Гепатит в полимерно цепная реакция

Гепатит в полимерно цепная реакция

РНК гепатита С – это молекула, содержащая наследственную информацию вируса. Именно ее определяет анализ методом ПЦР (полимеразной цепной реакции). Это ключевой этап диагностики, подтверждающий инфицирование гепатитом. Также по строению РНК определяют генотип HCV. Эти данные нужны для выбора терапии, поскольку некоторые подтипы (3а, 3б) не поддаются традиционному лечению интерфероном. Для достоверного результата потребуется соблюдать правила подготовки к исследованию.

Что такое РНК вируса

РНК, или рибонуклеиновая кислота, – это уникальный генетический материал организма. У вирусных гепатитов С от конструкции РНК зависит устойчивость вируса к разным типам лечения и особенности протекания болезни. Появление в крови фрагментов вирусной РНК значит, что болезнь вступила в острую фазу.

У хронических больных в состоянии ремиссии кровь также содержит РНК гепатита С и антитела к ней, но в меньшем объеме, чем при обострениях. Тем не менее, этого количества вируса все равно достаточно для заражения здоровых людей.

Кому назначают диагностику

Обследование крови на РНК HCV нужно в таких случаях:

  1. При обнаружении антител или повышения печеночных ферментов у человека, считающегося здоровым. Анализы на разные виды гепатита проводят для выявления болезни или ее исключения из списка возможных причин разрушения клеток печени.
  2. Когда лечат уже обнаруженный гепатит для отслеживания эффективности терапии. Контроль за уровнем вирусной РНК в крови своевременно выявит резистентность (устойчивость) к принимаемым лекарствам.
  3. После выздоровления на протяжении года – чтобы вовремя заметить рецидив.

Техника проведения анализа

Методом ПЦР обнаруживают нуклеиновые элементы, входящие в состав белковой оболочки вируса. Полимеразная цепная реакция выявляет:

  • присутствие фрагментов HCV в крови;
  • уровень вирусной нагрузки – количество частиц в миллилитре крови;
  • генотип гепатита.

Важно правильно подготовиться к забору крови из вены для полимеразной реакции, чтобы не было искажений в результате теста. Для этого:

  1. Не употреблять алкоголь, энергетики, жирную и жареную пищу в течение 3 дней до сдачи теста.
  2. Избегать физических и нервных нагрузок за 2-3 дня до анализа.
  3. Отказаться от приема лекарств, а если это невозможно – уведомить врача о принимаемых препаратах.
  4. Не сдавать анализ во время обострения хронических вирусных болезней, а также при ОРВИ.
  5. При беременности и во время менструации предупредить врача о своем состоянии, поскольку гормональные нарушения в этот период вызывают искажения результатов.

Расшифровка

Обработка крови состоит из трех этапов:

  1. Определение РНК вируса гепатита в крови (качественный анализ).
  2. Оценка вирусной нагрузки (количественный анализ). Применяется только при положительном результате первого (когда в материале обнаружено присутствие вируса).
  3. Генотипирование. Его проводят при первом обращении по подозрению на гепатит, а также при низкой эффективности терапии – чтобы выявить мутацию вируса.

При подозрении на ложный результат потребуется повторно пройти обследование через 2 недели.

Качественный анализ

На оборудовании большинства лабораторий гепатит С будет выявлен, если количество частиц больше 50 МЕ/мл (международных единиц на миллилитр крови). Редкие диагностические аппараты способны выявить гепатит при уровне 10 МЕ/мл. При меньшем количестве частиц вируса будет получен ложноотрицательный результат (гепатита C не обнаружено).

Присутствие в крови антител с одновременным отрицательным результатом на тестирование по вирусу – причина пройти повторное обследование через 2 недели. Также можно обратиться в другую лабораторию с более современным оборудованием для диагностики.

