Анализ пцр рнк гепатита с количественный
Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.
Суть диагностики
Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.
Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:
- праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
- специальный фермент (РНК-полимераза).
После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА. Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов. На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.
Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.
Виды исследования
Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:
- генотипирование;
- качественный;
- количественный.
Качественный метод
Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.
Количественный метод
Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).
Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.
Генотипирование
Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.
Достоинства анализа ПЦР на гепатит
Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:
- Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
- Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
- Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.
Показания к проведению
Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:
- наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
- симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
- положительные результаты ИФА;
- увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
- необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
- проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
- проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
- наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.
Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования
Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:
- забор крови проводится утром;
- анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
- за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
- за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.
Результаты анализа: нормы и отклонения
Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.
Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:
- биохимического анализа крови;
- данные ультразвукового исследования;
- результаты биопсии.
Расшифровка количественного анализа
При получении результатов количественного анализа ПЦР учитываются следующие показатели:
| Показатель | Характеристика |
| Не обнаружено | Норма здорового человека. Данный показатель обозначает, что в организме человека не присутствует генетический материал вируса или его концентрация ниже порога чувствительности. |
| До 1,8*10^2 МЕ/мл | Значение подобных результатов изучается с повышенной осторожностью, так как необходимо соотношение информации с другими видами диагностирования. Такой результат требует повторного проведения процедуры, ввиду того, что концентрация РНК возбудителя ниже порога количественного определения. |
| До 8*10^5 МЕ/мл | Вирусная нагрузка данного параметра считается низкой. Снижение концентрации вируса говорит о том, что лечебные мероприятия проводятся эффективно. |
| Больше 8*10^5 МЕ/мл | Высокая вирусная нагрузка, следует пересмотреть подход к лечению. |
| Больше 2,4*10^7 МЕ/мл | В этом случае концентрация РНК возбудителя достигает запредельных отметок, поэтому делать выводы об уровне вирусной нагрузке нет смысла. Чаще всего при таком результате назначается повторный тест с разведение частиц крови. |
Расшифровка качественного анализа
В заключении качественного анализа ПЦР на гепатит С могут присутствовать следующие данные:
| Показатель | Характеристика |
| Обнаружено | Если зафиксирован положительный ответ, это значит, что в исследуемом образце крови присутствует генетический материал вируса. Простыми словами – подтверждается факт заражения человека. |
| Не обнаружено | Если в конечном итоге выходит отрицательный ответ, значит, заражение не произошло или количество РНК вируса недостаточно для определения чувствительности. |
Расшифровка генотипирования
При получении анализов на генотипирование вируса можно обнаружить следующие варианты показателей:
| Показатель | Характеристика |
| Обнаружена РНК конкретного генотипа | Данный результат показывает то, что в биологическом материале пациента найден вирус гепатита С конкретного генотипа и субтипа. Обозначается каждый генотип цифрой и латинской буквой. |
| Обнаружена РНК вируса гепатита С | При подобных результатах назначается повторное исследование, так как данный параметр обозначает наличие вируса гепатита, который не относится к 1,2,3 типу. Подобные случаи считаются редкими в России. |
| Не обнаружено | Данный результат считается нормой и свидетельствует о том, что человек здоров или концентрация вируса ниже порога определения. |
Ложноположительные и ложноотрицальные результаты
Ложно положительные и ложноотрицательные результаты ПЦР исследования получаются в таких случаях:
- при недостаточной квалификации медицинского персонала, которые проводят диагностику;
- ошибки в работе лаборантов, когда кровь транспортируется в лабораторию ненадлежащим способом или биоматериал загрязнён;
- случаи ненамеренной подмены проб крови;
- нарушения в процессе подготовки биологического материала;
- воздействие на исследуемые образцы повышенной температурой.
Среди других причин получения неточных результатов выделяют такие:
- кровь пациента содержит остаточные частицы гепарина и прочих коагулянтов;
- в образце присутствуют вещества-ингибиторы, способствующие замедлению или остановке полимеразной цепной реакции.
