Серая зона в результатах анализа на гепатит с

Иммуноблот на гепатит С – высокоспецифичный развернутый тест, который позволяет подтвердить или опровергнуть результаты предварительных иммуноферментных анализов. ИФА определяет наличие антител к возбудителю патологии, а иммуноблот (вестерн-блот) делает то же, но с более высокой точностью. Диагностический метод также позволяет установить идентичность антител, направленных против определенных компонентов вируса гепатита.

Особенности анализа

Гепатит С провоцирует РНК-содержащий вирус, способный передаваться через биологические жидкости организма. В составе возбудителя имеются белки, к которым наш иммунитет вырабатывает антитела. Их и обнаруживают в сыворотке крови зараженного гепатитом.

Первыми (через несколько недель) образуются белковые соединения класса IgM. Примерно через полтора месяца активизируется производство иммуноглобулинов класса IgG, максимальная концентрация которых наблюдается спустя полгода. Поэтому анализы целесообразно делать через 3-6 недель после вероятного заражения.

Для обнаружения антител используют недорогой иммуноферментный тест (ИФА). Это первичное исследование не всегда позволяет поставить точный диагноз. Поэтому дальше применяется специфическая технология – метод иммуноблота. Поводом для назначения дополнительного тестирования являются положительные или сомнительные результаты иммуноферментного анализа.

Иммуноблоттинг гепатита рекомендуется проводить, когда в крови появляются антитела. Тест дает возможность обнаружить широкий спектр специфических белков, продуцируемых защитной системой в ответ на проникновение патогена. Срок исполнения – до 5 рабочих дней.

Кому и когда назначают

Основные показания к назначению иммуноблота:

1. подозрение на инфицирование вирусом;
2. положительный результат иммуноферментного теста, что может говорить о протекании острой фазы болезни;
3. сомнительные данные, которые получены в процессе предварительного обследования на гепатит.

Как и ИФА, исследование информативно после появления в крови специфических антител, то есть через 3-4 недели от момента проникновения возбудителя. Именно в этот период белковые соединения можно обнаружить с помощью иммуноблота.

Когда анализ вестерн-блот может быть неточным:

• «диагностическое окно» – промежуток времени между проникновением патогена в организм и появлением белковых соединений, в этот период вирусная нагрузка недостаточна, иммунный ответ задерживается;

• у людей с подавленным иммунитетом;

• перинатальное инфицирование новорождённых (нетипичную картину могут давать антитела женщины).

Подтверждением наличия возбудителя в таких случаях являются положительные данные, полученные при повторных исследованиях крови на наличие вирусной РНК. Анализ проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Как подготовиться

Специальная подготовка к сдаче анализа на гепатит не нужна. Достаточно придерживаться стандартных условий – сдавать кровь натощак или не раньше, чем через четыре часа после еды (необильной и нежирной).

Перед проведением исследования на гепатит не рекомендуется употреблять чай, кофе, соки и другие сладкие напитки. Разрешается питье простой воды.

Расшифровка результатов

Анализы трактуются в зависимости от комбинации антигенов, к которым выявлены антитела.

Если обнаружены антитела:

1. против двух и более антигенов заболевания – иммуноблот положительный, инфекция присутствует;
2. против одного антигена – результат анализов недостоверный (нужно повторить диагностику).

При положительном ИФА и отрицательном иммуноблоте считают, что результат иммуноферментного теста был ложноположительным, а в дальнейшем обследовании нет необходимости – человек здоров, гепатит отсутствует.

Сомнительный или положительный иммуноблот – повод сдать кровь на определение РНК вируса методом полимеразной цепной реакции. На основании этого анализа выдается общее заключение. Если результат ПЦР отрицательный при положительном иммуноблоте, исследование рекомендуется повторить через несколько месяцев.

Иногда получают значения, попадающие в промежуток с названием «серая зона». Это значит, что гепатит под сомнением, и требует повторения теста через две недели. При получении тех же показателей результат анализа считается отрицательным.

ПЦР-диагностика гепатита С – это исследование биологических образцов с применением полимеразной цепной реакции. Способ заключается в многократном копировании фрагментов РНК вируса. Благодаря такой методике всего нескольких молекул возбудителя достаточно для того, чтобы тест отреагировал на присутствие вируса. Результат можно получить уже в первые 5-7 дней после контакта с зараженным человеком. ПЦР позволяет выявить факт инфицирования, а также приблизительную концентрацию HCV и его генотип.

Когда назначается анализ ПЦР

Самая очевидная причина для назначения ПЦР на гепатит С в крови – это наличие признаков заболеваний печени:

• хроническая усталость;

• боли в области печени;

• желтизна кожи и белков глаз;

• гипертрофия печени;

• тошнота.

Анализ на ПЦР целесообразно сделать в условиях повышенного риска заражения:

1. сексуальный контакт с предполагаемым носителем гепатита;
2. повышенная активность АЛТ и АСТ, выявленные по результатам биохимического анализа крови;
3. если результат ИФА на антитела к вирусу гепатита положительный.

Другие показания к сдаче крови:

• Врачи-гепатологи назначают ПЦР на гепатит С в профилактических целях перед операциями.
• Медработники и сотрудники детских садов и школ сдают анализ в ходе плановых проверок.
• Метод показан при проведении вакцинации против вируса гепатита В.
• Анализ проводится несколько раз в ходе терапии гепатита С, чтобы оценить ее эффективность.
• ПЦР нужен для исключения смешанного поражения печени, что иногда бывает при гепатите В.

Как подготовиться и сдавать кровь

В течение дня у человека меняется соотношение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, а также активность некоторых гормонов. Прием пищи влияет на наличие жирных кислот в крови. Этот фактор мешает точности анализа. По этим причинам анализ ПЦР на гепатит С проводится утром натощак. В качестве исследуемого образца берется кровь из вены.

