Расшифровка пцр на вирусные гепатиты
Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.
По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.
Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.
Что такое анализ ПЦР?
ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.
Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.
Виды ПЦР-анализа на гепатит С
Различают три вида ПЦР-анализа:
- Качественный анализ ПЦР. Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.
- Количественный анализ ПЦР. Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.
- Генотипирование. Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.
Показания к ПЦР-анализу на гепатит С
ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:
- контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
- положительный результат иммуноферментного анализа;
- признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
- появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
- повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
- перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
- с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
- после окончания лечения для контроля за рецидивами;
- при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.
Расшифровка ПЦР-исследования на гепатит С
Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.
Расшифровка качественного анализа.
Обнаружено | В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено. |
Не обнаружено | Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности. |
Расшифровка количественного анализа.
Не обнаружено | Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования. |
До 1,8*10^2 МЕ/мл | Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование. |
До 8*10^5 МЕ/мл | Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно. |
Больше 8*10^5 МЕ/мл | Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким. |
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл | Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови. |
Расшифровка генотипирования.
Обнаружена РНК определенного генотипа | В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа. |
Обнаружена РНК вируса гепатита С | В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования. |
Не обнаружено | Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала. |
Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.
Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:
- кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
- образец биоматериала был загрязнен;
- в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
- в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.
Преимущества ПЦР перед другими методами
- Диагностика на ранних стадиях. ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.
- Низкая вероятность ошибки. В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.
- Высокая чувствительность. ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.
Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования
Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.
Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:
- анализ крови сдают с утра;
- перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
- за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
- в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.
Источник
Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.
При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.
Виды ПЦР на вирусный гепатит В
Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.
Качественный ПЦР и его трактовка
Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:
- отрицательный результат — вируса нет;
- положительный результат — вирус обнаружен.
Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.
В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.
Количественный ПЦР
Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:
- Перед назначением лечения.
- Для оценки эффективности терапии.
- Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
- Для определения стадии, на которой находится заболевание.
Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:
1 МЕ/мл = 5 копий/мл
Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.
Трактовка количественного ПЦР
При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:
- < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
- от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
- 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
- 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.
Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:
- Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
- Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
- Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
- Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
- Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.
Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:
- ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
- ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
- ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.
Подготовка к обследованию
Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:
- Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
- Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
- Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.
Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.
Подводя итоги
На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.
Источник
РНК-вирус проникает в клетки печени и вызывает болезнь – гепатит С. Заболевание проходит в острой и хронической форме. Для него характерно протекание без видимых признаков. Такое течение объясняется высокой способностью вируса к мутации и появлению различных видов. Это помогает патогену приспосабливаться к организму хозяина и ускользать от иммунной защиты.
Исследования на ранних стадиях развития не дает результата. Качественный анализ ПЦР на гепатит С проводят, чтобы выявить патоген, и начать вовремя лечение.
Что такое качественный анализ на гепатит С?
Гепатит С – серьезное заболевание, при хроническом развитии которого возникает цирроз и рак печени. Ученые длительное время не могут разработать вакцину от болезни, несмотря на изучение особенностей строения HCV. Многообразие видов патогена слабо поддается изучению.
Только с помощью лабораторных исследований можно обнаружить поражение органа, и предупредить инфицирование окружающих. С этой целью проводят качественный анализ ПЦР на гепатит С.
Носитель в течение многих лет может быть инфицирован и не подозревать о болезни. Качественный анализ предполагает проведение в лаборатории полимеразной цепной реакции крови пациента на наличие РНК вируса. Диагностика проводится на сверхчувствительном медицинском оборудовании, которое помогает его обнаружить.
Что показывает качественный анализ?
Качественное обследование с помощью ПЦР обладает достоинствами перед другими методами:
- даннй метод помогает выявить генетический материал патогена на ранних стадиях;
- показывает вид возбудителя;
- используется система тестов, нет необходимости высеивать материал в питательной среде;
- обладает высокой скоростью диагностики возбудителя: результат анализа будет готов через 5 часов;
- выявляет скрытую инфекцию.
