Анализ пцр гепатит с не обнаружено крови

Для постановки диагноза “хронический вирусный гепатит С (ХВГС)” требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Содержание
Что показывает этот анализ и зачем он нужен?
Три вида ПЦР анализов
Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?
Результат анализа ПЦР на гепатит С

Что показывает этот анализ и зачем он нужен?

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

высокая чувствительность – 97-98%;
гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Три вида ПЦР анализов

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Результат анализа ПЦР на гепатит С

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.

Источник

Гепатит С относится к вирусному поражению печени. Часто это заболевание переходит в хроническую форму. Человек заражается через кровь, половым путем, возможно инфицирование от матери к плоду.

Для диагностики этой болезни выполняют анализ крови на ПЦР (полимеразную цепную реакцию). Исследование на определение вируса бывает количественное и качественное.

Качественный анализ ПЦР на гепатит С помогает обнаружить возбудителя в крови. Количественный – показывает количество этого вируса.

Что такое качественный анализ ПЦР?

Он используется для установки диагноза хронического вирусного гепатита С и определения генотипа его возбудителя. Метод ПЦР относится к высокоточному способу молекулярной диагностики. Он способен определять даже малую концентрацию имеющегося вируса (10 – 500 МЕ/мл).

При острой фазе болезни качественный анализ определяет наличие патологии уже через 1 – 2 недели после заражения. В этот период специфические антитела к вирусу могут еще не выработаться, и проведение иммуноферментного анализа (ИФА) может быть бесполезно. Этот возбудитель имеет высокую мутационную активность. При помощи качественного метода ПЦР определяют, какой генотип болезни развивается у данного пациента.

Когда делается качественный ПЦР на гепатит С?

Качественный ПЦР проводится:

При обнаружении антител при ИФА.
Для диагностики сопутствующих поражений печени. Иногда выявляются смешанные инфекции: одновременно заражение гепатитом B, C и D.
Для выявления генотипа возбудителя с последующим определением тактики лекарственной терапии.
Чтобы верифицировать диагноз.
Для оценки качества лечения и изменений на фоне медикаментозной терапии.

К преимуществами качественного метода исследования относится высокая чувствительность методики, большая скорость диагностики (анализ выполняется от 8 до 24 часов) и выявление скрытого течения заболевания.

Качественный анализ выполняют сразу после обнаружения антител, затем на 4, 12, 24 неделе противовирусной терапии. Потом повторяют через 6 месяцев после завершения лечения и ежегодно.

Анализ ПЦР на гепатит С обязательно выполняют беременным женщинам, донорам, при подготовке к любому оперативному вмешательству.

Группы риска

К людям, находящимся в группе риска инфицирования вирусным гепатитом C, относятся:

Наркоманы, которые вводят наркотики парентерально (внутривенно или внутримышечно).
Лица нетрадиционной сексуальной ориентации.
Дети, рожденные от матерей наркоманок или болеющих гепатитом С.
Больные хронической почечной недостаточностью и постоянно находящиеся на гемодиализе.
Лица после трансплантации внутренних органов: печени, почек, сердца.
Пациенты, нуждающиеся в частых оперативных вмешательствах, заборах крови и инъекциях.
Люди, которые ведут беспорядочную половую жизнь.
Врачи, медработники, постоянно контактирующие с кровью.
Люди, делающие татуировки.

По данным ВОЗ хроническим вирусным гепатитом C в мире страдают 70 миллионов человек, ежегодно умирают от этого заболевания 399.000 людей. 25 млн являются носителями вируса.

Хронические гепатиты могут протекать абсолютно бессимптомно. При начальной стадии заболевания отсутствуют признаки поражения печени либо общие проявления интоксикации.

Необходимо как минимум один раз в год проверять кровь на вирусные гепатиты B и C. Врачи, медицинские сестры, военнослужащие, полицейские, работники силовых структур проходят такое исследование два раза в год.

Методика проведения качественного ПЦР

Для выполнения качественной полимеразной цепной реакции у пациента берется кровь из вены. Затем проводится лабораторное исследование следующим образом: в исследуемый материал добавляют праймеры (короткие химически синтезированные олигодезоксирибонуклеотиды) или специальные ферменты.

