Метод ифа при диагностике вирусного гепатита а

Для диагностики вирусного гепатита в рамках медицинского протокола используется несколько лабораторных и инструментальных методик. Одной из самых достоверных является иммуноферментный анализ (ИФА). Метод помогает определить наличие антигена к тому или иному виду вируса. Для этого выполняется стандартная процедура забора крови из вены пациента. Результаты становятся известны уже через неделю после взятия анализа.

Метод ифа при диагностике вирусного гепатита а

Что такое ИФА?

Термин расшифровывается как «иммуноферментный анализ». Он подразумевает определение в крови комплексов антиген-антитело для уточнения этиологии возбудителя. Если это вирус, определяются его виды и подвиды. Антигены — это частички на поверхности клеток возбудителей, связывающиеся с определенными участками антител. Последние являются иммунными молекулами, вырабатываемыми организмом для собственной защиты. Антигены и антитела неповторимы, поэтому определение их структуры с помощью иммуноферментного анализа свидетельствует о наличии конкретной патологии в организме больного. В качестве меток используются ферменты, которые и дали название методике.

Вернуться к оглавлению

Плюсы исследования

ИФА — это высокоточная методика, ее чувствительность достигает 90%. Она помогает проводить скрининг парентеральных гепатитов. Эти заболевания передаются путем инъекции, или через переливание крови. ИФА помогает выявить пациентов, у которых отсутствуют симптомы. Таковыми является большинство хронических больных. Они имеют риск развития цирроза. Его обнаружение на поздних стадиях — это плохой прогноз. Поэтому иммуноферментная методика позволяет своевременно определить заболевание и сэкономить деньги на лечение. ИФА верифицирует этиологию возбудителя и определяет прогноз недуга. Диагностические наборы для нее стоят недорого и длительно хранятся. За быстроту, удобство и точность данных ИФА называют экспресс-методом.

Вернуться к оглавлению

Когда нужен анализ?

Метод ифа при диагностике вирусного гепатита аДля определения вида вируса необходимо сдать ИФА.

ИФА необходим, когда требуется уточнить этиологию вирусного возбудителя для определения схемы лечения. У пациента идентифицируют наличие хронического гепатита B и C, или перенесенного заболевания вирусом подтипа A. Методику нужно применять у членов семьи больного, которые могут заразиться. В инфекционном стационаре анализ выполняется всем пациентам, у которых присутствуют такие симптомы:

  • Желтуха. Желтушность кожных покровов не сопровождается болями в правом подреберье и изменением цвета стула и мочи.
  • Повышение температуры тела. Она вырастает до субфебрильных цифр, иногда наступает лихорадка.
  • Диспепсия. Присутствуют тошнота и рвота, которая не приносит облегчение.
  • Немотивированная слабость.
  • Мелкоточечные высыпания на теле. Это мелкие кровоизлияния вследствие печеночной недостаточности.
  • Тяжесть в правом подреберье. Симптом возникает вследствие растяжения увеличенной печенью собственной капсулы, содержащей множество нервных окончаний.

Основным показанием к выполнению анализа является наличие определенных анамнестических данных. Если пациент ранее страдал инъекционной наркоманией, ему переливали кровь или пересаживали органы — это повод выполнить ИФА.

Вернуться к оглавлению

Подготовка к проведению

Чтобы результаты ИФА были достоверными, требуется предварительно подготовиться. За день до сдачи крови пациенту рекомендуется перестать употреблять жирную и жареную пищу, продукты с высокой концентрацией красителей, стабилизаторов, консервантов, усилителей вкуса и аромата. Нежелательно непосредственно перед выполнением метода заниматься тяжелым физическим трудом и спортивными упражнениями. В день сдачи крови необходимо воздержаться от завтрака. Забор материала натощак позволит получить точный результат. Необходимо исключить из употребления некоторые лекарственные средства. Но самостоятельно это делать не рекомендуется, поскольку есть вероятность вреда для здоровья. Нужна предварительная консультация лечащего доктора.

Вернуться к оглавлению

Методология проведения

Метод ифа при диагностике вирусного гепатита аМетод ИФА.

