Ифа антигены и антитела к гепатитам

Метод определения
Иммуноферментный анализ (ИФА).

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Показатель наличия защитного иммунитета против вируса гепатита В.

Anti-HBs-антитела появляются в фазе выздоровления после острого гепатита В, обычно через 3 — 4 месяца после элиминации HBsAg (так называемая фаза «окна»). Продолжительность фазы окна может варьировать от 1 месяца до 1 года, в зависимости от состояния иммунной системы больного. В этот период «окна» важно обследовать пациента на anti-HBc IgM.

Anti-HBs-антитела особенно важны в обеспечении иммунной защиты против данного вируса, поэтому количественное определение анти-HBs-антител обычно используют в контроле эффективности иммунитета при вакцинации против гепатита В. Со временем, титр антител снижается вплоть до необнаружения. Иногда возможна пожизненная циркуляция anti-HBs-антител. Появление анти-HBs на фоне клинического улучшения у больного гепатитом В и исчезновение HBsAg является хорошим прогностическим признаком и показателем выздоровления.

При хроническом течении гепатита В возможно параллельное определение поверхностного антигена и антител к нему. Обнаружение анти-HBs в острой фазе гепатита В параллельно с HBsAg свидетельствует о неблагоприятном прогнозе заболевания.

Особенности инфекции. Гепатит B (ВГВ, HВV) острое системное вирусное заболевание. Характеризуется поражением печени и различными внепечёночными проявлениями. Протекает остро или хронически, в желтушной (35%) или безжелтушной (65%) формах. Вирус гепатита В является ретровирусом семейства гепаднавирусов — Hepadnaviridae, содержит ДНК, чрезвычайно устойчив во внешней среде (к УФ-лучам, температуре, детергентам). Гепатит В передаётся с кровью и биологическими жидкостями парентеральным, трансплацентарным, половым и бытовым путями. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови, заключённые, члены семей HBs-положительных лиц, новорождённые от HBs-положительных матерей.

Проникая в организм, вирус гепатита попадает в макрофаги крови и разносится по организму. Репликация вируса происходит в лимфатических узлах, костном мозге, фолликулах селезёнки, макрофагах, гепатоцитах. Повреждение печени обусловлено, в основном, за счёт иммунного лизиса; также вирус оказывает прямое цитопатическое действие. Сходство антигенов вируса с антигенами системы гистосовместимости человека обусловливает возникновение аутоиммунных («системных») реакций.

Поверхностные (HBsAg) и сердцевинные (HBcAg) белки вируса являются антигенами, обусловливая выработку anti-HBs и anti-HBс соответственно. Сердцевинный антиген, попадая в кровь, расщепляется на более устойчивые составные части, одна из которых HBe-Ag также несёт антигеные свойства. На неё и вырабатываются anti-HBe антитела. Генетическая изменчивость HВV способствует «ускользанию» вируса из-под иммунного ответа. С этим связаны трудности в лабораторной диагностике (серонегативный гепатит В), а также хронизация заболевания. Появление атипичных участков ДНК в геноме вируса приводит к фульминантному течению гепатита В.

Инкубационный период в среднем составляет 50 дней, но может растягиваться до 6 месяцев. В конце инкубационного периода повышаются уровни печёночных трансаминаз, увеличиваются печень и селезёнка. Возможно повышение концентрации билирубина до 2 — 2,5 нормальных значений, хотя это не приводит к потемнению мочи. Встречаются гриппоподобный, артралгический, диспептический или смешанный варианты клинического течения продромы. Наиболее неблагоприятным является течение продромы по типу сывороточной болезни (зуд, мигрирующие околосуставные высыпания).

Острый период (2 — 12 дней) протекает с интоксикационным синдромом: снижением аппетита, диспепсией, инверсией сна. В трети случаев возникает желтуха: резко повышается уровень билирубина, слизистые оболочки и кожа окрашиваются в различные оттенки жёлтого цвета, появляется зуд. Наиболее тревожным симптомом является снижение протромбинового индекса и альбумина крови, свидетельствующие о печёночно-клеточной недостаточности. Осложнение заболевания печёночной энцефалопатией свидетельствует об острой гепатодистрофии. Бурный гуморальный иммунный ответ зачастую приводит к появлению иммунных комплексов, оседающих на эндотелии сосудов почек, щитовидной железы, половых органов и др. Возникают васкулиты. В программе системных проявлений HBV-инфекции могут возникать аутоиммунный тиреоидит, хронический гастрит, синдром Шегрена, идеопатическая тромбоцитопеническая пурпура, узелковый периартериит, гломерулонефрит, синдром Гийена Барре, ревматоидный артрит и др.