Количественный анализ

По результатам количественного теста можно определить, насколько эффективно организм борется с гепатитом С. Этим тестом определяют прогресс болезни, а также действенность терапевтической программы. Уровень вируса в крови определяют в МЕ/мл. В зависимости от результатов пациента относят к одной из пяти групп:

  1. Здоров (вируса не обнаружено).
  2. Минимальный уровень вируса в крови (меньше 180 МЕ/мл. Условно здоров. Иногда может означать ложноположительный результат или скрытое носительство без болезни.
  3. Болен с низкой вирусной нагрузкой (менее 800 тыс. МЕ/мл)
  4. Болен с высокой вирусной нагрузкой (от 800 тыс. до 2.5 млн. МЕ/мл)
  5. Терминальная вирусная нагрузка (более 2,5 млн. МЕ/мл).

От регресса вирусной нагрузки зависит длительность терапии. При слишком медленном падении активности вируса (плохой эффективности терапии) лечение растягивается на полгода и более. Если вирус удастся уничтожить быстрей, срок лечения не превышает 3 месяцев.

Генотипирование

Существует 11 генотипов вируса с различными подтипами. Некоторые из них вводят больных в группу риска по онкологии и фиброзу сильней остальных, другие не поддаются стандартной терапии интерфероном. В идеале генотипирование нужно провести при первичном обнаружении гепатита. Но из-за ограниченности ресурсов к этому анализу прибегают только при отсутствии результатов терапии.

Если есть возможность сделать генотипирование платно, обязательно нужно ею воспользоваться. Этот анализ предотвратит потерю времени на терапию, которая может быть неэффективна при редком субтипе гепатита С.

Как часто нужно сдавать кровь на диагностику

Регулярное обследование на гепатит показано:

  • Людям, которые входят в группу риска из-за профессии или вредных привычек. К первым относятся врачи, ко вторым – наркоманы и люди, практикующие беспорядочные половые связи без использования презервативов.
  • Проходящим терапию – для отслеживания эффективности лечения.
  • Излечившимся от гепатита с целью предотвращения рецидивов.

Кровь на профилактическое обследование у группы риска берут раз 3-6 месяцев. Во время лечения потребуется сдавать анализы чаще – раз в 4-6 недель. При сомнениях в эффективности оборудования той лаборатории, где проводятся анализы, лучше сдать тест в нескольких клиниках одновременно.

Читайте также:  Протективный уровень антител к гепатиту в

Источник

Гепатит в полимерно цепная реакция

Лабораторные показатели при гепатите С позволяют определить общее состояние здоровья человека, степень, стадию, вирусную нагрузку, генотип заболевания. Гепатит имеет скрытое течение и часто выявляется в процессе обычных исследований крови. Также сдача анализов необходима перед началом и в процессе противовирусного лечения для оценки его эффективности. Чем раньше выявляется гепатит С, тем больше шансов на полное выздоровление. 

Что покажут анализы на гепатит при инфекции

Показатели анализов при гепатите С сначала оценивает терапевт. После основных анализов врач может направить больного на дополнительное обследование: биопсию, УЗИ печени. Это позволит увидеть полную картину заболевания. 

ИФА

Исследуя показатели крови при гепатите С, обязательно назначают иммуноферментный анализ (ИФА). Он показывает ответ иммунной системы на столкновение с вирусом HCV. На момент проведения обследования количество патогенных клеток может быть очень мало, а антитела к вирусу гепатита С уже циркулируют в кровеносной системе. Появляются они в срок от нескольких дней до 2 недель после инфицирования. 

Анализ показывает только наличие и количество иммуноглобулинов G и М, поэтому диагноз с точностью поставить невозможно. Можно лишь определить стадию гепатита.

По иммуноглобулинам М видно, что человек только заразился. Это говорит об острой фазе патологии. Иммуноглобулины G свидетельствуют о хроническом течении болезни (более 6 месяцев) или об инфицировании в прошлом. 

При исследовании показателей крови методом ИФА можно получить псевдоотрицательный результат. Это значит, что инфицирование произошло недавно и антитела еще не успели выработаться. Врачи называют этот период «диагностическим окном», который может длиться до полугода. 

