Что такое аналитическая чувствительность гепатита в

Анализ ПЦР на гепатит С представляет собой внутривенный забор крови с целью определения в ней вируса РНК гепатита на генетическом уровне. Своё название анализ получил исходя из метода исследования.

ПЦР — это полимеразная цепная реакция, с помощью которой в сыворотке крови определяют наличие гепатита С. Итог может быть положительным и отрицательным.

Достоинства метода ПЦР

Этот метод диагностики обладает следующими достоинствами:

1. Метод ПЦР позволяет определить следующие результаты:
   • наличие вируса РНК;
   • степень радиоактивного излучения;
   • первоначальную генетическую информацию;
   • уникальность и неповторимость генетических данных.
2. Можно использовать любой необходимый клинический материал:
   • кровь;
   • плазма;
   • моча;
   • биологические жидкости и выделения;
   • мокрота и другие.
3. Позволяет определить в крови более одного микроорганизма одномоментно, в отличие от других проб.
4. Получение результата в течение суток.
5. Упрощённые методы хранения и транспортировки анализа, возбудители определяются даже в мёртвой среде.
6. Уникальность ПЦР позволяет выявлять определённые микроорганизмы, которые не поддаются ни одной другой пробе.
7. Высокая степень чувствительности реактивов, тест является самым точным в своём роде.

Особенности качественного анализа ПЦР

Качественный тест проводится с целью определения наличия вируса в крови и получения отрицательного или положительного итога.

Показанием к проведению этого вида диагностики является выявление в организме пациента антител к гепатиту С.

Возможные итоги:

• обнаружено (положительный);
• не обнаружено (отрицательный).

Качественный тест не подходит пациентам с очень низким содержанием вируса в крови, так имеет определённую чувствительность.

Результат «обнаружено»

Обнаружить вирус гепатита С можно уже через несколько недель после инфицирования организма, даже при отсутствии антител к этому возбудителю. Такой результат свидетельствует о наличии в организме и кровипациента фрагмента РНК, характерного для гепатита С.

Пациент считается инфицированным данным вирусом и подвергается дальнейшему распространению патогенных клеток в организме.

Результат «не обнаружено»

Такой вариант говорит о том, что в исследуемом образце биологического материала отсутствуют фрагментыРНК специфичные для гепатита С. Это отрицательный результат.

Чувствительность теста не позволяет выявить низкое содержание фрагментов РНК, поэтому итог «не обнаружено» не всегда является правдоподобным.

Особенности интерпретации результатов

Главной особенностью интерпретации результатов является порог чувствительности метода ПЦР.

Он зависит от следующих показателей:

• точность проведения исследования;
• вид и качество используемой аппаратуры.

Отмечено, что чувствительность может колебаться в пределах 10-500 МЕ/мл. Из этого следует, что если в организме исследуемого пациента присутствует вирус в концентрации меньше 10 МЕ/мл тест покажетрезультат «не обнаружено». Но это вовсе не означает, что возбудитель полностью отсутствует.

Варианты диагностических систем

На данный момент выделяют следующие варианты систем диагностики:

1. Если забор крови проводится у пациента, находящегося на противовирусном лечении, то должны быть использованы системы диагностики чувствительностью не меньше 50 МЕ/мл. Для этой цели применяют следующие анализаторы:
   • Cobas Ampicolor ВГС-Теst;
   • РеалБест РНК ВГС.
2. Чтобы поставить окончательный диагноз «гепатит С» необходимо обнаружить РНК вирус в трёх разных заборах биологического материала. Эти рекомендации разработаны Всемирной Организацией Здравоохранения. Эсли итог трехкратно отрицательный, то диагноз не подтверждается.
3. На данный момент помимо метода ПЦР существует более точный тест, именуемый ТМА (транскрипционный метод амплификации). Его порог чувствительности гораздо выше, чем в других методикахдиагностики.

