Вирус гепатита с семейство flaviviridae

Возбудитель — вирус гепатита С (HCV) — отнесен к семейству Flaviviridae, род Hepacаvirus. Вирион мелкий (30—38 нм в диаметре), РНК-содержащий, имеет суперкапсид, чувствителен к хлороформу. Вирус гепатита С отличается высокой склонностью к мутациям. «Зрелые» HCV-белки —три структурных (они включаются в состав вириона) и четыре неструктурных (не входят в состав вириона, участвуя на этапе внутриклеточной репликации вируса).

Геном представлен одноцепочечной плюс-РНК. На 5′-конце РНК расположен терминальный участок, который имеет почти одинаковую последовательность нуклеотидов у всех штаммов вируса (более 90% гомологии). Этот фрагмент высоко консервативен, что делает его универсальной мишенью для выявления HCV-PHK в полимеразной цепной реакции. Относительным постоянством нуклеотидного состава отличаются С- и NS3-yчастки генома. Это определяет использование кодируемых ими антигенов при изготовлении диагностических тест-систем для иммуноферментного анализа.

Эпидемиология и клиника. Источником инфекции является только человек. Распространение вируса происходит трансфузионно при переливании крови и ее препаратов или инструментальным путем в результате занесения зараженной вирусом крови в организм здоровых

людей, а также от матери плоду. Восприимчивость населения к HCV очень высокая. Вирус выделяется от больных в течение одной или нескольких недель до появления признаков болезни и до 10 нед. после начала болезни. Инкубационный период по сравнению с гепатитом В короче примерно на один месяц и составляет в среднем 6-8 нед. Клиническая картина сходна с таковой при гепатите В, однако заболевание протекает легче и характеризуется относительно быстрым выздоровлением, нередко оно протекает без желтухи; последняя наблюдается примерно у 25% больных.

Несмотря на относительно благоприятное течение, около 50% всех форм инфекции приводят к формированию хронического гепатита, а около 20% хронических поражений печени заканчивается циррозом и раком. Наряду с вирусом гепатита В, вирус гепатита С является одной из главных причин рака печени.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: кровь, биоптаты печени. HCV-инфекция сопровождается длительной вирусемией но вирус гепатита С может быть обнаружен в крови только по РНК, так как уровень вирионных частиц и вирусных антигенов ниже порога чувствительности современных иммунохимических реакций. Поэтому главным диагностическим критерием являются антитела, содержание которых в крови достаточно хорошо коррелирует с персистенцией вируса в гепатоцитах и вирусемией. «Золотым стандартом» служит обнаружение вирусспецифических РНК — последовательностей, амплифицированных после

обратной транскрипции при помощи ПЦР.

Антитела(АНТИ-HCV)

Диагностические тесты прошли трехэтапную эволюцию. В системах двух первых поколений антигенами служили рекомбинантные HCV-пептиды; в тестах 3-го поколения часть из них заменена на синтетические пептиды и их эпитопные фрагменты. Скрининговые тесты. Системы ИФА-3, сконструированные на основе сердцевинного

(С22) и неструктурных (NS3-NS5) пептидов, отличаются повышенной чувствительностью, специфичностью и выявляют антитела на более ранних этапах инфекции. Скринирование донорской крови при помощи ИФА-3 практически исключает передачу вируса гепатита С

реципиентам.

Подтверждающие тесты. Для подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С в образцах сыворотки с первично положительным результатом ИФА проводится постановка иммуноблоттинга с использованием рекомбинантных антигенов или синтетических пептидов.

Результат считается положительным при выявлении антител к двум и более антигенам. Антитела к вирусу гепатита С впервые могут быть обнаружены через 10-14 дней после начала заболевания. В первую очередь определяются атитела класса М к структурному белку С .

HCV-PHK

Поскольку геном ВГС представлен одноцепочечной РНК, то на начальном этапе анализа с помощью реакции обратной транскрипции (ОТ) получают комплементарную ДНК (кДНК), которая в дальнейшем служит матрицей в ПЦР. Вирусная РНК определяется в сыворотке крови больных гепатитом С через 1-2 недели после заражения. Наличие в крови вирусной РНК служит маркером репликации вируса.