Также возможен ложноположительный результат, когда реагент связывается с неспецифическим белком сыворотки крови. Такой показатель возможен при:

  • наличии онкологии;
  • вакцинации, которая была проведена накануне взятия крови;
  • туберкулезе;
  • склеродермии, рассеянном склерозе и прочих аутоиммунных заболеваниях;
  • повышенной температуре тела.

Чтобы получить точные показатели, результаты ИФА интерпретируют совместно с ПЦР. 

ПЦР

Полимеразная цепная реакция проводится для выявления РНК вируса в крови человека. Выделяется несколько видов ПЦР-анализа:

  • Качественный, благодаря которому выявляется генетический материал HCV.
  • Количественный анализ. Предназначен для определения вирусной нагрузки при гепатите С. Обязателен перед началом противовирусного лечения, а после на 1, 4, 12 и 24 неделе терапии для оценки ее эффективности.
  • Генотипирование для выявления генотипа вируса гепатита, поскольку он постоянно мутирует.

Расшифровкой показателей занимается врач-гепатолог. Он интерпретирует их в комплексе с результатами ИФА, биохимии крови, УЗИ и биопсии. В заключении при сдаче качественного анализа пишется:

  • Обнаружено. Это означает, что в крови человека выявлен генетический материал HCV, и инфицирование подтверждается.
  • Не обнаружено. Заражение не подтверждено или уровень РНК возбудителя находится ниже границы чувствительности аппаратуры. 

Показатели количественного анализа:

Не обнаруженоЧеловек либо полностью здоров, либо концентрация РНК HCV ниже пределов чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/млКоличество РНК очень мало. Данные показатели следует соотносить с результатами других анализов или проводить повторное обследование. 
До 8*10^5 МЕ/млНезначительный уровень вирусной нагрузки.
Свидетельствует об успешности ПВТ.
Более 8*10^5 МЕ/млВирусная нагрузка имеет высокие показатели.
Более 2,4*10^7 МЕ/млПри таких показателях назначается повторная сдача крови с разбавлением ее образца.

Расшифровка показателей генотипирования:

Не обнаруженоЧеловек полностью здоров либо уровень РНК вируса слишком мал. 
Выявлена РНК вируса HCVУ больного редкий генотип HCV, который не относится к первым трем типам. Назначаются дополнительные анализы.
Присутствует РНК определенного типаВ заключении пишется определенный генотип (1а, 1b).

Когда анализ ПЦР является отрицательным, а ИФА — положительным, это означает, что человек ранее уже перенес гепатит С, но вылечился самостоятельно. 

Общеклинический анализ крови

Посредством общего анализа крови при гепатите С определяется его стадия. Исследование включает в себя много показателей, которые меняются при воспалительном процессе в организме. Вот что показывает клинический анализ крови при заражении гепатитом С:

  • Уровень гемоглобина. У мужчин норма — 130-160 г/л, у женщин — 120-140 г/л. При хроническом гепатите С может оставаться в пределах нормы. Повышение показателей свидетельствует о гемохроматозе, снижение — о различных кровотечениях, приеме противовирусных препаратов. Если гемоглобин снижается ниже 100 г/л, ПВТ противопоказана. 
  • Количество эритроцитов. Норма у женщин — 3,80–5,10×10¹² г/л, у мужчин — 3,50–5,7×10¹² г/л в зависимости от возраста. Снижение показателей может свидетельствовать о гемолитической анемии из-за диффузных изменений в печени. Увеличение (эритроцитоз) — о развитии гемохроматоза. 
  • Лейкоциты и их фракции. Норма — 4-9×10⁹ г/л. Они могут быть в пределах нормальных значений или немного снижаться в зависимости от стадии гепатита С. Повышение лейкоцитов (лейкоцитоз) свидетельствует о том, что иммунные клетки активно борются с вирусом. При абсолютной лейкопении ниже 1,5 г/л ПВТ противопоказана. 
  • Тромбоциты. Норма — 180-320 х 10⁹ г/л. При снижении этих показателей определяется дисфункция печени, нарушается свертываемость крови. Значительное сокращение клеток также может говорить об инфицировании HCV 1 генотипа. Если уровень тромбоцитов ниже 50 г/л, противовирусная терапия противопоказана. 
  • СОЭ. Норма для мужчин 2-10 мм/ч, для женщин 2-15 мм/ч. Показатели увеличиваются при поражении клеток печени, серьезном воспалительном процессе в железе. Повышение происходит вследствие приема противовирусных лекарств. 
Читайте также:  Доклад что такое гепатит с