Фаза выздоровления характеризуется исчезновением признаков холестаза, нормализацией процессов обмена веществ, восстановлением функции печени, на первый план выходят системные проявления заболевания. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит В имеет более системный характер, менее благоприятно протекает у детей. Хроническое течение возникает в 5% случаев. «Здоровые носители» HBsAg, также как и больные хроническим гепатитом В, подвержены высокому риску развития цирроза печени и гепато-целлюлярной карциномы. Системные проявления не всегда исчезают вместе с излечением гепатита В.

Разработанные на сегодняшний день вакцины не вызывают вакцино-обусловленного гепатита В, т. к. представляют собой генно-инженерный HBs-антиген. Однако вакцинопрофилактика обеспечивает защиту от гепатита В только на 5 — 7 лет. До вакцинации, по итогам вакцинации и по прошествии 5 лет после вакцинации необходимо исследовать уровень anti-HBs-антител.

Источник

Среди всего населения планеты у 2 млрд человек в крови выявлен поверхностный антиген вируса гепатита В. Каждый год регистрируются десятки тысяч новых случаев заражения. Поэтому для профилактики распространения инфекции серологический скрининг назначают всем обратившимся за медицинской помощью и группе лиц, находящихся в зоне риска.

Среди вашего окружения есть больные Гепатитом В?

ДаНет

Что такое антигены вируса гепатита В?

Иммунитет здорового человека активизируется при появлении в организме чужеродных агентов. В ответ на антигенные свойства возбудителей болезней вырабатываются защитные антитела. Причиной инфицирования HBV-инфекцией становится проникновение в кровь инфицирующей дозы ДНК-вируса.

Вирусный штамм обладает чрезвычайно высокой вирулентностью, инфицирующая доза содержится в 0,0000001 мл сыворотки.

Расположение антигенов вируса гепатита В

От начала инфицирования в серологических тестах можно обнаружить разные типы антигенов и соответствующих им антител, по которым судят о стадии инфекционного процесса. В составе вирусной частицы ВГВ различают 4 типа антегенов:

поверхностный HBSAg находится среди молекул суперкапсида (внешней фосфолипидной мембраны вириона);
сердцевинный HBCoreAg содержится в ядре (core);
HBeAg совместно с геномом включен во внутреннюю ядерную часть (нуклеокапсид). Положительное значение в анализе свидетельствует об активной репликации вирусного ДНК.
HBxAg до конца не изучен. В начале инфекции обнаружить нельзя, появляется при хронизации процесса. По мнению ученых влияет на развитие первичного рака печени — гепатоцеллюлярной карциномы.

Поверхностный антиген

Поверхностный антиген вируса гепатита В отвечает за проникновение возбудителя в гепатоциты. Это первый серологический маркер, который появляется в крови. Достигает максимального титра к четвертой недели и циркулирует в сыворотке до 6 месяцев.

Из-за постоянной генетической изменчивости HBSAg возбудителю свойственна неоднородность в разных регионах планеты. Мутации S-гена приводят к формированию генотипов инфекции, на сегодня их зарегистрировано восемь. В России до 93% случаев инфицирования числятся с генотипом D.

Мутационные штаммы являются причиной неэффективности вакцинации против ВГВ.

Ядерный антиген

Тестирование сыворотки для выявления HBeAg проводится только в случае положительного поверхностного HBSAg для подтверждения диагноза. Наличие в крови антигена доказывает инфицированность человека. Подтверждается почти у 95% зараженных лиц в начале желтушного периода. При благоприятном течении болезни АГ исчезает при прогрессировании симптомов и к нему появляются АТ.

Обнаружить HBCAg при проведении ИФА нельзя, так как он локализуется внутри гепатоцитов. Подтвердить его можно только при биопсии печеночной ткани, что не оправдано из-за сложности инвазивной процедуры. Наиболее информативны антитела: anti-HBCAg IgM и IgG.