Диапазон выявляемых модификаций вирусов

На данном этапе развитии генетики известно несколько видов и вариантов модификации вирусов.

Лабораторная диагностика в нашей стране со стопроцентной точностью может определить следующие генотипы:

• 1а;
• 1в;
• 2а;
• 2в;
• 2с;
• 3;
• 4;
• 5а;
• 6.

Особенности количественного анализа ПЦР

Количественный анализ представляет собой определение вируса гепатита С в организме человека. Во время исследования с помощью ПЦР определяют РНК и вирусную нагрузку в исходном материале. Иначе, можно сказать, что тест позволяет выявить какое количество вирусных клеток находится в биологической жидкости. Для этого вида исследования используется только венозная кровь. Специфической подготовки к тесту нет.

Количественный анализ позволяет вести контроль на уже начавшемся этапе лечения и оценивать его эффективность. Для оценки берут данные теста до начала и во время терапевтических мероприятий. С помощью полученных результатов можно прогнозировать течение болезни.

При успешности выбранного метода лечения через 3 месяца количество РНК должно уменьшиться в несколько раз. Согласно рекомендациям количественный анализ проводят через один, затем через три и шесть месяцев. Последний результат при успешности лечения должен быть отрицательным.

Оценка результатов количественного теста ПЦР

В нашей стране существует 2 возможных варианта оценки результата количественного теста ПЦР:

• количество копий на миллилитр биологической жидкости;
• количество международных единиц на миллилитр.

Чтобы получить международные единицы количество копий делят на 4.

Выделяют 2 уровня нагрузки или виремии:

• высокая с показателем ПЦР выше 800000 МЕ/мл;
• низкая с показателем ПЦР ниже 400000 МЕ/мл.

Результат количественного теста предусматривает 2 варианта:

• «ниже диапазона измерений»;
• «не обнаружено» (отрицательный).

Оценка: «ниже диапазона измерений»

Такое заключение ставится когда количественный тест РНК не обнаружил в исходном материале клетки возбудителя гепатита С. Но вирус всё равно присутствует в крови. Достоверность анализа подтверждаетсякачественным способом, так как порог чувствительности количественного теста может не обнаружить маленькие значения и концентрации возбудителя.

Оценка: «не обнаружено»

Такое заключение ставиться когда в исходном материале во время диагностики не были обнаружены РНКвирусы гепатита С. Это отрицательный результат.

Интерпретация результатов анализа количественного теста ПЦР

С помощью показателя вирусной нагрузки определяют:

• степень запущенности болезни;
• насколько заразен больной;
• эффективность противовирусной терапии.

Чем выше показатели вируса гепатита С в организме, тем опаснее пациент для окружающих людей и тем прогрессивнее его заболевание.

ПЦР на гепатит С является важным методом диагностики, особенно в процессе терапевтических мероприятий. Благодаря полученным отрицательным или положительным итогам можно оценить их эффективность, полностью излечить больного или сократить сроки лечения.

Автор: Петрунина Светлана Сергеевна,
медсестра палаты интенсивной терапии,
специализация-острые отравления, реанимация,
специально для сайта moizhivot.ru

Полезное видео о полимеразной цепной реакции

Гастроэнтерологи в вашем городе

Выберите город:

источник: moizhivot.ru

Качественный анализ полимеразной цепной реакции — ПЦР на гепатит С определяет наличие или отсутствие ВГС в организме. В лабораторных условиях исследуется структура РНК, в составе которой и будет находиться вирус. В случае выявления вируса С необходимо пройти курс лечения, так как запущенное состояние печени в результате приведет к тяжелым последствиям. Качественный ПЦР проводится и после выздоровления для подтверждения отсутствия антител. Назначается и для профилактического осмотра. При низкой концентрации возбудителя в крови ПЦР (качественный) может ничего не обнаружить, ведь у диагностической системы есть свои пороги чувствительности. В случае начальной стадии болезни или легкой форме проводят ПЦР ультра диагностику на сверхчувствительном оборудовании.

