапии. Потенциального больного нужно обследовать комплексно (клинически, лабораторно, инструментально), чтобы иметь объективную картину патологии. Правильно назначить комплекс обследований для установления диагноза гепатита С, а затем грамотно расшифровать полученные результаты может только врач.

Исследование РНК вируса гепатита С является наиважнейшей процедурой, которая позволяет с большой точностью устанавливать длительность и методы лечения больных.

Диагностика заболевания состоит из нескольких различных исследований крови, таких как:

• маркеры гепатита С (анти-HCV);
• определение РНК вируса гепатита С (РНК HCV).

Первое исследование делается при первом подозрении на гепатит. Второй вариант является наиболее значимым при лечении HCV РНК, поэтому рассмотрим его более подробно.

Что такое вирусный гепатит С?

Вирусный гепатит C, или HCV, это инфекционная болезнь, поражающая печень. Заражение вирусом происходит через кровь. Заразиться можно, делая переливание крови, когда не соблюдаются правила по стерилизации медицинских инструментов. Реже встречаются случаи, когда заболевание получается половым путем или от беременной матери к плоду. Гепатит С бывает 2-х типов.

Хронический гепатит С наиболее опасен. Это форма болезни, которая может длиться на протяжении всей жизни. Она приводит к серьезным проблемам функционирования печени, таким как цирроз либо рак. У 70-90% инфицированных людей болезнь переходит в хроническую стадию.

Важнейшая опасность гепатита С состоит в том, что он протекает скрытно, без желтушных признаков. При этом чаще всего жалуются на поднятие температуры, тошноту и рвоту, физическую слабость, повышенную утомляемость, потерю аппетита и веса. При этом на фоне небольшого уплотнения тканей печени достаточно часто происходит ее злокачественное перерождение. По этой причине вирусный гепатит С зачастую называют «бомбой замедленного действия» или «ласковым убийцей».

Другая особенность болезни заключается в очень медленном ее развитии, исчисляемом десятками лет.

Как правило, заразившиеся не ощущают никаких симптомов и не подозревают о своем истинном состоянии. Часто заболевание можно выявить только при обращении к врачу по другому вопросу.

К группе риска относятся:

• дети, получившие вирус гепатита С от матерей;
• наркоманы;
• люди, прокалывавшие части тела или сделавшие татуировки нестерильными инструментами;
• получившие донорскую кровь либо органы (до 1992 года, когда гемодиализ не проводился);
• лица, инфицированные ВИЧ;
• медицинские работники, контактирующие с инфицированными пациентами.

Определение РНК гепатита С

Определение РНК вируса HCV-RNA, также именуемый ПЦР гепатита С, это исследование биологического материала (крови), с помощью которого можно определить в организме непосредственное наличие самого геноматериала вируса гепатита (любой отдельно взятый вирус является одной-единственной частичкой РНК).

Основной метод проведения теста — ПЦР, или метод полимеразно-цепной реакции.

Существуют два вида тестов крови на определение РНК HCV:

• качественный;
• количественный.

Качественный тест

Проведение качественного анализа дает возможность определить, находится ли вирус в составе крови. Все пациенты, у которых найдены антитела С-гепатита, должны пройти данный тест. По его результатам можно получить 2 ответа: «присутствует» либо «отсутствует» вирус. По положительному результату теста (обнаружено) можно судить об активном размножении вируса, который заражает здоровые клетки в печени.

Тест, проводимый на качественный ПЦР, настроен на конкретную чувствительность, от 10 до 500 МЕ/мл. Если обнаруженный в составе крови вирус гепатита при удельном содержании меньше 10 МЕ/мл, то обнаружение вируса может стать невозможным. Очень низкое значение удельного содержания вируса наблюдается среди пациентов, для которых назначена противовирусная терапия. Поэтому важным является тот факт, насколько высока чувствительность медицинской системы для диагностирования и постановки качественного результата при полимеразной цепной реакции.