Среди четырех антигенов именно HBCAg обладает максимальной иммуногенностью, как чужеродный агент, он первым активизирует иммунитет на ответную реакцию.

Антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В

В ответ на появление в крови поверхностного антигена, указывающего на положительный гепатит В, иммунная система начинает продуцировать anti-HBS двух видов:

IgM свидетельствуют о начале периода выздоровления, диагностируются 1—2 месяца и пропадают.

IgG наибольшие значения отмечаются через 1—2 года, в течение 10 лет титр постепенно падает. Постинфекционный иммунитет не устойчив, человек может заразиться снова.

Выявление АТ к поверхностному антигену помогает в составлении прогноза болезни:

благоприятный прогностический признак отмечается при появлении anti-HBS на фоне клинических улучшений;
неблагоприятный формируется при исчезновении anti-HBS в преджелтушном и желтушном периоде. В таких случаях быстро развивается паренхиматозная дистрофия.

Для формирования иммунитета к болезни вакцинацию проводят рекомбинантным HBSAg. В ответ на введение количество антител anti-HBS нарастает и колеблется на уровне 10 МЕ/мл в течение 10 лет.

Антигены вирусы гепатита В и взаимодействие с ними антител

Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В

В серологических анализах на гепатит В особая диагностическая ценность принадлежит антителам к вирусу, так как самого HBCORAg в крови нет. Иммуноглобулины класса М (anti-HBCOR IgM) присутствуют в плазме до 18 месяцев.

Доноров тестируют на наличие anti-HBCOR (total). Для выбраковки донорского биоматериала достаточно присутствия суммарного количества иммуноглобулинов без учета их класса.

Маркер anti-HBCOR IgG у лиц переболевших HBV, носителей HBSAg и больных с хронизацией процесса присутствует в крови пожизненно. Поэтому для диагноста это более информативный показатель, чем anti-HBS.

Поверхностный антиген вируса гепатита В положительный: что это значит?

Тестирование на выявление HBSAg назначают отдельно или в комплексе с анализами на другие маркеры инфекции. Поверхностный антиген сохраняется в крови на протяжении начального периода заболевания. Наибольшее значение отмечается за 1—2 недели до окончания инкубационного периода.

Появление положительного результата свидетельствует о:

начале острой стадии вирусного гепатита В;
заключительной стадии острого периода;
«здоровом» носительстве;
хроническом течении без признаков повреждения гепатоцитов;
сероконверсии (выработке иммуноглобулинов к ВГВ).

Всегда существует вероятность ложноположительных результатов к вирусу гепатита, при выявлении поверхностного АГ исказить ответ может:

некачественная или нечувствительная тест-система;
онкология;
аутоиммунные заболевания и другие инфекции.

Что делать при обнаружении антител к антигенам вируса гепатита Б?

Точный диагноз HBV-инфекции по одному положительному ИФА не устанавливают. Врач-инфекционист дополнительно назначает:

повторную серодиагностику;
ПЦР для выявления генетического материала;
биохимический анализ;
УЗИ печени.

Носителям HBV-инфекции сдавать биоматериалы для донорства запрещено.

Своевременная диагностика факта инфицирования улучшает прогноз для больного, так как клинические формы многообразны: от бессимптомного течения до быстропрогрессирующего цирроза.

Инфицированных больных в острой стадии и при обострении хронической формы госпитализируют для лечения в инфекционный стационар согласно санитарным правилам 3.1.1.2341-08 «Профилактика вирусного гепатита В». У лиц с установленным периодом ремиссии противовирусная терапия проходит в амбулаторно-поликлинических условиях.

Массовые обследования людей на выявление поверхностного антигена HBV необходимы, так как только 15% случаев инфицирования заканчиваются выздоровлением.

При хронизации процесса современные препараты поддерживают качество жизни больного человека, но не исключается риск возникновения фиброзных изменений в печени, печеночной недостаточности и гепатокарциномы.

( 3 оценки, среднее 5 из 5 )

Источник

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

острых и хронических заболеваниях печени;

желтухе неясного генеза;

обследовании перед хирургическими вмешательствами;

стандартном обследовании доноров крови;

постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

прохождении гемодиализа;

профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

незащищенном сомнительном половом контакте;

рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;

По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;

3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

выполненной накануне вакцинации;

при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

опухолевом процессе;

инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Источник