Метод ИФА состоит из двух этапов. На первом выполняется забор материала, на втором последний исследуется в лаборатории. Начальный этап проходит стандартно. Ему предшествует подготовка пациента к сдаче крови. В стерильном помещении проводится забор биоматериала, отправляемый в герметических контейнерах на лабораторное исследование. Дальнейшее определение комплексов антиген-антитело происходит с помощью ферментов и тест-систем на специализированном оборудовании. Результат становится известен в течение недели и отправляется пациенту на электронную почту.

Вернуться к оглавлению

Расшифровка показателей

Интерпретация данных подразделяется на качественную и количественную. При качественном определении результаты анализа считаются позитивными, если обнаружены суммарные антитела к определенному подтипу вируса. Выявление anti-НАV IgМ свидетельствует про острый, а anti-НАV IgG — хронический гепатит А. Позитивный маркер НВsAg — признак инфицирования вирусом подтипа В. Он наблюдается в острой и хронической фазах заболевания. Если же выявлен HBCAg, у человека присутствует хронический гепатит С. А anti-НDV сигнализирует про инфицирование подвидом D. Пациенты, у которых определен положительный маркер к вирусу, нуждаются в дальнейшем обследовании для более точной верификации диагноза.

Источник

Современная диагностика вирусного гепатита А. Антигены HAV

Вирус гепатита A (Hepatis A virus) идентифицирован S. Feinstone с соавторами в 1973 году. Вирус гепатита A (HAV) относят к роду Hepatovirus семейства Picornaviridae. Известно почти 30 разных штаммов и 7 генных подтипов вируса. Штаммы, выделенные на территории России, принадлежат к подтипу 1А. Все генотипы HAV имеют один и тот же антиген (НА Ag), что определяет их принадлежность к одному серотипу и моноклональный характер вырабатываемых против них антител (anti — HAV).

Читайте также:  Как не заразиться гепатитом при поцелуе

Морфологически HAV представляет собой сферические частицы диаметром 27-30 нм, которые построены по типу икосаэдрической симметрии, лишены оболочки. Вирусный геном представлен одноцепочечной рибонуклеиновой кислотой (RNA HAV), состоящей из приблизительно 7500 нуклеотидных оснований. Белковая оболочка (капсид) HAV построена из копий структурных протеинов.

В условиях лаборатории репликация вируса в культуре тканей не сопровождается цитолитическим действием, не подавляется ингибиторами роста пикорнавирусов (гуанидином, 2-альфа-гидросибензил-бензимидазолом). В материалах от больных и в препаратах из зараженных HAV тканевых культур могут обнаруживаться как зрелые, содержащие полноразмерную RNA HAV, так и дефектные вирионы, не содержащие или содержащие отдельные ее фракции.

Этиологическая диагностика вирусного гепатита А основана на выявлении самого возбудителя, антигенов вируса и специфических антител классов IgM, IgG.

гепатит А

Вирус гепатита A (HAV) присутствует в фекалиях инфицированных в последние дни инкубационного периода и на ранних стадиях болезни. В последние годы для обнаружения вируса используются чувствительные методы (РИА, ИФА). Было установлено, что вирус обнаруживается как в инкубационном периоде, так и в течение трех недель желтушного периода. Причем, если в конце инкубационного периода HAV определяется у 100% больных, то к концу 3 недели желтушного периода — только у 5% больных.

Особенностью экскреции HAV состоит в том, что наблюдается цикличность выделения Ag-содержащих и Ag-несодержащих порций материала.

Считалось, что вирусный антиген не является диагностически информативным, так как циркулирует кратковременно, как правило, в инкубационном периоде заболевания. Внедрение метода ПЦР для детекции RNA HAV позволило установить возможность продолжительность (до 500 дней и более) циркуляции RNA HAV в крови переболевших виру ным гепатитом A (CostaMattioli с соавторами, Normann с соаторами).

Для определения маркеров вируса гепатита А в крови пациентов разработан также метод ПЦР с обратной транскрипцией. По данным А. М. Глухова с соавторами, разработанный ими метод RT-PCR (гнездовой ПЦР) в основном подтверждал результаты, полученные методом ИФА и может служить дополнением к нему. Высокая активность аминотрансфераз коррелировала с высоким содержанием RNA HAV в крови пациентов.

