Патенты крысы цирроз печени этанол
Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и может быть использовано для изучения токсических поражений печени в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов и в разработке новых способов лечения цирроза печени. Способ представляет собой введение в желудок лабораторного животного два раза в неделю в течение месяца 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ного раствора этанола вместо воды для питья. Способ позволяет повысить воспроизводимость и упростить способ, сократить срок моделирования цирроза печени и приблизить к клиническому течению данной патологии. 4 табл. Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии, может быть использовано для изучения токсических поражений печени, в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов и в разработке новых способов лечения данной патологии. Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому изобретению является способ создания модели гепатита и цирроза печени млекопитающих (см. а. с. 94026117, G 09 В 23/28, БИ 24, 1996), где в качестве химического вещества берут формалин и вводят его путем вдыхания воздуха, содержащего 17,5-18,5 мг/л формалина. Известный способ моделирования цирроза печени является продолжительным и трудоемким: ежедневные ингаляционные опыты в течение 7 месяцев. Кроме того, 70%-ный раствор формалина представляет собой водный раствор формальдегида, который обладает резко выраженным раздражающим и сенсибилизирующим действием, средняя смертельная концентрация для крыс 588 мг/м3. Предельно допустимая концентрация паров формальдегида в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/м3, 2 класс опасности. Вещество остронаправленного механизма действия, способное вызывать аллергические заболевания в условиях производства и требующее автоматического контроля за его содержанием в воздухе. При концентрации формалина 17,5-18,5 мг/л (или 17500-18500 мг/м3) возможно развитие острого отравления всего организма с воспалительными и некробиотическими изменениями слизистых оболочек верхних дыхательных путей и легких. В условиях производства хроническое воздействие высоких концентраций формалина недопустимо. Техническим результатом изобретения является повышение воспроизводимости и упрощение способа, сокращение сроков моделирования цирроза печени и приближение к клиническому течению данной патологии печени. Технический результат достигается тем, что в желудок лабораторного животного 2 раза в неделю в течение месяца вводят 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и ежедневно в течение месяца вместо воды для питья дают 10%-ный раствор этанола. Для определения кратности введения 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле и его количества для моделирования цирроза печени был проведен эксперимент на животных, полученные данные сведены в табл. 1. Одновременно в течение всего эксперимента животным давали вместо воды 10%-ный раствор этанола. Из таблицы 1 видно, что при кратности введения 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле два раза в неделю воспроизводится надежная модель цирроза печени без гибели животных. Повышение воспроизводимости формирования хронического патологического процесса в печени и сокращения сроков опыта достигается при использовании совтола-1 и 10%-ного этанола в качестве питья вместо воды, за счет потенцирования гепатотоксического эффекта. Экспериментальный цирроз печени подтвержден морфогистохимическими и биохимическими показателями. Способ моделирования цирроза печени осуществляется следующим образом. Лабораторному животному два раза в неделю в течение месяца вводят в желудок зондом 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела. На протяжении всего эксперимента ежедневно для питья дают 10%-ный раствор этанола. Готовят: 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 1 часть совтола-1 и 2 части оливкового масла, перемешивают и вводят в желудок зондом, а 10%-ный раствор этанола для питья готовят путем разведения 96o этилового спирта. ПРИМЕР . Крысе, 180 г, 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле вводился из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела дважды в неделю в течение одного месяца, на протяжении эксперимента для питья животному давали 10%-ный раствор этанола. В течение всего опыта не отмечено каких-либо изменений внешнего вида и поведения животного, кроме частичного отказа от пищи. По истечении одного месяца проведена декапитация животного. Морфогистохимический анализ кусочков печени показал развитие хронического патологического процесса, основным проявлением которого является цирроз печени. Это подтверждается увеличением относительной массы печени и развитием в печеночной паренхиме фиброза и цитолиза. На гистологических препаратах печени поля фиброза занимают 3,1% среза, у интактной крысы на долю соединительной ткани приходится 0,5%. Гепатоциты локализованы преимущественно в перипортальной зоне, находятся в состоянии белковой и жировой дистрофии. Определяется дискомплектация