Показатели биохимического анализа при гепатите С

Биохимический анализ крови при гепатите С является одним из самых достоверных способов диагностики заболевания, степени поражения тканей печени и общего состояния здоровья больного. Сдается он натощак с утра. Последний раз можно кушать как минимум за 10 часов до сдачи крови. 

Билирубин

Это желчный пигмент, результат распада эритроцитов. Бывает прямым, непрямым и общим.

В норме показатели общего билирубина у женщин составляют от 8,5 до 19,8 мкмоль/л максимум, у мужчин — от 3,3 до 19 мкмоль/л максимум. 

У человека с патологическими изменениями в печени количество общего пигмента не превышает 21,0 мкмоль/л. О том, что началась гипербилирубинемия, свидетельствует концентрация более 17,1 мкмоль/л. Если показатели повышены (от 30 мкмоль/л), наблюдается желтушный синдром. При этом выделяется три его формы: 

  • тяжелая (более 160 мкмоль/л);
  • средняя (в пределах 87-160 мкмоль/л);
  • легкая (менее 86 мкмоль/л). 

При достижении уровня 300 мкмоль/л развивается печеночная кома. 

АЛТ, АСТ и коэффициент де Ритиса

АЛТ (аланинаминотрансфераза) и АСТ (аспартатаминотрансфераза) — это ферменты, которые вырабатываются печенью. АСТ и АЛТ при гепатите С начинают активно распространяться за пределы железы.

Нормальный уровень АСТ у мужчин — до 47 МЕ/л, у женщин — до 30 МЕ/л. При гепатите С, который развивается без цирроза, этот показатель превышен в 4-6 раз, а с циррозом — в 6-10 раз. 

Норма АЛТ у мужчин — до 45 МЕ/л, у женщин — до 35 МЕ/л. В случае гепатита С без цирроза количество фермента возрастает в 6-10 раз, с циррозом — более, чем в 10 раз. 

Коэффициент де Ритиса — это соотношение АЛТ и АСТ. Вычисляется из полученных результатов исследования. Необходим для выявления проблем в работе печени и сердца. Самостоятельного значения он не имеет, рассчитывают только при отклонениях в показателях АЛТ и АСТ. У здорового человека коэффициент колеблется от 0,91 до 1,75. При снижении индекса менее 0,91 имеются проблемы с печенью. Если показатели варьируются от 0,55 до 0,83, это говорит о гепатите В и А, причем данные биохимические показатели видны за 2 недели до проявления первичных признаков. 

Белок

Концентрация общего белка в сыворотке крови зависит от синтеза и распада глобулинов и альбумина — двух главных белковых фракций. У взрослых показатели 66-83 г/л — в пределах нормы. Снижение показателей до 60-63 г/л может говорить о развитии хронических заболеваний печени, воспалительных процессов, злокачественных новообразований.

Расшифровка низких результатов показывает недостаточность функции печени (гепатиты, цирроз печени). Сокращение количества общего белка до 50 г/л часто сопровождается гипопротеинемическими отеками тканей. 

Щелочная фосфатаза

Это наиболее информативный фермент в анализе на печеночные пробы. При исследовании показателей при гепатите С внимание обращается на активность печеночного подвида. У взрослого здорового человека она лежит в пределах 30-90 Ед/л, у подростков — до 400 Ед/л, беременных женщин — до 250 Ед/л. 

Повышенный уровень щелочной фосфатазы (в 10 и более раз) свидетельствует о механической желтухе, связанной с затруднением секреции прямого билирубина в желчный пузырь и поступлением желчи в кишечник. Это часто происходит при хроническом гепатите С. 