У контактного с больным вирусным гепатитом А при отсутствии каких-либо клинико-лабораторных признаков заболевания была идентифицирована RNA HAV, что, по мнению авторов, можно расценивать как предпосылку для использования метода гнездовой ПЦР для превентивной диагностики, оценки эпидемиологической ситуации и организации противоэпидемических мероприятий в очаге.

В повседневной клинической практике подтверждением диагноза вирусного гепатита А служит обнаружение в сыворотке крови антител к HAV класса IgM. Данные антитела достигают максимальной концентрации и циркулируют в течении 4-5 недель. Затем титры антител снижаются в течение 6-8 недель до неопределяемого уровня. Обнаружение anti-HAV IgM является ранним и надежным тестом, подтверждающим клинигеский диагноз. Антитела класса IgG появляются с 3-4 недели, сохраняются в течение длительного времени и могут служить маркером ранее перенесенного вирусного гепатита А (анамнестические) или поствакцинального иммунитета.

Обследование контактных в огагах детских коллективов должно включать одновременное исследования anti-HAV IgM и активности аминотрансфераз. Положительный тест на антитела класса IgM у детей с повышенной активностью АЛТ и ACT не вызывает сомнений в диагнозе вирусного гепатита А. Клинические данные позволяют уточнить период гепатита (в том числе преджелтушный, реконвалецентный), выявить источник, оценить эпидемиологическую ситуацию в очаге, определяющую срочные и потому эффективные противоэпидемические мероприятия.

Видео лабораторная диагностика вирусных гепатитов

Посетите раздел других видео уроков по эпидемиологии.

— Вернуться в оглавление раздела «гепатология — заболевания печени»

Оглавление темы «Диагностика вирусных гепатитов»:

  1. Подтверждение или исключение гепатита D и гепатита С у детей
  2. ИФА в диагностике вирусных гепатитов. Возможности иммуноферментного анализа
  3. Вирус гепатита В и его антигены
  4. Мутации вируса гепатита В. Генетическая изменчивость ВГВ
  5. Заражение гепатитом В после прививки. Иммунитет к вирусу гепатита В
  6. Варианты HBsAg гепатита В и их распространение
  7. Современная диагностика гепатита В. Выявление HBsAg
  8. Вирус гепатита С и его геном
  9. Белки и антигены вируса гепатита С. Диагностика ВГС
  10. Современная диагностика вирусного гепатита А. Антигены HAV

Источник

Гепатит А считается врачами относительно мягкой формой инфекционного процесса из-за редких случаев хронизации заболевания, но в последнее время этот недуг приобретает более широкое распространение. Вирусный гепатит А является наиболее распространенной формой гепатита. Микробиологические исследования доказали, что передается от человека к человеку инфекция  парентальным путем, с пищей и питьем.

Читайте также:  Склер при гепатите в фото

В некоторых случаях может иметь место молниеносный гепатит, такая разновидность патологического процесса способна закончиться смертельным исходом. По этой причине пускать развитие недуга на самотек нельзя.

Развитие болезни происходит в три этапа:

  • преджелтушная;
  • разгара болезни — желтушная;
  • реконвалесценции – выздоровления.

Сразу после инфицирования начинается инкубационный период, в течение которого, изменения не выявляются, этот период характеризуется накоплением вирусных частиц в организме.

Патогенез гепатита А сопровождается формированием в организме больного различных синдромов, представляющих собой комплексы симптомов, свидетельствующих о возникновении различных нарушений провоцируемых интоксикацией.

Проведение первичной диагностики

Диагностика гепатита А предполагает использование нескольких диагностических методов. При появлении подозрений на наличие указанной инфекции больной в первую очередь должен обратиться к врачу-инфекционисту для проведения экспресс-теста.

Осуществление первичного обследования у врача

Для диагностирования наличия заболевания инфекционисту достаточно провести беседу с пациентом, в процессе которой выясняются особенности способа жизни человека. После проведения беседы врач осуществляет осмотр больного, обследует печень методом пальпации и ставит первичный диагноз.

Так как большинство симптомов у различных типов вирусных инфекций сходны между собой, поэтому требуется лабораторная диагностика гепатитов.

После первичного осмотра и обследования врач дает направление на анализы.

Проведение лабораторной диагностики гепатита А во многом сходно с лабораторной диагностикой гепатита С.