Где сделать ПЦР-диагностику и сколько стоит?
Подобные исследования проводятся:
- в частных медицинских центрах;
- в КДВ;
- в государственных поликлиниках.
Государственные поликлинники проводят анализ ПЦР на гепатит С бесплатно на основаниях наличия у пациента направления от гепатолога или инфекциониста.
Диагностика заболевания на платной основе проводится во всех крупных городах России.
Стоимость диагностики зависит от:
- качества оборудования клиники;
- скорость выполнения работы;
- типа теста.
Цена на изучение крови методом ПЦР колеблется в следующих пределах:
- качественный ПЦР анализ — 600-900 рублей (в Москве и Санкт-Петербурге);
- качественный ПЦР анализ — 300-800 рублей (регионы);
- определение вирусной нагрузки — 17000-22000;
- определение других видов инфекции количественного анализа 1200-10000 рублей.
Фотогалерея
Загрузка …
Видео
Ошибочные анализы на гепатит С. Снято каналом Гепатит С побежден.
Источник
РНК гепатита С – это молекула, содержащая наследственную информацию вируса. Именно ее определяет анализ методом ПЦР (полимеразной цепной реакции). Это ключевой этап диагностики, подтверждающий инфицирование гепатитом. Также по строению РНК определяют генотип HCV. Эти данные нужны для выбора терапии, поскольку некоторые подтипы (3а, 3б) не поддаются традиционному лечению интерфероном. Для достоверного результата потребуется соблюдать правила подготовки к исследованию.
Что такое РНК вируса
РНК, или рибонуклеиновая кислота, – это уникальный генетический материал организма. У вирусных гепатитов С от конструкции РНК зависит устойчивость вируса к разным типам лечения и особенности протекания болезни. Появление в крови фрагментов вирусной РНК значит, что болезнь вступила в острую фазу.
У хронических больных в состоянии ремиссии кровь также содержит РНК гепатита С и антитела к ней, но в меньшем объеме, чем при обострениях. Тем не менее, этого количества вируса все равно достаточно для заражения здоровых людей.
Кому назначают диагностику
Обследование крови на РНК HCV нужно в таких случаях:
- При обнаружении антител или повышения печеночных ферментов у человека, считающегося здоровым. Анализы на разные виды гепатита проводят для выявления болезни или ее исключения из списка возможных причин разрушения клеток печени.
- Когда лечат уже обнаруженный гепатит для отслеживания эффективности терапии. Контроль за уровнем вирусной РНК в крови своевременно выявит резистентность (устойчивость) к принимаемым лекарствам.
- После выздоровления на протяжении года – чтобы вовремя заметить рецидив.
Техника проведения анализа
Методом ПЦР обнаруживают нуклеиновые элементы, входящие в состав белковой оболочки вируса. Полимеразная цепная реакция выявляет:
- присутствие фрагментов HCV в крови;
- уровень вирусной нагрузки – количество частиц в миллилитре крови;
- генотип гепатита.
Важно правильно подготовиться к забору крови из вены для полимеразной реакции, чтобы не было искажений в результате теста. Для этого:
- Не употреблять алкоголь, энергетики, жирную и жареную пищу в течение 3 дней до сдачи теста.
- Избегать физических и нервных нагрузок за 2-3 дня до анализа.
- Отказаться от приема лекарств, а если это невозможно – уведомить врача о принимаемых препаратах.
- Не сдавать анализ во время обострения хронических вирусных болезней, а также при ОРВИ.
- При беременности и во время менструации предупредить врача о своем состоянии, поскольку гормональные нарушения в этот период вызывают искажения результатов.
Расшифровка
Обработка крови состоит из трех этапов:
- Определение РНК вируса гепатита в крови (качественный анализ).
- Оценка вирусной нагрузки (количественный анализ). Применяется только при положительном результате первого (когда в материале обнаружено присутствие вируса).
- Генотипирование. Его проводят при первом обращении по подозрению на гепатит, а также при низкой эффективности терапии – чтобы выявить мутацию вируса.