Источник

Главные альфавирусные заболевания человека — тяжелые лихорадки (нередко осложненные сыпью и артритами) и энцефалиты. В инкубационном периоде и ранней клинической стадии они сопровождаются присутствием вируса в крови (вирусемией). Многие случаи ограничиваются неспецифическими (гриппоподобными) симптомами или вообще протекают без клинических признаков на фоне образования антител.

Большинство инфекций регистрируется в Центральной и Южной Америке (комплексы Западного, Восточного и Венесуэльского лошадиных энцефалитов, вирусы группы Синдбис и леса Семлики). Меньше страдает население Юго-Восточной Азии, Африки и Австралии. Лихорадка Синдбис зарегистрирована в южных районах Европы.

Для профилактики кроме борьбы с комарами используются убитые формалином вакцины, которые дают высокую степень защиты (вирусы Западного, Восточного и Венесуэльского лошадиных энцефалитов). Вакцины применяют по эпидемиологическим показаниям — лабораторные служащие, лица с высоким риском инфицирования.

Анализ инфекций строится на основании общих принципов, принятых для диагностики арбовирусных заболеваний: выделение из крови вируса-возбудителя, определение IgM- и IgG-антител, поиск вирусных РНК методом обратнотранскриптазной ПЦР.

Семейство флавивирусов

Cемейство Flaviviridae получило название от желтой (лат. flavus) лихорадки, которая в прошлом относилась к числу наиболее опасных болезней Центральной и Южной Америки. Это первая инфекция человека, для которой В. Ридом в 1901 г. была установлена вирусная природа. В дальнейшем обнаружено множество родственных вирусов, которые по началу были включены в семейство Togaviridae и обозначены как группа В, чтобы отличить их от группы А, теперь известной как альфавирусы (см. выше). В 1984 г. введен самостоятельный таксон — семейство Flaviviridae. В нем учитываются новые данные о генетических и фенотипических свойствах этих вирусов.

Флавивирусы — наиболее важная в медицинском отношении группа арбовирусов. К ним относится возбудитель лихорадки денге — самой распространенной инфекции человека тропического пояса. Эпидемической угрозой для Африки и Южной Америки остается желтая лихорадка. Энцефалиты, переносимые комарами и клещами, представляют опасность для Америки, Европы и Азии. Сложные циклы трансмиссии и экологической перестройки наряду с пластичностью РНК-генома ставят флавивирусные болезни в число «вновь появляющихся инфекций» (англ. emerging and reemerging infections). Примером служат Омская геморрагическая лихорадка, энцефалит Западного Нила, желтая лихорадка и др.

Флавивирусы включают вирусы трех родов — Flavivirus, Pestivirus и Hepacivirus. К арбовирусам человека принадлежат только представители рода Flavivirus (собственно флавивирусы). К пестивирусам относятся возбудители ветеринарных инфекций; род Hepacivirus состоит из вирусов гепатита С и G человека (см. «Вирусы гепатитов»).

Род Flavivirus cодержит более 70 вирусов. Большинство из них связаны с комарами и клещами; более половины поражают человека. По результатам серологической нейтрализации, подтвержденной генетическим анализом, флавивирусы разделены на виды (типы), которые на основании реакции торможения гемагглютинации объединены в группы (комплексы). Новые возможности открывает использование моноклональных антител. С их помощью удается обнаружить родовые, групповые и специфические эпитопы оболочечного гликопротеина Е. Известно по меньшей мере восемь антигенных комплексов. Наибольшее число вирусов представлено комплексом клещевого и японского энцефалитов.