Что такое РНК вирус?

Термином РНК вируса гепатита С (или вирус гепатита С РНК) называется само заболевание печени. Вирус С связывается со здоровой клеткой организма, проникая внутрь. Со временем разносится по всему организму, стоит только ему попасть в кровь. В итоге возбудитель проникает в печень, сращивается с ее клетками и усиленно работает. Печеночные клетки (гепатоциты) работают под его воздействием, претерпевая изменения, и от этого гибнут. Чем дольше вирус С находится в печени, тем большее количество клеток гибнет. Со временем развиваются опасные болезни, приводящие к злокачественному перерождению и летальному исходу.

Заражение печени этой разновидностью вируса может никак не проявляться внешне. Долгие годы или десятки лет зараженный человек чувствует себя абсолютно здоровым, и только случайное обследование чаще всего и выявляет патологию. При сдаче крови на гепатит исследуется часть цепочки РНК (рибонуклеиновой кислоты), входящей в состав человеческого гена (ДНК). Результаты лабораторного исследования не стоит использовать для самолечения, ведь это только показатель. Точную картину и дальнейшую диагностику лучше определит врач.

Когда делается: показания к исследованию

В подтверждение ВГС назначается анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция). Исследования ПЦР помогают найти материал возбудителя в структуре РНК и назначить эффективную терапию. Назначается в следующих случаях:

• выявление признаков воспаления печени;
• скрининговые исследования с целью профилактики;
• обследование контактирующих людей;
• диагностирование гепатитов смешанного происхождения (определение главного возбудителя);
• определение уровня активности размножения вируса при хронической форме;
• цирроз печени;
• для определения эффективности назначенного лечения.

Исследования ПЦР назначает врач для определения эффективности курса лечения гепатита.

Существует качественный, а также количественный анализ ПЦР. Количественный ПЦР показывает процентное соотношение РНК с носителями вируса в крови, а качественный указывает на вирусное присутствие либо отсутствие. Положительный показатель качества (присутствия РНК гепатита С) нуждается и в количественном исследовании. Высокий уровень концентрации возбудителя гепатита С сопряжена с риском его передачи, то есть заражения окружающих. Низкие показатели количества лучше поддаются лечению. Количество РНК-вирусов в составе крови никак не связано с интенсивностью заболевания. Делается анализ ПЦР и в случае интерфероновой терапии, чтобы назначить продолжительность и сложность лечебного курса.

Особенности качественного ПЦР анализ на гепатит С

Назначается качественный анализ с показателем полимеразной цепной реакции всем пациентам, у кого в крови обнаружены антитела к гепатиту С. Кто переболел и выздоровел, должен повторно пройти тестирование. Рекомендуется сдать анализ и на гепатит В, затем, в случае положительного заключения, и на гепатит D. Также качественно анализированная реакация должна проводиться в комплексе с другими анализами крови. Анализы покажут полную картину вирусного распространения.

Из результатов теста будет виден только положительный анализ на гепатит С или же отрицательный, то есть наличие или отсутствия вируса. Если в выводе стоит «обнаружено», значит, вирус есть и продолжает активно действовать. Обозначение «не обнаружено» говорит об отсутствии вируса или его маленьком количестве. При таком показателе следует учитывать то, что аналитическая чувствительность диагностических систем разная и РНК гепатит С все же может находиться в крови, но не проявиться в анализе.

Особо чувствительный метод ПЦР ультра гепатит С выявляет даже в мизерных количествах. Используется гибридизационно-флуоресцентное исследование, которое во много раз выше, чем стандартные системы ПЦР. Метод применяют в нескольких случаях:

• подозреваются скрытые формы гепатита С;
• диагностика ПЦР не подтвердила возбудитель, но антитела есть;
• в случае выздоровления;
• для выявления ранней стадии заражения.