При подозрении на ложный результат потребуется повторно пройти обследование через 2 недели.
Качественный анализ
На оборудовании большинства лабораторий гепатит С будет выявлен, если количество частиц больше 50 МЕ/мл (международных единиц на миллилитр крови). Редкие диагностические аппараты способны выявить гепатит при уровне 10 МЕ/мл. При меньшем количестве частиц вируса будет получен ложноотрицательный результат (гепатита C не обнаружено).
Присутствие в крови антител с одновременным отрицательным результатом на тестирование по вирусу – причина пройти повторное обследование через 2 недели. Также можно обратиться в другую лабораторию с более современным оборудованием для диагностики.
Количественный анализ
По результатам количественного теста можно определить, насколько эффективно организм борется с гепатитом С. Этим тестом определяют прогресс болезни, а также действенность терапевтической программы. Уровень вируса в крови определяют в МЕ/мл. В зависимости от результатов пациента относят к одной из пяти групп:
- Здоров (вируса не обнаружено).
- Минимальный уровень вируса в крови (меньше 180 МЕ/мл. Условно здоров. Иногда может означать ложноположительный результат или скрытое носительство без болезни.
- Болен с низкой вирусной нагрузкой (менее 800 тыс. МЕ/мл)
- Болен с высокой вирусной нагрузкой (от 800 тыс. до 2.5 млн. МЕ/мл)
- Терминальная вирусная нагрузка (более 2,5 млн. МЕ/мл).
От регресса вирусной нагрузки зависит длительность терапии. При слишком медленном падении активности вируса (плохой эффективности терапии) лечение растягивается на полгода и более. Если вирус удастся уничтожить быстрей, срок лечения не превышает 3 месяцев.
Генотипирование
Существует 11 генотипов вируса с различными подтипами. Некоторые из них вводят больных в группу риска по онкологии и фиброзу сильней остальных, другие не поддаются стандартной терапии интерфероном. В идеале генотипирование нужно провести при первичном обнаружении гепатита. Но из-за ограниченности ресурсов к этому анализу прибегают только при отсутствии результатов терапии.
Если есть возможность сделать генотипирование платно, обязательно нужно ею воспользоваться. Этот анализ предотвратит потерю времени на терапию, которая может быть неэффективна при редком субтипе гепатита С.
Как часто нужно сдавать кровь на диагностику
Регулярное обследование на гепатит показано:
- Людям, которые входят в группу риска из-за профессии или вредных привычек. К первым относятся врачи, ко вторым – наркоманы и люди, практикующие беспорядочные половые связи без использования презервативов.
- Проходящим терапию – для отслеживания эффективности лечения.
- Излечившимся от гепатита с целью предотвращения рецидивов.
Кровь на профилактическое обследование у группы риска берут раз 3-6 месяцев. Во время лечения потребуется сдавать анализы чаще – раз в 4-6 недель. При сомнениях в эффективности оборудования той лаборатории, где проводятся анализы, лучше сдать тест в нескольких клиниках одновременно.
Источник
Автор Vera На чтение 8 мин.
Гепатит С — вирусное заболевание печени, вызываемое флавивирусом HCV (от англ. hepatitis C virus), в структуре которого содержится молекула рибонуклеиновой кислоты (РНК). РНК несет генетический код вируса. Ее наличие позволяет проводить анализ ПЦР на гепатит С.
Опасность HCV для человека заключается и в том, что так называемое серологическое окно (промежуток времени между заражением и появлением реакции со стороны иммунной системы) может быть достаточно длительным — от нескольких недель до шести месяцев.
Это не дает обнаружить инфицирование и начать лечение вовремя.
В зависимости от индивидуальных особенностей организма носителя HCV может проявляться в острой форме, а также протекать как хроническое заболевание, которое потребует длительного и дорогостоящего лечения. При выявлении антител к HCV проводится ряд лабораторных анализов, в том числе ПЦР на гепатит С. Этот тест делается всем людям, в чьей крови были найдены антитела к HCV.