Вирион представляет собой частицы размером 40—50 нм. Внутри расположен нуклеокапсид кубической симметрии, снаружи — липидная оболочка (суперкапсид), в которой имеются небольшие выступы, состоящие из Е-гликопротеина. Это единственный компонент, отчетливо выявляемый на поверхности вириона. Он определяет вирусную способность к гемагглютинации, рецепции, слиянию с клеточными мембранами и взаимодействию с нейтрализующими антителами. Кроме Е-гликопротеина, вирион располагает внутренним С-белком, который образует капсид, связанный с геномной молекулой. В липидной оболочке присутствует еще один белок (М-протеин); в зрелом вирионе он почти незаметен. М-протеин выполняет цементирующую роль, стыкуя капсид с суперкапсидом. В процессе онтогенеза образуется пре-М-белок (prеM), который помогает созреванию и экзоцитозу вируса. Перед высвобождением вириона из клетки prеM подвергается протеолизу с удалением основного фрагмента. Это оставляет в суперкапсиде стабилизирующий М-белок.

Геном представлен линейной однонитчатой плюс-РНК размером около 11 кбайт. Вирионная РНК служит мРНК для всех вирусных белков и обладает инфекционностью при введении в чувствительные клетки. Гены структурных белков (С, preM и Е) cосредоточены на одном (5’) конце, за ними находятся гены для 7 неструктурных белков (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b, NS5). Все белки синтезируются в виде полипротеина, который нарезается на индивидуальные компоненты NS3-cерин-протеазой. NS5-белок выполняет функции РНК-зависимой РНК-полимеразы, используя вирионную РНК как цельную матрицу. Функции остальных неструктурных белков не известны.

Репликация флавивирусов начинается с Е-зависимого прикрепления к гликозаминогликанам и, возможно, другим (пока не идентифицированным) рецепторам плазматической мембраны. Так же, как в случае альфавирусов, это ведет к эндоцитозу вирионов. Нуклеокапсиды высвобождаются в результате слияния Е-белка с эндосомальной мембраной, давая начало трансляции геномной РНК. Одновременно образуется РНК-матрица для синтеза новых вирионных РНК и продукции структурных вирусных белков. Зрелые вирионы обнаруживаются внутри цитоплазматических вакуолей и высвобождаются при их слиянии с плазматической мембраной клетки; почкования не происходит. Размножение флавивирусов протекает медленнее, чем альфавирусов, их действие не носит выраженного цитопатического эффекта, а синтез белков клетки-хозяина происходит вместе с продукцией вируса.

Механизмы патологии широко варьируют. Безопасные для переносчиков, флавивирусы могут вызывать болезни у позвоночных животных, в том числе у человека. Говоря о болезнетворности для людей, следует выделить вирусы энцефалита, лихорадки денге и желтой лихорадки.

Энцефалитные вирусы переносятся комарами Culex и Aedes (энцефалит Сент Луи — Северная, Центральная и Южная Америка; Японский энцефалит — Индия, Китай, Япония, Юго-Восточная Азия; энцефалит долины Маррей — Австралия) и иксодовыми клещами Ixodes persulcatus и Ixodes ricinus (Европа, Азия). Вирусы клещевого энцефалита способны перезимовывать в теле клеща и передаваться трансовариально и трансфазово (яйцо—личинка—нимфа—имаго). В России заболевания регистрируются на всей лесной территории — от Дальнего Востока до западных границ. Прокормителями клещей и вторым по значимости резервуаром инфекции служат мышевидные грызуны, ежи, белки, бурундуки, кроты, крупные млекопитающие, мелкий и крупный рогатый скот. Различают западный (европейский) и восточный (сибирский) клещевые энцефалиты, которые вызываются двумя антигенными субтипами одного и того же вируса, передаются разными клещами (I. ricinus — западный и I. persulcatus — восточный вариант) и отличаются по нейровирулентности (восточный энцефалит протекает тяжелее). Заражение возможно при употреблении сырого молока инфицированных коз и коров. Кстати, козы болеют клещевым энцефалитом; коровы устойчивы к вирусу, но у них тоже наблюдается вирусемия. Вирус может длительно персистировать в центральной нервной системе, давая клинические проявления прогрессирующего характера. Для профилактики предложена убитая формалином вакцина.