Перед сдачей анализа требуется подготовка:

1. за 2-3 дня – ограничить нагрузку на печень (исключить алкогольные напитки, не употреблять жирную и жареную пищу);
2. за сутки – исключить стресс, поднятие тяжестей, посещение спортзала и бассейна;
3. за 8 часов – прекратить употребление любой пищи, так как глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь, изменяют качество ферментной реакции;
4. с утра до момента сдачи крови – не курить.

На результат анализа может повлиять повышение концентрации адреналина в крови. Чтобы исключить эту погрешность, нужно прийти на 20 минут раньше, отдышаться и успокоиться.

На эффективность анализа крови могут влиять разные препараты – БАДы, средства с кофеином, этанолом, глюкозой, леводопой, пероральные контрацептивы, антибиотики. Даже если человек принимает обычные витамины, об этом нужно предупредить врача.

Расшифровка ПЦР на гепатит С

В настоящее время используются три метода ПЦР:

1. качественный (тест на наличие или отсутствие вируса);
2. количественный (тест на концентрацию вируса в крови);
3. с генотипированием (определяет принадлежность HVC к конкретному генотипу и субтипу).

Качественный анализ

Качественный анализ – это метод диагностики гепатита С, который позволяет подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в крови. Выявляет наличие в определенной концентрации – в пределах 10-500 МЕ/мл. Выполняется в течение 1-4 дней и дает следующие результаты:

• «Не обнаружено» – вирус отсутствует либо его концентрация так мала, что реагент его не распознает.
• «Обнаружено» – вирус HCV присутствует, и его концентрация выше минимального порога чувствительности. Анализ выдает такой результат уже на 3-4 день после заражения.

Количественный анализ

Этот метод оценивает вирусную нагрузку, которая меняется в зависимости от стадии заболевания или этапа излечения. Метод не только показывает наличие флавивируса, но и его концентрацию в МЕ (международных единицах) на 1 мл крови. Это играет решающую роль при выборе тактики лечения гепатита С. Результаты количественной ПЦР-диагностики записываются следующим образом:

В результатах анализов очень часто можно увидеть степени, которые обозначаются как «^», например, 6*10^5 МЕ/МЛ, 10 в пятой степени это 100 тысяч, соответственно 6*10^5 МЕ/МЛ = 600 000 МЕ/МЛ.

Для упрощения подсчетов:

10^2 = 100

10^3 = 1000

10^4 = 10 000

10^5 = 100 000

10^6 = 1 000 000

Просто подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите результат. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).

Если затрудняетесь или есть вопросы по другим переменным анализов, вы всегда можете написать нашему дежурному врачу-инфекционисту (чат в правом нижнем углу экрана). Он бесплатно расшифрует ваши анализы.

Количественный анализ ПЦР на гепатит С необходим для оптимального выбора препарата. С его помощью можно прогнозировать осложнения и эффективность терапии. Он позволяет оценить степень заразности носителя гепатита для окружающих: чем большее число вирусов насчитывается в крови, тем больше риск заражения. 

Генотипирование

Сегодня известно, что у гепатита С имеется 11 генотипов и огромное количество субтипов. В разных странах есть свои приоритетные разновидности. В России в основном встречается 1 генотип (1b чаще, чем 1а), на втором месте по распространенности – 3 генотип (субтип 3а), на третьем – 2.

У каждого генотипа свои особенности. Зная их, можно спрогнозировать характер течения инфекции, риск перехода в хроническую форму и вероятность ответа на противовирусную терапию. Например, 3 генотип HCV провоцирует стеатоз, а 1 генотип требует лечения в течение 48 недель. По рекомендациям Минздрава генотипирование должно предшествовать противовирусной терапии.

Исходя из результатов, врач определяет противовирусный препарат, его дозировку, курс приема.

Преимущества и недостатки ПЦР

ПЦР-диагностика на вирусный гепатит С опережает иные методы по чувствительности, низкой вероятности ошибок и другим показателям:

• Позволяет выявить вирус на самых ранних стадиях, когда концентрация его в крови ничтожно мала. Для сравнения, иммунофлюоресцентный анализ (ИФА) реагирует только на иммуноглобулины, а они вырабатываются лишь через несколько недель в ответ на инфекцию. В то же время ПЦР реагирует на сам антиген и показывает присутствие вируса уже через 5 дней после заражения.

• Ложные результаты возникают гораздо реже, чем у других методов. Так, у ИФА возможны ложные результаты на гепатит при появлении перекрестных антител, но ПЦР реагирует непосредственно на патогены и такой погрешности не имеет.

• ПЦР – высокочувствительный метод. Анализ реагирует на присутствие РНК вируса гепатита уже 10-100 клеток в пробе и дает результат еще задолго до появления первых симптомов.

• В отличие от культуральных методов исследования, ПЦР проводится методом высокотехнологичной автоматизированной амплификации, что позволяет проводить тестирование в день забора.

Тест универсален и позволяет обнаружить несколько типов возбудителей гепатита в одной биологической пробе.

ПЦР-диагностика гепатита имеет и свои недостатки. Главный из них связан со способностью микроорганизмов к мутации. Вирусы гепатита приспосабливаются к условиям окружающей среды, и их генотип меняется. Когда это происходит, диагностическая система не может уловить гибрид. Второй недостаток ПЦР связан с возможностью получения ложноположительного и ложноотрицательного результата. Чтобы избежать ошибки, нужно соблюдать правила забора материала. Чаще всего погрешности возможны после уже проведенного лечения, поэтому принимать решение об отмене терапии может только лечащий врач.