При проведении первичной диагностики вирусного гепатита А показательной будет следующая информация:

  1. Посещал ли пациент в последнее время страны Азии и Африки, где недостаточно развита работа коммунальных служб. Это связано с тем, что передача инфекции осуществляется пищевым и водным путем.
  2. Соблюдает ли человек элементарные гигиенические правила.
  3. Важной является информация о том, контактировал ли пациент с больными гепатитом А.

На основании полученной информации врач может сделать предварительное заключение и проводить дальнейшую диагностику заболевания. Одновременно с проведением осмотра врач выясняет, как осуществляет функционирование пищеварительная система пациента, присутствуют ли признаки мышечной интоксикации. При проведении процедуры пальпирования доктор определяет размеры печени.

Очень часто течение заболевания происходит в безжелтушной форме, но опытный врач проводит осмотр склер глаз, появление даже небольшой желтушности говорит о возможном факте инфицирования организма.

Применение экспресс-теста в диагностике

В качестве первичного метода диагностики на наличие у пациента вирусной инфекции можно использовать экспресс-тест на определение антигена вируса гепатита А в составе кала или крови.

Фармацевтическая промышленность предлагает использовать два вида тестовых наборов – тест компании Vegal и иммуноферментные тест-системы Vintrotest Vitrotest HAV-IgM TK069.

Первая разновидность экспресс-тестов включает в своем составе весь комплект необходимых реактивов и инструментов. Для проведения исследования требуется не более 15 минут. Этот способ не дает 100% точности.

Иммуноферментные тест-системы Vintrotest Vitrotest HAV-IgM TK069 позволяют достаточно быстро определить присутствие антител IgM к вирусным частицам. Это исследование позволяет получить результат в домашних условиях уже через 15 минут.

Использование результатов гемотестов, несмотря на большое количество положительных отзывов о них, не могут использоваться в качестве единственного способа проведения диагностики.

После использования такого метода рекомендуется  провести дополнительные лабораторные исследования. Помимо этого, в связи с тем, что появляющиеся симптомы могут свидетельствовать о наличии в организме не только гепатита, а также, например, у взрослых людей алкогольного гепатоза и некоторых других заболеваний печени. По этой причине требуется проведение дифференциальной диагностики. Дополнительно нужно установить какая разновидность вируса поразила организм и спровоцировала появление болезни.

Анализы при диагностике гепатита А

Проведение диагностических мероприятий при подозрении на наличие патологии требует проведения целого комплекса исследований.

При диагностировании недуга применяются лабораторные и инструментальные методы проведения исследований.

Использование клинических способов диагностирования патологии

Показательные данные позволяет получить биохимический анализ крови и мочи.

В том случае, если выявлены повышенный билирубин, а также увеличенная концентрация печеночных ферментов, то это означает, что развивающийся в организме гепатит уже привел к нарушению работы клеток печеночной паренхимы.

Проведение детальной расшифровки анализа крови и мочи позволяет определить в некоторых случаях степень повреждения печени и организма в целом.

Наиболее показательными лабораторными методами диагностики гепатита А являются:

  • анализ мочи;
  • общий анализ крови;
  • биохимия крови;
  • коагулограмма.

Лучше всего сдавать анализы натощак, это позволит получить наиболее точные результаты.

Присутствие вируса в организме можно увидеть по анализу мочи, при появлении в ней билирубина, она начинает светлеть. У здорового человека в моче оно не выявляется, при наличии гепатита А наблюдается повышение концентрации в составе мочи уробилиногена. При тяжелом течении патологии в моче выявляется наличие низкомолекулярных плазменных белков, которые не должны выявляться в моче здорового человека.

Читайте также:  Антиген инфекционности вируса гепатита в

При общем анализе крови при гепатите А наблюдается снижение концентрации гемоглобина и лейкоцитов. Помимо этого фиксируется снижение концентрации тромбоцитов. Эти изменения свидетельствуют о наличии аномальных процессов в печени.

Биохимия крови позволяет выявить отклонения в концентрации печеночных ферментов. Такие отклонения свидетельствуют о патологических нарушениях в функционировании печени и разрушении гепатоцитов.

После проведения первичного осмотра и лабораторных анализов можно поставить диагноз, но для качественной диагностики требуется проведение дополнительных тестов и исследований.