Из энцефалитных флавивирусов остановимся еще на одном вирусе — вирусе лихорадки Западного Нила (ЛЗН). Он был изолирован в 1937 г. в провинции Западный Нил (Уганда) от больного с легкой формой лихорадки. В дальнейшем оказалось, что тот же вирус способен вызывать тяжелые поражения центральной нервной системы не только в Африке, но и в Южной Европе, на Среднем Востоке, в Южной Азии и Австралии. В 1999 г. неожиданно возникла вспышка в США (г. Нью-Йорк и его окрестности), которая сопровождалась высокой гибелью мигрирующих птиц. В России примерно в это же время зарегистрирована вспышка ЛЗН в южных регионах — Астраханской, Волгоградской областях и Краснодарском крае. Дело в том, что основной цикл вируса проходит между различными птицами и орнитофильными комарами рода Culex, среди которых есть виды, охотно нападающие на человека. Больше всего комаров наблюдается в июле—августе, и именно в это время происходит подъем заболеваемости среди людей. Человеческим вспышкам предшествуют эпизоотии среди диких, а затем и домашних птиц. С птицами связан и межконтинентальный обмен вирусными популяциями ЛЗН.

Источник

Документ показан в сокращенном демонстрационном режиме!

Получить полный доступ к документу

Для покупки документа sms доступом необходимо ознакомиться с условиями обслуживания

Я принимаю Условия обслуживания

Продолжить

Вирусы семейства Flaviviridae

Название семейства Flaviviridae происходит от лат. flavus — желтый по названию заболевания «желтая лихорадка», которое вызывает вирус данного семейства. Патогенные для человека вирусы входят в состав двух родов: рода Flavivirus, в состав которого входят возбудители арбовирусных инфекций, и рода Hepacivirus, в состав которого входят вирус гепатита C(HCV) и вирус гепатита G(HGV).

Типовым представителем семейства Flaviviridae является вирус желтой лихорадки, относящийся к роду Flavivirus.

Морфология, химический состав, особенности репродукции. Это сложные вирусы сферической формы, диаметром 40-60 нм. Геном вирусов состоит из линейной однонитевой плюс-нитевой РНК, окруженной капсидом с кубическим типом симметрии. Нуклеокапсид окружен суперкапсидом, который содержит на своей поверхности 2 гликопротеина. При репродукции вирусы проникают в клетку путем рецепторного эндоцитоза, взаимодействуя с поверхностными фосфо- и гликолипидами. В последующем происходит слияние вирусной оболочки со стенкой вакуоли. Вирусы реплицируются в цитоплазме, сборка происходит во внутриклеточных вакуолях. В полости вакуолей вирусные частицы часто образуют кристаллоподобные образования, формируемые вирусными белками.

Устойчивость к физическим и химическим факторам. Вирусы чувствительны к действию эфира, детергентов и формалина. Устойчивость флавивирусов к действию физических и химических факторов такая же, как и у альфавирусов.

Антигенная структура. Гликопротеин, являющийся гемагглютинином, содержит видо- и родоспецифические антигенные детерминанты. Характерной особенностью флавивирусов является их способность образовывать в инфицированных клетках растворимый антиген, обладающий активностью в РСК и РИД. Антитела к нему обладают нейтрализующей активностью. Представители флавивирусов внутри семейства и рода по антигенному родству в РТГА сгруппированы в 15 антигенных комплексов или групп: комплекс вирусов клещевого энцефалита, японского энцефалита, лихорадки денге и т.д. Вирус желтой лихорадки стоит вне этих комплексов.

Особенности культивирования. Вирусы культивируют во многих первичных и перевиваемых культурах клеток, цитопатическое действие хорошо проявляется в культурах клеток СПЭВ, ВНК-21. Универсальной моделью для выделения флавивирусов является интрацеребральное заражение новорожденных белых мышей, а также 3-4-недельных белых мышей, у которых отмечается развитие параличей. В качестве экспериментальной модели используют обезьян. Вирусы культивируют также путем заражения куриных эмбрионов на ХАО и в желточный мешок. Гибель куриных эмбрионов отмечается через 72 ч. Для вирусов лихорадки денге высокочувствительной моделью является интраторакальное и интракапутальное заражение комаров.

Источник

Источник