Другие данные биохимии

При биохимическом исследовании крови выявляются также уровень креатинина. Это результат обмена белков в печени. Выводится вещество с мочой почками. Нормальные показатели у взрослых — 39,9-72 мкмоль/л. Когда уровень завышен, врачи подозревают нарушения в работе почек. Данный показатель необходимо проверять перед проведением противовирусной терапии для оценки ее безопасности.

Триглицериды — это жиры, которые содержатся в жировой ткани. Норма — 0,45-2,16 мкмоль/л для женщин, у мужчин — 0,61-3,62. Повышение этих показателей врач может расценивать как ожирение, сахарный диабет, заболевания печени (цирроз, гепатит, жировая дистрофия). Их уровень повышается также во время приема интерферонов. 

Показатели анализа мочи

Общеклинический анализ мочи при гепатите С влияет на состояние печени, мочевыделительной системы, метаболизма. При инфицировании HCV меняются физические свойства мочи:

  1. на ее поверхности появляется пена;
  2. в процессе хронического течения заболевания цвет меняется со светлого до темно-коричневого. 

При лабораторном исследовании выявляются следующие отклонения:

  1. В урине появляется уробилиноген или билирубин — вещества, которые отсутствуют в моче у здорового человека.
  2. Повышается уровень лейкоцитов из-за воспалительного процесса. 

Также увеличивается удельный вес мочи, поскольку возрастает концентрация веществ.

Источник

Гепатит в полимерно цепная реакция

Значения гепатита С в анализах всегда разные. Они зависят от вирусной нагрузки, генотипа HCV, наличия антител в крови и состояния иммунной системы. Существуют референсные значения, в которые должны укладываться те или иные результаты. Они подразделяются на взрослые и детские, могут различаться в зависимости от пола, возраста больного. На их основании врачи ставят диагноз и назначают лечение. Расшифровкой показателей занимается только врач. 

Что такое референсные значения в анализах

Референтные значения — это границы, в которые должны уложиться результаты полученных анализов, чтобы их посчитали нормальными. Например, при диапазоне от 10 до 20, 10 — это нижняя граница, а 20 — верхняя. Если показатели исследований выше или ниже нормы, это свидетельствует о наличии той или иной проблемы со здоровьем. 

Читайте также:  Урсосан при остром гепатите с

Каждая лаборатория располагает собственным оборудованием, которое может отличаться от других. Поэтому референсные значения также могут быть различными. Врачи должны ориентироваться не на общие нормы, а на данные той лаборатории, где было проведено исследование. 

На результаты также влияет:

  1. режим и характер питания;
  2. потребление алкоголя;
  3. состояние стресса;
  4. физическое переутомление;
  5. время суток. 

Отклонения в показателях допускаются лишь тогда, когда врач проинформирован о факторах, способных исказить общую картину показателей.

Результаты диагностики на гепатит С

Итоговые значения зависят от вида анализа на гепатит. Если есть подозрение на инфицирование, одновременно сдается кровь для анализов ИФА и ПЦР. Чтобы результат был корректным, необходимо соблюдать основные рекомендации:

  • Биологический материал следует сдавать только натощак в утреннее время.
  • Кушать можно минимум за 10 часов до процедуры.
  • За сутки до забора необходимо исключить жирную, сладкую еду, алкогольные напитки.

Итоги обследований на вирус HCV можно увидеть уже спустя сутки. 

Что показывает ИФА

Иммуноферментный анализ выявляет наличие антител к гепатиту С в крови (анти-HCV). Они проявляются в срок от двух до шести недель после инфицирования. 

Нормальное значение этого исследования — «не обнаружено». Антитела к гепатиту должны полностью отсутствовать.

Положительный результат может косвенно подтверждать диагноз. В такой ситуации назначается повторная сдача крови совместно с ПЦР. 

При острой форме гепатита С в заключении указаны иммуноглобулины IgM. При хроническом течении заболевания (более полугода от заражения) в плазме обнаруживаются иммуноглобулины IgG. Также подобное значение может свидетельствовать о столкновении с болезнью в прошлом. Если одновременно выявлены два типа иммуноглобулинов, значит, идет обострение хронического гепатита.