Расшифровка анализа

Определение РНК вируса гепатита С методом полимеразно-цепной реакции.

На окончательное решение при постановке диагноза влияет ПЦР расшифровка ВГС, в частности, при ультраметоде. Основной недостаток такого исследования — строгое соблюдение стерильных условий для образца и материалов. Небольшое отклонение иногда показывает неточные выводы аналитики, усложнит постановку диагноза и последующее лечение. Анализ ПЦР на определение РНК вируса гепатита не всегда уверенно показывает картину заболевания, иногда допускаются неточности, причем в обе стороны.

Диагностируя вирус гепатита, рекомендуется применять комплексное обследование.

Норма показателей

Отсутствие в результатах исследования антител JgM к РНК вирусному гепатиту С считается нормой при анализе полимеразной цепной реакции. В то же время выводы серологического анализа указывают на присутствие антител к вирусу С и это также в пределах нормы. Качественное определение не показывает интенсивность заболевания, оно только выявляет возбудитель гепатита С в РНК. Такой анализ повторяют и после лечения, чтобы подтвердить действительное выздоровление.

Отклонения

Если антитела JgM к РНК ВГС присутствуют, это говорит о развивающемся заражении. Заболевание при этом протекает остро или хронически, проявляется в разных стадиях. Если зафиксировано уменьшение количества антител, то анализ будет свидетельствовать о достижении результатов лечения в ходе выздоровления. Встречаются в диагностике исключительно редкие случаи ложноположительных выводов. Они обнаруживаются у женщин при беременности и у людей с другими инфекционными болезнями.

источник: InfoPechen.ru

Source: gastro-help.ru

ПЦР диагностика позволяет не только определить наличие вируса гепатита В в крови и его этиологию, но также оценить его активность. Выявление вирусной нагрузки особенно важно для подбора эффективного лечения, если она слишком высока, то вероятность выздоровления уменьшается. В чем суть метода полимеразной цепной реакции?

Суть ПЦР диагностики

 При гепатите проводят ПЦР, чтобы наверняка удостовериться в поставленном диагнозе. При помощи этого метода можно выявить ДНК вируса, а также определить его количество в крови.

ДНК вирус в крови методом ПЦР при гепатите можно выявить по окончании инкубационного периода, в это время на фоне повышенного уровня трансаминаз можно определить и HBsAg, после чего появляется HBeAg.

• При качественном определении можно точно установить диагноз, есть гепатит или его нет. В норме в крови ДНК вируса должен отсутствовать.
• Количественный метод позволяет определить интенсивность развития болезни и размножение вируса.

Анализ имеет очень высокую чувствительность и достоверность. В качестве биологического материала берут венозную кровь. Благодаря современным технологиям, при ПЦР можно обнаружить вирус при концентрации 5×103-104 копий/мл в крови. По результатам анализа, зная норму, можно судить о вирусной нагрузке и поставить прогноз на лечение.

Важно! Именно ДНК вируса способствует развитию цирроза и других хронических заболеваний печени.

Обнаружение ДНК при помощи ПЦР необходимо в следующих случаях:

1. Сомнения при постановке окончательного анализа после сдачи анализов.
2. Определение острой стадии болезни.
3. Выявление скрытых форм гепатита.
4. Оценка эффективности после прохождения противовирусной терапии.

Как расшифровать полученные после ПЦР диагностики результаты?

ПЦР количественный

По количественной оценке можно не только определить наличие вируса, но и узнать вирусную нагрузку, в случае если ПЦР покажет положительный результат.

Количественный метод необходим, чтобы узнать такую информацию:

1. Интенсивность развития заболевания.
2. Эффективность лечения.
3. Развитие резистентности к противовирусным препаратам.

Количественная оценка очень важна при постановке диагноза хронического гепатита. В этом случае все показатели будут находиться не в пределах нормы. Уровень трансаминаза будет повышен, индекс активности вируса более 4, а концентрация ДНК вируса более 105 копий ДНК/мл. Если концентрация вируса более низкая, а уровень трансаминаза находится в норме, то можно говорить о пассивном носительстве.