Что такое анализ ПЦР?
Лабораторный анализ ПЦР на гепатит С — исследование биологического материала с целью выявить наличие флававируса.
Полимеразная цепная реакция (так расшифровывается аббревиатура) показывает количественное значение вирусного поражения организма, его качественные характеристики, а также генотип вируса, содержащего РНК.
На их основе, а также на базе дополнительных анализов определяется способ и длительность терапии, а также эпидемиологический фактор (степень риска передачи другому носителю).
Что такое РНК-анализ на гепатит С?
ПЦР гепатита С еще называют РНК-анализом (HCV RNA), т.к. флававирус содержит в себе частицу РНК размером вириона 30-60 нм. Одной из особенностей этого микроорганизма является высокая склонность к мутациям.
Каждый из подвидов (генотипов) вируса имеет различную резистентность, что обуславливает разные методики лечения и характер дальнейшего прогноза для пациента.
Биологический материал (венозная кровь) сдается натощак и, как правило, тестируется методом Real-Time PCR (высокочувствительной диагностики в режиме реального времени с нижним лимитом определения 15 МЕ/мл с применением закрытых автоматизированных систем).
Существуют другие тесты, например COBAS AMPLICOR с сенситивностью 50-100 МЕ/мл. Для любого лабораторного исследования важен порог чувствительности, т.е. способности реагента выявить минимальную концентрацию вируса в биологическом материале.
Референсное значение теста (нормальные показатели) — «не найдено».
Виды анализа на гепатит С методом ПЦР
ПЦР на гепатит С включает в себя три важных составляющих:
- качественный анализ;
- количественный анализ;
- генотипирование.
Эти тесты позволяют определить характер виремии, а также генетические признаки возбудителя. В зависимости от чувствительности диагностической системы, исследование проводится один раз, и иногда для подтверждения или уточнения результатов делается повторный тест с более чувствительным реагентом.
Качественный ПЦР гепатита С
Анализ ПЦР на гепатит С качественный — это другое общее название анализа полимеразной цепной реакции. Стандартная чувствительность теста, позволяющего выявить наличие вирусного поражения, находится в пределах 10-500 МЕ/мл.
Негативный анализ ПЦР на гепатит С показывает, что концентрация вируса в крови пациента находится ниже порога восприимчивости диагностической системы.
Если качественный ПЦР дал ответ «не обнаружено», то для последующего лечения важно узнать порог чувствительности реагента.
Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.
Белковые фракции к флававирусу появляются значительно позже.
Количественный ПЦР гепатита С
ПЦР гепатит С количественный — это показатель вирусной нагрузки, который отображает уровень концентрации РНК флававируса в организме. Это показатель, отображающий, сколько фрагментов вирусной РНК содержится на один кубический сантиметр крови. Результаты ПЦР РНК гепатита С количественного теста в общепринятой системе обозначаются в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) и могут записываться разными способами, например — 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.
Количественная ПЦР диагностика гепатита С назначается пациентам перед началом противовирусной терапии, и на 12 неделе лечения, чтобы оценить результаты выбранного метода борьбы с HCV. Вирусная нагрузка позволяет определить три важных показателя заболевания:
- инфекционность, т.е. степень риска передачи вируса от одного носителя к другому (чем выше концентрация РНК флававируса, тем выше вероятность заразить другого человека, например, при половом контакте);
- метод и эффективность лечения;
- длительность и прогноз противовирусной терапии (чем выше вирусная нагрузка, тем дольше длится лечение).
Количественная ПЦР диагностика гепатита С зависит от типа лабораторного теста и порога его чувствительности. Нижней границей нормы принято считать показатель до 600.000 МЕ/мл, среднее значение находится в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и выше считаются высоким уровнем концентрации РНК-содержащего вируса.
Важно: нет прямой связи между уровнем HCV RNA в крови и тяжестью заболевания. У больного может быть очень высокая вирусная нагрузка, но это еще не свидетельствует о том, что имеется серьезное поражение клеток печени.