печеночных балок, пролиферация соединительной ткани в портальных трактах с проникновением фиброзных тяжей в глубь долек. В поле зрения большое количество некротизированных гепатоцитов, отек и разрыхление стремы, в клеточном инфильтрате наблюдаются лимфоциты. При морфометрии препаратов печени выявлено снижение ядерноцитоплазматического отношения, отклонения стромы к паренхиме (см. табл.2). Гистохимический анализ ткани печени показал увеличение активности кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы и снижение активности АТФазы. Экспериментальный цирроз печени подтверждается также изменениями биохимических показателей: увеличением содержания изолированных двойных связей, диеновых коньюгатов, триеновых конъюгатов, глюкозоаминогликанов в ткани печени (см. табл.3). Кроме того, наблюдается увеличение количества оксипролина во фракциях коллагена кислоторастворимого и кислотоустойчивого. В сыворотке крови выявлено повышение активности ферментов: аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы. Предлагаемым способом воспроизводится надежная модель цирроза печени, что подтверждено морфогистохимическим анализом печени и биохимическими показателями. Модель позволяет изучать тяжелый хронический процесс в печени в динамике его развития. Предлагаемый способ моделирования цирроза печени в сравнении с известным (см. табл. 4) позволяет повысить воспроизводимость моделирования при сокращенных сроках опыта и в более упрощенном виде приблизиться к клиническому течению цирроза печени вследствие развития необратимых структурных и функциональных изменений в гепатоцитах, что подтверждено морфогистохимическим анализом, биохимическими показателями и оценкой поведения животных.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ моделирования цирроза печени путем введения химических веществ лабораторному животному, отличающийся тем, что в желудок вводят два раза в неделю в течение месяца 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ный раствор этанола вместо воды для питья.
Source: www.freepatent.ru
Источник
Хроническая алкогольная интоксикация является этиологическим фактором не менее чем 50% всех циррозов печени. Заболевание развивается в среднем у 1/3 больных алкоголизмом, обычно через 10-15 лет после начала злоупотребления алкоголем. Средний возраст больных с впервые установленным диагнозом составляет 40-50 лет.
Большинство больных скрывают свой алкогольный анамнез, поэтому часть циррозов алкогольной этиологии относят к криптогенным. Признание больного в том, что он пьет «в меру», «как все», в совокупности с клинико-лабораторными данными имеет диагностическое значение. Трудности диагностики алкогольного цирроза обусловлены также частым (в 25-50% случаев) длительным сохранением у больных удовлетворительного самочувствия, обусловленного наркотизирующим действием алкоголя, постепенным снижением способности к критике. Астенический синдром вне эпизодов острого алкогольного гепатита наблюдается при алкогольном циррозе реже, чем при циррозе печени вирусной этиологии. Жалобы нередко отсутствуют или неспецифичны: диспепсические явления (снижение аппетита, тошнота, изжога) и боль в верхней половине живота. В связи с этим решающее значение имеет выявление у больного неврологических и психических признаков алкоголизма, гепатомегалии (спленомегалия на начальных этапах алкогольного цирроза наблюдается значительно реже, чем при вирусном циррозе печени).
При алкогольном циррозе чаще, чем при вирусном, бывают анорексия, боль в правом подреберье и болезненность печени, выраженная гепатомегалия, кожные телеангиэктазии, расширение концевых фаланг пальцев в виде барабанных палочек, гинекомастия, геморрой, атрофия яичек и импотенция, периферическая невропатия, потеря в массе тела и диспепсический синдром, связанный с действием алкоголя на пищеварительный канал или сопутствующим алкогольным панкреатитом. В редких случаях наблюдают сочетание алкогольного цирроза алкогольной этиологии с алкогольной кардиомиопатией, признаками которой являются кардиомегалия, кардиалгия, резистентная к лечению сердечными гликозидами, сердечно-сосудистая недостаточность и часто нарушениями ритма сердечной деятельности. Часто наблюдается атрофия скелетной мускулатуры.
При лечении цирроза печени алкогольной этиологии необходимым условием является отказ от алкоголя. Абстиненция повышает пятилетнюю выживаемость больных циррозом печени с 30% до 70%.
Типичная черта алкогольного цирроза — белковая и витаминная недостаточность (особенно витаминов группы В и фолиевой кислоты), иммунодефицит. Поэтому среди лечебных мероприятий наряду с полным отказом от приема алкоголя назначают заместительную витаминотерапию: поливитамины, содержащие витамины группы В, в том числе фолиевую кислоту, («В-комплекс Мульти-табс»), жирорастворимые витамины А, Е (а-токоферол), устраняющие вторичный иммунодефицит и являющиеся антиоксидантами. Одним из рекомендуемых поливитаминных препаратов, содержащих полный набор водо- и жирорастворимых витаминов является альвитил, «Мульти-табс с ß-каротином».