Перед назначением противовирусного лечения прохождение ПЦР диагностики, а именно количественного обследования, является обязательным условием, чтобы определить вирусную нагрузку.

Делают анализ каждые 3 месяца, и если вирусная нагрузка возросла в 10 раз, то можно говорить об устойчивости вируса к лечению.

• Количественный анализ дает очень важную информацию, ведь можно определить, сколько в крови содержится ДНК возбудителя. Чем больше его количество, тем больше вирусная нагрузка и тем тяжелее состояние больного.
• При снижении вирусной нагрузке после прохождения лечения, можно судить о его эффективности.
• В некоторых случаях ПЦР при гепатите является показанием к проведению дополнительного обследования, такого как биопсия печени. При повышенном уровне АЛТ проводится ПЦР. Расшифровка анализов такая: если вирусная нагрузка более 105копий ДНК/мл, а уровень АЛТ превышает норму, но не более чем в 2 раза на протяжении полугода, то такой больной нуждается в биопсии. При сильном воспалении или фиброзе показано противовирусное лечение. Если же уровень АЛТ превышает норму более чем в 2 раза при высокой вирусной нагрузке, то сразу назначают лечение без дополнительной диагностики.

Только хорошие специалисты смогут правильно расшифровать результаты количественного ПЦР.

ПЦР качественный

Качественный анализ позволяет определить наличие вируса гепатита в крови. В норме он должен отсутствовать. Благодаря этому методу можно точно установить диагноз.

Качественный ПЦР анализ дает 100% точный результат.

Ни один другой метод не дает настолько достоверных данных. В более чем половине случаев после прохождения диагностики выявляют ДНК вируса, при отсутствии антигена. Очень важно на начальном этапе заболевания установить диагноз.

Доказано, что если ДНК вируса гепатита В активно размножается в организме человека в течение двух месяцев, то болезнь приобретает хроническую форму. Если же начать бороться с вирусом уже в течение первых недель после инфицирования, то шансы на полное выздоровление очень велики.

Как происходит расшифровка полученных результатов обследования при помощи качественного метода?

Расшифровка анализа очень проста:

• В норме результат должен быть отрицательным, то есть ДНК вируса не обнаружено.
• Положительный результат свидетельствует о наличии гепатита.

Анализ помогает выявить вирус, определить его генотип и начать своевременное лечение. Очень часто при наличии ДНК наряду с качественной оценкой проводят и количественную.

Как подготовиться к обследованию?

При анализе на гепатит при помощи ПЦР диагностики берут кровь из вены. Проходить обследование лучше всего с утра, так как кровь всегда нужно сдавать натощак (после последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов).

Чтобы анализ был максимально достоверным, больной должен знать о некоторых факторах, которые могут повлиять на конечный результат:

• Перед тем как сдавать кровь из вены, нужно 20 минут отдохнуть.
• Кроме того, что анализ сдается натощак, так, еще за 12 часов нельзя употреблять спиртное, курить, заниматься спортом и употреблять жирную еду.
• Некоторые лекарственные средства, которые вынужден принимать больной, могут повлиять на конечный результат. Лаборант должен знать о случае медикаментозного лечения.
• Если кровь нужно сдать ребенку в возрасте до 5 лет, то в таком случае его за полчаса до диагностики нужно поить каждые 10 мин. по стакану кипяченой воды.

Очень важно проходить ПЦР в клинике, которая хорошо себя зарекомендовала. Ведь несмотря на то что ПЦР определяет наличие вируса с точностью до 100%, этот показатель может снизиться до 95%, если учесть человеческий фактор.

Неквалифицированные лаборанты или плохая репутация клиники может стать причиной получения ложных результатов.

Source: pechen1.ru