Вот значения гепатита С на разных фазах болезни:

  • во время острой формы — IgM+, IgG+;
  • скрытая (латентная) форма — IgM-, IgG+;
  • хронического течение — IgM+, IgG+;
  • в процессе выздоровления — IgM-, IgG+, HCV-.

Анализ ИФА при гепатите С иногда бывает недостоверным. Больной может увидеть псевдоотрицательный результат в остром периоде инфекции. Иногда антитела к гепатиту С появляются на протяжении 3-5 месяцев с момента инфицирования, поэтому сразу они не определяются.

Также ложноотрицательные значения появляются у людей, которые проходят лечение сифилиса, онкологии, аутоиммунных заболеваний. В этом случае чувствительность ИФА колеблется в пределах 50-95%. У 8% ВИЧ-положительных больных диагностируется ложноотрицательный результат – их организм не производит антитела.

Значение количественной ПЦР

Полимеразная цепная реакция — это количественное исследование крови, благодаря которому определяется концентрация вируса гепатита. Это наиболее достоверный анализ, позволяющий обнаружить вирусные агенты, а не антитела. 

Вирусная нагрузка при гепатите С означает то, сколько единиц вирусной РНК присутствует в 1 мл биологического материала.

Когда человек здоров, референтный результат — отрицательный (в крови нет вирусных частиц). При разной вирусной нагрузке референсные значения различны:

  • От 0 до 1,8×102 МЕ на 1 мл — количество вирусной РНК ниже уровня установленного значения. Это означает, что вирусные агенты присутствуют в крови, но в очень маленькой концентрации (при одновременно проведенном качественном ПЦР).
  • От 1,8×102 до 7,9×105 МЕ на 1 мл — вирусная активность не очень высокая.
  • От 8×105 до 2,3×107 МЕ на 1 мл — присутствует HCV с высокой вирусной нагрузкой.
  • От 2,4×107 МЕ на 1 мл и более — высокая виремия. Вероятно развитие тяжелых осложнений (цирроза, рака печени). 

Количественное ПЦР-обследование назначается больным гепатитом С перед началом противовирусной терапии и в процессе нее на 3 месяце, чтобы оценить ее эффективность. 

Исследование ПЦР может быть качественным, когда выявляется вирус в крови. Его необходимо проходить всем людям, у которых имеются антитела к гепатиту С. Стандартная чувствительность — 10-500 МЕ/мл. Когда показатели ниже указанных пределов, анализ недостоверный. Если благодаря качественному анализу вирус не обнаружен, человек признается здоровым. 

Что делать с полученными значениями

Результаты анализов следует показать врачу. Значения количественной ПЦР диагностики позволяют определить:

  1. Вероятность передачи вируса от инфицированного здоровому человеку. Чем выше концентрация патологических агентов в крови, тем выше риск заражения гепатитом С. 
  2. Какие препараты лучше использовать и какова эффективность противовирусной терапии.
  3. Длительность и прогноз лечения. При высоких показателях вирусной нагрузки терапевтический курс длится дольше. 

Прямой связи между количеством вирусных частиц в крови и тяжестью заболевания нет. У инфицированного при высокой вирусной нагрузке может не быть серьезного поражения клеток печени.

В некоторых случаях значения анализов показывают отрицательный ПЦР, но положительный ИФА. Это говорит о том, что в данный момент вирус HCV не обнаружен, но ранее человек перенес острую форму гепатита С.

При ложноположительных результатах больному показаны повторные анализы, а также исследование на определение генотипа, печеночные пробы и УЗИ печени. 

При подтверждении гепатита С назначается лечение. Оно может быть основано на приеме интерферонов или препаратов прямого действия, которые имеют меньше побочных эффектов и большую результативность (до 99%). Это Софосбувир, Даклатасвир, Велпатасвир, Ледипасвир. С их помощью вылечить хронический гепатит даже с циррозом печени можно за полгода. 

Источник