С помощью специального прибора охлаждают и нагревают пробирки с кровью. Создается специальная искусственная среда, в которой размножается генетически материал возбудителя до такой степени, что его можно визуально исследовать. При качественном анализе происходит копирование цепей, которые соответствуют вирусной RNA. Затем делается заключение о наличии вируса гепатита в организме пациента.

Перед проведением качественной ПЦР на гепатит С перед исследованием необходимо:

Избегать физических нагрузок за день до сдачи анализа.
Прийти натощак, не употреблять пищу за 8 – 10 часов до сдачи анализа.
Производить забор крови в первой половине дня.
За два дня до проведения диагностики исключают жирную, жареную пищу, алкоголь.

Суть качественной полимеразной цепной реакции заключается в многократном увеличении фрагментов вирусных частиц.

Расшифровка результатов анализа

После проведения качественной ПЦР, в бланке анализа пишется «обнаружено» или «не обнаружено».

Отрицательный результат наблюдается, когда вирус присутствует в крови в малом количестве и чувствительная тест-система не смогла определить концентрацию. Такое наблюдается при недавнем заражении либо при длительно проводимой противовирусной терапии.

Обнаружено	В исследуемом материале определяется РНК HCV (возбудитель). Диагноз гепатита C подтвержден.
Не обнаружено	Возбудитель отсутствует или количество недостаточно для определения.

Расшифровка качественного анализа ПЦР не представляет затруднений. Однако при получении положительного результата необходимо обратиться к гепатологу или инфекционисту для уточнения диагноза и назначения противовирусной терапии.

Что делать, если ПЦР на гепатит С положительный?

Иногда выявляются ложные показатели качественной ПЦР.

Это бывает при некоторых ситуациях:

Воздействие на исследуемые жидкости высокой температуры.
Погрешности работы лаборанта или медицинской сестры.
Постоянное употребление пациентом антикоагулянтов.
Присутствие в крови веществ – ингибиторов ПЦР, которые затрудняют проведение полимеразной реакции.

Если нет никаких сомнений в результате, либо повторные проведенные исследования показали такой же результат, то пациенту ставится диагноз хронического вирусного гепатита C.

Для определения степени поражения и нарушения работы печени, выполняют дополнительные методы обследования: клинические анализы, определение уровня билирубина, трансаминаз, общего белка, щелочной фосфатазы, гамма – глутамилтрансферазы, УЗИ и биопсию печени. Проводится количественная ПЦР диагностика и генотипирование вируса.

Положительный эффект при лечении вызывает применение рибавирина, интерферона – альфа. Обязательно назначаются гепатопротекторные препараты: эссенциале, гептрал, урсосан, иммуномодуляторы.

Пациентам ни в коем случае нельзя отказываться от противовирусного лечения. Это чревато развитием серьезных осложнений, которые приведут к летальному исходу.

Качественная полимеразная цепная реакция относится к высокоточным анализам. Диагностика с помощью ПЦР выявляет даже небольшое количество возбудителя. Это приводит к раннему диагностированию гепатита С и своевременному назначению лечения. При адекватной терапии полное выздоровление наступает у 20% больных.

Источник

РНК-вирус проникает в клетки печени и вызывает болезнь – гепатит С. Заболевание проходит в острой и хронической форме. Для него характерно протекание без видимых признаков. Такое течение объясняется высокой способностью вируса к мутации и появлению различных видов. Это помогает патогену приспосабливаться к организму хозяина и ускользать от иммунной защиты.

Исследования на ранних стадиях развития не дает результата. Качественный анализ ПЦР на гепатит С проводят, чтобы выявить патоген, и начать вовремя лечение.

Что такое качественный анализ на гепатит С?

Гепатит С – серьезное заболевание, при хроническом развитии которого возникает цирроз и рак печени. Ученые длительное время не могут разработать вакцину от болезни, несмотря на изучение особенностей строения HCV. Многообразие видов патогена слабо поддается изучению.

Только с помощью лабораторных исследований можно обнаружить поражение органа, и предупредить инфицирование окружающих. С этой целью проводят качественный анализ ПЦР на гепатит С.

Носитель в течение многих лет может быть инфицирован и не подозревать о болезни. Качественный анализ предполагает проведение в лаборатории полимеразной цепной реакции крови пациента на наличие РНК вируса. Диагностика проводится на сверхчувствительном медицинском оборудовании, которое помогает его обнаружить.

Что показывает качественный анализ?