Качественный анализ назначают при профилактическом осмотре, когда имеются показания на его проведение. Он проводится во время лечения, после выздоровления. С его помощью подтверждают наличие или отсутствие антител вируса гепатита С в крови.
ПЦР исследует:
- количественное содержание генотипа HCV;
- качественные характеристики вирусной РНК;
- генотипирование.
Диагностику проводят повторно для подтверждения результата с более чувствительным реагентом.
Показания к исследованию
Для проведения качественной ПЦР нужны предпосылки для ее назначения:
- сексуальная связь с лицом, который инфицирован вирусом гепатита;
- цирроз печени;
- обязательное обследование перед оперативным вмешательством;
- проведение вакцинации против вируса гепатита В;
- плановое обследование работников медицинских учреждений, садов, школ.
Если у пациента видны явные признаки гепатита:
- желтизна кожных покровов, белков глаз;
- боль в правом подреберье;
- усталость;
- увеличение в размерах печени;
- тошнота.
Вирус гепатита С проникает в клетки печени через кровеносные сосуды. Патоген может попасть при гемодиализе, при пользовании инфицированной иглой, при нанесении татуировки, в стоматологических и косметических кабинетах.
Возможна передача вируса новорожденному от инфицированной матери, если происходит травмирование кожи ребенка при родах. Качественный анализ выявляет вирус и указывает на второстепенные признаки: наличие в крови больного антител.
Расшифровка результатов
Врач-гепатолог или инфекционист проводит расшифровку результатов ПЦР и ИФА на гепатит С. Полученные данные подтверждаются комплексным обследованием:
- биохимическим анализом;
- УЗИ органа;
- биопсией печеночных тканей.
Опираясь на полученные данные, врач подтверждает или отрицает гепатит С.
Стандартная чувствительность теста на ПЦР колеблется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ не дает результата, если она ниже указанного параметра.
Количественный анализ ПЦР показывает вирусную нагрузку: концентрацию патогена в человеческом организме (сколько фрагментов флававируса в 1 мл крови). Такой метод обследования назначают перед началом комплексной терапии и на 12 неделе заболевания. Он помогает:
- Выявить степень болезни. Если концентрация вируса в крови пациента высокая, возможна передача инфекции другим лицам.
- Назначить противовирусную терапию, выбрать нужный метод лечения.
- Сделать прогноз выздоравления.
Важно определить генотип, так как патоген постоянно мутирует и приспосабливается к организму. Известно 11 типов, на территории РФ выявлены три: 1, 2, 3. Обследование покажет тип вирусной инфекции.
При расшифровке пишут:
- РНК обнаружено;
- РНК не обнаружено (болезнь не выявлена);
- тип флававируса;
- количественный состав (концентрацию в крови);
- название теста.
РНК обнаружено
Если гепатит С обнаружен в биологическом материале пациента, врач назначает повторное исследование, чтобы исключить ошибку. Обследование биоматериала делают от 1 до 5 дней. Срок исполнения зависит от загруженности персонала.
Присутствие флававируса и антител к нему свидетельствует о продолжительном течении болезни, которая перешла в хроническую стадию. Ложные показания бывают у беременных женщин и у людей, имеющих другие инфекционные заболевания.
РНК не обнаружено
Качественный анализ не обнаружил гепатит С. Отрицательное значение означает, что в крови отсутствуют РНК вируса. Утомляемость и другие признаки возможно связаны с протеканием другой инфекции в организме и требуют дальнейшего изучения.
Что делать, если РНК вируса гепатита С обнаружено?
Если вирус обнаружен в крови, нельзя отчаиваться и впадать в панику. В 20 процентах болезнь излечивается самостоятельно. Антитела не всегда свидетельствует о том, что вы болеете гепатитом С. Случаются ошибки при лабораторных исследованиях. Доброкачественные и злокачественные опухоли, инфекционные очаги в организме, проведенная ранее вакцинация смазывают картину ПЦР.
Раннее обнаружение помогает вовремя остановить болезнь. Назначают противовирусную терапию. Препараты помогают вылечить хроническое заболевание в течение 3-6 месяцев.
Источник