Алкоголь и его первый метаболит ацетальдегид являются инициаторами супероксидации мембранных образований клеточных и субклеточных мембран гепатоцита, прежде всего микросомальной фракции, ответственной за детоксическую функцию, митохондриальных — за энергообеспечение за счет окислительного фосфорилирования на кристах митохондрий, клеточных — за резистентность паренхимы печени. В результате ускорения перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран образуются активные свободные радикалы: малоновый диальдегид (МДА), супероксид, гидрокситил радикалы, перекись водорода, которые в свою очередь ускоряют пероксидацию мембран, что приводит к дальнейшему снижению резистентности клеток печени, детоксической, синтетической ее функции. МДА инициирует мезенхимальное воспаление и коллагенообразование купферовскими клетками и клетками Ито (липоциты), в результате чего интенсифицируется фибротизация печени и алкогольное поражение обычно прогрессирует по пути развития жировой дистрофии печени, фиброза (возможна стадия хронического алкогольного гепатита), цирроза печени. На всех этапах лечения алкогольного цирроза необходимо включение гепатопротекторов-антиоксидантов (препараты силимарина — симепар, легалон, гепабене, менее эффективные карсил, силибор) в сочетании с антиоксидантами-витаминами (А, Е, С, группа В) и антиоксидантами-микроэлементами (цинк, селен-содержащие — намацит, триовит).
Назначение препаратов цинка целесообразно при алкогольном поражении печени (жировой дистрофии, фиброзе, гепатите и циррозе) не только потому, что цинк входит в основной фермент антиоксидантной системы — супероксиддисмутазу, снижая активность ПОЛ, и в ряд ферментных систем, регулирующих функционирование и созревание Т-субпопуляции клеточного звена иммунитета, но также и в системы, метаболизирующие этанол (алкогольдегидрогеназа) и наиболее токсичный его метаболит — ацетальдегид (ацетальдегидрогеназа).
Учитывая, что алкоголь- и ацетальдегидрогеназа являются Zn-содержащими ферментами, а при хроническом активном гепатите и алкогольном циррозе в крови снижается содержание цинка на фоне повышения токсических металлов (свинца и кадмия), целесообразно назначение намацита по 2 таб. 3 раза в день в течение 1-2 мес, энтеросгеля и сорбента СКН по 10 г в день 15-20 дней. Особого внимания заслуживает применение нового сорбента — белосорба, который назначается по 5-8 таб. 3 раза вдень.
При наличии очагов некроза в печени или цитолитического синдрома целесообразно также назначать гепатопротекторы-репаранты, содержащие эссенциальные фосфолипиды (лецитин-фосфатидилхолин) для восстановления разрушенных патологическим процессом мембран гепатоцита. К таким препаратам относят эссенциале Н, ливолин-форте, липин.
При алкогольных циррозах эссенциале Н следует назначать в течение 10-20 дней в/в в сочетании с капсулами, затем в течение 2-3 мес. применять ессенциале или ливолин перорально по 1-2 капс. 3 раза вдень. Кроме того, витамины А, Е, С и микроэлементы — цинк, селен способствуют устранению вторичного иммунодефицита, ярко выраженного при циррозе печени алкогольной этиологии.
При алкогольном циррозе печени, особенно если он сопровождается нарушением психоэмоциональной сферы больного, в виде депрессии или возбуждения, целесообразно назначение адеметионина (гептрала) по 400 мг в первые 2-3 нед. в/в и перорально, в последующие 2-4 нед. перорально по 400 мг дважды вдень.
При циррозе печени алкогольной этиологии и без выраженных проявлений печеночной энцефалопатии назначают цитраргинин по 1-2 ампулы питьевого раствора 2-3 раза в день в течение 1-2 мес.