Качественное обследование с помощью ПЦР обладает достоинствами перед другими методами:

даннй метод помогает выявить генетический материал патогена на ранних стадиях;
показывает вид возбудителя;
используется система тестов, нет необходимости высеивать материал в питательной среде;
обладает высокой скоростью диагностики возбудителя: результат анализа будет готов через 5 часов;
выявляет скрытую инфекцию.

Качественный анализ назначают при профилактическом осмотре, когда имеются показания на его проведение. Он проводится во время лечения, после выздоровления. С его помощью подтверждают наличие или отсутствие антител вируса гепатита С в крови.

ПЦР исследует:

количественное содержание генотипа HCV;
качественные характеристики вирусной РНК;
генотипирование.

Диагностику проводят повторно для подтверждения результата с более чувствительным реагентом.

Показания к исследованию

Для проведения качественной ПЦР нужны предпосылки для ее назначения:

сексуальная связь с лицом, который инфицирован вирусом гепатита;
цирроз печени;
обязательное обследование перед оперативным вмешательством;
проведение вакцинации против вируса гепатита В;
плановое обследование работников медицинских учреждений, садов, школ.

Если у пациента видны явные признаки гепатита:

желтизна кожных покровов, белков глаз;
боль в правом подреберье;
усталость;
увеличение в размерах печени;
тошнота.

Вирус гепатита С проникает в клетки печени через кровеносные сосуды. Патоген может попасть при гемодиализе, при пользовании инфицированной иглой, при нанесении татуировки, в стоматологических и косметических кабинетах.

Возможна передача вируса новорожденному от инфицированной матери, если происходит травмирование кожи ребенка при родах. Качественный анализ выявляет вирус и указывает на второстепенные признаки: наличие в крови больного антител.

Расшифровка результатов

Врач-гепатолог или инфекционист проводит расшифровку результатов ПЦР и ИФА на гепатит С. Полученные данные подтверждаются комплексным обследованием:

биохимическим анализом;
УЗИ органа;
биопсией печеночных тканей.

Опираясь на полученные данные, врач подтверждает или отрицает гепатит С.

Стандартная чувствительность теста на ПЦР колеблется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ не дает результата, если она ниже указанного параметра.

Количественный анализ ПЦР показывает вирусную нагрузку: концентрацию патогена в человеческом организме (сколько фрагментов флававируса в 1 мл крови). Такой метод обследования назначают перед началом комплексной терапии и на 12 неделе заболевания. Он помогает:

Выявить степень болезни. Если концентрация вируса в крови пациента высокая, возможна передача инфекции другим лицам.
Назначить противовирусную терапию, выбрать нужный метод лечения.
Сделать прогноз выздоравления.

Важно определить генотип, так как патоген постоянно мутирует и приспосабливается к организму. Известно 11 типов, на территории РФ выявлены три: 1, 2, 3. Обследование покажет тип вирусной инфекции.

При расшифровке пишут:

РНК обнаружено;
РНК не обнаружено (болезнь не выявлена);
тип флававируса;
количественный состав (концентрацию в крови);
название теста.

РНК обнаружено

Если гепатит С обнаружен в биологическом материале пациента, врач назначает повторное исследование, чтобы исключить ошибку. Обследование биоматериала делают от 1 до 5 дней. Срок исполнения зависит от загруженности персонала.

Присутствие флававируса и антител к нему свидетельствует о продолжительном течении болезни, которая перешла в хроническую стадию. Ложные показания бывают у беременных женщин и у людей, имеющих другие инфекционные заболевания.

РНК не обнаружено

Качественный анализ не обнаружил гепатит С. Отрицательное значение означает, что в крови отсутствуют РНК вируса. Утомляемость и другие признаки возможно связаны с протеканием другой инфекции в организме и требуют дальнейшего изучения.

Что делать, если РНК вируса гепатита С обнаружено?

Если вирус обнаружен в крови, нельзя отчаиваться и впадать в панику. В 20 процентах болезнь излечивается самостоятельно. Антитела не всегда свидетельствует о том, что вы болеете гепатитом С. Случаются ошибки при лабораторных исследованиях. Доброкачественные и злокачественные опухоли, инфекционные очаги в организме, проведенная ранее вакцинация смазывают картину ПЦР.

Раннее обнаружение помогает вовремя остановить болезнь. Назначают противовирусную терапию. Препараты помогают вылечить хроническое заболевание в течение 3-6 месяцев.

Источник