Генотипирование
Ввиду высокой мутационной активности HCV в природе при тестировании важно выявить, какой именно генотип вируса находится в крови пациента. Всего на планете зафиксировано 11 генотипов вируса гепатита С, в которые входят множество подвидов (субтипов). На территории РФ распространены 1,2 и 3.
ПЦР РНК гепатита С вместе с генотипированием — очень важная составляющая анализа, т.к. позволяет врачу определить резистентность (устойчивость) вируса, подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения.
Разные генотипы HCV по-разному поддаются противовирусной терапии. Например, 1 генотип требует до 48 недель лечения, а его эффективность в среднем составляет 60%, тогда как 2 и 3 генотипы лечатся в два раза быстрее с эффективностью до 85%.
Генотипирование также позволяет и косвенно определить состояние печени. Например, 3 генотип HCV нередко сопровождается стеатозом, при котором в клетках органа накапливается жир.
Анализ крови на ПЦР при гепатите С должен выдать цифру, определяющую генотип. В лабораторных ответах может быть написано «не типируется» — и это значит, что в крови человека находится вирус, не определяемый тестовой системой. Это может говорить о том, что генотип нехарактерен для данной географической зоны. В этом случае следует повторно сдать анализ с более высокой чувствительностью системы диагностирования.
Расшифровка анализа ПЦР на гепатит С
Тест на гепатит С ПЦР количественный расшифровать можно на основе приведенных выше данных. При получении результатов лабораторных анализов обычно пишутся следующие данные:
- «найдено»/ «не найдено» (ПЦР качественный на гепатит С);
- количество РНК-содержащих фракций, например 831.680 ME/мл (анализ на ПЦР количественный);
- цифра, определяющая генотип HCV, например — 1, 2, 3, 4;
- название теста — чаще всего Real-time.
Наиболее важным при расшифровке анализа ПЦР на гепатит С считается второй пункт, который показывает вирусную нагрузку, определяющую прогноз, способ и длительность лечения.
Важно: в результате теста рядом с цифрой, показывающей генотип, может стоять латинская буква, например, 1а, что обозначает субтип вируса. Для врача он не имеет значения: для выбора метода лечения берется только генотип.
Если ПЦР анализ на гепатит С отрицательный, а ИФА положительный — что это значит?
Для расшифровки лабораторных анализов важно обратиться к гепатологу или инфекционисту, который разъяснит полученную информацию в соответствии с видом диагностической системы и порогом ее чувствительности. В медицинской практике существует множество данных анализов крови, которые могут ввести человека без медицинского образования в заблуждение.
Например, если тест на гепатит С ПЦР отрицательный, а ИФА положительный, то может обозначать, что в данный момент в крови пациента нет HCV, но ранее он перенес острую форму гепатита С. Принято считать, что позитивный иммуноферментный анализ (ИФА) показывает, что в крови есть антитела, выработанные после вторжения вируса в прошлом. Но в современной медицинской практике ИФА анализ считается недостаточно надежным и нередко дает нетипичные результаты, поэтому врачи используют его в качестве первичного скрининга. При диагностике заболевания специалисты ориентируются именно на ПЦР тесты.
Полезное видео
В следующем видео очень подробно и интересно рассказывается, в чем суть метода ПЦР, как проводится анализ:
Заключение
Для анализа на ПЦР гепатита С обычно берется венозная кровь. Чаще всего происходит двойной забор биологического материала — для ИФА, и непосредственно для ПЦР теста. Для корректных результатов тестов требуется соблюдение основных правил лабораторного забора биологического материала:
- кровь на анализ сдается в первой половине дня натощак;
- между приемом пищи и забором крови должно пройти не менее 8 часов;
- перед сдачей анализа нужно также исключить алкоголь и жареную пищу;
- в течение суток перед сдачей крови необходимо избегать высоких физических нагрузок.
Результаты тестирования крови обычно готовы на следующий день.
Источник