Бетаина цитрат обладает общим дезинтоксикационным действием, a L-аргинин повышает детоксическую функцию печени за счет интенсификации аргиназы, основного фермента орнитинового цикла. Учитывая, что L-аргинин инициирует повышение активности NO-синтетазы и, таким образом, образование оксида азота, при начальных стадиях цирроза печени этот препарат можно назначать, так как он способствует улучшению микроциркуляции и портального кровотока в печени. Однако при наличии печеночной энцефалопатии II-III стадии, печеночно-почечного синдрома и хронической печеночной недостаточности цитраргинин противопоказан, поскольку при этих состояниях резко повышается продукция кишечного эндотоксина, который ответственен за чрезмерное образование оксида азота. Оксид азота является периферическим вазодилататором, а при наличии преренальной азотемии (уремии), характерной для печеночно-почечного синдрома, может усугубить олигоурию и степень тяжести почечной недостаточности.
Отказ от алкоголя на определенной стадии сопровождается прекращением прогрессирования цирроза и исчезновением признаков воспалительной и некротической активности. Продолжение употребления алкоголя приводит к обострению воспалительного и дистрофического процесса или к развитию на фоне цирроза острого алкогольного гепатита.
У больных компенсированным и субкомпенсированным циррозом печени без печеночной энцефалопатии и наличия признаков печеночно-клеточной недостаточности показано парентеральное питание. Диета больных алкогольным циррозом должна содержать достаточное количество белка и суточный набор необходимых водо- и жирорастворимых витаминов и микроэлементов.
В случае сопутствующего хронического панкреатита с экзокринной недостаточностью или мальабсорбции назначают микросферированные и микро-таблетированные современные препараты панкреатина — креон, панцитрат и др. Дозировка индивидуальна. Традиционно и по настоящее время для лечения алкогольного цирроза печени применяется пропилтиоурацил. Канадскими врачами опубликованы результаты многолетнего лечения цирроза печени алкогольной этиологии пропилтиоурацилом, который больные получали по 150 мг 2 раза в день в течение 3 мес. Далее лечение продолжалось при условии отсутствия явлений гипотиреоза. При двухлетнем наблюдении отмечено снижение летальности в основной группе в 2 раза по сравнению с контрольной, больные которой не принимали препарат.
Имеются сообщения о том, что для уменьшения фибротизации печени в начальных стадиях алкогольного цирроза целесообразно в течение 6 мес. назначать колхицин в дозе 1 мг/сут. Лечение портальной гипертензии и ее конечной стадии — отечно-асцитического синдрома, пищеводно-желудочных кровотечений, печеночной энцефалопатии гепаторенального синдрома, гиперспленизма, асцита-перитонита — проводится по общепринятой схеме, описанной в соответствующих разделах данной главы.
Источник: www.eurolab.ua
Читайте также
Вид:
Источник
Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и может быть использовано для изучения токсических поражений печени в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов и в разработке новых способов лечения цирроза печени. Способ представляет собой введение в желудок лабораторного животного два раза в неделю в течение месяца 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ного раствора этанола вместо воды для питья. Способ позволяет повысить воспроизводимость и упростить способ, сократить срок моделирования цирроза печени и приблизить к клиническому течению данной патологии. 4 табл. Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии, может быть использовано для изучения токсических поражений печени, в доклиническом исследовании гепатозащитных препаратов и в разработке новых способов лечения данной патологии. Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому изобретению является способ создания модели гепатита и цирроза печени млекопитающих (см. а. с. 94026117, G 09 В 23/28, БИ 24, 1996), где в качестве химического вещества берут формалин и вводят его путем вдыхания воздуха, содержащего 17,5-18,5 мг/л формалина. Известный способ моделирования цирроза печени является продолжительным и трудоемким: ежедневные ингаляционные опыты в течение 7 месяцев. Кроме того, 70%-ный раствор формалина представляет собой водный раствор формальдегида, который обладает резко выраженным раздражающим и сенсибилизирующим действием, средняя смертельная концентрация для крыс 588 мг/м3. Предельно допустимая концентрация паров формальдегида в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/м3, 2 класс опасности. Вещество остронаправленного механизма действия, способное вызывать аллергические заболевания в условиях производства и требующее автоматического контроля за его содержанием в воздухе. При концентрации формалина 17,5-18,5 мг/л (или 17500-18500 мг/м3) возможно развитие острого отравления всего организма с воспалительными и некробиотическими изменениями слизистых оболочек верхних дыхательных путей и легких. В условиях производства хроническое