Зачастую полимеразная цепная реакция C-гепатита проводится сразу же после нахождения соответствующих антител. Последующие тесты, при прохождении противовирусной терапии, проводятся на 4-ю, 12-ю и 24-ю недели. И еще один анализ после прекращения ПВТ делается через 24 недели. Затем — один раз в год.

Количественный тест

Количественный анализ ПЦР РНК, иногда называемый вирусной нагрузкой, определяет концентрацию (удельное содержание) вируса в составе крови. Другими словами, под вирусной нагрузкой понимается определенное количество вирусной РНК, которое может находиться в конкретном количестве крови (принято использовать 1 мл, равный 1 см в кубе).

Единицы измерения для результатов теста — международные (стандартные) единицы, разделенные на один миллилитр (МЕ/мл). Содержание вируса иногда представляется по-разному, это зависит от лабораторий, где проводятся исследования. Для гепатита С количественное определение иногда использует такие значения, как копии/мл.

Необходимо понимать, что нет никакой конкретной зависимости в степени тяжести гепатита С от концентрации данного штамма в составе крови.

Проверка «вирусной нагруженности» позволяет определить степень инфекционности заболевания. Так риск заразить вирусом другого человека повышается при повышении концентрации гепатита в составе крови. К тому же высокое содержание вируса снижает эффект от проводимого лечения. Поэтому малая вирусная нагрузка является очень благоприятным фактором для успешного лечения.

К тому же тест гепатита С и его определение методом ПЦР играют большую роль при применении терапии от болезни и определения успешности лечения. На основании результатов теста осуществляется планирование курса реабилитации. Например, при слишком медлительном уменьшении удельной концентрации вируса гепатита, противовирусная терапия продлевается, и наоборот.

В современной медицине считается, что нагрузка больше 800000 ME/мл является высокой. Нагрузка же сверх 10000000 ME/мл считается критической. Но у специалистов из разных стран и по сей день не появилось одинакового мнения о пределах вирусной нагрузки.

Частота проведения количественного теста

В общих случаях количественный анализ на гепатит HCV-RNA делается перед проведением противовирусной терапии и через 3 месяца по окончании лечебных процедур для определения качества проведенной терапии.

В качестве результата для количественного теста станет считаться количественная оценка результатов по образцу, указанному выше. В результате будет вынесен вердикт «ниже измеряемого диапазона» или «в крови не обнаружено» — это является нормой для здорового человека.

Параметр чувствительности качественного теста обычно ниже, чем чувствительность количественного анализа. Расшифровка «Отсутствующий» показывает, что оба вида анализов не нашли РНК вируса. При показателе теста «ниже измеренного диапазона» анализ количественного типа, скорее всего, не нашел РНК гепатита, хотя это подтверждает наличие вируса с очень маленьким удельным содержанием.

Гепатит C и его генотипы

Генотипирование РНК вируса гепатита C диагностирует присутствие разных генетических типов гепатита С. Науке известно более 10 типов генома вируса, но для медицинской практики достаточно выделить несколько генотипов, имеющих наибольший удельный вес в регионе. Определение генетического типа играет ключевую роль при выборе сроков лечения, что очень необходимо, если принять во внимание обширный спектр побочных эффектов лекарств от гепатита.

Способы лечения

Единственным действенным способом вылечить вирус гепатита С, как правило, оказывается сочетание 2-х медпрепаратов:

• интерферона-альфа совместно с рибавирином;
• софосбувир вместе с велпатасвиром;
• софосбувир совместно с даклатасвиром.

По отдельности эти лекарства не так эффективны. Рекомендуемые дозировки лекарств и сроки применения должны назначаться только врачом и индивидуально каждому пациенту. Лечение этими лекарствами может растянуться на срок от 6 до 12 месяцев по первой схеме и от 3 до 6 месяцев по второй и третьей схеме.

Сегодня не изобретено препаратов, гарантирующих стопроцентное выздоровление от вируса. Однако при верно подобранном лечении исцеление пациентов может достигать до 98% от числа заболевших.