Использование лабораторных методов

После ряда анализов врач-инфекционист направляет больного для количественных и качественных обследований гепатита А.

Существует ряд методик, позволяющих определить количество вируса в организме и степень его агрессивности.

Наиболее распространенными методами проведения такой диагностики являются:

  1. Иммуноферментная диагностика.
  2. Ультразвуковое исследование.
  3. Полимеразная цепная реакция.

Наиболее точной и специфической диагностикой является выявление РНК вируса в крови при помощи ПЦР.

Применение иммуноферментного обследования

Для точного определения наличия антител к вирусу необходимо проверить кровь на маркеры. Специфическими маркерами являются иммуноглобулины класса М анти-HAV IgM. Наличие этого компонента можно установить с первых дней после проникновения патогена в организм при помощи методики ИФА.

Иммуноглобулины появляются в организме больного в первые месяцы развития патологии. Выработка антител у больного происходит в независимости от тяжести, формы и симптомов болезни. Эти антитела носят название ранних, это связано с тем, что спустя полгода после инфицирования их уже невозможно выявить методом ИФА в организме. Спустя 6 месяцев наблюдается их возврат в крови пациента, после возвращения анти тела способны сохраняться в составе крови на протяжении всей жизни.

Наличие указанных антител к вирусу является доказательством того, что человек инфицировался гепатитом А и у него выработался иммунитет к этому патогену. Аналогичные антитела появляются у человека, если ему делалась прививка против вируса в качестве профилактики развития патологии.

Для определения наличия маркеров требуется сдать кровь для проведения лабораторных тестов. Сотрудники клинической лаборатории в процессе проведения тестов имеют возможность выявить не только само наличие антител, но и их количество в организме пациента.

Эта методика определения патологии относится к высокоточным лабораторным методам, требующим наличие специального оборудования и реактивов.

Проведение ультразвукового исследования

Применение ультразвукового исследования позволяет выявить наличие нарушений вызванных инфекционным процессом в структуре и форме печени. Такие нарушения являются частым спутником при развитии у человека гепатита А.

В процессе исследования выявляется наличие пятен на органе что говорит о повышении эхогенности, наличие уплотнений может свидетельствовать о развитии в печени цирроза.

УЗИ может помочь диагностировать присутствие в железе любых серьезных изменений на самых ранних стадиях их прогрессирования. Так, например, при помощи ультразвука выявляются нарушения, возникающие в результате развития холестаза и цитолиза гепатоцитов.

УЗИ может быть назначено человеку для подтверждения наличия вирусной инфекции даже в случае наличия у него на руках результатов ИФА, это требуется для того чтобы определить полную картину развивающихся патологических изменений в тканях железы.

Для получения максимально точной картины нарушений УЗИ рекомендуется проводить натощак, а за два дня до процедуры исключить из рациона питания такие продукты как:

  • горох;
  • фасоль;
  • свежие фрукты;
  • молоко;
  • капусту;
  • соки.

Исключение указанных компонентов из рациона связано с тем, что они усиливают процессы газообразования, а это в свою очередь приводит к неточностям при проведении ультразвукового обследования.

Осуществление обследования ПЦР

Метод ПЦР дает возможность определить уровень нуклеиновых кислот и присутствие чужеродной ДНК или РНК.

Использование ПЦР позволяет выявить генетический материал патогена еще на самой начальной стадии, когда в составе крови отсутствуют антитела. Эта методика диагностики является наиболее многогранной и точной, что позволяет проводить наиболее раннюю диагностику заболевания.

Использование этого метода оправдано в тех случаях, когда требуется получение наиболее точного результата в максимально короткие сроки для предотвращения распространения инфекционного процесса.

Недостатком методики является высокая стоимость инструментов необходимых в процессе анализа, а также его недоступность в целом ряде стран с высокой степенью распространения вирусной инфекции.

Методика ПЦР дает возможность определить чувствительность вируса к определенным противовирусным препаратам и определяет точное расположение очагов заболевания – мест наибольшего скопления частиц патогена. Наличие у лечащего врача такой информации позволяет подобрать наиболее оптимальный вариант проведения терапевтических мероприятий.

Специфичность методики составляет около 98%. Наличие у ПЦР высокой степени чувствительности позволяет его использовать, как наиболее показательный при проведении диагностики гепатита А.

Источник