воздействие высоких концентраций формалина недопустимо. Техническим результатом изобретения является повышение воспроизводимости и упрощение способа, сокращение сроков моделирования цирроза печени и приближение к клиническому течению данной патологии печени. Технический результат достигается тем, что в желудок лабораторного животного 2 раза в неделю в течение месяца вводят 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и ежедневно в течение месяца вместо воды для питья дают 10%-ный раствор этанола. Для определения кратности введения 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле и его количества для моделирования цирроза печени был проведен эксперимент на животных, полученные данные сведены в табл. 1. Одновременно в течение всего эксперимента животным давали вместо воды 10%-ный раствор этанола. Из таблицы 1 видно, что при кратности введения 50%-ного раствора совтола-1 на оливковом масле два раза в неделю воспроизводится надежная модель цирроза печени без гибели животных. Повышение воспроизводимости формирования хронического патологического процесса в печени и сокращения сроков опыта достигается при использовании совтола-1 и 10%-ного этанола в качестве питья вместо воды, за счет потенцирования гепатотоксического эффекта. Экспериментальный цирроз печени подтвержден морфогистохимическими и биохимическими показателями. Способ моделирования цирроза печени осуществляется следующим образом. Лабораторному животному два раза в неделю в течение месяца вводят в желудок зондом 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела. На протяжении всего эксперимента ежедневно для питья дают 10%-ный раствор этанола. Готовят: 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 1 часть совтола-1 и 2 части оливкового масла, перемешивают и вводят в желудок зондом, а 10%-ный раствор этанола для питья готовят путем разведения 96o этилового спирта. ПРИМЕР . Крысе, 180 г, 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле вводился из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела дважды в неделю в течение одного месяца, на протяжении эксперимента для питья животному давали 10%-ный раствор этанола. В течение всего опыта не отмечено каких-либо изменений внешнего вида и поведения животного, кроме частичного отказа от пищи. По истечении одного месяца проведена декапитация животного. Морфогистохимический анализ кусочков печени показал развитие хронического патологического процесса, основным проявлением которого является цирроз печени. Это подтверждается увеличением относительной массы печени и развитием в печеночной паренхиме фиброза и цитолиза. На гистологических препаратах печени поля фиброза занимают 3,1% среза, у интактной крысы на долю соединительной ткани приходится 0,5%. Гепатоциты локализованы преимущественно в перипортальной зоне, находятся в состоянии белковой и жировой дистрофии. Определяется дискомплектация печеночных балок, пролиферация соединительной ткани в портальных трактах с проникновением фиброзных тяжей в глубь долек. В поле зрения большое количество некротизированных гепатоцитов, отек и разрыхление стремы, в клеточном инфильтрате наблюдаются лимфоциты. При морфометрии препаратов печени выявлено снижение ядерноцитоплазматического отношения, отклонения стромы к паренхиме (см. табл.2). Гистохимический анализ ткани печени показал увеличение активности кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы и снижение активности АТФазы. Экспериментальный цирроз печени подтверждается также изменениями биохимических показателей: увеличением содержания изолированных двойных связей, диеновых коньюгатов, триеновых конъюгатов, глюкозоаминогликанов в ткани печени (см. табл.3). Кроме того, наблюдается увеличение количества оксипролина во фракциях коллагена кислоторастворимого и кислотоустойчивого. В сыворотке крови выявлено повышение активности ферментов: аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы. Предлагаемым способом воспроизводится надежная модель цирроза печени, что подтверждено морфогистохимическим анализом печени и биохимическими показателями. Модель позволяет изучать тяжелый хронический процесс в печени в динамике его развития. Предлагаемый способ моделирования цирроза печени в сравнении с известным (см. табл. 4) позволяет повысить воспроизводимость моделирования при сокращенных сроках опыта и в более упрощенном виде приблизиться к клиническому течению цирроза печени вследствие развития необратимых структурных и функциональных изменений в гепатоцитах, что подтверждено морфогистохимическим анализом, биохимическими показателями и оценкой поведения животных.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ моделирования цирроза печени путем введения химических веществ лабораторному животному, отличающийся тем, что в желудок вводят два раза в неделю в течение месяца 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ный раствор этанола вместо воды для питья.
Source: www.freepatent.ru
Опубликовано в Без рубрики 13 апреля 2018
Комментариев нет »
Источник
